灯盏花素对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡相关基因表达的影响

心肌缺血再灌注损伤是心脏缺血性疾病和心脏外科围术期常见的一种病理生理现象,临床常见到再灌注后心律失常、心肌顿抑等.近年研究表明,在再灌注时细胞凋亡是导致细胞再灌注损伤的重要因素[1].细胞凋亡是受基因调节的一种生理性死亡过程.研究表明,在心肌梗死早期以细胞凋亡为主,且凋亡过程是可逆的,所以在AMI早期设法阻断凋亡信号转导途径,减少细胞凋亡是减少缺血区细胞死亡的一条有效途径[2].本研究通过用大鼠在体心脏模拟临床缺血再灌注损伤病理变化,通过观察灯盏花素对心肌细胞P-SAT1及P-STAT3基因表达的影响,探讨该药的心肌保护作用机制.     

细胞凋亡与心肌缺血再灌注损伤

本文就近年来 ,缺血再灌注时的心肌细胞凋亡现象、心肌细胞凋亡的机制及心肌细胞保护的研究等 ,综述如下。1　心肌细胞凋亡现象对急性缺血和缺血再灌注时的心肌细胞凋亡曾有过争论 ,Ｇｏｔｔｌｉｅｂ等[1 ] 于 1 994年采用电镜结合ＤＮＡ凝胶电泳方法 ,率先报道了缺血再灌注时的心肌细胞凋亡现象 ,发现细胞凋亡可以作为心肌细胞缺血再灌注损伤的特征 ,并区别于缺血性损伤 ,单纯缺血心肌无细胞凋亡。同年Ｔａｎａｋａ等[2 ] 报道 ,在乳鼠心肌细胞培养时 ,以 95 %Ｎ2 、5 %ＣＯ2 造成缺血条件 ,在 1 2ｈ内就观察到心肌细胞凋亡 ,证实细胞凋亡…     

Urocortin抑制心肌缺血再灌注诱导的自噬

目的 研究uroeortin (UCN)对缺血再灌注诱导的心肌细胞自噬的影响,探讨UCN的心肌保护机制.方法 构建大鼠在体心脏缺血再灌注损伤和离体新生大鼠心肌细胞的缺氧复氧模型,进行缺血/缺氧1h再灌注/复氧2h的损伤,在缺血/缺氧前1h给予UCN预处理;在再灌注/复氧2h后观察UCN对缺血再灌注/缺氧复氧诱导的心肌损伤、细胞自噬和自噬相关基因表达的影响.结果 UCN预处理可以显著降低缺血再灌注损伤导致的心肌损害,使梗死面积降低,血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)降低;增加缺氧复氧离体心肌细胞活力、减少培养上清的LDH水平.与上述心肌保护作用相伴随的是UCN预处理还能抑制缺氧复氧导致的心肌细胞自噬,使LC3BⅡ/LC3BI的比值显著降低,并且抑制自噬相关基因Beclin1、Bni p3的mRNA表达.结论 UCN可以抑制缺血再灌注诱导的心肌细胞自噬,可能在抗缺血再灌注损伤中起重要作用.     

中医药干预心肌细胞焦亡研究进展

心肌细胞焦亡参与诸多疾病及因素所致心肌损伤的发生发展，其分为经典焦亡途径、非经典焦亡途径和Caspase-3介导的焦亡途径。焦亡以细胞肿胀裂解、胞质外流、炎症因子释放为特征，可促进炎症反应，进一步造成心肌损伤。心肌缺血再灌注、慢性心力衰竭、脓毒症心肌病、多柔比星心脏毒性均会造成心肌损伤，心肌细胞焦亡参与其发生发展。中医药以多靶点优势干预心肌细胞焦亡，保护心功能，为疾病的治疗提供新的策略。     

脑钠肽对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的:探索脑钠肽(BNP)对大鼠急性心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响.方法:采用结扎大鼠左冠状动脉法制备心肌缺血再灌注(IR)模型.将大鼠随机分为三组,(1)假手术组(Sham组)行假手术,滴注生理盐水,观察时间同实验组;(2)缺血再灌注组(IR组):缺血45分钟,再灌注1小时,滴注生理盐水;(3)脑钠肽治疗组(BNP组):缺血45分钟,再灌注1小时,滴注BNP注射液.分别以地高辛随机引物法及免疫组化法检测心肌凋亡细胞、心肌细胞bax、bcl-2基因的蛋白表达情况.结果:缺血再灌注心肌细胞凋亡数量显著高于假手术组(P<0.01),脑钠肽治疗组心肌细胞凋亡(P<0.05)明显受到抑制.IR组和BNP组bax和bcl-2基因蛋白表达均明显增加(P均<0.01),BNP明显抑制bax基因表达(P<0.05),但对bcl-2基因表达无明显影响.结论:急性心肌缺血再灌注时心肌细胞调亡加剧,bax、bcl-2参与了缺血再灌注时心肌细胞调亡调控, BNP可抑制调亡加速基因bax的表达,因而在缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的保护方面有一定价值.     

丹参对大鼠急性心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的　探讨丹参对大鼠急性心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法　采用结扎大鼠左冠状动脉法制备心肌缺血 +再灌注模型 ,2 4只大鼠随机均分为 :①缺血再灌注 (IR)组 :缺血45min ,再灌注 1h ,滴注生理盐水 ;②丹参治疗 (DS)组 :缺血 45min ,再灌注 1h ,滴注丹参注射液 (5mg/kg ,制药厂生产 ) ;③假手术 (Sham)组 :行假手术 ,滴注生理盐水 ,分别采用地高辛随机引物法及免疫组织化学法检测心肌凋亡细胞、心肌细胞bax和bcl 2基因的蛋白表达情况。结果　缺血再灌注心肌细胞凋亡数量显著高于Sham组 (P <0 .0 1) ,DS组心肌细胞凋亡明显受到抑制 (P <0 .0 5 )。IR组和DS组bax、bcl 2基因蛋白表达均明显增加(P值均 <0 .0 1) ;丹参明显抑制bax基因表达 (P <0 .0 5 ) ,但对bcl 2基因表达无明显影响。结论　急性心肌缺血再灌注时心肌细胞调亡加剧 ,bax和bcl 2参与调控缺血再灌注时心肌细胞调亡 ,丹参可抑制调亡加速基因bax的表达 ,因而在缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的保护方面有一定价值。     

二氮嗪预处理对培养成年大鼠心肌细胞模拟缺血/再灌注损伤的保护作用及其与剂量的关系

目的探讨二氮嗪预处理对培养大鼠心肌细胞模拟缺血/再灌注损伤的保护作用及其与剂量的关系.方法采用培养成年大鼠心肌细胞模拟缺血/再灌注损伤模型,观察不同浓度的二氮嗪预处理对心肌细胞缺血再灌注损伤后的细胞成活率和肌酸激酶(CK)释放的影响.结果二氮嗪预处理培养大鼠心肌细胞后,对模拟缺血/再灌注损伤要保护作用,能减少心肌细胞的损伤和死亡.在10～200mmol/L的浓度范围内,随着二氮嗪剂量的增加,其预处理心肌细胞的保护效应也相应增加.结论在50～200 mmol/L的浓度范围内,二氮嗪能剂量依赖地产生预处理心肌保护效应.     

缺血后适应对压力超负荷肥厚心肌缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨缺血后适应(IPost)在离体小鼠肥厚心肌缺血再灌注(I/R)损伤中的保护作用及可能的作用机制。方法 12周龄C57/BL小鼠通过主动脉弓缩窄4周建立心肌肥厚模型,利用Langendorff灌流装置建立小鼠肥厚心肌I/R模型,稳定灌流10 min后分为3组,空白组(SH组,给予灌流液持续灌流150 min)、缺血再灌注组(I/R组,予30 min全心缺血随后再灌注120 min)、缺血后适应组(IPost组,予30 min全心缺血后,采取缺血10 s及再灌注10 s的3次IPost周期,再灌注120 min)。使用微球囊进行心脏血流动力学检测,采用三苯基氯化四氮唑染色的方法确定梗死心肌面积及生化法测定心肌酶、检测心肌细胞超微结构,TUNEL法检测心肌细胞的凋亡。结果与SH组I、/R组比较,IPost组小鼠心脏血流动力学指标LVSP、dp/dtmax显著改善,心肌梗死范围减小,心肌酶释放减少,调亡指数显著降低(P均<0.05)。与I/R组比较,IPost组透视电镜下心肌细胞线粒体损伤明显减轻。结论 IPost能通过减少心肌梗死范围、减少线粒体损伤、抗心肌凋亡而有效地减轻离体小鼠肥厚心肌缺血再灌注损伤。     

急性心肌梗死溶栓后再灌注心律失常及预后分析

近年来随着急性心肌梗死(AMI)再灌注治疗的普及,使透壁性心肌梗死的病死率有所降低。国内外研究表明再灌注后重新获氧的心肌受到活跃的氧代谢物的额外损伤即再灌注损伤,主要表现在心肌细胞的死亡、微血管的损伤、心肌顿抑及再灌注心律失常[1,2]。本文旨在探究AMI溶栓后再灌注心     

供心缺血-再灌注损伤与心肌细胞凋亡

目的 探讨细胞凋亡在心脏长时间低温保存后缺血再灌注损伤中的作用,明确抗调亡因子在心脏移植供心缺血再灌注损伤中的保护作用,为心脏保护液药物研究提供帮助。方法 将16只实验SD大鼠分2组,通过建立改良Langendorff离体大鼠心脏灌注模型,在围手术期、供心保存过程中通过天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3抑制剂(Ac-DEVD-CHO)干预,使用HTK保存液低温长时间保存供心,监测模型前后心功能,检测生化、酶学、凋亡相关因子和病理学指标。 结果 在恢复灌注复跳后60min,①实验组的以心功能指标的恢复率百分数高于对照组（P<0.05）。②在恢复灌注复跳后60min,实验组的心功酶及肌钙蛋白Ⅰ均低于对照组（P<0.01）。③实验组的心肌Caspase-3活性低于对照组（P<0.01）。④心肌组织HE染色：光镜下显示实验组的心肌组织损伤较对照组严重。 结论 ①供心长时间低温保存再灌注后细胞出现明显凋亡,心肌细胞凋亡是心脏移植供心长时间保存缺血再灌注后心功能下降的主要机制之一。②使用半胱天冬酶抑制剂能明显抑制心肌细胞凋亡,减轻供心缺血再灌注损伤,改善供心心功能,是提高供心保存时效的良好方法。③半胱天冬酶抑制剂Ac-DEVD-CHO对供心保存的时-效,量-效关系仍有待进一步探讨。     

SEA0400对大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨SEA0400对离体大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用及其机制.方法:利用酶解法分离成年Wistar大鼠心脏获得心肌细胞悬液,随机分成3组进行研究:(1)对照组:心肌细胞用再灌注液培养60min,未经历缺血再灌注过程;(2)缺血再灌注损伤组:心肌细胞缺血30min,再灌注30min,经历缺血再灌注损伤过程;(3)SEA0400干预组:在心肌细胞缺血再灌注过程中,予以终浓度1 μmol/L的SEA0400进行干预.实验结束后测定以上各组心肌细胞内Ca~(2+)浓度和心肌细胞活力.结果:缺血再灌注可导致心肌细胞活力降低和细胞内Ca~(2+)荧光强度显著升高(P<0.01);SEA0400能够明显增加心肌细胞活力和减轻细胞内Ca~(2+)荧光强度升高(P<0.01).结论:SEA0400可明显减轻缺血再灌注所致心肌细胞内钙超载,维持心肌细胞活力,从而达到心肌保护的作用.     

胺碘酮抗心肌再灌注损伤的作用及其机理

为观察胺腆酮对Langendorff大鼠心肌缺血—再灌注损伤的保护作用。通过离体大鼠心肌缺血—再灌注损伤模型的建立,分别于缺血及再灌注同时于胺碘酮(30μg),结果发现两者均能减少再灌注心律失常的发生及心肌细胞乳酸脱氢酶的释出,并能增加再灌注心肌局部超氧化物歧化酶及一氧化氨水平,降低丙二醛水平,提示胺碘酮对离体大鼠再灌注心肌有保护作用,其机制可能与清除自由基和增加心肌局部的一氧化氮含量有关。     

大鼠心肌缺血再灌注损伤中肿瘤坏死因子的实验研究

目的 :探讨肿瘤坏死因子 (TNF)在心肌缺血再灌注损伤中的作用机制。方法 :应用大鼠Langendorff离体心脏灌注模型 ,通过酶联免疫法测定心肌组织TNF含量 ,原位杂交检测TNFmRNA的表达情况。结果 :对照组心肌组织中可以检测到一定含量的TNF ,但实验组心肌组织中的TNF水平较对照组明显升高 (P <0 .0 5 )。对照组心肌组织中没有TNFmRNA表达 ,染色呈阴性 ;实验组心肌组织中的TNFmRNA表达明显 ,染色呈强阳性或极强阳性 ,并将阳性表达的细胞定位于心肌细胞。结论 :TNF是在离体的、缺血心脏中产生的 ;TNF表达主要定位于心肌细胞 ,在心肌缺血再灌注损伤过程中 ,心肌细胞是影响心肌功能的TNF的重要来源     

瓜蒌薤白半夏汤对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达影响

目的 研究瓜萎薤白半夏汤对缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达影响.方法 通过结扎大鼠冠状动脉左前降支造成心肌缺血再灌注损伤模型,各组动物至实验时限心肌缺血30min、再灌注90min后,取出心脏.采用TUNEL检测心肌细胞凋亡,免疫组化方法检测心肌Bcl-2、Bax蛋白表达.结果 与假手术组对照,模型组细胞凋亡率及Bax表达水平均明显升高、Bcl-2表达水平降低,组间比较差异有统计学意义(P＜0.01);瓜萎薤白半夏能有效降低Bax表达、升高Bcl-2表达水平,抑制细胞凋亡的发生,与模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 瓜萎薤白半夏汤可能通过上调Bcl-2、下调Bax蛋白表达而有效抑制心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡的发生.     

脑缺血/再灌注损伤过程中脑内脑源性神经营养因子和促调亡因子与神经元调亡的关系

脑原性神经营养因子(Brain derived neurotrophic factor BDNF)是1982年由德国神经生物学家Barde等,从猪脑中分离纯化出来的NGF家族的第二成员[1],在中枢神经系统内分布广泛,对神经元生长发育、分化成熟以及抵御外来侵袭中起重要的调节作用[2],有维持神经元存活和促进突触生长作用[3,4,5],在神经元受到外来打击时如外伤[6]、毒性因子、缺血[7、8]及退行性变时BDNF的表达有较大的变化.目前认为Bax是bcl-2基因家族中的一类能促进细胞调亡的基因,调控细胞调亡,决定细胞的命运.本研究的目的在于探究在脑缺血-再灌注损伤过程中,BDNF、Bax表达水平与神经元调亡间的关系.     

麻醉药物在心肌缺血再灌注损伤中的保护作用

心肌缺血再灌注损伤指的是心肌短时间血供中断后,一定时间内再次恢复心肌血液供应,缺血心肌发生较血液供应恢复前更严重的损伤.二十世纪八十年代,有学者提出缺血预适应概念,是指多次短暂缺血对随后较长时间心肌缺血再灌注损伤产生保护的一种适应机制.缺血预处理是保护心肌细胞,减轻心肌再灌注损伤的有效方法,成了医学领域的热门研究课题之一.但由于临床心肌细胞缺血事件不能够事先预见,以及实施缺血预适应过程对心脏有损伤,因此,缺血预适应这种干预措施操作难度高、风险大,在临床上的应用受到很大的限制[1].     

自体骨骼肌卫星细胞移植治疗急性心肌梗死的实验研究

临床各种心脏疾病引起的心肌损伤无法进行增殖修复,最终以纤维疤痕代替,导致具有收缩功能的心肌细胞明显减少,最终发展为充血性心力衰竭[1]。近年来,应用骨骼肌卫星细胞心肌内移植替代损伤心肌及疤痕组织的研究取得了很大进展,受到广泛关注。我们以成年杂种犬为研究对象,经左冠状动脉前降支将自体骨骼肌卫星细胞灌注移植入急性心肌梗死区域,观察卫星移植细胞对梗死心肌内的心肌再生、心肌细胞基本结构保护作用。一、材料和方法1骨骼肌卫星细胞的提取、分离和纯化:依据Ｄｏｒｆｍａｎ等[2]介绍的方法稍加改进。2骨骼肌卫星细胞的体外培养、标…     

心肌缺血-再灌注损伤大鼠心电图变化机制的研究

[目的]探讨大鼠心肌缺血再灌注损伤过程中,氧自由基及心肌细胞凋亡与缺血再灌注性心律失常的关系。[方法]建立大鼠心肌缺血-再灌注模型,对比缺血期与再灌注期的心律失常发生率及平均持续时间、ST段改变、心肌丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力、心肌细胞凋亡情况。[结果]缺血期房室传导阻滞、室性早搏及室速的发生率分别为7.5%、15%及10%;再灌注后分别为30%、67.5%及32.5%,与缺血期相比,再灌注后上述指标均明显增高。室速的平均发作时间由缺血期的(40±14)s上升到(495±103)s(P<0.01);再灌注后室颤平均持续时间为(198±22)s。再灌注后心肌MDA含量高于缺血组(P<0.01),且有逐渐递增趋势;心肌SOD活力较缺血组降低(P<0.01),再灌注120 min后下降趋缓。再灌注组心肌细胞凋亡明显高于缺血组(P<0.05)。缺血再灌注损伤过程中,心律失常发生率与SOD活力变化呈负相关,与MDA值变化及心肌细胞凋亡变化均呈正相关。[结论]氧自由基及心肌细胞凋亡很可能是造成心肌缺血再灌注后心律失常的重要因...     

一氧化氮与心肌缺血再灌注损伤

<正>1955年Melrose首先提出应用心脏停搏液进行心肌保护,经过10余年的发展日趋成熟.我国于七十年代应用于心脏外科临床,目前已被广泛采用,作为常规心肌保护方法.停跳的心脏即使在停搏液保护下,仍存在着能量供需的矛盾.缺血的心肌在突然恢复循环再灌注后又可引起一种新的病理生理改变,叫做再灌注损伤(Reperfuse Injury,RI).早在三十年代,Tennant等就观察到心肌再灌注可诱发室颤.其后,Jenning等在大鼠离体心脏模型中也发现了氧反常现象,在以后的临床实践中也得到广泛证实.从此,人们对心肌保护研究的重点从缺血期转移到再灌注后.随着近年来对血管内皮细胞功能认识的不断发展,研究也不单纯限于对心肌细胞的保护,心肌再灌注损伤(Myocardial reperfusion injury,MRI)在心脏外科手术过程中的意义及其防治的研究也不断深入.1 心肌缺血再灌注损伤的发生机制     

PEP-1-SOD1对离体缺血再灌注损伤大鼠心肌Bax、Bcl-2蛋白表达的影响

目的:研究细胞穿透肽PEP-1介导人铜锌-超氧化物歧化酶(Cu,Zn-SOD,SOD1)对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤(MIRI)细胞凋亡的影响。方法:采用Langendorff灌流系统对离体大鼠心脏进行停灌-复灌建立心肌缺血再灌注损伤模型。大鼠随机分为对照组、SOD1蛋白预处理组,25、50、100μmol/L PEP-1-SOD1蛋白预处理组。复灌结束后,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫荧光法检测心肌组织Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:与对照组及SOD1组相比,各PEP-1-SOD1组心肌细胞凋亡指数(AI)显著下降,Bcl-2蛋白表达升高,Bax蛋白表达显著减少(P<0.01)。结论:PEP-1-SOD1融合蛋白可抑制离体心脏缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡,其机制可能与上调Bax表达及下调Bcl-2表达有关。