082 白果槲寄生中的亲脂性成分诱导细胞调亡的作用

大多数关于白果槲寄生Viscum album L.药理作用的研究是基于其水溶性成分的，作者在对该植物亲脂性成分槲寄生素进行分离和测定其抗增殖活性中，又提取出了3个亲脂性成分桦木酸、齐墩果酸和熊果酸。     

白果槲寄生叶水醇提取物的血管舒张作用

作者采用兰根道尔夫离体和灌注心脏模型，研究了白果槲寄生Viscum album L．叶水醇提取物的血管舒张作用及用Kelm等的方法研究了该提取物的作用机理。     

细胞凋亡与泰素帝的诱导凋亡作用

泰素帝是1986年由法国罗纳普朗克·乐安公司首先生产的一种半合成抗癌新药,其结构类似紫杉醇[1] 。紫杉醇目前国内的主要来源是以红豆杉树皮和叶中提取。含量最好的东北红豆杉,树皮和树叶中也仅含0 .0 4 2 %和0 .0 0 39% [2 ] 。泰素帝由于采用了半合成工艺来源较紫杉醇易获得,这必将在用药普及性和诱导细胞调整抗肿瘤药方面开拓更大的前景。1　细胞凋亡的生物学特性1.1　形态学变化　细胞凋亡的形态学变化是多阶段的,先是细胞体积缩小,胞浆凝缩,内质网变疏松并与胞膜融合,核糖体、线粒体等聚集,但结构无明显改变,染色质逐渐凝聚成新月状附…     

白果槲寄生亚种的分子遗传学鉴定

白果槲寄生Viscum album L．的代谢物，特别是粘毒素的性质、含量及提取物的生物活性与不同亚种有关，提示它们具有遗传特异性和宿主特异性，因而很难根据其形态学和解剖学特征来鉴别。为确定这种特异性是否严谨及在亚种间的杂交是否很少发生，作者以叶绿体trnH(GUG)-trnK(UUU)和核     

中药活性成分诱导胃癌细胞凋亡的研究进展

胃癌是我国发病率极高的恶性肿瘤,临床可采用手术治疗、化疗、免疫治疗、中医中药治疗等方法。中药活性成分为天然提取而来,因其副作用小、多靶点控制肿瘤、提高患者生存质量等优点,逐步引起国内外学者的关注。中药活性成分诱导胃癌细胞凋亡主要通过调控相关基因表达、阻滞细胞周期、调控相关通路来实现的。本文总结了近年来中药活性成分在诱导胃癌细胞凋亡方面的研究,以期为中药提取物临床应用于胃癌治疗提供帮助。     

糖及血清糖蛋白对白果槲寄生凝集素细胞毒性的调节作用

白果槲寄生 Viscum album L.凝集素(ML)是用于癌症辅助治疗的该植物制剂中的主要成分。3种 ML,即 ML Ⅰ、MLⅡ和MLⅢ是由 A、B 2条含二硫键的链组成的糖蛋白,它们对人白血病 Molt 4细胞系有很强     

细胞色素C在氟尿嘧啶诱导肝癌细胞凋亡中的作用

研究发现化疗药物主要是通过损伤肿瘤细胞启动其内在的死亡程序即凋亡，并非导致死亡。凋亡是细胞发生不可修复损伤后按指令自我执行的一种主动的、程序性死亡方式，受细胞内外信号转导调控。迄今发现细胞凋亡主要经过两条死亡通路，一条是外源性通路，即由死亡受体及配体系统激发的凋亡信号下传至启动性caspa3e-8，然后激活效应性caspase蛋白酶而引发细胞凋亡；另一通路称为内源性通路，细胞损伤后线粒体功能障碍，膜通透性改变，凋亡蛋白包括细胞色素C（cymomeC，eytoC），Apaf—1及Smac／DIABLO等从线粒体释放到胞浆，caspase-9与之形成凋亡体（apposome）并被激活，随之引起caspase瀑布式活化和细胞死亡。     

活性氧诱导细胞凋亡作用机理的研究进展

细胞凋亡是细胞在形态学和分子生物学上的积极死亡。正常的细胞凋亡在维持生物机体细胞增殖与死亡的平衡过程中起重要作用。但异常的细胞凋亡是某些重要疾病发病的重要原因[1] :肿瘤的发生与细胞凋亡有关 ;在人类免疫缺陷病毒感染者发生艾滋病的过程中ＣＤ4 Ｔ细胞的凋亡起重要作用 ;细胞凋亡的异常增加是神经系统退化性疾病 (老年性痴呆 ,帕杰森疾病 )的重要发病机制 ;肿瘤细胞的凋亡则与肿瘤治疗密切相关。因此探讨细胞凋亡的发生机理有重要意义。近年来的大量研究证实 ,在特定条件下 ,低水平的氧自由基能诱导细胞凋亡 ,而活性氧如Ｏ2 - …     

苦参碱诱导宫颈癌Hela细胞的凋亡作用

目的:研究不同浓度的苦参碱(Mat)对宫颈癌Hela细胞株的体外增殖抑制作用。方法:采用体外细胞培养技术,以不同浓度的Mat作用于宫颈癌Hela细胞,相同条件下培养24h、48h、72h后,倒置显微镜观察细胞形态变化;MTT法测定Mat对Hela细胞的增殖抑制率;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率。结果:不同浓度Mat在体外均能不同程度抑制宫颈癌Hela细胞增殖,并且作用呈现时间-剂量依赖性;苦参碱诱导Hela细胞凋亡率增加。结论:Mat有抑制宫颈癌Hela细胞的增殖,诱导其凋亡作用。     

miR-200c在CIK细胞诱导胃癌细胞凋亡中的作用

目的 观察细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对胃癌细胞凋亡的影响,探讨微RNA-200c(miR-200c)在此过程中的作用.方法 实时荧光定量RT-PCR检测胃癌细胞(MKN-45、BGC-803)miR-200c表达,流式细胞术检测胃癌细胞凋亡.构建包含miR-200c作用位点的psiCHECK2-FAP-1 3’-UTR,转染胃癌细胞,双荧光素酶报告基因试剂盒检测胃癌细胞Fas相关磷酸酯酶-1(FAP-1)荧光素酶活性.结果 CIK细胞促进MKN-45细胞miR-200c表达[(2.10±0.25)倍,P＜0.05]及凋亡(P＜0.01),而miR-200c inhibitor能够拮抗此过程(P＜0.05).另外,miR-200c mimics诱导胃癌细胞凋亡(P＜0.05),BGC-803细胞也发现相似趋势.miR-200c直接作用于FAP-1基因3’-UTR区,且CIK细胞降低胃癌细胞荧光素酶活性[MKN-45细胞:(49.67±2.36)％,P＜0.01;BGC-803细胞:(43.86±4.41)％,P＜0.01].结论 CIK细胞通过上调miR-200c促进胃癌细胞凋亡,为CIK细胞治疗胃癌提供新的数据.     

Mcl-1在阿霉素诱导骨肉瘤细胞凋亡中的作用

目的研究阿霉素诱导骨肉瘤细胞凋亡过程中Mcl-1含量的变化以及Mcl-1对骨肉瘤细胞凋亡的调控作用。方法采用半定量PCR法检测Mcl-1、Bcl-2、β-actin的mRNA水平变化;Western blot法检测Mcl-1、Bcl-2、β-actin蛋白变化;转染pcDNA3-Mcl-1质粒使细胞高表达Mcl-1、Bcl-2;采用Caspase3/7活性试剂盒检测Caspase3/7活性。结果骨肉瘤细胞在阿霉素作用下,Mcl-1和Bcl-2的mRNA水平无变化,而蛋白水平下调;过表达Mcl-1可以明显抑制凋亡标志物PARP的剪切,而Bcl-2不具有抑制效应;同样,过表达Mcl-1可以抑制阿霉素作用下Caspase3/7的活化。结论阿霉素作用下,Mcl-1蛋白水平下降是骨肉瘤细胞发生凋亡的重要原因,并且该凋亡过程与Caspase的活化有关。     

白果槲寄生提取物中的槲寄生凝集素-甲壳质结合物的分离和定量及其方法确认

最近从白果槲寄生Viscum album L.中发现了一类与甲壳质结合的新的槲寄生凝集素(cbML)。该cbML共有3个异构体,其中主要异构体cbML3由两条相同的各含49个氨基酸残基的肽链组成,富含半胱氨酸和甘氨酸的2条链间通过二硫键链接。cbML2比     

维甲酸促进三氧化二砷诱导的细胞凋亡作用

目的:观察三氧化二砷(As2O3)对非急性早幼粒细胞性白血病(acute prom y elocytic leukemia, APL)急性髓性白血病细胞的体外作用以及维甲酸(retinoic acid, R A )与As2O3之间的相互作用.方法:用维甲酸敏感(HL-60S)及维甲酸耐药(HL-60R)急性髓性白血病细胞株HL-60作为体系, 应用细胞计数及台盼蓝试验观察细胞活力及生长.采用细胞形态、DNA 片段梯度、末端核苷酸酶标记及流式细胞法观测细胞凋亡.结果: As2O3(0.5～4 μmol·L-1)抑制 HL -60R细胞生长,抑制能力与As2O3浓度及作用时间呈正相关;RA不仅促进HL-60S而且促进HL-60R 对As2O3的敏感性.结论:As2O3对细胞的抑制作用不局限于PML/RARα阳性细胞;As2O3可能对非APL急性髓性白血病有治疗作用 ,RA 与As2O3合用可能发挥更佳效果.     

细胞自噬在三氧化二砷诱导肝癌细胞凋亡中的作用研究

【摘要】 目的 研究细胞自噬在三氧化二砷（ATO）诱导的肝癌细胞死亡中的作用,观察调控细胞自噬对ATO诱导的细胞凋亡有何影响。方法 以人肝癌HepG2细胞为研究对象,在ATO作用于HepG2细胞的基础上,加入自噬激动剂〔雷帕霉素（Rap）〕和自噬抑制剂〔三甲基腺嘌呤（3-MA）〕进行调控。以MTT法检测细胞生存率,透射电镜观察自噬体结构,免疫印迹法分析自噬相关蛋白LC-3和Beclin1的表达;流式细胞术检测细胞凋亡。结果 5~20 μmol/L ATO与10 mmol/L 3-MA联用时HepG2细胞存活率比同剂量ATO单独作用时降低（P <0.05）,凋亡率增加（P <0.05）,细胞内呈现典型凋亡反应特征,自噬蛋白LC3和Beclin1表达低于ATO单独作用组（P <0.05）。相反,5~20 μmol/L ATO与0.25 μmol/L Rap联用时,HepG2细胞的存活率比ATO单独作用时显著增加（P <0.05）,凋亡率降低（P <0.05）,细胞内出现大量自噬体结构,自噬蛋白LC3和Beclin1的表达较ATO单独作用组有增加趋势,但差异无统计学意义（P >0.05）。结论 特异性自噬抑制剂能显著增强ATO杀伤肝癌细胞的敏感性,其机制与增强肝癌细胞凋亡有关。     

Caspase3在哇巴因诱导Jurkat细胞凋亡中的作用

目的 探讨哇巴因诱导Jurkat细胞凋亡的机制。方法 四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察哇巴因对Jurkat细胞生长的抑制作用；应用DNA片段分析、流式细胞术观察细胞凋亡；半定量逆转录PCR(RT-PCR)检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase3)基因表达水平；应用westernblot测定caspase3的活性亚单位；比色法检测caspase3活性。结果 哇巴因能诱导Jurkat细胞凋亡，在细胞凋亡过程中，caspase3活性明显升高。结论 caspase3活化参与了哇巴因诱导Jurkat细胞的凋亡过程。     

前凋亡因子Bim在地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡中的作用

目的 研究前凋亡因子Bim在地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡中的作用. 方法体外培养BALB/c小鼠胸腺细胞,终浓度1 μmol/L地塞米松诱导细胞,透射电镜、AnnexinV/PI双染流式细胞术、DNA凝胶电泳检测细胞凋亡;RT-PCR半定量法分析1 μmol/L地塞米松作用不同时间以及不同浓度地塞米松作用1 h小鼠胸腺细胞Bim mRNA表达. 结果①1 μmol/L地塞米松作用4 h小鼠胸腺细胞出现特征性DNA梯状条带和细胞凋亡典型形态特征,流式细胞术检测显示在不同时间点(2 h,4 h,8 h)实验组细胞凋亡率较对照高;②1 μmol/L地塞米松作用1/2 h后小鼠胸腺细胞Bim mRNA三个异构体表达即明显升高,以BimL最为明显,其中BimL、BimEL mRNA表达在1 h达高峰,较对照组高峰前移11 h,且各时间点(0 h、24 h除外)表达水平与同时点对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05);BimS mRNA表达高峰较对照组提前4 h,但各时间点表达水平与同时点对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05);③不同浓度(0,10-2,10-1,1,10 μmol/L)地塞米松作用胸腺细胞1 h时,其活细胞率和凋亡细胞百分率在不同浓度组间的差异无统计学意义,而Bim mRNA表达随地塞米松终浓度增加而升高,也以BimL mRNA表达增高最明显. 结论 Bim参与了地塞米松诱导的小鼠胸腺细胞凋亡过程,Bim三个异构体中以BimL作用为主;Bim mRNA表达发生在细胞凋亡早期,其表达水平随作用时间变化,并在一定地塞米松浓度范围内呈剂量依赖性.     

一氧化氮在鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡中的作用

目的研究一氧化氮在鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡中的作用.方法采用MTT法测定细胞增殖活力及鱼藤酮对PC12细胞的急性损伤效应,Greiss法测定NO2-含量,琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡.结果MTT实验表明PC12细胞传代后7 d达到增殖高峰,低剂量L-NAME对PC12细胞有保护作用,在四个不同剂量L-NAME的比较试验中,100μmol/L的L-NAME对PC12细胞的保护作用最强.鱼藤酮亦可诱导PC12细胞DNA梯带的形成.另外,一氧化氮合酶抑制剂L-NAME可以抑制鱼藤酮诱导的caspase-3蛋白酶的活力,L-NAME亦可抑制鱼藤酮诱导的NO的产生.结论一氧化氮和caspase-3共同参与了鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡.     

槲寄生碱联合顺铂对人肺腺癌A549细胞的生长抑制及诱导凋亡作用

目的 探讨槲寄生碱、顺铂及两者联用对人肺腺癌细胞A549增殖、凋亡和细胞周期的影响.方法 MTT法观察槲寄生碱、顺铂及两者联用对人肺腺癌A549细胞增殖的影响;DAPI染色观察槲寄生碱、顺铂及两者联合作用时A549细胞凋亡形态,流式细胞术检测槲寄生碱、顺铂和两者联合应用对人肺腺癌A549凋亡和细胞周期的影响.结果 ①槲寄生碱、顺铂均能抑制人肺腺癌细胞A549的生长,并表现为浓度和时间的依赖性:槲寄生碱0.0625、0.125mg/mL分别与顺铂1、2mg/L联合24、48、72 h的抑制率显著高于单用顺铂、槲寄生碱组(均为P<0.01),两者呈现出相加的抗瘤效果.②DAPI染色后槲寄生碱纽、顺铂纽和联合用药组A549肺癌细胞均表现出典型的细胞凋亡特征.③槲寄生碱和顺铂均可在一定程度上诱导细胞凋亡,两种药物联用后,诱导细胞凋亡作用显著增强(P<0.01).④槲寄生碱将细胞周期阻滞在G0/G1期,顺铂将细胞周期阻滞在S期.结论 槲寄生碱、顺铂均可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖、诱导细胞的凋亡,槲寄生碱可明显提高顺铂对A549细胞的杀伤效果.两者具有明显的相加作用.     

三氧化二砷诱导肝癌细胞HepG2凋亡作用

目的 探讨三氧化二胂（As2O3)诱导肝癌细胞HepG2凋亡作用。方法 应用普通光学显微镜、荧光显微镜和流式细胞仪观察As2O3对HepG2细胞株的形态学改变和诱导凋亡率。结果 As2O3作用于细胞后,可看到较典型的细胞凋亡形态学改变,细胞体积缩小、染色质固缩成斑块状、呈半月型紧贴于核膜周边、核碎裂、凋亡小体形成等。AO／EB荧光染色法显示,细胞凋亡率为3．1％－9．1％。As2O3诱导HepG2细胞凋亡作用呈时间依赖性,最佳浓度为2μmol／L。流式细胞仪DNA直方图上呈现典型的亚二倍体凋亡峰。As2O3主要作用于细胞周期的G2／M期。结论 As2O3具有诱导HepG2细胞凋亡作用,具有治疗肝癌的潜在价值。