活性维生素D缺乏促进小鼠皮肤衰老

目的:探讨1,25二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]在抗皮肤衰老中的作用及机制。方法:使用组织学、免疫组织化学、免疫印迹和生化指标检测的方法比较同窝10周龄25-羟化维生素D1α-羟化酶基因敲除纯合子[1α(OH)ase-/-]小鼠和野生型小鼠皮肤表型的差异。结果:1α(OH)ase-/-小鼠皮肤衰老相关β-半乳糖苷酶染色增强,出现皮肤变薄、表真皮交界平坦、皮下脂肪和毛囊数目减少等衰老表型;通过细胞增殖性核抗原(PCNA)免疫组织化学染色和TUNEL检测,发现1α(OH)ase-/-小鼠皮肤中PCNA阳性细胞明显减少而TUNEL阳性细胞则显著增多;免疫印迹结果显示p16、p27、p53、NF-κB、活化型Caspase-3在1α(OH)ase-/-小鼠皮肤组织中表达明显升高;生化检测显示1α(OH)ase-/-小鼠皮肤活性氧(ROS)水平明显升高、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)水平降低、丙二醛(MDA)含量增高。结论:1,25(OH)2D3能够通过促进皮肤细胞增殖、抑制皮肤细胞凋亡和抗氧化应激作用发挥抗皮肤衰老的作用。     

甲状旁腺素和不同钙磷饮食对活性维生素D合成的影响

目的:研究甲状旁腺素(PTH)和不同钙磷饮食对活性维生素D合成的影响?方法:使用正常?高钙低磷或低钙低磷饮食喂养2月龄野生型(WT)和PTH基因敲除纯合子(PTH-/-)小鼠4周,测定血清钙?磷?PTH和1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]水平,并利用RT-PCR方法检测肾1α-羟化酶[1α(OH)ase]基因表达水平?结果:正常饮食PTH-/-小鼠表现为低钙血症?高磷血症,肾1α(OH)ase基因表达上调,而血清1,25(OH)2D3水平则降低?与正常饮食相同基因型小鼠相比,高钙低磷饮食WT和PTH-/-小鼠血清PTH和1,25(OH)2D3水平降低,肾1α(OH)ase基因表达下调?高钙低磷饮食矫正了PTH-/-小鼠的低钙和高磷血症,肾1α(OH)ase基因表达仍高于WT小鼠,而血清1,25(OH)2D3水平与WT小鼠无差异?与正常饮食相同基因型小鼠相比,低钙低磷饮食WT和PTH-/-小鼠血清PTH和1,25(OH)2D3水平明显升高,肾1α(OH)ase基因表达明显上调?低钙低磷饮食PTH-/-小鼠血清钙严重降低,血清磷仍然较高,肾1α(OH)ase基因表达和血清1,25(OH)2D3水平均较WT小鼠为低?结论:钙磷饮食能够通过PTH依赖性和PTH非依赖性的方式调节活性维生素D的合成?     

甲状旁腺素在胸腺的表达及血钙对其表达的调节

目的:为了证实PTH基因在胸腺的表达,明确PTH蛋白在胸腺组织的定位以及胸腺来源的PTH是否受到血钙水平改变的调节.方法:使用RT-PCR、real-time PCR和免疫组织化学的方法比较分析同窝2周龄PTH基因敲除纯合子(PTH-/-)和野生型(WT)小鼠以及1-α羟化酶基因敲除纯合子[1α(OH)ase-/-]和野生型(WT)小鼠的甲状旁腺和胸腺的PTH表达差异.结果:PTH-/-小鼠的甲状旁腺和胸腺无PTH表达:同窝WT小鼠甲状旁腺和胸腺均有PTH表达,但胸腺表达水平较甲状旁腺低.PTH在胸腺上皮细胞表达,而不在胸腺淋巴细胞表达.1α(OH)ase-/-小鼠表现为低钙血症.与正常血钙的WT小鼠相比,PTH基因和蛋白的表达水平在1α(OH)ase-/-小鼠胸腺组织中均明显升高.结论:胸腺组织不仅是产生PTH的辅助器官,而且其PTH表达也受到血钙水平的调节.     

活性维生素 D缺乏导致牙齿和下颌骨的发育障碍

目的:为了检测活性维生素D缺乏及其母乳成分的改变是否影响小鼠下颌骨以及牙齿的发育.方法:通过采用X线摄影、微CT和组织学等方法比较分析25羟维生素D3的1α羟化酶杂合子[1α(OH)ase+/-]和纯合子[1α(OH)ase-/-]母鼠所喂养的纯合子和杂合子小鼠下颌骨以及牙齿的表型差异.结果:母乳中的钙水平在1α(OH)ase-/-母鼠较1α(OH)ase+/-母鼠为低.1α(OH)ase-/-仔鼠的牙量和骨量较同窝1α(OH)ase+/-仔鼠明显下降,而由1α(OH)ase-/-母鼠所喂养仔鼠的牙量和下颌骨骨量比由1α(OH)ase+/-母鼠喂养的仔鼠要低.由1α(OH)ase+/-母鼠所喂养的1α(OH)ase+/-仔鼠牙量和下颌骨量最高,而由1α(OH)ase-/-母鼠所喂养的1α(OH)ase-/-仔鼠牙量和下颌骨量最低.结论:活性维生素D和高乳钙摄入各自具有刺激下颌骨和牙齿矿化和发育的作用,又具有协同作用.     

维生素D3对EC9706细胞增殖、裸鼠移植瘤生长及NDRG1蛋白表达的影响

目的:观察1,25-(OH)2维生素D3对食管癌EC9706细胞细胞增殖、细胞周期、食管癌细胞裸鼠移植瘤生长及对NDRG1蛋白表达的影响.方法:采用0.3 μmol/L的1,25-(OH)2维生素D3作用于EC9706细胞后,MTT法检测肿瘤细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期的变化.BALB/c小鼠荷瘤后,用5 μg/kg 1,25-(OH)2维生素D3溶液皮下注射于移植瘤周围,观察移植瘤生长情况,并采用免疫组织化学方法检测裸鼠移植瘤组织中NDRG1蛋白表达水平.实验中均以未经1,25-(OH)2维生素D3处理作为对照组.结果:①MTT实验结果显示,1,25-(OH)2维生素D3作用1～5 d时各组吸光度均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);随着1,25-(OH)2维生素D3作用时间的延长,细胞增殖抑制率逐渐升高(1 d:7.4%,3 d:21.1%,5 d:23.8%).②细胞周期检测结果显示,不同培养时间组G1期细胞分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).③与对照组相比,1,25-(OH)2维生素D3可上调NDRG1蛋白表达水平.结论:1,25-(OH)2维生素D3可抑制食管癌细胞增殖,并通过上调NDRG1的表达而抑制食管癌裸鼠移植瘤的生长.     

1,25-二羟维生素D3对胃癌细胞增殖和TNF-α表达的影响

摘要：目的研究1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对胃癌SGC-7901 细胞增殖和细胞周期的影响,以及对细胞因子TNF-α
mRNA及蛋白表达的影响。方法用不同浓度1,25(OH)2D3处理胃癌SGC-7901细胞,采用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞
仪检测细胞生长周期;RT-PCR和Western blotting分别检测TNF-α在mRNA和蛋白水平的表达情况。结果1,25(OH)2D3对胃癌
SGC-7901细胞增殖有抑制作用（P<0.05）,并呈时间剂量依赖性。经1,25(OH)2D3处理72 h后细胞周期出现向G0/G1期移行的动
力学改变（F=9.81,P<0.05）。TNF-α mRNA及蛋白的表达水平均呈剂量依赖性减少（P<0.05）。结论1,25(OH)2D3可抑制胃癌
细胞增殖,且与其抑制TNF-α的表达可能有相关性。
     

甲状旁腺素和活性维生素D在调节肾脏钙结合蛋白中的协同作用

目的:明确甲状旁腺素(PTH)和1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]在调节肾脏钙结合蛋白中的各自和协同作用.方法:采用免疫组织化学方法观察PTH基因敲除、1α羟化酶基因敲除及双基因敲除对钙结合蛋白D28K和D9K在小鼠肾脏不同部位表达的影响.结果:钙结合蛋白D28K和D9K均定位于肾脏皮质远曲小管及髓质集合管上皮细胞的胞浆内.两种钙结合蛋白在PTH基因敲除小鼠肾脏的表达均明显减少.它们的减少在1α羟化酶基因敲除小鼠更为明显,而以双基因敲除小鼠最为显著.结论:PTH和活性维生素D均能调节钙结合蛋白在肾脏的表达,而且两者具有协同作用.     

1, 25(OH)2D3对柯萨奇病毒B3诱导小鼠心肌炎症反应的影响及机制

目的探讨1, 25二羟维生素D3[1, 25(OH)2D3]对柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导小鼠心肌炎症反应的影响及机制。方法将雄性野生型(WT)小鼠和1α羟化酶基因敲除[1(OH)ase-/-]小鼠分为WT组、WT+CVB3组、1(OH)ase-/-+CVB3组和1(OH)ase-/-+CVB3+VD3组, 每组8只。实时荧光定量PCR测定促炎症因子白细胞介素(IL)1β、IL-6、干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA水平;HE染色观察心肌组织病理学改变;TUNEL染色及流式细胞仪检测心肌细胞凋亡;Fluo-4/AM荧光探针检测心肌细胞内的钙离子含量;Western印迹法检测钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)及内质网应激相关葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的表达水平。结果与WT组相比, WT+CVB3组小鼠心肌中促炎症因子IL-1β(14.88±3.32比1.03±0.02, P=0.009)、IL-6(7.00±1.09比1.81±0.18, P=0.005)、IFN-γ(4.70±1.11比1.34±0.3...     

1,25-二羟维生素D3对胃癌细胞增殖和TNF-α表达的影响

目的研究1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对胃癌SGC-7901细胞增殖和细胞周期的影响,以及对细胞因子TNF-αmRNA及蛋白表达的影响。方法用不同浓度1,25(OH)2D3处理胃癌SGC-7901细胞,采用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞生长周期;RT-PCR和Western blotting分别检测TNF-α在mRNA和蛋白水平的表达情况。结果 1,25(OH)2D3对胃癌SGC-7901细胞增殖有抑制作用(P<0.05),并呈时间剂量依赖性。经1,25(OH)2D3处理72 h后细胞周期出现向G0/G1期移行的动力学改变(F=9.81,P<0.05)。TNF-αmRNA及蛋白的表达水平均呈剂量依赖性减少(P<0.05)。结论 1,25(OH)2D3可抑制胃癌细胞增殖,且与其抑制TNF-α的表达可能有相关性。     

2型糖尿病患者血清1,25-二羟基维生素D3的变化及意义

目的:比较2型糖尿病患者与正常人之间血清1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]水平的差异,分析维生素D与2型糖尿病的关系?方法:选择2型糖尿病患者110例为病例组,同期本院健康体检者105例为对照组?用ELISA法测定血清1,25(OH)2D3水平,同时进行问卷调查并检测相关临床及生化指标,统计分析?结果:血清1,25(OH)2D3在病例组和对照组中的差异明显(P < 0.01),血清1,25(OH)2D3与空腹血糖呈显著负相关(rs=-0.696,P < 0.01)?结论:血清1,25(OH)2D3在2型糖尿患者中明显低于正常人?空腹血糖越高,血清1,25(OH)2D3越低?