天津地区志贺菌属产超广谱β内酰胺酶及其基因型的检测

目的 了解天津地区志贺菌属产超广谱β内酰胺酶(ESBL)的流行基因型、耐药特征和流行病学特征,探讨产ESBL志贺菌属特性与耐药质粒的关系.方法 136株志贺菌来源于2009年5月至2010年9月在天津市儿童医院、天津医科大学第二医院及天津市第一中心医院门诊就诊的以脓血便为主的腹泻患者粪便标本,纸片扩散法筛选可疑产ESBL志贺菌属;对产ESBL志贺菌进行接合试验,供体菌和接合子进行耐药性测定,以确定耐药性质粒传递;采用TEM、SHV、CTX-M-1组、CTX-M-2组、CTX-M'9组β内酰胺酶通用引物对产ESBL菌株的基因型进行PCR检测.使用肠杆菌科基因间的重复序列PCR(ERIC-PCR)分析产ESBL菌株的分子同源性.采用x2检验.结果 136株志贺菌属中,产ESBL志贺菌20株,检出率为14.7％,未检测出产AmpC酶菌株.其中16株志贺菌基因型为CTX-M-14型,4株为CTX-M-15型;产CTX-M型ESBL菌株对多种抗菌药物耐药,但对亚胺培南的敏感率为100％.18株产ESBL志贺菌接合试验获得成功,其接合子对β内酰胺类抗菌药物耐药.结论 天津地区志贺菌属产ESBL基因型以CTX-M型为主,产ESBL是志贺菌属对β内酰胺类耐药的主要原因,产ESBL菌株的传播机制以质粒介导为主.     

耐药志贺菌1类整合子的研究

目的分析我院志贺菌的流行菌株类型和耐药特点,研究志贺菌1类整合子的检出率、与耐药的相关性及其携带的耐药基因盒。方法从本院肠道门诊腹泻患者的粪便标本分离出70株志贺菌,以K-B琼脂法测定药敏情况;PCR扩增1类整合子可变区并进行序列测定和基因盒分析。结果70株志贺菌对四环素、复方新诺明、氨苄西林、利福平、萘啶酸的耐药率均>60%;对喹诺酮类常用药诺氟沙星耐药率较低,为12.8%;对头孢菌素类的耐药率≤10%。多重耐药率较高,达到77.1%。16株(22.9%)志贺菌中检出1类整合子。其中8株检出大小约为1 900 bp的1类整合子,测序显示含有编码对甲氧苄啶耐药的基因盒dhfrXⅡ和对氨基糖苷类耐药的基因盒aadA2,另8株检出大小约为1 000 bp的1类整合子,测序显示含有编码对氨基糖苷类耐药的基因盒aadA2。结论本院志贺菌流行株主要是福氏和宋内氏志贺杆菌,多重耐药率较高。志贺菌中存在1类整合子,与志贺菌的耐药具有相关性     

福氏志贺菌中超广谱β-内酰胺酶的基因型分析

目的检测福氏志贺菌中超广谱G内酰胺酶（ESBLs）的基因型别。方法琼脂稀释法测定5株福氏志贺菌对多种抗菌药物的敏感性，并进行接合试验；改良三维试验检测产ESBLs菌株，同时对这些菌株进行脉冲场电泳（PFGE）检测；采用TEM、SHV、CTX-M-1组、CTX-M-2组、CTX-M-9组β-内酰胺酶通用引物以及TEM、CTX-M-9组全编码基因引物进行PCR检测，并对全编码基因PCR产物进行DNA序列分析。结果三维试验结果显示，5株福氏志贺菌均为产ESBLs菌株，对青霉素类、第一代、第二代头孢菌素以及四环素、复方磺胺甲嗯唑显著耐药，对第三代头孢菌素中头孢曲松、头孢噻肟耐药或中度敏感，对亚胺培南、头孢美唑、氟喹诺酮类、头孢噻肟克拉维酸、头孢他啶、头孢他啶一克拉维酸显示敏感。对于β-内酰胺类的耐药性可以通过接合方式发生水平转移；ESBLs基因型别为CTX-M-14，5株菌株的PFGE谱型可分为A、B两种谱型。结论5株福氏志贺菌产生CTX-M-14型超广谱β-内酰胺酶，导致对多种β-内酰胺类抗生素耐药，并存在克隆传播，需加强监控。     

临床痢疾志贺菌整合子检测及耐药基因盒序列分析

目的 检测印度东部1988、1995和2002年部分临床分离痢疾志贺菌中细菌耐药关系密切的1、2、3类整合酶基因及整合子携带的耐药基因盒的分布,分析整合子系统对志贺菌耐药的影响.方法 纸片扩散法检测实验菌株对药物的敏感性;应用PCR方法对16株临床耐药菌株进行1、2、3类整合酶基因(intI)筛选,对阳性样本可变区基因盒序列进行鉴定分析.结果 所有16株菌均耐4种及4种以上药物,包括β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、磺胺类、氯霉素类和喹诺酮类.13株菌检出1类整合酶基因,全部菌株含2类整合酶基因,即发现同时存在两种整合子结构菌株,未检测到3类整合酶基因.1类整合酶插入基因盒以blaara30-aadAl基因家族为主,分别对β-内酰胺类抗生素、链霉素、壮观霉素耐药;2类整合酶插人基因盒以dfrAl-satl组合为主,分别对甲氧苄氨嘧啶、链丝菌素耐药,同时在4株菌中发现dfrAl-satl-aadAl基因盒组合.结论 2类整合子普遍存在于临床志贺菌中.整合子与志贺菌的多重耐药具有密切相关性.     

整合子及相关基因盒在临床分离铜绿假单胞菌中的分布

目的检测Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合子及Ⅰ类整合子相关基因盒在铜绿假单胞菌临床分离株中的分布,分析整合子对细菌耐药性的影响。方法用纸片法对62株临床分离铜绿假单胞菌进行药敏试验;应用多重PCR法检测62株铜绿假单胞菌Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合子;对Ⅰ类整合子阳性菌进行整合子相关基因盒检测。结果62株菌中有40株(64.5%)含有Ⅰ类整合子,1株(1.6%)含有Ⅱ类整合子;没有检测到Ⅲ类整合子阳性菌。在Ⅰ类整合子阳性菌中,有26株携带Ⅰ类整合子相关基因盒(65.0%);分离自同一科室的部分菌株携带大小相同的基因盒;Ⅰ类整合子阳性菌株的耐药率高于整合子阴性的菌株。结论Ⅰ类整合子及整合子相关基因盒在铜绿假单胞菌临床菌株中分布广泛,整合子在细菌耐药中发挥作用。     

天津地区福氏志贺菌整合子携带及耐药性研究

目的了解天津地区不同年份福氏志贺菌血清型分布,整合子携带情况,耐药性及其变化趋势。方法采用血清学方法对天津地区不同年份分离的56株福氏志贺菌进行分型;PCR扩增整合子整合酶及可变区,并测序;采用K-B法测定其对16种抗菌药物的敏感性。结果 1981~1983年分离株福氏志贺菌1类整合酶阳性率为87.50%(28/32),其中27株可变区含氨基糖苷类药物耐药基因aadA;2009~2011年分离株福氏志贺菌1类整合酶阳性率为91.67%(22/24),可变区及3’末端扩增均阴性。1981~1983年分离株福氏志贺菌2类整合酶均阴性;2009~2011年分离株福氏志贺菌2类整合酶阳性率79.17%(19/24),可变区含dfrA1、sat1、aadA1,介导对甲氧苄啶、链丝菌素和链霉素耐药。有17株福氏志贺菌1、2类整合酶均阳性。1981~1983年分离株福氏志贺菌对四环素、链霉素、氯霉素及甲氧苄啶/磺胺甲噁唑耐药率高,多重耐药率为65.63%;2009~2011年分离株福氏志贺菌对氨苄西林、链霉素、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑、哌拉西林和四环素耐药率高,多重耐药率为83.33%。结论 1、2类整合子广泛存在于天津地区福氏志贺菌中,其中1类整合子3’保守末端可能缺失或存在变异。2009~2011年分离株福氏志贺菌对抗菌药物耐药性较1981~1983年分离株增强,多重耐药率增高。福氏志贺菌优势血清型发生转变,血清型分布呈现多样化。     

肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶耐药基因的临床研究

目的探讨肺炎克雷伯菌感染的药敏及β-内酰胺酶耐药基因的分布情况。方法对近2年分离的268株肺炎克雷伯菌培养阳性标本结果进行回顾性分析,并随机选择其中20株肺炎克雷伯菌进行p内酰胺酶基因（TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-9群、OXA-1群、OXA-2群、0xA-10群、PER、GES、VEB、CARB、DHA、ACT-1）检测并分析。结果产超广谱β-内酰胺酶菌对多种抗生素的耐药性较非产酶株显著升高,对β-内酰胺类、喹诺酮类和青霉素类抗生素几乎全部耐药,但对亚胺培南的敏感性为100．0％;且肺炎克雷伯菌β-内酰胺类抗菌药物耐药与产β-内酰胺酶密切相关。结论近年来该菌感染率高,且产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌对多种抗生素的耐药性呈上升趋势,应高度重视,及时加强对该菌的药敏及耐药谱检测,具有十分重要的临床意义。     

基因盒-整合子系统与志贺菌耐药

随着抗生素的广泛应用,志贺菌的耐药特别是多重耐药问题日趋严重.具有捕获及表达外来基因能力的整合子(integron)系统作为新的细菌耐药机制,正越来越受关注.根据整合酶int Ⅰ的不同,整合子可分为6类.其中1,2,3类整合子研究较多,并已被证明与细菌的耐药性有关.最近研究表明,2类整合子是志贺菌中最常见的整合子.本文就基因盒-整合子系统的概念、结构及与志贺菌耐药相关性等进行综述.     

广西宋内志贺菌药敏特性及ESBLs基因检测分析

目的了解广西地区宋内志贺菌的药敏特性及携带超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因与型别特征,为临床合理用药和控制耐药性的传播提供科学依据。方法采用微量肉汤稀释法对宋内志贺菌分离株进行药物敏感试验;采用PCR方法和毛细管电泳方法检测菌株携带相关ESBLs基因;采用近邻相接法构建系统进化树,分析菌株CTX-M型基因型别;对菌株携带ESBLs基因与特定抗菌药物耐药性的关系进行统计学分析。结果90株宋内志贺菌对环丙沙星敏感率为86.67%,无耐药现象;头孢曲松耐药率为96.67%,阿奇霉素耐药率为96.67%,多重耐药率为98.89%。90株宋内志贺菌中50株检出blaCTX-M-9 group基因,检出率为55.56%,经系统发育分析均为CTX-M-14亚型;1株检出blaTEM基因,检出率为1.11%;未检出blaCTX-M-1 group,blaCTX-M-2 group,blaCTX-M-8 group,blaCTX-M-25 group和blaOXA,blaSHV,blaNDM,blaVIM等β-内酰胺酶基因。blaCTX-M-14基因阳性菌株与blaCTX-M-14基因阴性菌株对头孢噻肟的耐药率差异无统计学意义(χ²=0.000,P>0.05);携带blaTEM基因的菌株对头孢他啶不耐药。结论广西地区的宋内志贺菌对主要治疗药物头孢曲松高度耐药,且多重耐药现象严重;菌株普遍携带ESBLs基因,主要为CTX-M-14亚型;携带单一型别的ESBLs基因与菌株对特定β-内酰胺类抗菌药物耐药无明显关联。     

屠宰生猪多重耐药沙门菌I类整合子与耐药基因的检测

目的了解屠宰生猪沙门菌分离株多重耐药与I类整合子及耐药基因的携带关系。方法采用K-B纸片法对屠宰生猪78株沙门菌分离菌株进行22种抗生素敏感试验;应用PCR技术对沙门菌分离菌株进行I类整合子及耐药基因检测。结果78株沙门菌分离株中有41株(52.56%)对2种以上抗生素耐药,属于多重耐药株,强力霉素-四环素-卡那霉素-氯霉素是主要多重耐药谱;41株多重耐药菌中有19株(46.34%)携带I类整合子,tetB、aph(3)-IIa和Flor基因分别检出最高。结论沙门菌多重耐药性与整合子的携带之间关系密切,耐药表型测定结果与耐药基因检测结果一致。