核糖核酸酶抑制因子抑制碱烧伤后角膜新生血管

目的 制作兔碱烧伤后角膜新生血管(CNV)模型,结膜下注射核糖核酸酶抑制因子(RI),以探讨RI对碱烧伤后CNV的抑制效果。方法 每只兔双眼均制成碱烧伤后CNV模型。自身双眼对照,实验眼结膜下注射RI,对照眼用等量生理盐水结膜下注射。根据烧伤范围和烧伤时间,16只兔随机分成4组,各组给药量相应改变。两周后,摄片分析CNV面积。结果 实验眼组较对照眼组,CNV被抑制了27.83％,P<0.01组1的抑制率为35.26%,P<0.01;组2的抑制率为48.32％,P<0.05;组3的抑制率为8.01％,P<0.01;组4的抑制率为34.84%,P<0.01。结论 RI能够抑制碱烧伤后CNV的发生。     

干扰素抑制角膜新生血管的实验研究

目的 :探讨局部应用干扰素对角膜新生血管是否具有抑制作用 ,为临床治疗角膜新生血管提供依据。方法 :2 5只大耳白兔皆以双眼碱烧伤制备角膜新生血管模型 ,随机分成实验和对照二组 :实验组分成A、B、C三组 ,B、C组给予不同深度α IFN隔日结膜下注射 ,A组给予α IFN点眼。碱烧伤后第 14天各组免以墨汁灌注法显示角膜新生务管 ,进行血管图像分析 ,统计学处理 ,扫描电镜下比较两组间新生血管形态差异。结果 :结膜下注射α IFN实验和对照血管图像分析 ,统计学处理后F >F0 .0 1,P <0 . 0 1;结膜下注射α IFN使角膜新生血管形成受到抑制破坏。结论 :结膜下注射α IFN具有抑制角膜新生血管作用 ,且剂量大者抑制作用显著。但α IFN局部点眼对角膜新生血管无抑制作用。     

重组人内皮抑素抑制角膜新生血管的实验研究

目的研究重组人内皮抑素（rHES）对碱烧伤诱导大鼠角膜新生血管（CNV）的抑制效应。方法60只Wistar大鼠按随机数字表法分为正常组、阳性对照组、rHES组3组,每组各20只。阳性对照组右眼角膜碱烧伤后不治疗;rHES组右眼角膜碱烧伤后立即100mg／mL rHES点眼,每日3次;20只正常鼠不做任何干预处理作为正常组。观察碱烧伤后1、4、7、10、14d各组角膜情况及CNV的生长面积。碱烧伤后第16天处死动物,取角膜行组织病理学检查。免疫组织化学、PCR检测血管内皮生长因子（VEGF）蛋白量和mRNA在角膜组织的表达,透射电镜下检查碱烧伤后角膜组织的超微结构变化。结果rHES组角膜在碱烧伤后各时间点新生血管面积均小于阳性对照组（t4d=3．294,P=0．040;t7d=5．391,P=0．000;t10d=6．560,P=0．000;t14d=10．346,P=0．000）。角膜碱烧伤后第16天各组VEGF蛋白表达量的差异有统计学意义（F=337．62,P=0．00）,各组VEGF mRNA表达量的差异有统计学意义（F=114．43,P=0．00）。透射电镜检查显示正常组结构正常,rHES组较阳性对照组角膜结构变化小。PCR结果发现rHES组VEGF mRNA的相对表达量低于阳性对照组,但高于正常组。结论rHES用于眼表可有效抑制碱烧伤诱导的CNV。     

软骨源抑制因子抑制角膜新生血管的实验研究

目的 观察软骨源抑制因子（ＣＤＩ）在活体状态下对角膜新生血管的抑制效果。方法 制备高纯度的ＣＤＩ和４组（６４只眼）的兔角膜新生血管模型,采用角膜微袋分析技术和病理方法定量检测,观察在不同情况下ＣＤＩ对角膜新生血管的抑制作用。结果 纯化的ＣＤＩ对角膜新生血管的生长速度和生长面积均有显著的抑制作用（Ｐ〈０．００１）。结论 纯化的ＣＤＩ在一定条件下能特异性地抑制机体组织中的角膜新生血管生长,抑制效果呈剂     

重组人内皮抑素滴眼液抑制小鼠角膜新生血管形成的研究

目的　检验重组人内皮抑素对角膜新生血管形成的抑制效果,探索其临床应用价值。 方法　用MTT方法检验重组内皮抑素对血管内皮细胞的增殖抑制活性;用重组人内皮抑素滴眼液,治疗小鼠角膜碱烧伤导致的角膜新生血管形成。 结果　重组人内皮抑素 10μg/mL时可抑制bFGF刺激下HUVEC的增殖,抑制率达到 42 1% (P<0 05); 100μg/mL的内皮抑素可抑制碱烧伤诱导的小鼠角膜新生血管形成,治疗 7d时新生血管长度较未治疗组减少 30 9%(P<0 01),新生血管化面积减少了 13 7% (P<0 01)。 结论　内皮抑素特异地抑制血管内皮细胞增殖,抑制碱烧伤诱导的小鼠角膜新生血管形成,可能成为临床上预防、治疗相关眼科疾患的药物。     

血管抑素抑制大鼠角膜新生血管的研究

目的研究血管抑素（AS）对大鼠角膜碱烧伤后新生血管的抑制作用。方法120只Wistar大鼠制作碱烧伤角膜新生血管（CNV）模型,随机分为4组,分别为2.5μgAS组、5μgAS组、地塞米松组、生理盐水组,每组30只。分别给予2.5μg/0.1mLAS、5μg/0.1mLAS、0.1mg/0.1mL地塞米松、生理盐水各0.1mL,球结膜下注射,隔日1次,共4次。在大鼠角膜碱烧伤后不同时间裂隙灯下观察大鼠角膜混浊度,计算新生血管面积,分析角膜组织病理切片。结果2.5μgAS组、5μgAS组及地塞米松组在第7、10、14天较生理盐水组角膜混浊程度轻,差异均有统计学意义（P〈0.05）;2.5μgAS组、5μgAS组及地塞米松组在碱烧伤后第3天起各时间点新生血管面积小于生理盐水组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论AS能有效抑制大鼠角膜碱烧伤后CNV的形成。     

人羊膜匀浆上清液抑制兔角膜新生血管的研究

目的观察人羊膜匀浆上清液对家兔角膜新生血管（CNV）的抑制作用。方法63只新西兰白兔随机选取3只作为正常对照组,余60只制作双眼碱烧伤模型,随机分为4个组：A组为碱烧伤对照组滴用PBS液,B、C、D组为实验组分别滴用50、200、400μg／mL的羊膜匀浆上清液。术后1、5、7、14、28d每组分别随机处死3只兔子,行组织病理学检查,测量微血管数量、多形核白细胞（PMNL）含量、血管内皮生长因子（VEGF）的表达量。结果碱烧伤1、5、7、14、28d各时间点CNV的生长面积、微血管计数、PMNL浸润、VEGF的表达4个组差异均有统计学意义（P〈0．01）,其中D组均数最小。VEGF、PMNL、微血管计数三者呈正相关（P〈0．01）。结论羊膜匀浆上清液有减轻角膜血管化的作用,呈质量浓度依赖性,质量浓度达到400μg／mL时抑制作用显著增强。     

羊膜匀浆提取液抑制兔角膜新生血管及超微结构的研究

目的: 观察羊膜匀浆提取液对大鼠碱烧伤后抑制角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)以及对角膜超微结构的影响,探讨羊膜匀浆提取液(amnioticmembrane,AM)临床应用的合理浓度。方法: SD大鼠40只40眼,通过1mol/L的NaOH建立角膜碱烧伤模型。对照组(A组)行PBS液点眼4次/d,其余三组(B、C、D组)分别行240,400,560μg/mL的AM点眼。通过裂隙灯显微镜记录并比较四组角膜新生血管的生长情况。角膜共聚焦显微镜动态观察损伤后角膜的超微结构。结果: 损伤后的各个时间点,C组的角膜新生血管面积与A、B两组均有显著性差异(P<0.05),即随着羊膜匀浆提取液浓度的增加,其抑制角膜新生血管的作用增强。但是C、D两组之间的CNV面积差异无统计学意义。角膜共聚焦显微镜观察发现,羊膜匀浆提取液治疗组的多形核细胞浸润明显少于对照组。结论: 羊膜匀浆提取液对碱烧伤后角膜新生血管的抑制作用呈剂量依赖性,但当浓度达到400μg/mL,其对角膜新生血管的抑制作用趋于稳定。这可能部分与羊膜匀浆提取液抑制碱烧伤炎症反应有关。     

血管内皮细胞生长抑制因子VEGI151重组腺病毒对角膜新生血管的抑制作用

目的研究以复制缺陷型重组腺病毒为载体的血管内皮细胞生长抑制因子VEGI151对角膜新生血管的抑制作用。方法利用腺病毒载体pCA13构建携带VEGI151基因的质粒,经293A细胞包装、扩增,WesternBlot检测病变细胞内基因的蛋白质表达,体外检测AdVEGI151对ECV304细胞的抑制作用,缝线诱导法建立炎症性兔角膜新生血管模型,给予体内基因治疗。结果VEGI151重组腺病毒在病变细胞内能成功表达相对分子质量为17300的蛋白,体外实验表明,可以强烈抑制静脉内皮细胞的生长,体内实验表明,重组腺病毒对炎症性角膜新生血管的生长具有抑制作用。结论以复制缺陷型重组腺病毒为载体的血管内皮细胞抑制因子VEGI151基因治疗角膜新生血管效果显著,为角膜新生血管的基因治疗提供了新的思路。     

重组人血管内皮抑制素注射液对激光诱导兔脉络膜新生血管的抑制作用

背景脉络膜新生血管（CNV）是多种眼底病变的严重并发症。研究表明,重组人血管内皮抑制素能够阻断血管内皮生长因子（VEGF）的信号通路,并通过核仁素发挥体内外抗血管生成的效应。目的观察玻璃体腔内注射重组人血管内皮抑制素对激光诱导CNV的抑制作用。方法将8～12周龄的健康青紫蓝兔16只用随机数字表法分为模型组和重组人血管内皮抑制素组,所有动物用氩离子532nm绿激光机在视盘下方1—2DD处击射25点诱导实验性CNV模型,重组人血管内皮抑制素组于光凝后1周玻璃体腔内注射给药。2组兔均于造模后1、2、4周行荧光素眼底血管造影（FFA）和光学相干断层扫描（OCT）检查,并于造模后2周、4周摘除眼球制作视网膜切片,用苏木精-伊红染色法行视网膜组织病理学检查。收集动物玻璃体和血清,用ELISA法检测VEGF和色素上皮衍生因子（PEDF）质量浓度。结果眼底检查表明激光光凝后1周即出现视网膜水肿和渗出,光凝后第4周可见光凝点周围的灰黄色瘢痕。FFA检查显示,光凝后1周42％（84／200）的光斑在脉络膜期和动脉早期出现高荧光团,造模后2周重组人血管内皮抑制素组荧光素渗漏少于模型组,造模后4周渗漏几乎消失。OCT检查显示,兔眼光凝后1周激光斑下方的视网膜色素上皮（RPE）下出现团块状、梭形或不规则膨大的局部强反射区,其间可见条带状或片状红白色高密度反光;光凝后各时间点重组人血管内皮抑制素组OCT检查可见部分CNV闭塞,愈合早,瘢痕较小。视网膜组织病理学检查表明,重组人血管内皮抑制素组光凝区视网膜结构的损伤表现比模型组CNV发展迟缓。重组人血管内皮抑制素组各时间点血清PEDF的质量浓度均明显高于模型组（P〈0．01）,各时间点玻璃体及血清VEGF／PEDF比值模型组均高于重组人血管内皮抑制素组（P〈0．05）。结论氩激光损伤可以成功建立青紫蓝兔CNV模型;玻璃体腔内注射重组人血管内皮抑制素能够抑制实验性青紫蓝兔CNV的形成和发展。     

注射用盐酸多西环素对兔角膜新生血管的抑制作用

目的　研究基质金属蛋白酶抑制剂盐酸多西环素对兔角膜新生血管（corneal neovascularization,CNV）生长的影响。方法　成年大耳白兔33只（66眼）,随机分为对照组、碱烧伤组和多西环素组。对照组3只（6眼）不做处理。剩余30只（60眼）利用1 mol·L^-1NaOH滤纸片建立双眼碱烧伤模型,右眼为多西环素组,左眼为碱烧伤组。碱烧伤组不给予药物治疗,多西环素组隔日结膜下注射0.1 mL注射用盐酸多西环素（10 g·L^-1）。观察兔CNV的生长情况,应用免疫组织化学化法检测角膜组织中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）、组织型金属蛋白酶抑制剂-2（tissue inhibitors of metalloproteinase-2,TIMP-2）的表达情况。结果　造模后3 d,可见碱烧伤组和多西环素组CNV长入透明角膜。造模后4 d、7 d、14 d、21 d,多西环素组CNV的面积分别为（6.15±2.85）mm²、（14.39±4.04）mm²、（18.07±5.74）mm²、（19.44±6.95）mm²,碱烧伤组CNV的面积分别为（17.00±4.60）mm²、（37.93±6.91）mm²、（42.25±9.32）mm²、（38.81±4.87）mm²,各时间点多西环素组CNV的面积均明显小于碱烧伤组（均为P<0.05）。造模后1 d、4 d、7 d、14 d、21 d,多西环素组角膜上皮层VEGF灰度值分别为167.74±10.59、140.14±12.14、128.69±9.21、103.06±8.29、176.16±9.72,碱烧伤组角膜上皮层VEGF灰度值分别为129.79±10.97、100.51±21.73、81.38±9.98、62.54±10.30、148.81±8.65,造模后各个时间点多西环素组VEGF的表达均明显少于碱烧伤组（均为P<0.05）。造模后4 d、7 d、14 d,多西环素组角膜上皮层MMP-2灰度值分别为83.50±14.81、123.42±16.20、110.90±8.98,碱烧伤组角膜上皮层MMP-2灰度值分别为65.27±12.84、91.31±13.22、94.28±6.46,造模后4 d、7 d、14 d多西环素组角膜上皮层MMP-2表达均明显低于碱烧伤组（均为P<0.05）。造模后21 d,角膜上皮层TIMP-2的表达最强,但造模后多西环素组角膜上皮层TIMP-2表达和碱烧伤组表达强度相似,两组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论　VEGF、MMP-2、TIMP-2在CNV发生发展中发挥着重要的调控作用,盐酸多西环素可通过抑制基质胶原纤维的降解来降低炎症反应,并通过抑制角膜碱烧伤后兔角膜组织中VEGF、MMP-2的表达,进而抑制CNV的发生发展。     

盐酸吡格列酮抑制大鼠角膜新生血管的研究

目的 探讨眼局部应用过氧化物酶增生体激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR-γ)配体盐酸吡格列酮对大鼠角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)的抑制作用及其对CNV化大鼠角膜组织中PPAR-γ、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响.方法 角膜缝线法制作大鼠CNV模型,24只诱发新生血管的SD大鼠随机分为吡格列酮治疗组和生理盐水处理组,每组各12只,并以6只正常大鼠做对照.裂隙灯显微镜下观察各组CNV的生长情况,计算CNV面积;免疫组织化学法检测角膜组织中PPAR-γ和VEGF的表达.结果 (1)盐酸吡咯列酮治疗组在第5天、第12天、第20天、第28天的新生血管面积分别为(3.96±3.07)mm2、(13.06±4.97)mm2、(24.42±5.92)mm2、(10.49±3.12)mm2,而生理盐水对照组的新生血管的面积分别为(9.00±2.22)mm2、(17.25±2.11)mm2、(31.89±2.54)mm2、(19.12±3.15)mm2,2组相比差异有显著统计学意义(P<0.01);(2)PPAR-γ在正常组角膜上表达量为2.70±2.16,在新生血管化大鼠角膜上的表达为13.30±4.71,2组比较差异有统计学意义(P<0.05);(3)盐酸吡格列酮治疗组PPAR-γ和VEGF的表达量分别为27.40±14.34、14.90±3.67,而生理盐水处理组分别为13.30±4.71、33.70±11.06.与生理盐水处理组比较,治疗组PPAR-γ的表达大幅上升(P<0.05),VEGF的表达则明显降低(P<0.05).结论 盐酸吡格列酮能够抑制大鼠CNV,其机制可能与活化PPAR-γ,降低CNV化角膜上VEGF的表达有关.     

Inhibitory effect of triamcinolone acetonide on corneal neovascularization

Background Corneal neovascularization (NV) plays an important role in the pathogenesis of corneal disorders. Recently, triamcinolone acetonide (TA) has been reported as a potential treatment for ocular angiogenesis. However, there are no reports on the inhibitory effect of TA on the corneal NV. Methods Triamcinolone acetonide (2 mg) was administered to four rabbits' eyes by a subconjunctival injection immediately after a basic fibroblast growth factor (bFGF)-pellet was placed into the cornea. As a control, four eyes received an injection of distilled water. Four weeks later, the inhibition of corneal NV was evaluated as the percentage ratio of the vessel invasion area to the area that was sandwiched between the pellet and the limbus cornea. To identify the characteristic appearance of new corneal vessels, the control cornea was examined by using the antibody of vascular endothelial growth factor (VEGF). To confirm TA concentration in TA-treated corneas, the TA level was measured using high-performance liquid chromatography. Results Neovascularization from the limbus to the pellet was detected in control eyes 4 weeks after the bFGF pellet implantation. TA-treated eyes demonstrated the inhibition of the neovascular response to the pellet. The severity of NV as compared between control and TA-treated eyes was statistically significant (P<0.05). Morphologically, new vessel growth was shown in the control cornea, and endothelial cells of new vessels were positively stained with the antibody of VEGF. TA concentration in TA-treated corneas at 2 weeks showed 63.5±42.8 μg/g (n=4, mean ± SD), while TA was not detected in control and TA-treated corneas at 4 weeks. The level of TA was effectively maintained for at least 2 weeks after the subconjunctival injection. Conclusion We have demonstrated that subconjunctival TA administration inhibited rabbit corneal NV. This agent may prove useful in the treatment of corneal angiogenic disorders. No human subjects are involved as experimental animals were used in this study     

姜黄素对大鼠碱烧伤角膜新生血管的抑制作用

目的:探讨姜黄素(curcumin)对大鼠角膜新生血管(corne-al neovascularization,CNV)形成的影响及CNV形成过程中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide syn-thesis,iNOS)的表达情况。方法:以碱烧伤建立角膜新生血管模型,采用裂隙灯照相、免疫组化和RT-PCR等方法分别检测使用姜黄素前后各时期角膜组织中VEGF和iNOS的表达情况,并进行统计学分析。结果:姜黄素结膜下注射组角膜新生血管面积明显减少(t值分别为4.453,4.440,3.887,4.718,3.585,P<0.05);免疫组化染色,VEGF和iNOS在正常角膜上皮基底细胞有弱表达,新生血管对照组表达明显增强,其表达主要分布在新生血管形成区域和上皮全层;结膜下注射组表达明显减少;VEGF mRNA和蛋白表达一致。结论:姜黄素可以有效抑制角膜新生血管的发生,其机制与降低角膜新生血管VEGF和iNOS有关。     

分泌粒蛋白Ⅲ(Scg3)抗体对角膜新生血管的抑制作用

目的 分析分泌粒蛋白III (Scg3)抗体对兔角膜新生血管(CNV)的干预作用。方法 选取健康新西兰白兔45只,未做碱烧伤的5只作为对照组,剩余40只白兔用碱烧伤法构建CNV模型,随机分为模型组(20只)和干预组(20只),自碱烧伤之日起每隔2 d结膜下分别注射0.1 mL 1×PBS溶液或0.5 mg·L^-1的Scg3抗体工作液。碱烧伤后14 d, Western blot检测对照组与模型组兔角膜组织中Scg3的蛋白表达。分别在碱烧伤后1 d、7 d、14 d应用眼前段分析仪测量CNV的面积和长度,应用角膜共聚焦显微镜观察眼表变化,利用蛋白芯片法检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β1(TGF-β1)等炎症相关细胞因子的表达。结果 角膜碱烧伤后14 d,模型组兔烧伤区域出现大量CNV,而干预组兔角膜无明显CNV生长。Western blot检测结果显示,与对照组相比,模型组兔角膜中Scg3蛋白表达显著升高(P<0.05)。角膜共聚焦显微镜下观察可见,模型组兔的角膜缘内出现大量活动性CNV。角膜碱烧伤后7 ...