培美曲塞联合奥沙利铂对人胃癌BGC-823细胞生长的影响

目的:探讨培美曲塞与奥沙利铂对人胃癌细胞BGC-823的生长抑制作用以及可能的作用机制。方法:采用不同浓度培美曲塞和奥沙利铂单独或联合作用于BGC-823细胞。应用MTT法检测BGC-823细胞生长抑制率,FCM检测细胞周期的变化,蛋白质印迹法检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和细胞周期蛋白D1(cell cycle D1,cyclinD1)的表达水平。结果:培美曲塞和奥沙利铂均可抑制BGC-823细胞的生长(P<0.05),且呈时间和剂量依赖性。这两种药物均可明显增加G1期细胞比例,降低S期细胞比例。蛋白质印迹法检测结果显示,cyclinD1和PCNA表达量均明显降低,其中培美曲塞和奥沙利铂联合处理具有协同效应,培美曲塞(80μg/mL)处理24h后序贯奥沙利铂(40μg/mL)处理24h组BGC-823细胞的生长抑制率明显高于双药联合处理组以及奥沙利铂(40μg/mL)处理24h后序贯培美曲塞(80μg/mL)处理24h组(P<0.05)。结论:培美曲塞和奥沙利铂均可抑制胃癌细胞BGC-823的生长,细胞被阻滞于G1期。在双药联合处理中,以培美曲塞序贯奥沙利铂对胃癌细胞的生长抑制最强。     

铂类药物对胃癌细胞生物学行为和MDR1表达的影响

目的 研究顺铂（CDDP）和奥沙利铂（L-OHP）对人胃癌细胞株生长的抑制作用,进而分析两种铂类不同的作用机制。方法 用不同浓度（IC10、IC30、IC50）的CDDP和L-OHP分别作用胃癌细胞株（BGC-823和SGC-7901）24、48、72h,应用MTT比色法检测细胞的增殖抑制率;采用RT-PCR法检测MDR1基因表达量。IC30浓度的两种铂类药物作用于胃癌细胞48h后,用流式细胞术分析细胞凋亡,细胞划痕实验评价细胞迁移能力。结果 两种铂类药物作用后,胃癌细胞BGC-823和SGC-7901的增殖受到抑制,呈时间和剂量依赖,L-OHP的量效变化更明显。两种铂类药物作用后,MDR1呈上升趋势,随着浓度增加和（或）时间的延长,表达增强。BGC-823细胞的凋亡率增加较SGC-7901细胞明显,L-OHP组的细胞凋亡率高于CDDP组;BGC-823细胞的增殖迁移较SGC-7901细胞慢而距离短,CDDP作用后细胞的增殖迁移较L-OHP作用后快而距离长。结论 L-OHP诱导胃癌细胞凋亡及抑制细胞迁移侵袭的能力均强于CDDP。胃癌对两种铂类药的耐药机制可能与其诱导MDR1表达上调有关。     

凋亡抑制蛋白基因在多西紫杉醇耐药胃癌细胞中的差异表达及其意义

目的 研究多西紫杉醇耐药的胃癌细胞中凋亡抑制蛋白(IAP)基因的表达变化,探讨胃癌细胞对多西紫杉醇的耐药机制.方法 体外建立多西紫杉醇耐药的胃癌BGC-823细胞株,采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法检测胃癌细胞的耐药指数和交叉耐药特性;采用Annexin-V F1TC和PI双染法检测多西紫杉醇诱导胃癌细胞的早期凋亡率;采用实时定量PCR法检测胃癌细胞中IAP基因的表达变化.结果 在不同终浓度多西紫杉醇的诱导下,建立了BGC-823/R1、BGC-823/R2和BGC-823/R3胃癌耐药细胞,其对多西紫杉醇的耐药指数分别为10.2、24.5和56.3.BGC-823/R3细胞对顺铂、氟尿嘧啶和奥沙利铂无交叉耐药,对紫杉醇有都分交叉耐药.随着耐药指数的增加,多西紫杉醇诱导胃癌细胞的凋亡率呈下降趋势.BGC-823/R3细胞中IAP(survivin、livin、XIAP、c-IAF2)基因和bcl-2基因的表达明显升高(P＜0.05).相关性分析显示,survivin和XIAP基因的表达水平与多西紫杉醇的IC50值呈正相关(r=0.909,P＜0.001;r=0.892,P＜0.001).结论 凋亡途径的抵抗和IAP的表达上调是胃癌细胞对多西紫杉醇耐药的重要机制.IAP可作为逆转紫杉类药物耐药的新靶点.     

miR-421在胃癌中的表达及对BGC-823细胞增殖的作用

目的探讨miR-421在胃癌细胞中的表达水平及对BGC-823胃癌细胞增殖的作用。方法利用PCR方法分析miR-421在胃癌组织细胞及多种胃癌细胞株中的表达水平,并通过RNA转染技术将miR-421 mimics与miR-421 inhibitors转染BGC-823胃癌细胞;通过CKK-8试剂盒检测转染后BGC-823细胞的增殖情况。结果 miR-421在胃癌组织细胞及多种胃癌细胞株中均表达增强（P〈0.05）;miR-421 mimics转染BGC-823后,癌细胞增殖能力增强（P〈0.05）,而miR-421 inhibitors转染的BGC-823细胞则增殖力受到明显抑制（P〈0.05）。结论 miR-421在胃癌组织细胞及多种胃癌细胞株中均过表达,而miR-421可能直接或间接参与调控BGC-823胃癌细胞的增殖。     

RNA干扰沉默Bmi-1基因对胃癌细胞BGC-823生长及顺铂敏感性作用的研究

目的:探讨Bmi-1基因对胃癌细胞BGC-823增殖、侵袭及顺铂耐药的作用及可能机制。方法:采用LipofectamineTM2000向胃癌细胞BGC-823随机转染成功构建靶向沉默Bmi-1表达的siRNA,分别利用Western Blot、CCK-8、Transwell小室等方法对转染Bmi-1 siRNA的BGC-823细胞的增殖、侵袭能力及顺铂耐药进行检测。结果:转染Bmi-1 siRNA后,BGC-823细胞的增殖、侵袭能力显著下降（P<0.05）,而且顺铂敏感性显著提高。结论:Bmi-1基因与胃癌BGC-823细胞系的增殖、侵袭及顺铂耐药相关,可能是胃癌治疗的靶点。     

重组人p53腺病毒联合奥沙利铂对胃癌细胞SGC-7901的生长抑制作用

目的观察外源p53基因在胃癌细胞SGC-7901内的表达及其对胃癌SGC-7901细胞生长的影响、对胃癌细胞化疗敏感度的作用及机制。方法用重组人p53腺病毒注射液（rAd-p53）及奥沙利铂（OXA）单独及联合作用于胃癌细胞株SGC-7901不同时间后,CCT-8法检测其对体外培养SGC-7901细胞的抑制率,免疫组织化学SP法检测p53蛋白的表达情况,流式细胞仪（FCM）分析其细胞凋亡蛋白Caspase-3的表达情况。 结果rAd-p53及OXA单独作用SGC-7901细胞时,随药物浓度及作用时间的增加,细胞的生长抑制率逐渐增高;两者联合作用48h,其在较低浓度时即可显著抑制细胞生长（P<005）;OXA（6.25 μg/ml）与rAd-p53(5×107、5×108、5×109vp/ml)联合作用48h后,胃癌细胞caspase-3蛋白的含量较对照组升高,但p53蛋白无明显升高。结论OXA和 rAd-p53单药可抑制胃癌细胞的生长, 两者联合对胃癌细胞的抑制作用明显增强; rAd-p53有增强OXA化疗敏感度的作用,其机制与通过线粒体途径激活下游的 caspase-3诱导细胞凋亡有关。     

LncRNA SNHG1靶向miR-101-3p调控胃癌细胞奥沙利铂耐药性

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)核内小RNA宿主基因1(small nucleolar RNA host gene l,SNHG1)靶向微小RNA-101-3p(miR-101-3p)在胃癌细胞BGC-823中对奥沙利铂(OXA)耐药性的影响及其可能的机制.方法 体外培养BGC-823细胞和耐奥沙利铂细胞BG...     

特异性增殖型腺病毒CNHK300-mIFN-γ治疗胃癌的体外实验研究

 目的　研究增殖型腺病毒CNHK300-mIFN-γ在胃癌细胞BGC-823中的特异性增殖能力、目的基因表达能力、肿瘤杀伤作用及安全性。方法　通过增殖实验比较CNHK300-mIFN-γ与CNHK300在胃癌细胞BGC-823与成纤维细胞BJ中的增殖能力;ELISA法检测CNHK300-mIFN-γ和复制缺陷型腺病毒Ad-mIFN-γ在不同细胞中mIFN-γ蛋白的表达量;MTT与细胞病变效应（CPE）实验观察CNHK300-mIFN-γ对胃癌细胞的杀伤效应及安全性。结果　增殖实验结果表明CNHK300-mIFN-γ能选择性地在端粒酶阳性的胃癌细胞中大量增殖;ELISA实验结果表明CNHK300-mIFN-γ在胃癌细胞BCG-823中mIFN-γ的表达量可至（171.93±33.61）ng／ml,表达量高于复制缺陷型腺病毒Ad-mIFN-γ[（0.92± 0.24）ng／ml];MTT与CPE实验表明CNHK300-mIFN-γ对胃癌细胞BGC-823有较强的杀伤作用,对正常细胞并无明显杀伤。结论　增殖型腺病毒CNHK300-mIFN-γ感染胃癌细胞BGC-823后能高效增殖并大量表达mIFN-γ蛋白,对胃癌细胞有明显杀伤作用且安全性良好。     

菝葜皂苷元对胃癌BGC-823细胞增殖、凋亡影响的实验研究

目的：观察不同浓度菝葜皂苷元对体外培养胃癌BGC-823细胞增殖、凋亡的影响.方法：BGC-823细胞经不同浓度菝葜皂苷元处理后,采用MTT法检测细胞的生长活性,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果：随菝葜皂苷元浓度的增加,胃癌BGC-823细胞增殖抑制率、凋亡率亦升高.结论：菝葜皂苷元对胃癌BGC-823细胞的增殖有抑制作用,并可诱导细胞凋亡.     

菝葜皂苷元对胃癌BGC-823细胞增殖、凋亡影响的实验研究

目的:观察不同浓度菝葜皂苷元对体外培养胃癌BGC-823细胞增殖、凋亡的影响.方法:BGC-823细胞经不同浓度菝葜皂苷元处理后,采用MTT法检测细胞的生长活性,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:随菝葜皂苷元浓度的增加,胃癌BGC-823细胞增殖抑制率、凋亡率亦升高.结论:菝葜皂苷元对胃癌BGC-823细胞的增殖有抑制作用,并可诱导细胞凋亡.     

奥沙利铂联合替尼泊甙对胃癌BGC-823细胞的生长抑制和诱导凋亡的协同作用(英文)

Objective:The aim of this study was to investigate the synergistic effects of oxaliplatin and teniposide on proliferation and apoptosis of gastric cancer cell line BGC-823.Methods:MTT assay was carried to examine the inhibition rate of oxaliplatin and teniposide on gastric cancer cell line BGC-823 with various concentrations separately and associatively.The apoptosis rate of BGC-823 cells under the treatment of oxaliplatin or/and teniposide was examined by flow cytometry.The expression level of livin, an ap...     

盐酸小檗碱对人胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究盐酸小檗碱对人胃癌细胞及永生化胃上皮细胞增殖和凋亡的影响,初步探讨其中可能的分子机制。方法：利用不同浓度的小檗碱处理胃癌细胞系MKN-45和SGC-7901细胞,以及永生化胃上皮细胞系GES细胞,采用MTT法测定细胞活力,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡（PI标记）,Western blot检测细胞周期和凋亡相关蛋白的表达。结果：MTT结果显示与空白对照组相比,小檗碱处理后,细胞增殖速度明显受到抑制（P〈0.05）,并呈浓度依赖性,其中50μg/ml处理组最大抑制率为81.3%,这种抑制作用对胃癌细胞更为明显。流式细胞仪检测表明,小檗碱在较低浓度（10μg/ml）时即可诱导胃癌细胞出现G0/G1阻滞,S期细胞百分比减少和细胞凋亡（P〈0.05）,这种作用呈时间和浓度依赖性。Western blot结果提示小檗碱处理后,胃癌细胞Bcl-2蛋白表达水平降低,Bax及p53蛋白表达水平明显上调。结论：小檗碱可抑制胃癌细胞增殖,诱导胃癌细胞凋亡,其机制与阻滞细胞周期进展以及调控凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和p53密切相关。     

rAd-p53联合顺铂对胃癌细胞生长及 KAI1／CD82蛋白表达的影响

目的：观察rAd-p53、顺铂（ DDP）单独及联合作用于人胃癌SGC7901细胞后,对肿瘤细胞增殖凋亡情况、KAI1／CD82蛋白表达情况的影响。方法 rAd-p53、DDP单独及联合作用于胃癌SGC7901细胞株24、48、72 h后,CCK-8法测定SGC7901细胞体外增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫组化法检测KAI1／CD82蛋白表达情况。结果rAd-p53、DDP单独及联合作用于SGC7901细胞后,细胞增殖被抑制,并呈剂量和时间依赖性,且两药联合组细胞增殖抑制率明显高于单用组,与阴性对照组相比差异均有统计学意义（ P＜0．05）;rAd-p53、DDP单独及两药联合作用SGC7901细胞48h后,细胞凋亡率为36．94％±0．78％、28．79％±2．37％,69．26％±0．63％;rAd-p53、DDP单独及两药联合均可上调KAI1／CD82蛋白表达,且两药联合组更明显。结论 rAd-p53、DDP单独及两药联合均可抑制胃癌SGC7901细胞的生长,诱导其凋亡,二者联合对胃癌细胞的抑制作用增强,rAd-p53可能通过上调KAI1／CD82的表达诱导SGC7901细胞凋亡,同时增强DDP的抗肿瘤作用。     

Effects of the proteasome inhibitor bortezomib alone and in combination with chemotherapeutic agents in gastric cancer cell lines

The proteasome plays a pivotal role in controlling cell proliferation, apoptosis, and differentiation in a variety of tumor cells. Bortezomib is a boronic acid dipeptide derivative, which is a selective and potent inhibitor of the proteasome and has prominent effects in vitro and in vivo against several solid tumors. We examined the anti-proliferative and apoptotic effects of bortezomib in three gastric cancer cell lines (SNU638, MUGC-3 and MKN-28), along with its antitumor combination effects with other chemotherapeutic agents. Tumor cell growth inhibition and apoptosis was measured by MTT assay and FACS analysis, respectively. Apoptosis- and cell cycle-associated protein expression levels were measured by Western blot assay. Bortezomib induced the suppression of tumor cell growth and apoptosis in a dose-dependent manner with an inhibitory dose (ID)50 of approximately 0.5 microg/ml in all gastric cancer cell lines tested. Further combination treatment with cisplatin and docetaxel, in particular with docetaxel displayed dramatically increased tumor cell growth suppression in all three gastric cancer cell lines, as compared to single drug treatment alone. This was concomitant with the induction patterns of apoptotic cells. Bortezomib treatment increased the Bax protein expression. Moreover, combination treatment of bortezomib plus docetaxel resulted in a dramatic increase in the Bax expression. In contrast, Bcl-2 expression was decreased by combination treatment with bortezomib plus docetaxel in SNU638 cells. Finally, bortezomib, docetaxel and to a greater degree bortezomib plus docetaxel increased the expression levels of p27 proteins even without influencing p53 expression levels. Bortezomib has profound effects on tumor cell growth inhibition and induction of apoptosis in human gastric cancer cells, suggesting that bortezomib may be an effective therapeutic drug for patients with gastric cancer. Further combination studies with other chemotherapeutic drugs, in particular docetaxel showing more tumor cell growth inhibition and apoptosis suggest that combining bortezomib with docetaxel might be more effective for displaying tumor cell growth inhibitory effects in gastric cancer cells through regulation of Bcl-2, Bax and p27 proteins in vitro.     

丙泊酚通过调控HDAC1抑制胃癌细胞转移的机制研究

目的:探讨静脉麻醉药丙泊酚抑制胃癌细胞转移的具体分子机制.方法:不同浓度(1、5、10、20μg/ml)丙泊酚作用MGC-803细胞48h后,MTT实验检测不同浓度丙泊酚细胞增殖的影响,以此选出合适浓度进行下列实验:Transwell实验检测细胞的侵袭和迁移能力;化学比色法检测HDACs总活性;Western blotting实验检测HDAC1、上皮间质转化(EMT)相关蛋白和p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)通路相关蛋白的表达变化.同时,利用siRNA干扰HDAC1表达后进行上述实验检测相应指标.结果:丙泊酚呈浓度依赖性抑制MGC-803细胞增殖,以影响增殖的较小浓度5μg/ml进行后续实验,丙泊酚处理后侵袭和迁移的细胞数目均明显减少;HDAC1表达和HDACs总活性降低;E-cadherin表达明显上调,N-cadherin、Vimentin、β-catenin、Slug、Snail1表达明显下调;p38蛋白表达无明显变化,p-p38蛋白表达明显减少.siRNA干扰HDAC1表达对MGC-803细胞的作用与丙泊酚一致.结论:丙泊酚可能是通过调控HDAC1表达和下游的p38 MAPK通路,抑制胃癌细胞MGC-803的侵袭、迁移和EMT过程.     

丹参酮ⅡA对乳腺癌细胞的影响及其分子机制

目的 观察丹参酮ⅡA(TanⅡA)对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其分子机制.方法 选取处于对数生长期的乳腺癌MCF-7细胞,设对照组(0μg/ml TanⅡA)和处理组(0.25、0.50、0.75μg/ml TanⅡA),处理MCF-7细胞48 h.MTT法检测各组MCF-7细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测各组MCF-7细胞的凋亡率,Western Blot和RT-PCR分别检测各组MCF-7细胞中p53、Bcl2的蛋白和mRNA表达水平.结果 与对照组比较,不同剂量TanⅡA处理组的MCF-7细胞增殖抑制率升高(P﹤0.05),且呈剂量-时间依赖性;随着TanⅡA作用剂量的增加,MCF-7细胞的凋亡率逐渐增大,均高于对照组(P﹤0.05).与对照组比较,0.75μg/ml TanⅡA处理组的p53蛋白表达升高,Bcl2蛋白表达水平下降,差异有统计学意义(P﹤0.05);与对照组比较,0.75μg/ml TanⅡA处理组的p53 mRNA表达水平增加,Bcl2 mRNA表达水平降低,分别为对照组的4.88倍和0.42倍(P﹤0.05);0.75μg/ml TanⅡA处理组的p-AKT蛋白表达水平(0.866±0.015)低于对照组的p-AKT蛋白表达水平(1.000±0.020),差异有统计学意义(P﹤0.05).结论 TanⅡA对乳腺癌MCF-7细胞具有抑制增殖和促进凋亡的作用,其凋亡作用与p53和Bcl2蛋白的表达有关,其抗凋亡机制与p-AKT信号通路有关.     

奥沙利铂联合替尼泊苷抑制胃癌BGC-823细胞生长和诱导凋亡的作用

目的:探讨奥沙利铂(oxaliplatin, OXA)联合替尼泊苷(teniposide, VM-26)抑制胃癌BGC-823细胞的体外生长及诱导细胞凋亡的作用.方法:应用MTT法检测不同浓度OXA和VM-26单药以及联合用药对胃癌BGC-823细胞生长的抑制作用,应用FCM检测细胞凋亡率,同时应用免疫细胞化学法检测OXA单药以及OXA联合VM-26用药对胃癌BGC-823细胞caspase-9和livin蛋白表达的影响.结果:OXA和VM-26单药均可抑制胃癌BGC-823细胞的生长,且在一定浓度范围内呈剂量依赖效应;联合用药组的细胞生长抑制率明显高于OXA和VM-26单药组,差异有统计学意义(P<0.05),联合指数(combination index, CI)为0.46.OXA(1.250 μg/mL)单药作用于胃癌BGC-823细胞12、24和48 h后,细胞凋亡率分别为6.13%、13.86%和21.48%;VM-26(0.625 μg/mL)单药组的细胞凋亡率分别为4.60%、10.72%和17.07%;联合用药组的细胞凋亡率分别为11.73%、24.14%和44.75%.联合用药组的细胞凋亡率明显高于OXA和VM-26单药组,差异有统计学意义(P<0.05).免疫细胞化学结果显示,OXA(1.250 μg/mL)单用以及联合VM-26(0.750 μg/mL)作用于胃癌BGC-823细胞48 h后,凋亡相关基因caspase-9蛋白的阳性表达率均增加,而livin蛋白的阳性表达率均下降;各用药组之间以及用药组与对照组(未用药)之间的差异均有统计学意义(P<0.05).结论:OXA联合VM-26用药在抑制胃癌BGC-823细胞的生长和诱导细胞凋亡方面具有协同作用.     

多烯磷脂酰胆碱与奥沙利铂协同抗胃癌细胞增殖的研究

目的 探讨多烯磷脂酰胆碱联合奥沙利铂对胃癌细胞增殖的影响。方法 采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测多烯磷脂酰胆碱、奥沙利铂及两药联合对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;流式细胞术检测各组细胞周期分布及凋亡情况;Western blotting检测各组凋亡相关蛋白细胞色素c、Bcl-2、Bax、caspase-9、caspase-3和细胞周期调控蛋白细胞因子D1、细胞因子E的表达水平。结果 奥沙利铂显著抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,且呈剂量和时间依赖性（P＜0.05）;多烯磷脂酰胆碱促进胃癌SGC-7901细胞增殖,其作用呈剂量依赖性（P＜0.05）;两药联合表现为协同作用,与奥沙利铂单药组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。奥沙利铂使胃癌细胞增殖停滞在G0／G1期,并具有诱导胃癌细胞凋亡的作用;多烯磷脂酰胆碱可增强奥沙利铂诱导细胞凋亡及细胞周期停滞的作用,但这两种增强作用均与多烯磷脂酰胆碱的浓度无关（P＞0.05）。Western blotting检测结果显示,多烯磷脂酰胆碱联合奥沙利铂上调细胞色素c的水平并激活其下游蛋白Bcl-2、Bax、caspase-9、caspase-3,下调细胞因子D1、细胞因子E的表达水平。结论 多烯磷脂酰胆碱与奥沙利铂可抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖和诱导细胞凋亡,将细胞阻滞于G0／G1期,两药联合可能会产生协同抗肿瘤的作用。     

Ad-p53诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231的凋亡作用

目的：观察重组人p53腺病毒（ p53-expressing adenovirus,Ad-p53）对人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞生长、细胞周期、凋亡和p53表达的影响。方法：流式细胞仪检测Ad-p53作用于MDA-MB-231细胞72h后细胞凋亡率和细胞周期变化,Western blot法检测MDA-MB-231细胞p53蛋白表达。结果：经Ad-p53处理72h后倒置显微镜下MDA-MB-231细胞形态发生明显的变化。流式细胞术检测结果显示, Ad-p53作用MDA-MB-231后其细胞凋亡率与对照组相比明显增加,G0/G1期细胞比例逐渐升高,S期、G2/M期细胞比例相应减少（ P＜0.05）。Western blot证实了外源野生型p53基因能在MDA-MB-231细胞表达增加。结论：Ad-p53可以抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的生长,促进其凋亡,其机制可能是通过阻滞细胞周期以及野生型p53蛋白表达增加实现的。