2～5岁儿童种接大肠杆菌O157O特异性多糖结合疫苗的安全性和免疫原性

大肠杆菌O157：H7可引起严重肠炎和溶血性尿毒病，尤其对幼儿和老年人。与志贺菌的情况相似，血清抗大肠杆菌O特异性多糖IgG抗体能通过裂解肠道细菌而提高免疫力。成人Ⅰ期临床试验显示，大肠杆菌O157O特异性多糖与重组绿脓杆菌外毒素A结合制成的疫苗（O157-rEPA）安全且具有免疫原性。此项Ⅱ期临床试验旨在确认2～5岁儿童接种O157-rEPA的安全性和免疫原性。     

应用酶联免疫吸附实验检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7

目的制备和纯化O157∶H7抗原,免疫家兔和豚鼠,获得高效价的抗O157∶H7免疫血清并进行纯化及酶标记。建立对O157∶H7感染患者快速诊断方法,做到早期发现及时治疗,有效控制疫情的蔓延。 方法ELISA双抗体夹心法检测O157∶H7抗原。步骤包被特异性抗体,加处理后的粪便等标本,然后加入抗O157∶H7酶结合物,最后加入底物显色。结果本课题所研制的抗O157∶H7酶结合物只对O157∶H7呈阳性反应,而与其他相关细菌无交叉反应。结论应用酶联免疫吸附试验（即双抗体夹心法）对肠出血大肠杆菌O157∶H7抗原的检测较常规法实验程序简捷、快速、敏感。临床和现场验证结果表明,其方法具有灵敏度高,特异性强操作简单等特点,为肠出血性大肠杆菌O157∶H7的鉴定及快速诊断提供了一种新的检测手段。     

应用酶联免疫吸附实验检测肠出血性大肠杆菌O157:H7

目的:制备和纯化O157:H7抗原,免疫家兔和豚鼠,获得高效价的抗O157:H7免疫血清并进行纯化及酶标记.建立对O157:H7感染患者快速诊断方法,做到早期发现及时治疗,有效控制疫情的蔓延. 方法ELISA双抗体夹心法检测O157:H7抗原.步骤:包被特异性抗体,加处理后的粪便等标本,然后加入抗O157:H7酶结合物,最后加入底物显色.结果本课题所研制的抗O157:H7酶结合物只对O157:H7呈阳性反应,而与其他相关细菌无交叉反应.结论应用酶联免疫吸附试验(即双抗体夹心法)对肠出血大肠杆菌O157:H7抗原的检测较常规法实验程序简捷、快速、敏感.临床和现场验证结果表明,其方法具有灵敏度高,特异性强操作简单等特点,为肠出血性大肠杆菌O157:H7的鉴定及快速诊断提供了一种新的检测手段.     

大肠杆菌O157：H7生物学特性研究

血清型O157－H7大肠杆菌,可引起人类出现散发和暴发流行出血性结肠炎（HC）和溶血性尿毒综合症（HUS）,本文对5株大肠杆菌O157：H7的生物学特性进行了研究,结果研实：本菌为革兰氏阴性杆菌,电镜下观察可见细菌表明具有鞭毛,荚膜和菌毛,5菌具有典型大肠杆菌的生化反应,并有其独特的生化特性,不发酵山梨醇,对棉子糖,赖氨酸,鸟氨酸呈100％阳性反应。山梨醇－麦康凯培养基（SMAC）可用于分离大肠杆菌O157：H7,但SMAC至少不能区分大肠杆菌O157：H7和宋内氏痢疾杆菌,除个别抗生素外,此菌对常用的抗生素都敏感。5株大肠杆菌在D－甘露糖存在或不存时,均不能引起人A型红细胞和豚鼠红细胞发生凝集反应,5株菌均能产生一种特殊的肠溶血素,并且培养基对其溶血环的产生有很大影响,所有检测的大肠杆菌O157：H7都产生Vero细胞毒素,不产生不耐热肠毒素和耐热肠毒素,也不具有侵袭力,小鼠毒力试验（LD50）显示毒力远远大于肠毒原性大肠杆菌和宋内氏痢疾杆菌,DNA G＋C Mol%测定表明5株菌之间及其与作为标准大肠杆菌的E.coilK12之间具有很近的亲缘关系,质粒图谱分析结果表明：3株菌携带分子量为2．55MD,4．32MD和59．6MD的3个质粒,一株菌携带两个质粒：分子量为2．09MD和59．6MD,另一株菌也携带两个质粒：分子量为3．98MD和59．6MD。用紫外线照射法从5株大肠杆菌O157：H7中诱导出5种噬菌体,本文提取了大肠杆菌O157：H7的O－特异性多糖,其对小鼠有一定的免疫保护力。     

首次发现一株与EHEC O157：H7血清交叉凝集的维罗纳气单胞菌温和生物变种

2002年夏季，我们对云南战区部队感染性腹泻病原监测时，从1例腹泻患者粪便标本中分离到1株氧化酶阳性，能与EHEC O157：H7诊断血清发生强凝集反应的维罗纳气单胞菌温和生物变种(Aeromonas Veronni biovar sobria)，国内未见报道，现将结果报告如下。     

大肠杆菌O157：H7实验感染动物排菌动态检测

目的检验大肠杆菌O157：H7胶体金免疫层析检测试纸条在感染动物排菌中的应用效果。方法将牛和小鼠采用灌胃攻毒方式实验感染大肠杆菌O157：H7,用大肠杆菌O157：H7胶体金免疫层析检测试纸条与细菌鉴别培养基分别培养检测感染动物粪便中的O157：H7的排菌量和持续时间。结果牛在感染大肠杆菌O157：H7后的第2天开始从粪便排菌,第4～6天达到峰值,排菌时间可持续28 d;小鼠在感染O157：H7后的第4小时开始从粪便排菌,第6小时达到峰值,排菌时间可持续15 d。结论大肠杆菌O157：H7胶体金免疫层析检测试纸条与细菌鉴别培养基培养计数的检测结果一致,试纸条更简便、快捷、直观,在1～5 min内可得出检测结果。     

大肠杆菌O157:H7多糖蛋白结合疫苗重复肌肉注射对大鼠的长期毒性研究

目的:考察大肠杆菌O157:H7多糖蛋白结合疫苗(简称O157疫苗)对大鼠重复肌肉注射的长期毒性,为临床试验提供安全性依据。方法:48只SD大鼠随机分为疫苗组和对照组(均n=24),疫苗组每只每次给予O157疫苗0.5mL(含多糖25μg),对照组给予等体积磷酸盐缓冲溶液,均间隔2周免疫1次,共3次。第1次免疫后2周、第3次免疫后1、3、5周每组每次处死大鼠6只,进行血液学指标、血液生化学指标、组织器官病理、血清特异性抗体、骨髓组织、给药部位组织等的观察和检测。结果:与对照组比较,疫苗组各指标检查未出现有病理意义的改变,部分血液学指标因免疫诱导所致出现动态规律变化,但未见免疫系统损伤。结论:大鼠重复肌肉注射O157疫苗后未发现明显长期毒性和局部刺激性。     

大肠杆菌O157:H7感染的临床分析

1999年及2000年夏秋季江苏省苏北某地及其接壤地区出现感染性腹泻患者,且有肾功能衰竭（肾衰）发生,病死率高,经检验证实该组病例系由大肠埃希菌（Escherichia coli）O157：H7引起的出血性肠炎（HC）和溶血性尿毒综合征（HUS）。该菌又称肠出血性大肠埃希菌（EHEC）O157：H7,简称大肠杆菌O157：H7,我们就该病流行期间76例临床诊断患者的临床表现作一分析。     

O型血孕妇血清免疫抗体与新生儿溶血病的关系探讨

目的：探讨O型血孕妇血清中免疫抗体IgG抗A(B)与新生儿溶血病(HDN）的关系。方法：检测HDN患儿母亲血型及血清IgG抗A(B)效价，检测患儿血型；另外检测产前组O型血孕妇血清IgGA(B)效价。结果：HDN患儿母亲均为O型(患儿为A或B型)，且IgG抗A(B)效价≥1：128者达81．6％；产前组O型血孕妇IgG抗A(B)效价≥1：128者达56．2％。结论：O型血孕妇孕期检测血清IgG效价对HDN的防治有重要意义。     

儿科危重急症急救讲座 第二十四讲 重型感染性腹泻病（下）——沙门菌感染与中毒型痢疾

出血性大肠杆菌肠炎1982年在美国俄勒冈州和密歇根州发生因食汉堡包引起的食物中毒事件中,肠出血性大肠杆菌（E H E C）被明确为致病菌。E H E C能引起人的血性腹泻者目前公认有O157∶H7、O26∶H11和O111三个血清型,而O157∶H 7占绝大部分。本讲以O 1 5 7∶H 7肠炎为代表讲述。     

大肠杆菌O157∶H7实验感染动物排菌动态检测

目的 检验大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条在感染动物排菌中的应用效果.方法 将牛和小鼠采用灌胃攻毒方式实验感染大肠杆菌O157∶H7,用大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条与细菌鉴别培养基分别培养检测感染动物粪便中的O157∶H7的排菌量和持续时间.结果 牛在感染大肠杆菌O157∶H7后的第2天开始从粪便排菌,第4～6天达到峰值,排菌时间可持续28 d;小鼠在感染O157∶H7后的第4小时开始从粪便排菌,第6小时达到峰值,排菌时间可持续15 d.结论 大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条与细菌鉴别培养基培养计数的检测结果一致,试纸条更简便、快捷、直观,在1 ～5 min内可得出检测结果.     

探讨孕妇免疫性IgG-A（B）抗体效价与新生儿ABOHDN的发病关系

目的了解母亲体内免疫性IgG-A（B）抗体效价与ABO新生儿溶血病的发病关系。方法以我实验室检测的168例夫妇血型不合,孕妇为＂O＂型的新生儿溶血病检测结果为研究对象,以抗体效价〈1：128者和≥1：128者进行分组,采用数据统计分析方法进行研究。结果抗体效价〈1：128者未发病62例,发病9例,合计71例,发病比例为12.68%（9/71）;抗体效价≥1：128者未发病57例,发病40例,合计97例,发病比例为41.24%（40/97）。结论孕妇血清中免疫性抗体效价〈1：128者与抗体效价≥1：128差异有统计学意义（0.01〈P〈0.05）,可以把抗体效价≥1：128作为临床新生儿溶血病发病的重要参考。     

O型血孕妇产前IgG抗体效价异常与新生儿溶血病发病关系的探讨

目的探讨O型血孕妇产前免疫球蛋白G(Ig G)抗体效价检测的异常情况与新生儿溶血病发病之间的关系。方法用微柱凝胶法对1357例O型血孕妇产前血清Ig G抗A(B)抗体进行检测。结果 1357例O型血孕妇血清抗体效价≥1:128者147例,异常检出率为10.8%。结论孕妇产前Ig G抗A(B)效价的检测在预防或减少新生儿溶血病方面有重要意义。     

肠出血性大肠杆菌O157：H7的快速可视化检测

目的应用环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）技术和羟基萘酚蓝（Hydroxynaphthol blue,HNB）指示剂建立肠出血性大肠杆菌（EHEC）O157∶H7快速可视化检测方法。方法针对EHEC O157∶H7脂多糖编码基因rfbE保守区设计LAMP引物及环引物,反应体系加入染料HNB作为LAMP扩增的指示剂,结合LAMP浊度仪优化扩增条件,根据HNB的颜色变化进行结果判定,并评价检测方法的特异性和灵敏度。结果本方法最低检出限约为100拷贝/反应管,高于普通PCR;检测特异性高,仅EHEC O157∶H7反应管HNB颜色由紫罗兰变成天蓝色,而肠产毒性大肠杆菌（ETEC）、肠致病性大肠杆菌（EPEC）、肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）、肠聚集性大肠杆菌（EAEC）、宋内志贺菌、福氏志贺菌均不发生变色反应;体系的扩增效率高于普通PCR,40 min内出结果。结论建立的基于颜色判定的EHEC O157∶H7 LAMP检测方法具有特异、灵敏、设备要求简单等特点,适用于EHEC O157∶H7现场快速检测。     

凝聚胺在交叉配血和不完全抗体检测的使用评价

目的 评价凝聚胺在交叉配血和不完全抗体检测中的使用。方法 分别用盐水法、菠萝酶法、抗球蛋白法、凝聚胺法对随机200名受血者标本与其同型献血员标本做交叉配血；IgG抗-D血清按比例进行性稀释与谱细胞反应分别用抗球蛋白法和凝聚胺法测定。结果 交叉配血菠萝酶法、抗球蛋白法、凝聚胺法各凝集1例；假凝集盐水法2例、菠萝酶法1例；实验时间凝聚胺法最短。IgG抗-D检测阳性效价抗球蛋白法为1：128，凝聚胺法为1：256。结论 凝聚胺法具有简便、快速、敏感性强和排除非免疫细胞聚合引起的假阳性等优点，是目前交叉配血和不完全抗体检测的理想方法。     

孕妇526例产前ABO血型抗体效价检测及分析

目的探讨血型抗体效价异常在孕妇中所占比例及临床意义,为预防及诊治新生儿溶血病提供指导。方法526例孕妇,女方血型为O型,男方为A型、B型或AB型,用抗人球蛋白试管凝集法对526例孕妇进行IgG抗A或抗B的ABO血型抗体效价检测。结果526例中异常46例,异常检出率8．75％（46／526）,其中1gG抗A效价检测异常率为8．88％（19／214）,IgG抗B效价检测异常率为9．23％（24／260）,IgG抗AB型异常率为5．77％（3／52）,各组间抗体异常检出率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论孕妇产前ABO血型抗体效价检测异常检出率较高,应重点监测并进行妊娠干预。     

动物免疫血清的制备

目的：探讨制备动物免疫血清的方法和效果，以适应其在实验教学中的需要。方法：制备好的免疫原，按照一定的免疫程序（免疫途径、次数、间隔时间、剂量）接种给所选择的动物。待动物体内产生抗体后，采集动物血液，分离血清对其效价进行测定。结果：经免疫后的抗血清最终分别达到1：2040以上的高效价。结论：此方法制备的抗血清效价高，特异性高，亲和力强，既经济又方便，适用于实验教学，提高了实验的开出率。     

孕妇500例ABO血型抗体效价检测分析

目的：了解血型抗体效价异常在孕妇中所占比率及临床意义。方法：用盐水试管凝集法进行IgG抗A或抗B的ABO血型抗体效价检测。结果：500例孕妇中,血清效价大于1：64者有48例,异常检出率为9．6％。结论：在产前保健孕妇中进行ABO血型抗体效价检测,及早发现异常及时治疗,可减少由于母婴血型不合引起的溶血疾病发生,提高人口素质。     

抗-Mur引起交叉配血不合1例报告

1临床资料 患者男,22岁,患淋巴血管瘤,病程15年,血型为O型,RhD阳性,曾多次输血,无输血反应。2009年3月5日在本院作输血前交叉配血时,发现与一名O型献血者应用盐水法、凝聚胺法、抗人球法均出现主侧管有凝集,次侧管无凝集。为查明原因,将患者血清作抗体筛选及抗体鉴定。     

O型血孕妇血清IgG抗体效价与新生儿溶血病发生关系分析

目的探讨O型血孕妇血清IgG抗体效价与新生儿溶血病发生关系。方法选择我院,IgG抗A或者抗B效价增高孕妇以及其新生儿共314例,均为单胎。对孕妇妊娠16周、28周、36周与丈夫血型相对应的血清IgG抗A或者抗B效价进行检测以及非特异性抗体测定。在新生儿出生7d内对溶血3项目检测。结果本组共发生63例新生儿溶血病,总发生率为20.01%。孕妇IgG效价在1:128～1:256、1:512～1:1024、大于1:1024时,新生儿溶血病发生率分别为13.5%、23.2%、46.8%。结论 O型血孕妇血清IgG抗体是导致新生儿溶血病发生的主要因素,随着血清IgG抗体效价升高,新生儿溶血病发生率也逐渐增高,在孕期要及时检测,及时治疗,有助于降低新生儿溶血病发生。