血友病A患者产生凝血因子Ⅷ抑制物的相关因素分析

目的 分析血友病A患者的临床特征,探讨其凝血因子Ⅷ(FⅧ)抑制物产生的相关因素.方法 回顾性分析113例血友病A患者的临床资料及治疗情况.用一期法检测FⅧ活性,确定血友病的严重程度;对85例经过FⅧ替代治疗的患者进行FⅧ抑制物检测,并分析FⅧ抑制物产生的相关闪素.结果 FⅧ活性检测显示113例患者中重型74例,中型27例,轻型12例.本组经FⅧ替代治疗的患者产生FⅧ抑制物的发牛率为28.24%,抑制物水平均为低滴度,均发生在中、重型患者.首次使用FⅧ持续时间、血友病患者严重程度、是否有大出血或手术大量使用FⅧ史均与FⅧ抑制物是否产生相关(P<0.05).结论 血友病A患者产生FⅧ抑制物以低滴度为主,多发生在中、重型患者.首次使用FⅧ持续时间超过5 d,中、重型.曾大出血或手术使用大剂量FⅧ等均与FⅧ抑制物产生相关.     

TNF-α及CTLA-4基因多态性与中国汉族血友病A患者血浆凝血因子Ⅷ抑制物发生的相关性研究

目的 探讨中国汉族血友病A(HA)患者肿瘤坏死因子α(TNF-α)-308基因多态性及细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)-318基因多态性与凝血因子Ⅷ(FⅧ)抑制物的相关性.方法 采用聚合酶链反应结合限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP),对140例经过FⅧ替代治疗的HA患者和108名正常对照者的TNF-α及CTLA-4基因的单碱基多态性进行检测.所有HA患者样本均应用改良的Nijmegen方法检测FⅧ抑制物活性.结果 在HA患者中,TNF-α-308 G/G基因型118例(84.3%),G/A基因型18例(12.8%),A/A基因型4例(2.9%);CTLA-4-318 C/C基因型108例(77.2%),C/T基因型30例(21.4%),T/T基因型2例(1.4%).TNF-α-308、CTLA-4-318等位基因频率在HA病例组与正常对照组间差异均无统计学意义(P＞0.05),关联分析显示携带TNF-α-308 A等位基因HA患者发生FⅧ抑制物的风险是非A等位基因携带患者的7.519倍(OR=7.519,95%CI=3.168～17.844);而携带TNF-α-308 A等位基因重型HA患者发生FⅧ抑制物的风险是非A等位基因携带重型患者的8.163倍(OR=8.163,95%CI=2.521～26.434).携带CTLA-4-318 T等位基因血友病A患者发生FⅧ抑制物的风险与非T等位基因携带患者的差异无统计学意义(OR=1.586,95%CI=0.729～3.450).结论 TNF-α-308基因多态性与中国汉族人群重型HA患者发生FⅧ抑制物具有相关性,该基因可能为HA患者替代治疗产生抑制物的调节基因之一.

Abstract：

Objective To investigate the potential association between factor Ⅷ inhibitor development and polymorphisms of tumor necrosis factor-α(TNF-α)-308 and cytotoxic T-lymphocyte associated protein-4 gene in Chinese Han patients with hemophilia A(HA). Methods The single base change polymorphism in TNF-α and CTLA-4 gene was analyzed in 140 Chinese Han patients with hemophilia A who have been treated with plasma-derived FⅧ concentrates and 108 normal controls by using PCR-restrictive fragment length polymorphism(RFLP). All of the HA patients' plasma samples were measured by modified-Nijmegen assay simultaneously. Results In HA patients,G/G genotype,G/A genotype and A/A genotype were detected in 118 (84.3%) ,18( 12.8% ) and 4 cases(2.9% )respectively; C/C genotype,C/T genotype and T/T genotype were detected in 108(77.2% ), 30 (21.4%) and 2 cases( 1.4% )respectively. The difference in the genotype frequencies between HA patients and controls was nonsignificant ( P ＞ 0.05 ). Patients who were carriers of homozygotes for A allele had a higher risk of inhibitor development compared with those who were not( OR =7. 519, 95% CI = 3. 168 - 17. 844). Severe HA patients who were carriers of homozygotes for A allele had a higher risk of inhibitor development compared with those who were not ( OR =8. 163, 95% CI =2.521 -26. 434 ). There was no statistical difference in the risk of inhibitor development between the patients who were carriers or not ( OR = 1. 586, 95% CI = 0. 729 - 3. 450 ). Conclusion TNF-α-308 gene polymorphism is significantly associated with inhibitor development in Chinese Han patients with severe hemophilia A. TNF-α gene may be a useful marker and potential modulator of the immune response to replacement therapy for hemophilia A patients.     

359例血友病A实验室诊断数据回顾分析

目的 调查分析本院血友病A患者的实验室诊断数据,了解医院就诊血友病A临床分型、抑制物存在情况及获得性血友病的诊断思路,为临床诊断和治疗提供证据.方法 对患者进行活化部分凝血活酶时间(APTT)和Ⅷ因子活性(FⅧ∶C)检测,抑制物筛查采用APTT纠正试验做定性判断,阳性者用Nijmegen定量检测抗体.结果 359名血友病A患者以重型和中型居多(共占81％),亚临床型仅14例.抑制物筛查22例阳性,FⅧ抗体定量检测平均抗体滴度35 BU.获得性血友病1例;2例患者同时存在FⅧ∶C、FⅨ∶C低下和抑制物阳性.结论 医院就诊的血友病A患者主要为重型和中型,亚临床型少见;FⅧ抑制物筛查及抗体滴度在临床治疗方案选择中及其重要;获得性血友病诊断思路应该为实验室数据结合临床、遗传学、自身免疫性检查等.     

血友病凝血因子抗体的诊断及影响因素研究

本研究探讨血友病凝血因子抗体(抑制物)的诊断、分型及影响因素.对500例血友病采用一期法检测FⅧ活性(FⅧ:C),FⅨ活性(FⅨ:C),用Bethesda法检测FⅧ抗体(FⅧ:Ab)、FⅨ抗体(FⅨ:Ab).结果表明,500例血友病中,HA 411例,FⅧ抗体阳性者151例(30.2%),滴度为3.50±2.84 Bu/ml;HB 79例,FⅨ抗体阳性者18例(3.6%),滴度为(2.92 ± 2.19)Bu/ml;自身获得性血友病10例(2.0%).抗体分型:高、中、低反应型依次为3例、47例、119例,以中低反应型抗体为主(98.22%).抗体产生的影响因素:169例抗体阳性者的92.90%(157/169例)年龄在30岁以下;89.35%(151/169例)为HA;81.66%(138/169例)为中、重型血友病;98.22%(166/169例)为中、低反应型抗体;同种特异性杭体阳性者158例均有输血史.结论:抗体以中、低反应型为主,患者年龄及输血史是影响的因素.本研究为血友病凝血因子抗体的诊断、分型及其产生的影响因素提供了依据,并说明血友病反复输注血液制品对抗体的产生有直接影响,对防治血友病出血及预防凝血因子活性降低有重要意义.     

凝血酶生成试验在血友病患者中的应用

目的：探讨凝血酶生成试验在血友病患者中的应用。方法：收集134例血友病患者[其中血友病A（HA）114例，血友病B（HB）20例1的临床资料，根据FⅧ：C／FIX：C不同，将无FⅧ／FⅨ抑制物的132例HA／HB患者分成重型（FⅧ：C／FIX：C〈1％）、中型（FVIU：C／FIX：C1％～5％）及轻型（FⅧ：C／FIX：C6％～25％）3组，检测凝血酶生成、FⅧ：C／FIX：C及其抑制物。结果：重型HA／HB患者与轻型者比较，出血频度及凝血酶生成各指标差异均有统计学意义（P〈0．01）；而重型者与中型者比较，除延迟时间和达峰时间差异有统计学意义外（P〈0．01），其余指标差异均无统计学意义；中型者与轻型者比较，除延迟时间和达峰时间差异无统计学意义外，其余指标差异均有统计学意义（P〈0．01）。HA／HB患者的出血频度与FⅧ：C或FIX：C无关（P=0．16），而与凝血酶生成潜力（ETP）密切相关（P=0．0001）：结论：凝血酶生成试验可作为预测HA／HB患者出血风险的有效手段。     

血友病A患者凝血因子Ⅷ抑制物筛查及分析

本研究通过检测重型血友病A(hemophilia A,HA)患者凝血因子Ⅷ(FⅧ)抑制物,探讨抑制物阳性患者基因突变情况.选取58例一期法检测FⅧ:C均小于1% HA患者,以APTT法为基础进行FⅧ抑制物筛查,筛查阳性者用Bethesda法进行FⅧ抑制物定量分析.以基因组DNA为模版,对抑制物阳性患者FⅧ12、14、16外显子进行基因扩增,PCR产物通过直接测序检测突变情况.结果表明:58例HA患者中4例(6.9%)抑制物检测为阳性,FⅧ12、14、16外显子基因均未发现基因突变.结论:本组病例HA患者抑制物阳性率低于国外文献报道,抑制物产生的原因有待于进一步研究.     

血友病的综合康复治疗——附67例病例回顾性分析

目的:回顾性分析67例血友病患者康复治疗期间病例资料，了解血友病关节肌肉病变情况、综合康复治疗方案及疗效。方法:收集2012年1月～2021年7月在武汉协和医院康复医学科收治，且住院满3周的67例血友病病例资料。采用血友病关节健康评分(HJHS)与功能独立性评分量表(FISH)评估3周综合康复治疗有效性；再发出血次数及抑制物滴度评估安全性。结果:总研究人群在低剂量预防联合康复治疗下HJHS及FISH治疗3周前后评分差异具有统计学意义(P<0.05)。住院期间仅1例(1.5%)重型HA外伤后再出血，1例(1.5%)中间型HA产生低滴度(<5BU/ml)FVIII抑制物。结论:血友病患者在低剂量预防治疗联合康复的综合方案下短期内可有效改善血友病关节健康及功能独立性，同时减少出血、抑制物形成等不良事件。     

血浆热灭活处理在Nijmegen法检测遗传性凝血因子Ⅷ抑制物中的应用

目的评价血浆样本热灭活处理在Nijmegen法检测遗传性凝血因子Ⅷ(FⅧ)抑制物中的应用价值。方法同时应用Nijmegen法及增加热灭活步骤的Nijmegen法检测52例中、重型血友病A(HA)患儿血浆中FⅧ抑制物滴度。以抑制物滴度≥0.60BU判为阳性结果,对两种方法检测结果的阳性率及抑制物滴度水平进行分析。结果两种方法的抑制物阳性率检测差异无统计学意义(P0.05),但有2例中间型HA患儿的血浆用原方法检测为阴性但热灭活处理后检测为阳性。两种方法检测的抑制物滴度水平呈显著的正相关(r=0.990 8,P0.000 1)。在两种方法检测均为抑制物阴性的患儿中,血浆热灭活处理组的抑制物滴度[0.37(0.17,0.48)BU]明显高于无热灭活处理组[0.12(0.02,0.34)BU],差异有统计学意义(P0.01);而在抑制物阳性组,两种方法的检测结果差异无统计学意义(P0.05)。结论待测血浆样本热灭活处理在Nijmegen法检测FⅧ抑制物检测中的结果可信,且检测前增加血浆热灭活处理步骤可提高检测的灵敏度。     

因子Ⅷ抑制物及其临床意义

FⅧ抑制物是一种可以抑制或中和F血凝血活性的同种抗体或自身免疫抗体[1]。同种抗体见于部分先天性血友病甲患者；自身免疫抗体见于非血友病患者，由此引起的疾病亦称之为获得性血友病。FⅧ抑制物一旦形成，常规治疗方法时常不能有效地控制出血，成为临床棘手的问题。1FⅧ抑制物形成的相关因素FⅧ抑制物产生的病因较为复杂。同种抗体与以下因素有关：①血友病甲的严重程度。重型患者易形成FⅧ抑制物，而轻型患者较少见[2]。FⅧ基因严重的分子缺陷造成无FⅧ蛋白合成和分泌，替代疗法的FⅧ类似异体抗原，导致免疫反应，形成同种抗体，即F…     

血友病A伴抑制物一例及其免疫耐受诱导治疗探讨

目的 探讨血友病A伴抑制物的免疫耐受诱导(immune tolerance induction,ITI)治疗,提高血友病A伴抑制物患者的诊疗水平.方法 对重型血友病A患者用APTT标准曲线一期法测定凝血因子Ⅷ(FⅧ)活性(FⅧ∶C);用Bethesda法定量测定FⅧ抗体;用长距离PCR方法检测内含子22倒位.结果 经检测发现患者为FⅧ基因22内含子倒位;ITI治疗3个月后,患者FⅧ抑制物滴度下降为0,输注FⅧ后回收率＞66%,治疗6个月后达到抑制物清除标准,停止治疗.结论 该患者是国内首例采用ITI成功治疗血友病A伴抑制物的病例,ITI是目前最有希望根除血友病抑制物的方法.     

3例获得性血友病A报告及文献复习

<正>获得性血友病A(acquited hemophilia A,AH-A)是由于非血友病患者体内自发性产生针对凝血因子Ⅷ(FⅧ)的特异性自身抗体(FⅧantibody,亦称FⅧ抑制物)而引起的1种出血性疾病[1,2]。这种自身抗体能引起FⅧ活性降低,产生     

Nijmegen法检测凝血因子Ⅷ抑制物的临床应用

目的观察血友病A(HA)及获得性HA(AHA)患者凝血因子Ⅷ(FⅧ)抑制物的产生情况,探讨Nijmegen法结合APTT纠正试验在FⅧ抑制物检测中的应用及对临床诊断和治疗的指导意义。方法用一期凝固法对42例临床患者进行凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)及FⅧ活性检测,进一步采用APTT纠正试验进行筛选,阳性患者用Nijmegen法进行FⅧ抑制物浓度的测定,并结合临床资料进行分析。结果 42例均为FⅧ活性减低患者。39例HA患者中有2例存在FⅧ抑制物(5.1%),浓度分别为3.7 BU/m L和83.2 BU/m L。3例非HA患者经APTT纠正试验未能纠正到正常范围,其中2例AHA患者的抑制物浓度分别为3 686 BU/m L和61 BU/m L,另1例SLE患者APTT纠正试验结果不具有时间依赖性,抑制物浓度仅为0.1 BU/m L。结论 Nijmegen法结合APTT纠正试验检测FⅧ抑制物,方法简便准确,可为FⅧ活性减低患者的临床诊断和治疗提供指导。     

一例血友病A伴抑制物免疫耐受诱导治疗的护理

血友病A是一种X染色体连锁的隐性遗传性出血性疾病,为凝血因子Ⅷ（FⅧ）基因异常所致,其临床特点为自发性关节出血和／或深部组织／肌肉出血。FⅧ替代治疗已公认为血友病A的最佳疗法,FⅧ抑制物的产生是其最严重的并发症。     

血友病A患者血浆FⅧ同种抗体ELISA检测方法的建立及其临床应用

目的建立血友病A患者血浆FⅧ同种抗体的ELISA检测方法,以评估经替代治疗的血友病A患者血浆FⅧ同种抗体的发生率.方法选取血友病A患者140例,其中重型84例,中型34例,轻型22例,所有患者均已经过FⅧ替代治疗;同时选取健康对照者80名.以本室制备的FⅧ单克隆抗体包被酶标板,封闭后加入重组人FⅧ,洗涤后加入待测稀释血浆,再次洗涤后加入辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG,邻苯二胺显色,记录490 nm处的吸光度(A490)值.所有患者血浆样本同时采用改良的Nijmegen方法检测抑制物活性.结果通过ELISA法检测,血友病A患者产生血浆FⅧ同种抗体阳性率为40.0%(56/140),重型、中轻型患者产生抗体的阳性率分别为47.6%(40/84)、28.5%(16/56),两组患者产生同种抗体的阳性率差异有统计学意义(x2=5.079,P＜0.05);采用改良的Nijmegen方法检测,血友病A患者产生FⅧ抑制物阳性率为24.3%(34/140),重型、中轻型患者产生抑制物的阳性率分别为33.3%(28/84)、10.7%(6/56),两组患者产生抑制物的阳性率差异有统计学意义(x2=9.349,P＜0.05).其中,25例通过ELISA法检测出同种抗体阳性的患者未被检出抑制物活性.ELISA法与改良的Nijmegen法检出的阳性率分别为40.0%(56/140)、24.3%(34/140),差异有统计学意义(x2=15.75,P＜0.01),具有相关性(rn=0.59,P＜0.01);且两种方法检出结果存在一致性(Kappa=0.55,P＜0.01).结论 ELISA法能够提高FⅧ同种抗体的检出率,血友病A患者经替代治疗后,血浆FⅧ同种抗体发生率并不低,重型患者产生抗体的阳性率高于中轻型患者.     

血浆纠正试验差值在血友病A患儿抑制物中的诊断价值

目的通过受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析,确定利用即刻法与孵育后活化部分凝血活酶时间(APTT)结果差值预测血友病A凝血因子Ⅷ抑制物产生的临界诊断点。方法回顾分析172例血友病A患儿的APTT纠正试验及抑制物定量监测结果,并应用ROC曲线分析血友病A凝血因子Ⅷ抑制物阳性的最佳临界点。结果 ROC曲线下面积=0.908(95%CI:0.875~0.941,P0.05),Youden值为0.679,所对应的APTT差值为2.6s,为有无抑制物的最佳诊断界点。此时敏感度为80.4%,诊断特异度为87.5%。结论 2.6s的APTT纠正试验秒值差可作为儿童血友病A凝血因子Ⅷ抑制物产生的早期筛查指标。     

血友病A凝血因子Ⅷ抑制物的形成因素和治疗

目前血友病尚无根治方法,替代治疗是最主要的治疗方法,但反复输注凝血因子Ⅷ(FⅧ)制剂可导致体内产生FⅧ抑制物,尽管FⅧ抑制物的出现并未使血友病A患者的出血发生率增加,却增加了对出血治疗的难度,是治疗血友病的最严重并发症之一.我们就FⅧ抑制物产生的环境因素及遗传因素进行分析,并对FⅧ抑制物产生后的治疗方法进行讨论.目的是尽量避免FⅧ抑制物的产生,以及指导血友病患者FⅧ抑制物产生之后的治疗.     

36例血友病A相关抑制物检测分析

目的 研究替代治疗后血友病A患者抑制物存在状况,以指导临床治疗方案的调整.方法 对病人进行活化部分凝血活酶时间(APTT)测定和Ⅷ因子活性(FⅧ:C)检测,抑制物检测采用APTT纠正试验做定性判断,阳性者用Nijmegen方法进行抗体定量检测.结果 全部36例血友病A患者替代治疗后FⅧ抑制物定性试验有2例出现阳性,FⅧ抗体定量检测抗体量分别为33BU和61BU.结论 通过对血友病A患者替代治疗后FⅧ抑制物的检测分析,有利于了解血友病A患者的替代治疗效果及预后.     

167例血友病A患者凝血因子Ⅷ抑制物筛查及分析

血友病A(HA)是一种由于凝血因子Ⅷ(FⅧ)基因缺陷所致的出血性疾病,是一种X染色体连锁隐性遗传性疾病。在男性中的发病率约(10 ～20)/10万[1]。主要临床表现是反复发生异常出血,主要依靠反复输注FⅧ制剂替代治疗,以达到治疗和预防出血的目的。但是替代治疗会在一部分患者中导致相应凝血因子抗体的产生,最终导致疗效下降或无效,这已成为治疗HA的最严重并发症之一。国内外目前对FⅧ抑制物的发生率报道不一,我国HA患者抑制物的发生率报道相对较少,对抑制物形成的危险因素等研究尚处在初步阶段,缺乏对FⅧ抑制物患者临床动态监测。因此,调查抑制物的发生情况及动态变化,对于抑制物形成的防治和临床治疗具有重要的理论和现实意义。     

抗因子Ⅷ抗体与临床处理的现状

血循环中出现因子Ⅷ(FⅧ)抗体,一般发生在甲型血友病。据道导,有5～20％的甲型血友病产生对FⅧ的抑制物。Shapiro报告有5～10％的甲型血友病患者对FⅧ促凝活性(Ⅷ:C)产生抑制物。瑞典有8％的重症甲型血友病循环中有抑制物。抑制物发生的百分率差异很大,为1～21％。抑制物出现可能与接受输血、冷沉淀物或FⅧ浓缩物有关。大多数发生于重型血友病。一旦发生出血,治疗很困难。现将抗FⅧ抗体及其临床处理中的有关问题综述如下:     

获得性血友病A的临床分析与实验室检查

为了提高获得性血友病A（acquired hemophilia A）的诊断水平,对1例获得性血友病患者的临床表现、影象学、实验检查结果进行了分析。具体包括了解患者病史,复习静脉彩超记录和分析实验室检查结果。实验室检查项目有：活化部分凝血激酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）、凝血酶（TT）时间、血浆FⅧ：C、FⅨ：C、FⅪ：C和FⅫ：C。结果表明：APTT99．3秒,PT13秒,TT13．5秒,FⅧ：C2％、FⅨ：C7％、FⅪ：C9％、FⅫ：C21％。患者血浆加等量正常新鲜血浆不能使APTT延长完全纠正;患者血浆和等量正常新鲜血浆混合后于37℃温育情况下,APTT随温育时间延长而延长;患者血浆稀释10倍后加等量未稀释正常血浆重复测定结果显示：FⅧ：C6％、FⅨ：C75％、FⅪ：C95％、FⅫ：C123％。抑制物滴度测定表明：FⅧ抑制物〉32 Bethesda 单位／ml。获得性血友病A确诊后,经强的松、硫唑嘌呤治疗1月余,复查APTT为33．3秒、FⅧ：C为128％、FⅧ抑制物消失。结论：详细询问病史、分析影象学所见,进行APTT纠正试验、稀释试验和抑制物滴度测定,能减少获得性血友病的误诊和误治,免疫抑制治疗能消除FⅧ抑制物,恢复正常凝血功能。