羧甲基壳聚糖修饰阿霉素纳米脂质体的制备及体外细胞实验

以羧甲基壳聚糖（CMCT）为修饰剂,采用薄膜pH梯度法制备具有pH敏感性的阿霉素纳米脂质体（CMCTDOXNL）,以增加抗癌药物在肿瘤部位的蓄积,同时增强抗癌药物向肿瘤细胞内的传递。结果表明：制备的CMCTDOXNL粒子形貌圆整,粒径分布均匀为 （38±221）nm,药物包封率为8883%;相比传统的阿霉素纳米脂质体（DOXNL）, CMCTDOXNL与Hela细胞的结合和摄取均有所提高,对细胞的杀伤作用更强; CMCTDOXNL的体外药物释放具有明显的pH敏感性,比普通的阿霉素脂质体更能促进阿霉素（DOX）向肿瘤细胞内的传递。     

阿霉素脂质体的制备及对MCF-7／Dox作用的考察

目的:制备阿霉素(Doxorubicin,DOX)脂质体,并考察其对耐阿霉素的人乳腺癌细胞(MCF-7/rDOX)的作用.方法:采用硫酸铵梯度法制备脂质体;采用MTT法考察DOX脂质体对MCF-7/DOX的细胞毒性和逆转多药耐药(Muhydrug resistance,MDR)的效果.结果:阿霉素的平均包封率为90.77%.脂质体的细胞毒性实验结果显示,DOX脂质体的IC50比游离DOX小4倍;DOX脂质体对MCF-7/DOX的逆转倍数是游离DOX的4倍.结论:硫酸铵梯度法适用于制备DOX脂质体,其具有较好的细胞毒性作用及一定的逆转MCF-7/DOXMDR的作用.     

iRGD肽修饰阿霉素脂质体的理化性质和对肿瘤细胞增殖抑制作用的初步研究

目的 制备整合素分子识别配体（RGD）iRGD多肽修饰阿霉素脂质体（iRGD-LP-DOX）,研究iRGD-LP-DOX的理化性质,体外肺癌细胞A549靶向性和肿瘤细胞增殖抑制率。方法 制备iRGD-LP-DOX,透射电镜观察其形态,采用透析袋法检测iRGD-LP-DOX中阿霉素的释放特点;流式细胞术检测A549细胞对iRGD-LP-DOX的摄取效率;构建肺癌A549细胞肿瘤球模型,激光共聚焦定性观察iRGD-LP-DOX 对肿瘤球的穿透能力;MTT实验检测空白脂质体和不同阿霉素剂型的细胞毒性,并计算50%抑制浓度（IC ₅₀ ）。结果 制备的iRGD-LP-DOX粒径均一,呈球形。游离DOX在5 h内全部释放,而LP-DOX和iRGD-LP-DOX 48 h内释放约40%。定量摄取实验表明A549细胞对iRGD-LP-DOX的摄取效率高于LP-DOX,差异有统计学意义（ P<0.01）;肿瘤球穿透实验结果显示iRGD-LP-DOX组的荧光强度显著强于LP-DOX组。MTT实验表明,iRGD-LP-DOX组A549细胞增殖能力受到抑制,差异有统计学意义（ P<0.01）,其IC ₅₀ 值低于LP-DOX组细胞。结论 阿霉素脂质体经过iRGD修饰后,具有缓释能力,增强了DOX高效进入肿瘤细胞并抑制肿瘤细胞生长能力。     

基于点击化学修饰的肿瘤靶向阿霉素脂质体的制备与表征

首先合成了叠氮化的胆固醇和炔基化的奥曲肽,并基于叠氮化的胆固醇制备了叠氮修饰的阿霉素脂质体Dox@N₃-L;随后利用点击反应在其表面修饰了具有肿瘤靶向功能的奥曲肽,得到奥曲肽靶向阿霉素脂质体Dox@Oct-L;最后考察了点击反应的进程、点击修饰对药物包封率的影响以及脂质体的体外靶向性。结果表明,通过点击反应能成功将奥曲肽修饰到载药载体表面,点击修饰对脂质体中荷载的药物没有影响,包封率为99.8%,与点击前无显著差异。细胞毒性实验结果显示,Dox@Oct-L对肿瘤细胞HepG2的杀伤作用强于Dox@N₃-L,表明Dox@Oct-L对HepG2细胞具有一定的靶向性。因此,利用点击化学在荷载药物的载体表面修饰是一种温和有效的方式,可方便地实现载药载体表面的功能化。     

IR-780联合阿霉素对肝癌干细胞样细胞的杀伤效应研究

目的 探讨七甲川花菁类荧光小分子IR-780联合阿霉素对肝癌干细胞样细胞的杀伤作用.方法 利用CCK-8试剂盒检测不同浓度IR-780(0、1.250、2.500、5.000、10.000、20.000.μmol/L)及IR-780联合阿霉素(0、0.025、0.050、0.100、0.200、0.400 μmol/L)对4种不同肝癌细胞(QGY-7703、SMMC-7721、Huh-7和HepG2)的杀伤效应,并确定后续实验IR-780和阿霉素的浓度,采用细胞划痕实验检测IR-780联合阿霉素对肝癌细胞迁移能力的影响;采用无血清悬浮培养的方法从Huh-7细胞株中分离并鉴定出具有干细胞特性的肿瘤细胞,检测IR-780联合阿霉素对肝癌干细胞样细胞的杀伤作用及迁移能力的影响;在裸鼠皮下荷瘤模型中观察IR-780联合阿霉素对肝癌干细胞样细胞生长的抑制作用.结果 低浓度的IR-780对肝癌细胞无明显杀伤作用;采用1.250 μmol/L的IR-780联合阿霉素可对多种肝癌细胞产生较强的杀伤作用,其中半数致死浓度LC50较单药阿霉素降低25％;采用无血清悬浮培养的方法培养出Huh-7细胞肿瘤球,比较其与贴壁细胞的克隆形成能力、致瘤能力和细胞周期分布,证明悬浮培养的肿瘤细胞具有肿瘤干细胞特性;IR-780联合阿霉素对肝癌干细胞样细胞具有较强的杀伤作用,单用阿霉素和IR-780联合阿霉素对肝癌干细胞样细胞的LC50差异有统计学意义[(0.30±0.02)vs (0.22±0.04) μmol/L,P＜0.05];IR-780联合阿霉素可明显抑制肝癌干细胞样细胞的迁移能力和裸鼠皮下肿瘤的生长.结论 IR-780可增强阿霉素的抗肿瘤作用,提高对肝癌干细胞样细胞的杀伤效应.     

新型斑蝥素类似物LB1协同阿霉素杀伤肝癌细胞的实验研究

目的通过水溶性化学小分子蛋白磷酸酶2A抑制剂LB1与阿霉素(doxorubicin,DOX)联合应用,研究其在肝癌化疗过程中的协同作用。方法体外细胞活性分析检测不同剂量LB1对HepG2细胞活性影响及其与阿霉素(DOX)的协同杀伤效应;通过裸鼠体内荷瘤模型以及组织化学分析,进一步观察LB1对肿瘤生长影响以及在体与阿霉素的协同化疗作用。结果 LB1对HepG2细胞生长与作用剂量相关,低剂量时可促进其生长,高剂量时则促进其凋亡,而且在联合阿霉素后,可显著提高对HepG2肿瘤细胞的杀伤作用;体内实验也发现,单纯给予阿霉素抑瘤率为57%,而LB1联合应用后,抑瘤率可达77%,显著提高了阿霉素对肿瘤的杀伤作用(P<0.05),且无明显毒副作用。结论 LB1联合应用可显著提高阿霉素(DOX)对肝癌细胞的化学杀伤作用。     

穿膜肽修饰表阿霉素与五味子乙素脂质体的处方优选及细胞毒性评价

目的构建穿膜肽修饰表阿霉素与五味子乙素脂质体,通过正交试验设计优选出最佳制备工艺,并对构建的脂质体进行细胞毒性评价。方法采用硫酸铵梯度法制备脂质体,采用高效液相色谱仪测定脂质体包封率,利用正交设计优选出脂质体的最佳制备工艺,最后采用SRB染色法进行细胞毒性实验以考察脂质体对肿瘤细胞的杀伤效果。结果脂质体的最优处方为磷脂:胆固醇=5∶1(质量比),磷脂:表阿霉素=25∶1(质量比),水化环境pH=7.3,细胞粉碎功率为500 W。穿膜肽修饰表阿霉素与五味子乙素脂质体对LLT细胞的IC50值为(2.65±1.57)μmol/L,对U87细胞的IC50值为(4.96±3.46)μmol/L。结论优选出的穿膜肽修饰表阿霉素与五味子乙素脂质体的制备工艺条件的重复性良好,操作简便,构建的脂质体具有明显的肿瘤细胞毒性。     

胆酸修饰的联苯双酯脂质体体外肝实质细胞摄取特性

用胆酸修饰联苯双酯脂质体,以期通过受体配体特异性的结合,增加药物在肝实质细胞的蓄积。本研究采用薄膜超声法制备联苯双酯脂质体(LP-DDB)和胆酸修饰联苯双酯脂质体(BP₂B-LP-DDB),采用葡聚糖凝胶法测定包封率,比较LP-DDB和BP₂B-LP-DDB的理化性质差异;分离培养肝实质细胞,研究孵化温度、给药剂量等对肝实质细胞体外摄取上述两种脂质体的影响。BP₂B的修饰对脂质体的包封率、粒径、多分散指数和Zeta电位均无显著性影响。LP-DDB和BP₂B-LP-DDB中药物平均包封率分别为(90.66±1.22)%和(86.89±1.61)%,平均粒径分别为(309.52±16.74)和(273.77±14.14)nm,Zeta电位分别为(24.98±2.03)和(22.21±7.03)mV。与LP-DDB相比,BP₂B-LP-DDB与肝实质细胞的结合及摄取均显著增加,具有明显的主动转运特征。胆酸修饰的脂质体可作为肝实质细胞靶向的载体,可以通过受体介导的方式促进药物向肝实质细胞内的传递。     

近红外二区成像载药脂质体的制备、体外成像及抗肿瘤活性

通过纳米技术实现诊断与治疗的结合,有利于推动肿瘤治疗的发展。近红外二区(NIR-II)成像技术由于其成像上的优势在近年来发展迅速。本研究制备了一种新型纳米载药系统——DOX-IR1061阳离子脂质体,载入NIR-II荧光探针IR1061与阿霉素(DOX)分别作为成像剂和治疗剂,并且通过十八胺增强其细胞摄取及肿瘤细胞抑制能力。通过对脂质体的NIR-II性能测试表明,DOX-IR1061阳离子脂质体具有NIR-II成像能力;对脂质体细胞摄取行为的分析和肿瘤细胞抑制实验证明,十八胺能够促进脂质体被细胞摄取,与DOX协同增强抗肿瘤效果。研究结果表明,DOX-IR1061阳离子脂质体具有同时实现肿瘤成像与治疗的潜力,具有进一步研究的价值。     

cRGD靶向阿霉素脂质体制备及其对Hela细胞的影响

目的 :制备含有二硫键的环形RGD肽(cyclic RGD peptide,c RGD)修饰长循环阿霉素主动靶向脂质体,对其理化性质、靶向性和对Hela细胞的影响进行评价。方法:用DSPE-PEG-NHS耦联c RGD,插入采用p H法制备的磁性长循环阿霉素脂质体中制备主动靶向脂质体;利用透射电镜、紫外分光光度计和质谱仪进行表征;流式细胞术和免疫荧光验证其靶向性;MTT和流式细胞术验证其对Hela细胞的影响。结果:制备的主动靶向脂质体粒径在100~180 nm之间,包封率达到72%,免疫荧光及流式细胞术均显示其对Hela细胞具有一定靶向性,且能显著诱导Hela细胞凋亡。结论:本研究制备的c RGD靶向阿霉素脂质体具有一定靶向性,能显著提高其杀伤肿瘤细胞的作用。这种具有靶向及穿透功能的脂质体载体可能为肿瘤治疗提供一个新方法。