COX-2抑制剂塞来昔布对人舌鳞癌Tca8113细胞迁移的抑制作用

目的 研究环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布(Celecoxib)抑制人舌鳞癌Tca8113细胞迁移的作用.方法 采用细胞划痕实验、细胞.基质黏附实验和Boyden趋化小室测定Tca8113细胞的迁移能力.观察塞来昔布对Tca8113细胞迁移作用的影响.结果 10 μmol/L和20 μmol/L塞来昔布处理细胞24 h后.细胞迁移数与对照组相比减少有统计学意义(P<0.05),Tca8113细胞的迁移能力显著减弱.不同浓度塞来昔布处理Tca8113细胞24 h后,其与包被Fn基质胶表面上的黏附情况呈剂量依赖天系,随塞来昔布浓度的增加,Tca8113细胞在基质表面的黏附显著降低.结论 COX-2抑制剂塞来昔布具有抑制Tca8113细胞迁移的能力,其机制有待进一步研究.

Abstract：

Objective To investigate the role of COX-2 inhibitor celecoxib in inhibiting the migration of human tongue squamous cell carcinoma Tca8113 cells. Methods The effects of celecoxib on Tca8113 cell migration were tested using scrape motility assay, cell-matrix adhesion assay and Boyden chamber motility assay. Results Following a 24-hour incubation with 10 and 20 μmol/L celecoxib, the migration of Tca8113 cells was significantly decreased (P<0.05). Celecoxib treatment for 24 h also resulted in significantly decreased adhesion of Tca8113 cells on Fn-coated surface in a dose-dependent manner. Conclusion COX-2 inhibitor celecoxib can inhibit Tca8113 cell migration, the mechanism of which awaits further investigation.     

塞来昔布对Lewis肺癌的抑制作用

目的:观察选择性COX-2抑制剂塞来昔布对Lewis肺癌细胞增殖和Lewis肺癌移植瘤生长的抑制作用,探讨其作用机制.方法:应用不同浓度塞来昔布与Lewis肺癌细胞共培养,以MTT比色法检测细胞增殖,ELISA法检测细胞上清液VEGF浓度,流式细胞术检测细胞凋亡情况.20只C57BL/6小鼠进行Lewis肺癌移植瘤实验,随机分为加药组(每天给以含塞来昔布1 mg/g的食物)和对照组(普通食物),电镜观察药物作用24 h后Lewis肺癌移植瘤细胞的超微结构改变;免疫组化检测移植瘤VEGF和COX-2的表达.结果:塞来昔布对Lewis肺癌细胞增殖有抑制作用,效应呈剂量(120、50、12.5、3.1、0 μmol/L)和时间(24、48、72 h)依赖性.50 μmol/L塞来昔布组细胞凋亡率为(14.93±0.79)%,明显高于对照组的(4.73±0.83)%(P<0.001).药物组移植瘤质量为(1.37±1.04) g,明显低于对照组的(3.49±1.75) g (P<0.01),抑瘤率为60.1%.电镜观察Lewis肺癌组织,药物组出现较多有凋亡特征的细胞.免疫组化结果显示塞来昔布对肿瘤组织的VEGF表达有明显抑制作用.结论:塞来昔布可在体内及体外抑制Lewis肺癌细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤血管生成是其可能的作用机制.     

塞来昔布对实验性结肠癌原位移植瘤生长及环氧化酶-2表达的影响

目的探讨塞来昔布对实验性结肠癌原位移植瘤生长及环氧化酶-2（COX-2）表达的影响。方法使用对数生长期的人结肠癌细胞（HT-29）于裸鼠皮下接种4周形成皮下移植瘤，再将皮下移植瘤组织原位接种于24只裸鼠盲肠浆膜下，制成原位移植瘤模型。术后随机分为对照组（C组）及塞来昔布高、中、低剂量组（H、M、L组）四组，分别给予纯水及含有不同浓度（1．5、1．0和0．5mg／ml）塞来昔布的饮水。饲养42d后处死裸鼠，观察各组原位移植瘤的瘤体积和瘤重，计算抑瘤率。RIA测定瘤组织匀浆上清中前列腺素E2（PGE2）含量，免疫组化检测肿瘤组织COX-2表达。结果24只裸鼠实验期间无1只死亡，成瘤率为100％，比较各组原位移植瘤体积和瘤重差异有统计学意义（P值均〈0．05）。L组、M组和H组的抑瘤率分别为25.30％、38．80％、76．92％，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05），且存在明显的剂量依赖。干预组瘤组织中COX-2的表达和匀浆上清中PGE2含量与对照组比较差异有统计学意义（P分别〈0．05和〈0．01），随着剂量增加，瘤组织中COX-2的表达和PGE：含量逐渐降低。瘤组织中PGE：含量与瘤重以及COX-2表达存在显著正相关性（分别为r=0．881，P〈0．01和r=0．825，P〈0．05）。结论塞来昔布通过抑制人结肠癌裸鼠原位移植瘤的COX-2，抑制PGE2合成，从而对结肠癌的生长有抑制作用。     

塞来昔布预防大鼠乳腺癌发生及其机制

目的观察环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布对化学致癌剂7,12-二甲基苯蒽(DMBA)化学诱发的大鼠乳腺癌形成的影响。方法DMBA油剂灌胃复制大鼠乳腺癌模型,90只大鼠分为3组:单纯诱癌组作为阴性对照、三苯氧胺组作为阳性对照和塞来昔布组,观察塞来昔布对大鼠乳腺肿瘤发生率和COX-2、VEGF蛋白表达的影响。结果三苯氧胺组(48.15%)和塞来西布组(50.00%)肿瘤发生率明显低于单纯诱癌组(85.71%),差异具有显著性(P=0.003;P=0.004)。塞来昔布组COX-2蛋白表达率(28.57%)低于单纯诱癌组(83.33%)和三苯氧胺组(69.23%),差异具有显著性(P=0.001;P=0.035)。塞来昔布组VEGF蛋白表达率(42.86%)低于单纯诱癌组(79.17%)(P=0.023);和三苯氧胺组(46.15%)无显著性差异(P=0.863)。结论塞来昔布能抑制DMBA诱发的大鼠乳腺癌的发生、发展,下调COX-2和VEGF蛋白表达可能是其机制之一。     

塞来昔布诱导人骨肉瘤细胞株SAOS-2凋亡的实验研究

目的研究塞来昔布(celecoxib)对人骨肉瘤细胞株SAOS2生长和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法采用四唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖,以确定塞来昔布对SAOS2的有效剂量;应用高效液相色谱(HPLC)检测前列腺素E2(PGE2)含量;光镜形态学观察;流式细胞仪测定细胞周期。结果塞来昔布抑制SAOS2的增殖,效应呈剂量依赖性;塞来昔布能够诱导SAOS2细胞凋亡,当浓度为100μmol/L时,凋亡率增加了44.3%,但是塞来昔布的这种抑制SAOS2生长和诱导凋亡作用不能被PGE2所拮抗。结论塞来昔布对于人类骨肉瘤可能是一种有效的化学治疗和化学预防药物,塞来昔布并非通过前列腺素E2(PGE2)途径抑制SAOS2生长和诱导凋亡。     

塞来昔布对喉癌Hep-2细胞COX-2和Caspase-3表达的影响

目的:探讨塞来昔布对喉癌细胞株Hep-2生长抑制及对环氧化酶-2(COX-2)和Caspase-3变化的影响。方法:将不同浓度塞来昔布作用于体外培养的人喉癌细胞株Hep-2,MTT法计算细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞周期变化,Western blot检测COX-2表达,分光光度法检测Caspase-3活性。结果:塞来昔布呈剂量依赖性显著抑制Hep-2细胞生长,阻滞细胞G0/G1期转化,且可明显降低COX-2蛋白水平,增加Caspase-3活性。结论:塞来昔布能抑制喉癌细胞的生长,其机制可能与下调COX-2表达、增强Caspase-3活性有关。     

塞来昔布对肺癌细胞的增殖抑制、环氧化酶-2表达的影响和化疗敏感性

目的：探讨环氧化酶（COX）-2抑制剂塞来昔布（celecoxib）对肺癌A549细胞的增殖抑制、COX-2表达和化疗敏感性的影响。方法：用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTY法）检测塞来昔布单药及联合顺铂（DDP）对COX-2高表达的人肺腺癌细胞A549的增殖抑制，流式细胞术分析塞来昔布联合DDP对细胞周期及细胞凋亡的影响,Westernblot法分析不同浓度塞来昔布干预后对A549细胞内COX-2蛋白表达的影响。结果：MTT法检测显示，塞来昔布（0-100μmol／L）对肺腺癌A549细胞的抑制作用呈时间依赖性、剂量依赖性效应。联合用药组与单药组相比差异有显著性（P〈0．001）。流式细胞术分析显示，塞来昔布12．5μmol／L与25μmol／L联合DDP0．5ms／L时，A549细胞明显阻滞于c,o-Gl期，S期细胞比例减少，联合用药组的凋亡率明显高于单药组（P〈0．001）。Westem blot法分析显示，塞来昔布浓度超过50μmol／L时，COX-2蛋白的表达受到了抑制。结论：塞来昔布的抗肿瘤作用机制涉及到COX．2依赖性途径。塞来昔布能增加DDP的化疗敏感性，塞来昔布与DDP联用对人肺腺癌A549细胞有明显协同抗肿瘤效应，该作用可能是通过增强对A549细胞的增殖抑制、诱导凋亡来实现的。     

COX-2抑制剂塞来昔布对大鼠脊髓损伤的保护作用

目的 观察选择性环氧化酶一2抑制剂塞来昔布（celecoxib）对大鼠脊髓损伤的保护作用。方法 48只SD大鼠，随机分为单纯损伤组及治疗组。采用改良Allen’s打击法制作脊髓损伤动物模型，分别在伤后12、24、72h测定脊髓标本的丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）含量。用苏木精-伊红染色观察损伤脊髓组织病理变化，原位末端标记法（TUNEL）标记凋亡细胞。同时采用Tarlov评分和斜板实验观察脊髓神经功能恢复情况，比较各组之间的差异。结果 治疗组较单纯损伤组神经功能明显改善（P〈0．05）。治疗组各时间点MDA含量较单纯损伤组明显降低（P〈0．05），SOD含量明显升高（P〈0．05），病理形态改变较轻且凋亡细胞少（P〈0．05）。结论 COX-2抑制剂塞来昔布可减少神经细胞凋亡，对继发性脊髓损伤起到保护作用。     

塞来昔布对人舌鳞癌Tca8113细胞survivin表达与诱导细胞凋亡的作用

目的　观察环氧化酶-2抑制剂塞来昔布对人舌鳞癌Tca8113细胞COX-2、survivin表达的影响及诱导细胞凋亡的作用,探索抑制COX-2活性后对Tca8113细胞生物学行为影响的机制。方法　塞来昔布作用Tca8113细胞后,采用流式细胞术检测细胞周期分布及凋亡率,半定量RT-PCR法、Western Blot法检测COX-2、Survivin mRNA及其蛋白表达变化。结果　塞来昔布以剂量依赖方式抑制细胞周期进程的同时,其诱导细胞凋亡的作用也明显增强,同时,塞来昔布下调节Survivin mRNA及其蛋白表达,同时抑制COX-2蛋白的表达,但对COX-2 mRNA表达的抑制作用较弱。结论　COX-2抑制剂塞来昔布下调节survivin表达的作用可能与抑制肿瘤细胞生长、诱导细胞凋亡的有关,其机制有待进一步研究。     

选择性COX-2抑制剂塞来昔布的研究及应用进展

塞来昔布（celecoxib）是一种高选择性COX-2抑制剂,在用于镇痛、抗炎方面的疗效与传统的NSA IDs相当,且能降低用药者的胃肠道风险。并通过抑制肿瘤细胞增殖、抑制血管增生及促进肿瘤细胞凋亡而用于消化道肿瘤、乳腺癌、肺癌和肝癌的治疗。同时能减缓动脉粥样硬化病变,在心血管疾病的治疗方面也具有一定价值。但长期较大剂量应用celecoxib,用药者心血管事件的相对风险增大。     

COX-2和VEGF-C在舌癌组织中的表达及与颈淋巴结转移的关系

目的 通过观察环氧化酶-2(COX-2)及血管内皮生长因子-C(VEGF-C)在舌癌组织中的表达,研究两者及与新生微血管和淋巴结转移之间的相互关系.方法 采用S-P免疫组化的方法观察了46例舌鳞状细胞癌组织及颈部转移淋巴结中COX-2、VEGF-C的表达,并且测定肿瘤组织中微血管密度(MVD)并以正常口腔粘膜作为对照,通过检测内皮细胞CD34蛋白的表达.测定肿瘤组织微血管密度.结果 舌癌组织中,COX-2及VEGF-C强阳性表达率分别为82.61%及73.91%.而在正常口腔粘膜的阳性表达分别为0及2例(25%).两者之间存在显著差异(COX-2:P＜0.01,VEGF-C:P＜0.05).COX.2和VEGF-C表达一致符合率为82.61%(38/46),两者之间有相关性(P＜0.01),两者一致性kappa系数(K)=0.495(P＜0.01).COX-2及VEGF-C强阳性组中MVD值明显高于其弱阳性组MVD值(P＜0.001);COX-2的表达强弱与淋巴结的转移无明显相关(P＞0.05),而VEGF-C的表达强弱则与淋巴结转移有明显相关性(P＜0.05).结论 COX-2与VEGF-C的强阳性表达与舌鳞状细胞癌的生物学行为密切相关.COX-2和/或VEGF-C可以作为临床判断肿瘤的侵袭性、转移潜能及估计预后的重要参考指标,但其在肿瘤发生中的作用机制有待于进一步探讨.     

塞来昔布对人舌鳞癌Tca-8113细胞表达乙酰肝素酶的影响

目的探讨塞来昔布(celecoxib)对人舌鳞癌Tca-8113细胞表达乙酰肝素酶(heparanase,Hpa)的影响。方法用0(对照),10,20,40,80μmol/L五个浓度的塞来昔布干扰Tca-8113细胞24 h后,应用免疫细胞化学方法观察细胞胞质中Hpa的合成情况。结果与对照组相比,实验组中Hpa的表达都明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),用20-80μmol/L塞来昔布干预时Hpa降低水平显著。结论塞来昔布有抑制人舌鳞癌Tca-8113细胞表达Hpa的作用。     

尼美舒利对舌鳞癌Tca8113细胞Survivin及VEGF表达的影响

目的 探讨选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂尼美舒利(nimesulide,NIM)对人舌鳞癌Tca8113细胞生存素(Sur-vivin)及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 体外培养人舌鳞癌Tca8113细胞,对照组加入0.4%二甲基亚砜(DMSO),试验组加入不同浓度的NIM(25,50,100,200 μmol/L)进行干预,作用24,48,72 h后,采用免疫细胞化学法检测舌鳞癌细胞内Survivin及VEGF蛋白表达变化.结果 不同浓度的NIM(浓度分别为25,50,100,200 μmol/L)处理Tca8113细胞24 h,48 h,72 h后,细胞内Survivin及VEGF蛋白表达均下降.在同浓度下,随着NIM干预时间的延长,Survivin及VEGF的表达较对照组下降更为明显(P＜0.05);在同一时间点,随着NIM浓度的增加,Survivin及VEGF表达较对照组亦均明显下降(P＜0.05).经方差分析,二者均呈浓度和时间依赖性.VEGF与Survivin高度相关,相关系数r=0.93(P＜0.01).结论 NIM对Tca8113细胞Survivin和VEGF表达的抑制可能是其具有抗肿瘤作用的机制之一.     

诱导型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在舌癌细胞株中的表达

 【目的】探讨诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和血管内皮生长因子（VEGF）在舌鳞癌细胞株Tca8113中的表达,为进一步研究iNOS和VEGF在舌鳞癌肿瘤血管生成中的作用提供实验基础。【方法】采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法和SP免疫组化方法,对舌鳞癌细胞株Tca8113中iNOS和VEGF mRNA和蛋白表达情况进行检测。【结果】RT-PCR检测到舌鳞癌Tca8113细胞株中iNOS／VEGF mRNA条带明显,SP免疫组化检测到iNOS／VEGF蛋白在舌癌细胞胞浆中呈强阳性表达。【结论】iNOS／VEGF mRNA和蛋白在舌鳞癌Tca8113细胞株中呈高水平表达。     

诱导型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在舌癌细胞株中的表达

【目的】探讨诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和血管内皮生长因子（VEGF）在舌鳞癌细胞株Tca8113中的表达,为进一步研究iNOS和VEGF在舌鳞癌肿瘤血管生成中的作用提供实验基础。【方法】采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法和SP免疫组化方法,对舌鳞癌细胞株Tca8113中iNOS和VEGF mRNA和蛋白表达情况进行检测。【结果】RT-PCR检测到舌鳞癌Tca8113细胞株中iNOS／VEGF mRNA条带明显,SP免疫组化检测到iNOS／VEGF蛋白在舌癌细胞胞浆中呈强阳性表达。【结论】iNOS／VEGF mRNA和蛋白在舌鳞癌Tca8113细胞株中呈高水平表达。     

人舌鳞癌Tca8113细胞株中c-erbB-2、bcl-2表达

目的探讨口腔癌肿瘤细胞中c-erbB-2、bcl-2基因的表达水平及其在肿瘤形成、发展过程中的作用.方法采用荧光定量RT-PCR实验技术检测人舌鳞癌Tca8113细胞株中c-erbB-2、bcl-2基因mRNA表达水平.结果分光光度计检测纯度A260/A280均在1.8～2.0,通过基因表达扩增曲线图与看家基因GAPDH校正,得出目的基因的相对含量高.结论 bcl-2与c-erbB-2基因的表达水平在人舌鳞癌Tca8113细胞株中显著升高,可能在肿瘤形成、发展过程中起到一定的作用.     

前列腺素E1促进大鼠急性心肌梗死模型血管内皮生长因子表达及量效关系研究

目的 探讨前列腺素E1（PGE1）对急性心肌梗死（AMI）大鼠心肌血管生成及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响，以及PGE1剂量与心肌细胞分泌VEGF蛋白之间的初步量效关系。方法SD大鼠经10％戊巴比妥钠麻醉后，开胸结扎冠脉左前降支，建立大鼠AMI模型。PGE1治疗各亚组应用不同剂量PGE1每日静脉注射，分别在手术后2周和4周处死大鼠，取心脏标本切片，HE染色及VEGF、CD34免疫组化染色后显微镜观察。定量分析心肌VEGF蛋白水平及毛细血管密度，并测定血浆VEGF蛋白浓度。结果 PGE1治疗组VEGF蛋白的表达、毛细血管密度、血浆VEGF浓度显著增加，明显高于对照组和假手术组（均P〈0．05）。随PGE1剂量的增加，VEGF蛋白水平相应升高。但PGE1治疗组各亚组之间毛细血管密度无明显差异（P〉0．05）。结论前列腺素E1可以增加AMI大鼠心肌VEGF蛋白表达和梗死区域毛细血管密度，促进侧支循环建立。前列腺素E1引起的心肌VEGF蛋白表达升高作用呈剂量依赖性，前列腺素E1剂量与心肌细胞分泌VEGF蛋白之间具有一定量效关系。     

VEGF-C真核表达质粒的构建及其真核表达

目的　研究人血管内皮生长因子 C(VEGF- C)基因功能片段的表达功能及表达活性。方法　以前期从人舌癌克隆得到的 VEGF- C功能片段 c DNA和真核表达质粒 pc DNA3.1( )构建重组质粒 ,以阳离子脂质体转染法将其导入舌鳞癌细胞 Tca8113,并检测其表达、分泌功能及体外激活能力。结果　通过将长度约为 110 0 bp的VEGF- C功能片段插入 pc DNA3.1( )的 Eco R 和 Xho 酶切位点之间 ,成功构建出 pc DNA3.1( ) - VEGF- C重组质粒 ,该质粒转染 Tca8113细胞后得到 VEGF- C高表达的舌癌细胞 Vc Tca,转染后的细胞可表达相对分子质量为 5 3× 10 3和 2 9× 10 3的 VEGF- C分子 ,在细胞培养液中可检测到相对分子质量为 2 9× 10 3的 VEGF- C片断。结论　构建的 VEGF- C重组质粒可在真核细胞实现表达 ,并能被分泌和激活