重视角膜基质细胞的作用

位于角膜基质胶原纤维板层之间的角膜基质细胞处于静息状态,可以分泌胶原以及硫酸角质素,对角膜透明性的维持发挥着重要作用。当角膜受到损伤时,角膜基质细胞可发生凋亡,向成纤维细胞以及肌成纤维细胞等修复细胞表型转化,进而促进细胞再生,诱导角膜纤维瘢痕形成。此外,大量角膜基质细胞还具有干细胞特性。目前已知角膜基质细胞是多种机体功能的积极参与者,应重视角膜基质细胞的作用。     

姜黄素对角膜基质细胞纤维化的抑制作用

背景角膜的创伤或手术可导致角膜基质细胞纤维化,进而形成瘢痕。研究表明姜黄素可明显减轻组织的纤维化程度,但姜黄素是否会影响角膜基质细胞纤维化的研究尚少。目的观察不同质量浓度的姜黄素对小鼠角膜基质细胞向成纤维细胞转化过程的影响,探讨姜黄素抗角膜基质纤维化的作用。方法150只6～8周龄BALB／c小鼠,分离角膜基质细胞并在含质量分数10％胎牛血清（FBS）的DMEM中进行培养,以原代角膜基质细胞重悬于DMEM中并分为5组：（1）空白对照组（DMEM＋10％FBS,含质量分数1％。DMSO,CG组）。（2）低剂量组（CG＋7．5mg／L姜黄素组）。（3）中剂量组（CG＋10mg／L姜黄素组）。（4）高剂量组（CG＋12．5mg／L姜黄素组）。（5）无诱导剂组（DMEM,含1％oDMSO）。上述因素干预7d后,用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测各组中细胞表型keratocan、醛脱氢酶（ALDH）、CD90、decorin、fibronectin一1的表达。用MTS法检测姜黄素对角膜基质细胞增生的影响。制备小鼠角膜冰冻切片,采用免疫荧光技术检测角膜基质细胞内fibronectin-1的表达。结果原代培养的角膜基质细胞呈梭形,为细胞质丰富且核大的角膜基质成纤维细胞。随着姜黄素质量浓度的增加,角膜基质细胞中keratocanmRNA、ALDHmRNA的表达量增加,CD90mRNA和decorinmRNA的表达量减少,差异均有统计学意义（P〈O．05）,fibronectin-1mRNA的表达变化差异无统计学意义（P〉0．05）。MTS法检测发现,随着姜黄素质量浓度的增加,对角膜基质细胞增生的抑制率逐渐增加（F=956．00,P〈0．05）。免疫荧光技术检测发现角膜基质细胞中fibronectin-1的表达呈红色荧光。结论姜黄素对离体小鼠角膜基质细胞纤维化有明显的抑制作用,可减轻角膜基质创伤修复过程中的过度纤维化。     

微型角膜刀法与乙醇浸润法准分子激光角膜上皮瓣下磨镶术对角膜基质细胞影响的实验研究

目的探讨微型角膜刀法准分子激光角膜上皮瓣下磨镶术（Epi-LASIK）与乙醇浸润法准分子激光角膜上皮瓣下磨镶术（LASEK）对角膜基质细胞的影响研究。方法50只新西兰大白兔随机编号,其中48只（96只眼）随机一只眼行Epi-LASIK,另一只眼行LASEK,余2只（4只眼）未进行手术,作为对照组。采用核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口标记（TUNEL）法观察角膜基质细胞的凋亡情况、Ki-67和d平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的免疫组化和免疫印迹法测定角膜组织d-SMA蛋白来观察角膜基质细胞的增殖与向肌成纤维母细胞转化情况,进行计数与半定量分析,对haze形成影响进行分析。结果Epi-LASIK与LASEK术后角膜基质中均有较多的TUNEL阳性细胞出现,在术后24h达最高峰,LASEK术后1周内细胞凋亡情况较Epi-LASIK明显（t=3．63、7．80、4．34、2．95,均P〈0．01）。术后1周基质Ki-67阳性细胞表达增高,72h时达高峰,两组在1周内差异有统计学意义（t=3．81、5．85、5．09、5．59,均P〈0．01）。α-SMA阳性细胞在术后1周明显出现,3个月时仍有较高表达,在术后1个月时阳性细胞数达高峰,α-SMA蛋白表达量的情况与α-SMA阳性细胞数变化一致,均提示LASEK术后增高的情况较Epi-LASIK差异有统计学意义（t=2．97、7．19、6．73,均P〈0．01）。结论Epi-LASIK较LASEK有着更少的角膜基质细胞凋亡、更弱的增殖以及向肌成纤维母细胞的转化,提示Epi-LASIK较LASEK有着更轻的haze反应几率。     

核因子кB在人角膜基质细胞中的表达

目的 探讨核因子кＢ（ＮＦ－кＢ）在人角膜基质成纤维细胞中的基础表达及激活情况。方法 取体外培养的第２或３代人角膜基质细胞,同步化后分为２组：无血清的ＤＭＥＭ液培养的不加药组;含质量浓度为１０μｇ／ｍｌ脂多糖的ＤＭＥＭ液培养６小时的加药组。均采用免疫荧光抗体染色、流式细胞仪计数法和核蛋白提取物凝胶迁移率法检测。结果 流式细胞计数法示,角膜基质细胞内ＮＦ－кＢ的基础表达率为９．４％,脂多糖作用后升高     

脱细胞猪角膜基质体外支持皮肤细胞生长的实验研究

目的 探讨脱细胞猪角膜基质体外是否支持皮肤细胞的生长.方法 制备脱细胞猪角膜基质(前期实验已完成).体外培养人皮肤表皮细胞和成纤维细胞,取第3代人皮肤成纤维细胞接种在脱细胞猪角膜基质的中间基质面,培养3 d后,将材料翻转,取第3代人皮肤表皮细胞接种在材料的上皮面上,再培养10 d后,取细胞-支架复合体制作石蜡切片,HE染色后光镜下观察.结果 组织学观察显示皮肤的表皮细胞和成纤维细胞体外均可在脱细胞猪角膜基质上黏附生长.接种10 d后,皮肤表皮细胞在材料表面形成复层结构,可见角化的细胞.接种13 d可见成纤维细胞存活并在支架层间生长.结论 脱细胞猪角膜基质有良好的细胞相容性,在体外能支持皮肤细胞的生长和增生.     

脱细胞猪角膜基质体外支持角膜上皮和基质细胞的生长

目的:探讨脱细胞猪角膜基质体外能否支持兔角膜细胞的生长。方法:体外培养兔角膜上皮细胞和基质细胞,并接种到制备的脱细胞猪角膜基质上,倒置相差显微镜和组织学观察细胞生长情况。结果:上皮细胞能在脱细胞猪角膜基质上贴附生长,10d时可形成2~3层的复层结构。基质细胞在脱细胞猪角膜基质上贴附生长后可向材料深层迁徙。结论:制备的脱细胞猪角膜基质体外可支持兔角膜上皮细胞和基质细胞的生长。     

角膜基质细胞生物学活性与角膜病变

角膜基质细胞是位于角膜基质层中平行排列的胶原纤维板潜在空隙内的扁平细胞。在正常的角膜组织中,角膜基质细胞处于相当稳定的状态。然而,在角膜病变中,角膜基质细胞在发病机制、病理过程及疾病转归中扮演了重要的角色。     

Peters异常：角膜基质中角膜细胞分化及细胞外基质异常

Peters异常以角膜内皮和Descemet膜的缺陷为特征，二与角膜中央的透明性及角膜与晶状体和虹膜的前表面粘连有关。大约50％的病例有前房角发育异常，多为双眼发病。据报道，干扰视神经嵴细胞的迁移和分化有可能导致Peters异常。这种眼部异常可联合全身发育异常，可能是由于在胚胎发育过程中神经嵴细胞机能障碍所致。     

细胞凋亡与角膜损伤修复

角膜基质细胞凋亡影响着包括屈光知识性角膜手术在内的损伤修复过程。本就角膜损伤修复过程中细胞凋亡的概况,相关基因以及影响细胞凋亡发生的局部微环境,细胞凋亡的意义进行了综述。     

羊膜上皮细胞培养液抑制角膜基质细胞凋亡的实验研究

目的 对羊膜上皮细胞培养液抑制由肿瘤坏死因子(TNF-α)诱发的角膜基质细胞凋亡进行研究。方法 体外培养兔角膜基质细胞(RCK),30ng/ml TNF-α诱发角膜基质细胞凋亡。实验分为对照组、羊膜上皮细胞培养液组(羊膜组)和阴性对照组。应用FITC-dUTP-TUNEL和DAPI染色检测RCK细胞凋亡发生率,分别测定经24h培养后各组细胞凋亡特异性DNA梯形降解。Western blot检测细胞凋亡保护性因子Bcl-2、促进因子Bax在经羊膜上皮细胞培养液处理后于细胞中表达强度及Bcl-2/Bax比值变化。结果 羊膜上皮细胞培养液明显抑制由TNF-α诱发的兔角膜基质细胞凋亡,DAPI染色显示24h对照组,羊膜培养液组和阴性对照组细胞凋亡发生率分别为:42.4％±4.3％,2.2％±0.3％和2.7％±0.4％。DNA降解实验显示羊膜上皮细胞培养液明显抑制TNF-α诱导的DNA片段降解。Western blot显示羊膜上皮细胞培养液明显刺激RCK细胞Bcl-2蛋白的表达和分泌。结论 羊膜培养液中可能释放的多种细胞因子对TNF-α诱发的角膜基质细胞调亡具有明显的抑制作用,其作用机制之一是刺激Bcl-2在RCK细胞的表达,并使Bcl-2/Bax比值上调。     

先天性泪囊突出的研究进展

先天性泪囊突出是由于鼻泪管远端(Hasner瓣膜)和近端(Rosenmuller瓣膜)的同时堵塞引起泪囊继发性扩张而形成,典型临床表现为泪囊区皮下青紫色肿物,其与儿童常见先天性泪囊炎有很大区别.此病有自愈倾向,保守治疗有一定疗效,但易引发严重的感染、呼吸窘迫等危及生命的并发症.近来研究倾向于先行保守治疗,无效后再行手术治疗.     

The progress of fixation eye movement research

When eyeball fixes targets, it will produce one frequent and regular movement which is difficult to detect. Such movements is called fixation eye motion. This motion can be further divided into drift, tremor and microsaccades. In recent years, research in this field is strikingly increasing. Due to the significant role on the control of fixation positon, maintaining continuous sense of perception, keeping bistable condition, clear vision, spatial orentation and attention, research in this field is maybe a worthwhile myopia research direction.     

Schlemm管成形术研究进展

Schlemm管成形术（canaloplasty）作为一种新的非穿透性手术越来越引起人们的重视,它通过扩张Schlemm管重建自然房水外流通道以加强房水外流,从而达到降低眼压的目的。Schlemm管成形术手术成功率在原发性开角型青光眼与小梁切除术类似。其优点包括：降眼压作用是非滤过泡依赖性的,术中不需要使用抗代谢药物,因而与滤过泡相关的并发症极低。但这项新技术大范围应用于临床仍有很长的路要走。（国际眼科纵览,2015,39:341.345）     

Caspase inhibitor z-VAD-FMK inhibits keratocyte apoptosis, but promotes keratocyte necrosis, after corneal epithelial scrape

The purpose of this study was to determine whether the caspase inhibitor z-VAD-FMK could be applied topically prior to epithelial scrape injury to inhibit keratocyte apoptosis. Rabbit corneas were treated with z-VAD-FMK or vehicle alone prior to epithelial scrape injury. Cell fate was analysed at 4 hr after epithelial scrape using quantitative TUNEL assay, propidium iodide staining, and transmission electron microscopy. Less stained anterior stromal keratocytes were detected with the quantitative TUNEL assay in corneas pre-treated with z-VAD-FMK than in corneas pretreated with vehicle at 4 hr after epithelial scrape. This difference appeared to be confirmed by propidium iodide staining of keratocyte nuclei. It was observed that fewer nuclei were stained with propidium iodide in the DMSO vehicle treated corneas compared to the z-VAD-FMK treated corneas. Analysis of corneas with transmission electron microscopy, however, indicated that many anterior stromal keratocytes in corneas pretreated with z-VAD-FMK, but not vehicle, had cell morphologic changes more consistent with necrosis. Although pretreatment of corneas with the caspase inhibitor z-VAD-FMK inhibited keratocyte apoptosis detected with the TUNEL assay, transmission electron microscopy revealed that many anterior stromal keratocytes in z-VAD-FMK-treated corneas instead died by necrosis. Thus, z-VAD-FMK is unlikely to be useful to modulate corneal would healing through inhibition of keratocyte apoptosis induced by epithelial injury. The TUNEL assay should not be used to monitor cell fate without confirmation using analyses that also detect necrosis.     

泪液的相关研究与进展

泪液是主要由泪腺分泌的一种水样液体,通过瞬目运动覆盖在眼表面形成泪膜。当前就泪膜的特殊结构和功能等方面,已开展了大量研究,将收集到的泪液,睑板腺分泌物,印迹细胞学、刷检细胞学、结膜活组织检查收集到的眼表细胞,应用电泳、色谱分析联合质谱分析及聚合酶链式反应（PCR）等分子生物学技术,分析泪膜脂质、蛋白、黏蛋白分子及其mRNA是较常用的方法。泪液成分分析技术的进步为I临床医师了解泪膜,诊断及治疗干眼症提供了有力的依据。就泪液成分分析的基本方法和研究现状进行综述。     

弱视的基础与临床的研究进展

弱视是视觉发育敏感期异常视觉经验所导致的以空间视力损害为特征的一组视力不良综合征。据统计：弱视在人群中的发病率为2％-4％,大约40％～60％的儿童斜视、屈光参差因治疗不及时发展成弱视。近年来，随着分子生物学、神经科学、影像学和心理物理学的发展，弱视的基础和临床研究取得了明显的进步，笔者就近年来弱视的研究进展进行综述。     

眼表黏蛋白的研究进展

黏蛋白是眼表泪膜的重要组成部分，由角膜结膜上皮细胞和结膜杯状细胞分泌，具有稳定泪膜、润滑眼表、防止微生物入侵等作用。本文主要综述眼表黏蛋白的来源与分类，黏蛋白的功能，影响黏蛋白分泌的因素以及黏蛋白与眼表疾病的关系。     

角膜晶状体蛋白的概念及其研究进展

晶状体蛋白包括酶类晶状体蛋白和非酶类晶状体蛋白,对维持晶状体透明性具有重要作用.目前研究发现角膜中也存在晶状体蛋白,在角膜透明性及眼部正常结构稳定性的维持中起到重要作用.角膜晶状体蛋白指的是包括酶类晶状体蛋白在内的、一类具有酶及结构组成双重功能、具有物种特异性的水溶性蛋白.人类角膜晶状体蛋白主要包括乙醛脱氢酶(ALDH)和转酮醇酶(TKT).这些角膜晶状体蛋白在角膜组织中可通过结构改变吸收紫外线,减少正常组织的损伤,也可通过降解脂质过氧化反应中产生的有毒醛类,抗氧化作用保护眼正常结构的稳定性.同时,角膜晶状体蛋白也在角膜透明性的维持过程中发挥重要作用.此外,部分角膜晶状体蛋白还参与到细胞周期的调控.本文就角膜晶状体蛋白的概念、种类、结构、分布及作用等行为学研究的现状及进展进行综述.