孕妇外周血中胎儿DNA的提取和应用

从孕妇外周血中分离胎儿细胞一直是无创性产前诊断的主要思路和探索途径，但是母血中胎儿细胞数量少，富集，分离技术操作复杂，价格昂贵限制了其临床应用。近年来发展起来的从孕妇外周血中提取胎儿DNA行产前诊断，敏感度，特异度不降低的同时简化了技术条件，为无创性产前诊断开辟了新途径。具有广阔的发展前景。     

孕妇血浆中游离胎儿DNA的研究进展

从孕妇血中分离胎儿细胞是无创性产前诊断的一种确定方法，但由于母血中胎儿细胞数量极少，而且从母血中分离和富集胎儿细胞的技术不成熟，使它应用于临床有一定的困难。许多研究者一直致力于探索一种简便有效的无创性产前诊断方法，分子生物学技术的发展为分子分析提供了很多有用的工具。本文对检测母血浆中游离胎儿DNA在遗传病的产前诊     

孕妇外周血分离胎儿有核红细胞与FISH分析技术在无创性产前诊断中的应用

目的:应用流式细胞仪从孕妇外周血中分离胎儿有核红细胞(NRBCs),通过荧光原位杂交(FISH)分析进行无创性产前诊断。方法:对15例妊娠11～24周的高危孕妇外周血按常规密度梯度方法分离单个核细胞,选用红细胞特异性抗体CD71、HbF结合流式细胞术(FACS)分选富集NRBCs,并进行FISH分析。结果:所有标本均分选出NRBCs,分选率为100%,CD71和HbF双阳性细胞含量为(3.43±1.62)×10-2。经FISH成功分析13例,未发现异常结果。结论:从孕妇外周血中分离富集得到的胎儿有核红细胞,通过FISH分析检测胎儿特定的染色体,可进行无创性产前诊断遗传性疾病。     

利用母血中胎儿有核红细胞结合血清筛查和三维超声无创性产前诊断唐氏综合征

目的:利用母外周血中胎儿有核红细胞结合血清三联筛查及三维超声,建立快速无创性产前诊断唐氏综合征的有效模式。方法:早、中期孕妇共670例,采取血清三联筛查结合三维超声和病史选取唐氏高危孕妇,抽取高危孕妇的外周血,流式细胞术富集母血中的胎儿有核红细胞(Fetal Nucleated Red Blood Cells,FNRBCs);次日进行多重引物原位杂交(muti-primed in situ labeling,multi-PRINS)检测胎儿细胞21号染色体与Y染色体。结果:通过血清三联筛查和三维超声结合病史筛选出高危孕妇24例,高危孕妇在两日内即可确诊,24例中诊断23例染色体正常胎儿,包括男胎12例、女胎11例;诊断1例男性唐氏综合征胎儿。24例标本检测结果和实际胎儿核型符合。结论:血清三联筛查、超声检查结合病史筛选出高危孕妇,然后利用母血中胎儿有核红细胞进行多重引物原位杂交检测细胞染色体,可作为快速、无创性产前诊断唐氏综合征的有效模式,并可为其他胎儿染色体基因异常或者宫内感染的无创性产前诊断提供参考。     

单细胞PEP-PCR技术无创性产前诊断胎儿性别

目的探讨无创性产前基因诊断胎儿性别新方法的科学性和可行性.方法从273例孕妇外周血中分离出单个胎儿细胞,应用引物延伸预扩增(primer extension preamplification,PEP)方法预扩增单个细胞的基因组,再用PCR方法检测扩增产物中的SRY基因以产前诊断胎儿性别.结果153例男胎标本中该产前诊断方法检测到SRY基因的有149例,120例女胎样本中除1例外均未检测出SRY基因.该产前诊断方法的敏感性为97.39%,特异性为99.17%,正确率为98.17%.结论无创性产前基因诊断胎儿性别的新方法具有良好的科学性和可行性,并为其他疾病的无创性产前诊断研究奠定基础.     

单细胞PEP-PCR技术无创性产前诊断胎儿性别

目的:探讨无创性产前基因诊断胎儿性别新方法的科学性和可行性。方法:从273例孕妇外周血中分离出单个胎儿细胞,应用引物延伸预扩增(primer extension preamplification,PEP)方法预扩增单个细胞的基因组,再用PCR方法检测扩增产物中的SRY基因以产前诊断胎儿性别。结果:153例男胎标本中该产前诊断方法检测到SRY基因的有149例,120例女胎样本中除1例外均未检测出SRY基因。该产前诊断方法的敏感性为97.39％,特异性为99.17％,正确率为98.17％。结论:无创性产前基因诊断胎儿性别的新方法具有良好的科学性和可行性,并为其他疾病的无创性产前诊断研究奠定基础。     

孕妇血浆中游离胎儿DNA的生物学特点及临床应用

已证实胎儿细胞存在于孕妇外周血中 ,但由于其数量较少 ,而且存在个体差异 ,所以很难将其应用于临床形成成熟的非创伤性产前诊断检测方法。 1997年 ,Lo[1] 首次报道在母体血循环中发现了游离胎儿DNA ,证实了母体血浆中的DNA是胎儿和母体DNA的嵌和物。随后又有一些学者相继证实了母体血循环中游离胎儿DNA的存在。近两年来 ,随着分子生物学等技术的完善 ,使得从母血循环中检测胎儿DNA并应用于临床成为可能 ,并为形成一种易于为广大患者接受、应用范围广的无创性产前诊断技术奠定了基础     

孕妇血浆中游离胎儿DNA在产前诊断中的研究进展

用妊娠妇女外周血中的胎儿DNA进行产前诊断是目前产前诊断研究的热点,从妊娠妇女外周血中得到胎儿DNA主要有两种途径,一种是从妊娠妇女外周血中富集纯化胎儿细胞,另一种是从孕妇血浆/血清中直接提取游离的胎儿DNA。将对孕妇血浆中的胎儿DNA在非侵入性产前诊断中的应用及存在的问题进行综述。     

孕妇血浆中游离胎儿DNA的生物学特点及临床应用

已证实胎儿细胞存在于孕妇外周血中，但由于其数量较少，而且存在个体差异，所以很难将其应用于临床形成成熟的非创伤性产前诊断检测方法。1997年，Lo^[1]首次报道在母体血循环中发现了游离胎儿DNA，证实了母体血浆中的DNA是胎儿和母体DNA的嵌和物。随后又有一些学者相继证实了母体血循环游离胎儿DNA的存在。近两年来，随着分子生物学等技术的完善，使得从母血循环中检测胎儿DNA并应用于临床成为可能，并为形成一种易于为广大患者接受、应用范围广的无创性产前诊断技术奠定了基础。     

孕妇血浆中游离胎儿DNA在产前诊断中的研究进展

用妊娠妇女外周血中的胎儿DNA进行产前诊断是目前产前诊断研究的热点，从妊娠妇女外周血中得到胎儿DNA主要有两种途径，一种是从妊娠妇女外周血中富集纯化胎儿细胞，另一种是从孕妇血浆／血清中直接提取游离的胎儿DNA。将对孕妇血浆中的胎儿DNA在非侵入性产前诊断中的应用及存在的问题进行综述。     

孕妇血浆中游离胎儿DNA在产前诊断中的研究进展

用妊娠妇女外周血中的胎儿DNA进行产前诊断是目前产前诊断研究的热点，从妊娠妇女外周血中得到胎儿DNA主要有两种途径，一种是从妊娠妇女外周血中富集纯化胎儿细胞，另一种是从孕妇血浆／血清中直接提取游离的胎儿DNA，将对孕妇血浆中的胎儿DNA在非侵入性产前诊断中的应用及存在的问题进行综述。     

引物原位标记技术标记胎儿细胞的可行性探讨

目的探讨引物原位标记技术(PRINS)对脐血中胎儿有核红细胞(NRBC)进行标记的可行性。方法15例足月孕妇外周血经不连续密度梯度离心、制片,行PRINS技术标记胎儿细胞,显微镜下识别并计数。结果发现15例孕妇脐血细胞涂片中每例均有阳性杂交信号出现;阳性率为100%(15/15)。30张正常对照组的外周血细胞涂片中仅1例出现阳性杂交信号;阴性率为96%(29/30),假阳性率仅为4%(1/30)。结论实验结果提示PRINS法对于用脐血中分离到的胎儿细胞进行无创性产前诊断具有可行性。     

母血循环中胎儿细胞的研究进展

已经证明早在妊娠5周母血循环中就可监测出胎儿细胞,分离、纯化这些细胞可用于早期胎儿遗传学诊断。常用的胎儿细胞类型为滋养细胞和有核红细胞。目前从母血中分离、纯化胎儿细胞在技术和临床研究上取得了很大的进展,作为一种无创性产前诊断方法其有着一定的临床应用价值,但仍存在一些问题有待解决。     

孕妇外周血中胎儿游离DNA的研究进展

<正>当前,产前诊断越来越受到人们的重视,产前诊断是减少出生缺陷儿的有效措施之一。分为有创与无创性,有创性包括:羊水穿刺、绒毛活检取样(CVS)、胚胎(胎儿)镜、经皮胎儿脐血穿刺等,因为具有创伤性,操作时可能对母亲和胎儿造成一定的风险,因而在临床上限制了其使用。近年来,无创伤性产前诊断越来越受到人们的关注,而孕妇外周血中的胎儿游离DNA的发现为无创伤性产前遗传病诊断提供了重要的研究方法,由于胎儿游离DNA在孕妇外周血中具有     

母体血循环中胎儿细胞的分离及在产前诊断中的应用

近年来，随着单克隆抗体技术、流式细胞技术、离心技术、聚合酶链反应及荧光原位杂交技术的日臻完善并应用于临床。一种非侵入性产前诊断方法──从孕妇外周血富集分离胎儿细胞进行基因诊断成为可能。本文就国外这方面研究的历史及目前进展作简要介绍。     

母血循环中胎儿细胞的研究进展

已经证明早在妊娠５周母血循环中可监测出胎儿细胞,分离、纯化这些中用于早期胎儿遗传学诊断。常用的胎儿细胞类型为滋养细胞和有核红细胞。目前从母血中分离、纯化胎儿细胞在技术和临床研究上取得了很大的进展,作为一种无创性产前诊断方法其有着一定的临床应用价值,但仍存在一些问题有待解决。     

母体血循环中胎儿细胞的分离及在产前诊断中的应用

近年来，随着单克隆抗体技术、流式细胞技术、离心技术、聚合酶链反应及荧光原位杂交技术的日致完善并应用于临床。一种非侵入性产前诊断方法－－从孕妇外周血富集分离胎儿细胞进行基因诊断成为可能。本文就国外这方面研究的历史及目前进展作简要介绍。     

无创性产前诊断胎儿染色体异常的研究进展

利用孕妇外周血和宫颈黏液中胎儿来源物质,对胎儿染色体病进行诊断,一直是产前诊断领域的研究热点。本文对近年来用孕妇外周血和宫颈黏液中胎儿细胞和孕妇外周血中游离胎儿DNA/RNA,进行无创性产前监测胎儿染色体非整倍体异常的研究,综述如下。     

培养孕妇外周血中胎儿有核红细胞在性连锁疾病产前诊断中的应用

目的 本文旨在建立一种利用孕妇外周血中分选出的胎儿有核红细胞应用于性连锁疾病无创伤性产前诊断的有效方法.方法 10例妊娠8～12周孕妇各取外周血5 mL,淋巴细胞分离液分离外周血、取上层细胞培养后固定、透化、血红蛋白ε链免疫荧光抗体染色.显微操作取阳性细胞,采用单细胞多重置换扩增技术(MDA)进行全基因组扩增,利用全基因组扩增产物为模板,常规PCR检测Alphoid基因片段确定胎儿性别,与B型超声性别诊断比较.结果经培养后所有标本均观察到血红蛋白ε链阳性细胞,即胎儿有核红细胞(fetal nucleated red blood cell,FNRBC).分选出的阳性细胞经全基因组扩增和后续常规PCR检测,结果 显示10例中有6例诊断为男胎,与B型超声结果完全符合.3例为女胎,1例全基因组扩增失败,B型超声诊断4例为女胎.该方法诊断男胎的正确率为100%,诊断女胎的正确率为75%.结论 应用淋巴细胞分离液从孕妇外周血中富集单个核细胞、培养后以ε-血红蛋白抗体为分选标志,结合显微操作技术从母血中挑选出ε-血红蛋白阳性细胞,并通过全基因组扩增可以有效地获取足够量的研究模板,保证后续分析的准确性,且简单、经济、易行,在临床上可应用于性连锁遗传疾病的无创性产前诊断.     

培养孕母血中胎儿有核红细胞作为无创伤性产前诊断的评价

孕母血中循环的胎儿细胞是作为无创伤性产前诊断的重要选择细胞,为了评价培养母血中胎儿有核红细胞作为无创伤性产前诊断的可行性。作者采集了27例9～17周孕妇外周血标本,每例标本分为两组,一组在培养前用了磁场细胞分离装置(Macs)分离单个核细胞,另一组则没有分离;其中16例获得了足够的单个核细胞。将Macs分离出的有核细胞接种于含多种生长因子的半固体培养基中,而未经Macs分离的另一组细胞接