单核细胞趋化蛋白—1的结构和功能

单核细胞趋化蛋白-l（MCP-1）是由内皮细胞（ECs）、血管平滑肌细胞（VSMCs）和单核细胞（MCs）／巨噬细胞（MΦ）分泌的一种趋化因子，属于赵化因于超家族，是作用于单核细胞（MC）特异的强趋化蛋白，并可促进VSMCs的有丝分裂。MCP-1与脂蛋白、粘附分子、细胞因子、凝血因子、激素等相互影响。通过研究，目前已对其基因、分子结构及其生物学功能有所认识。MC迁移至血管内膜下层，是多种急、慢性炎症性疾病，如动脉粥样硬化（AS）、肾小球硬化症等疾病的特征性病变，是此类疾病发生发展过程中的关键性发病学机制。MCP-1及其受体…     

单核细胞趋化蛋白—1在大肠杆菌中的表达

将人单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）的ｃＤＮＡ插入融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－１中，构建成质粒ｐＧＥＸ／ＭＣＰ转化大肠杆菌ＪＭ１０９，经ＩＰＴＧ诱导后合成ＧＳＴ－ＭＣＰ－１融合蛋白。用１２％ＳＣＳ－ＰＡＧＥ检测在３０ｋＤ左右有新生蛋白条带出现，表达量约占菌体总蛋白的３１．７％，趋化实验证明，该产物具备明确的单核细胞趋化活性。     

人单核细胞趋化蛋白-1在大肠杆菌中的高效表达及其生物学活性

利用PCR和DNA重组技术,将人单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）cDNA克隆在表达载体pGEX－2T中,表达产物GST／MCP－1占菌体总蛋白的50％,且以无活性的包涵体形式存在。经变复性,GlutathioneSepharose4B亲合柱层析纯化,融合蛋白达到电泳纯,且具有MCP－1趋化活性。体内外抗肿瘤试验结果表明,GST／MCP－1激活单核细胞和淋巴细胞后可抑制肿瘤细胞生长,提示MCP－1可能成为肿瘤辅助治疗的一个候选药物。     

氧化修饰的低密度脂蛋白和极低密度脂蛋白对单核细胞MCP—1…

为了研究氧化修饰的低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ）和氧化修饰的极低密度脂蛋白（ＯＸ－ＶＬＤＬ）对单核细胞的单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ－１）ｍＲＮＡ和蛋白表达的影响，在单核细胞的培养基中分别加入２５μｇ／ｍｌ的ＬＤＬ，ＯＸ－ＬＤＬ，ＶＬＤＬ和ＯＸ－ＶＬＤＬ，培养２４小时后分别收集单核细胞及其条件培养基，对照异硫氰酸胍法提取单核细胞总ＲＮＡ，并用γ＾３２Ｐ末端标记ＭＣＰ－１寡核苷酸探针，进行ｓｌｏｔｂｌｏ     

人单核细胞趋化因子蛋白—1的临床研究进展

ＭＣＰ－１趋化因子家族的一个主要成员，具有诱导单核细胞趋化及激活单核细胞的双重功能，在人体各器官事均有表达，同时又地机体的防御、炎症恢复及抗肿瘤发挥重要作用。本文就人单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）近的来在临床方面的研究进展作一综述。     

人单核细胞超化蛋白—1（MCP—1）基因的PCR扩增,克隆…

本文报道用植物血凝素（ＰＨＡ）诱导健康人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ，包括单核细胞和淋巴细胞），提取细胞总ＲＮＡ，反转录合成ｃＤＮＡ第一链，再以其为模板进行ＰＣＲ，得到了编码成熟单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）的ｃＤＮＡ。该ｃＤＮＡ用ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ双酶切后，回收含ＭＣＰ－１基因的长约２８０ｂｐ的ＤＮＡ片段，插入到经ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ双酶切的ｐＵＣ１９载体中，进行序列分析。结果表明，ＭＣ     

人单核细胞趋化蛋白—1（MCP—1）cDNA的克隆和序列测定

人单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）是由多种细胞产生的一种趋化因子。它不但能趋化单核细胞还能激活单核细胞，在机体防御。炎症恢复和抗肿瘤等方面起重要作用。本文利用ＲＴ－ＰＣＲ方法克隆了人ＭＣＰ－１ｃＤＮＡ，经核鞋酸序列测定，除第１２位密码子为ＴＧＴ与国外报道的ＴＧＣ不同，但编码相同的氨基酸半胱氨酸外，其余序列完全相同。     

MCP—1的表达与动脉粥化硬化

单核细胞趋化蛋白能趋化单核细胞在内皮下间隙聚集，这是动脉粥样硬化最早期的病变之一，近年研究表明，内皮细胞、平滑肌细胞、单核细胞和巨噬细胞均能表达ＭＣＰ－１。并认为动脉粥样硬化病变早期的内皮细胞和内皮下巨噬细胞是ＭＣＰ－１的主要来源。     

白细胞介素1,肿瘤坏死因子α和脂多糖对人脐静脉内皮细胞表达 …

目的 观察细胞因子白细胞介素１（ＩＬ－１）β、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）α和脂多糖（ＬＰＳ）是否诱导人脐静脉内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ－１）ｍＲＮＡ及蛋白。方法 选取生长汇合的人脐胸脉内皮细胞,在其培养基中分别加入终浓度为２ｎｇ／ｍｌ的ＩＬ－１β、２０ｎｇ／ｍｌ的ＴＮＦβ和１００ｎｇ／ｍｌ的ＬＰＳ,３７℃共育４ｈ后,按照一步法提取其总ＲＮＡ,用γ－＾２２Ｐ标记的寡核苷酸ｄｏｔ ｂｌｏｔ分析     

流体切应力下血管内皮单核细胞趋化蛋白-1的表达

目的研究流体切应力对人血管内皮细胞的单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响,探讨血流动力在动脉粥样硬化(AS)发生早期中的作用.方法利用平行板流动腔对血管内皮细胞施加不同切应力,分别采用夹心酶联免疫吸附测定(EL,ISA)及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测MCP-1蛋白及mRNA水平.结果以0.72Pa切应力进行不同时间作用,0.5h后MCP-1mRNA即达到静态时(0.160±0.037)的4倍(0.684±0.033),5h时略有升高,达0.707±0.089,12h后下降到低于对照组的水平(0.036±0.006,P＜0.001).灌流液中MCP-1蛋白时间依赖性增加,但5h后增长趋缓;而在不同切应力(0.30、0.72、2.40Pa)相同时间(5h)下,0.72Pa的作用最显著,MCP-1蛋白比静态对照增加了2倍多,mRNA水平则升高达4倍.结论MCP-1的表达对切应力的变化反应强烈,持续稳定的切应力则下调MCP-1的表达,此研究结果表明血流紊乱可促进AS病变的发生发展.     

两步法细菌内同源重组制备重组单核细胞趋化因子-1腺病毒

目的两步法提高细菌内同源重组效率制备重组人单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）复制缺陷型腺病毒。方法制备含有腺病毒骨架质粒pAdEasy—1的大肠杆菌BJ5183，HindⅢ酶切筛选未发生细菌内重组的菌落，并将其制备成感受态（BJ5183pAdEasy—1）RT—PCR法克隆得纠MCP—1 cDNA片段，连接到pMD18-T载体后亚克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack上陶建重组穿俊载体pAdTrackMCP—1.PmeⅠ酶切线性化并碱性磷酸酶处理pAdTrack—MCP—1，然后电穿孔转化感受态BJ5183pAdEasy-1。PacⅠ酶切筛选得到正确重组的腺病毒载体pad—MCP—1，将pAd—MCP—1转染入HEK293细胞中包装病毒颗粒，以PCR法鉴定？结果成功构建pad—MCP-1，效率町达50％以上，pad—MCP—1能有效转染HEK293细胞并在细胞内包装PCR鉴定病毒携带有MCP—1基因片段、结论两步法细菌内同源重组构建再组腺病毒载体较常规电穿孔共转化效率高．成功制备重组腺病毒颗粒为进一步研究MCP-1的作用提供了重要的方法？     

叶酸降低高同型半胱氨酸血症大鼠主动脉单核细胞趋化蛋白-1的表达

目的： 探讨补充叶酸对高蛋氨酸(Met)喂养所致的高同型半胱氨酸（Hcy）血症大鼠主动脉单核细胞趋化蛋白（MCP-1）表达的影响。方法: SD大鼠30只随机分3组:即正常对照组(control)、高蛋氨酸组(Met)、蛋氨酸＋叶酸组(Met＋folate)，每组10只，分别给予普通饲料、普通饲料加1.7%蛋氨酸、普通饲料加1.7%蛋氨酸和0.006%的叶酸，饲养45 d，测定血浆总同型半胱氨酸浓度(thcy)，用免疫组织化学染色法及蛋白免疫印迹（Western blotting）法检测大鼠的主动脉单核细胞趋化蛋白MCP-1表达。结果: 高Met组血浆总同型半胱氨酸浓度明显高于control组(P<0.01)，Met＋folate组血浆总同型半胱氨酸浓度明显低于Hhcy组(P<0.01)； 高Met组大鼠主动脉表达的MCP-1明显多于control组(46.41±4.23 vs 15.73±2.74； P<0.05)，而Met＋folate组能抑制高同型半胱氨酸血症所致的主动脉MCP-1的表达(23.12±4.40 vs 46.41±4.23; P<0.05)。结论: 大鼠喂以高Met饲料45 d，可充分诱导高Hcy血症。而叶酸补充治疗，在显著降低血浆tHcy水平的同时，也降低了高同型半胱氨酸大鼠主动脉单核细胞趋化蛋白MCP-1的表达。     

肺癌患者单核细胞趋化蛋白-1含量及其活性的研究

目的：探讨单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）含量及其活性-单核细胞趋化活性（MCA）变化与肺癌发病的关系。 方法： 以ELISA法测定肺癌组、良性肺病组及健康对照组支气管肺泡灌洗液（BALF）中MCP-1的含量，并同时测定各组BALF的MCA。 结果： 肺癌组BALF的MCP-1含量及MCA明显高于良性肺病组及健康对照组，均P＜0.01。但肺癌组BALF中MCP-1含量与MCA的相关系数却明显低于良性肺病组和健康对照组；即在肺癌组MCA活性并没有随MCP-1含量增加而成正比地增加。 结论： 肺癌患者可能存在单核细胞趋化活性不足。     

大鼠急性甲醇中毒大脑皮质单核细胞趋化蛋白-1蛋白的表达

目的　观察大鼠急性甲醇中毒后单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）在大脑皮质的表达变化。 方法　应用通有混合气体（N2O/O2）的密闭有机玻璃箱并灌胃相应剂量甲醇溶液复制急性高剂量和低剂量甲醇中毒大鼠模型,运用Western Blot和免疫组化染色检测不同时间点大脑皮质中MCP-1的表达变化。 结果　Western Blot显示急性甲醇中毒后低剂量组和高剂量组MCP-1蛋白表达在12 h明显升高（P<0.01）,24 h达高峰,然后逐渐下降,3 d仍高于对照组（P<0.01）。高剂量组MCP-1蛋白表达在12 h和24 h高于低剂量组（P<0.05）,3 d 组MCP-1的表达无显著差异。免疫组化染色显示对照组大鼠大脑未见明显MCP-1阳性表达,急性甲醇中毒后,高剂量组24 h MCP-1阳性表达数增加,3 d达高峰,和对照组相比有显著差异（P<0.01）,阳性表达多集中在梨状皮质,1周阳性反应减少,但与对照组相比仍有显著差异（P<0.01）。 结论　大鼠急性甲醇中毒后,脑组织MCP-1蛋白表达显著增高并持续一定时间,可能参与了脑组织病理变化过程,程度与甲醇中毒剂量有关。     

核因子-κB/IκB信号通路介导实验性肾炎肾组织中单核细胞趋化蛋白-1表达

目的　探讨核因子 κB(NF κB) /IκB信号通路在肾毒血清性肾炎肾组织单核细胞趋化蛋白 1(MCP 1)表达中的作用。方法　肾毒血清肾炎应用兔抗鼠肾小球基底膜肾毒血清制备。应用凝胶电泳迁移率 (EMSA)和Western印迹检测肾毒血清肾炎大鼠肾组织中NF κB活化、p6 5亚基核转位以及IκBα和IκBβ的降解 ;采用免疫组织化学及核酸酶保护法检测肾组织中MCP 1表达 ,并分析其与NF κB活化的关系。结果　模型组肾小球及肾小管中MCP 1表达分别为 (2 4 37± 7 0 6 )个 /肾小球横切面和 (5 4 78± 11 4 9) % ,较正常对照组显著升高 (P <0 0 1) ;肾组织中NF κB活化显著增强 ,p6 5由胞质转移至胞核 ,胞质内IκBα和IκBβ降解明显增加 ;NF κB活化与MCP 1表达呈显著正相关。 结论　NF κB/IκB信号通路介导肾小球肾炎肾组织中MCP 1表达。     

MCP-1在妊娠期高血压疾病患者血清中的变化及意义

目的探讨妊娠期高血压疾病患者血清单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)变化的意义。方法用ELISA法对21例妊娠期高血压疾病患者(其中轻度子痫前期12例,重度子痫前期9例)血清MCP-1浓度进行测定,并选择同期30例正常孕妇作为对照组。结果妊娠期高血压疾病患者血清中MCP-1含量显著高于对照组孕妇,并随病情加重呈增加趋势。结论 MCP-1所参与的免疫反应可能是妊娠期高血压疾病的发病机制之一。     

云芝多糖B抑制ox-LDL诱导巨噬细胞株单核细胞趋化蛋白-1mRNA表达的调控机制

目的：探讨云芝多糖（CVPS）-CVPS-B对氧化修饰低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的巨噬细胞(RAW264.7)单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）mRNA表达的影响，及对核因子-κB（NF-κB）和细胞内谷胱甘肽（GSH）的调控作用。方法:应用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定RAW264.7细胞MCP-1 mRNA的表达；凝胶滞留法（EMSA）测定NF-κB的结合活性；荧光分光光度法测定细胞内GSH的活性。结果:CVPS-B呈剂量依赖性抑制ox-LDL诱导的RAW264.7细胞MCP-1 mRNA的表达。应用GSH 特异性消耗剂buthionine-［S，R］-sulfoximine （BSO），ox-LDL不能诱导RAW264.7细胞MCP-1 mRNA的表达。CVPS-B抑制ox-LDL诱导RAW264.7细胞内GSH活性下降。CVPS-B呈剂量依赖性抑制 ox-LDL诱导的RAW264.7细胞NF-κB活性；在完全消耗GSH的RAW264.7细胞，ox-LDL不能诱导NF-κB的活性。结论:CVPS-B可抑制ox-LDL诱导RAW264.7细胞MCP-1 mRNA的表达；其抑制作用可能通过GSH/NF-κB的调控。     

反义寡核苷酸抑制缺氧/再给氧时内皮细胞细胞间粘附分子-1的表达

目的:探讨反义寡核苷酸(AS-ODN)对缺氧/再给氧(H/R)时内皮细胞细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法:流式细胞仪测定肾小球血管内皮细胞在缺氧、再给氧及加入AS-ODN后ICAM-1表达的阳性百分率。结果:缺氧10h,肾小球血管内皮细胞ICAM-1的表达与对照组无显著性差异,再给氧6hICAM-1的表达明显高于正常,加入AS-ODN后,ICAM-1阳性细胞的百分率下降40.6%。结论:AS-ODN可以降低H/R时内皮细胞ICAM-1的表达。