载脂蛋白H在肾小管疾病中的研究进展

载脂蛋白 H,系人血浆中的一种由 32 6个氨基酸残基组成的单链糖蛋白 ,包括 5个相似的结构域 ,其中富含脯氨酸和半胱氨酸。其理化特性及编码基因特点都己陆续阐明。能激活脂蛋白酯酶 ,从而参与脂类代谢 ,作用于凝血机制 ,抑制血凝 ,其检测是反映肾小管病变的又一良好指标     

载脂蛋白H单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备及鉴定载脂蛋白H Aport单克隆抗体。方法从人血清中分离纯化Aport免疫小鼠后取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合，经筛选出两株杂交瘤细胞株2C5和3H4，制备腹水后，用硫酸胺沉淀等方法纯化。获得Aport单抗。结果两株细胞产生的单抗皆属于IgG1，与其它载脂蛋白无交叉反应，细胞株连续传代3个月仍能稳定分泌Aport单抗，且效价稳定。结论2C5和3H4两株细胞能分泌合格的Aport单抗。     

载脂蛋白M对肾小管上皮细胞增殖凋亡的影响

目的:探究载脂蛋白M(ApoM)缺失对肾小管上皮细胞(RTECs)增殖及凋亡的影响,为肾脏疾病的防治提供新的思路.方法:收集野生型小鼠(WT)及ApoM基因缺失型(ApoM-/-)小鼠尿液并检测尿蛋白、尿酸及尿肌酐的含量.原代培养两组小鼠的RTECs,EdU试剂盒检测其增殖活力;Western blot法检测凋亡相关关...     

脑卒中患者载脂蛋白H与血脂关系的研究

目的　探讨脑卒中患者载脂蛋白H(ApoH)血清水平与血脂的相关性以及ApoH与脑卒中的关系。方法　采用放射免疫法检测急性动脉粥样硬化性血栓性脑梗死 (ACI)患者 33例和急性高血压性脑出血 (ACH)患者 2 8例的ApoH血清水平 ,酶法测定血脂各项。结果　ACI、ACH患者与健康对照组血清ApoH水平分别为 2 88mg/L± 85 4mg/L、2 4 8mg/L± 6 8mg/L、2 5 6mg/L± 71mg/L。ACI患者的ApoH血清水平与胆固醇 (CHO)、低密度脂蛋白 (LDL)呈正相关 (r=0 394 ,P <0 0 5 ;r =0 394 ,P<0 0 5 ) ,与TG无相关性。 17例有家族史的脑卒中患者血清ApoH与高密度脂蛋白相关。结论　ApoH血清水平与ACI患者的CHO、LDL相关 ,与正常人及ACH患者无相关性。     

载脂蛋白H基因多态性与脑卒中的相关性研究

目的　探讨载脂蛋白H(apoH)基因多态性与长沙地区汉族人脑卒中的关系。方法　采用PCR 单链构象多态技术和DNA序列测定法检测长沙地区汉族 2 6 0例脑卒中患者、2 0个脑卒中家系成员和 10 0例健康对照者的apoH基因 3号外显子的多态性。结果　长沙地区汉族人apoH基因 3号外显子存在G341A(Ser88Asn)多态 ,在脑出血 (CH)组 ,G341A (Ser88Asn)多态A等位基因频率(0 12 7)明显高于对照组 (0 0 5 5 ) (P <0 0 5 )。有高血压的CH组A等位基因频率 (0 15 1)明显高于对照组 (0 0 5 5 )及无高血压的CH组 (0 0 78) (P <0 0 5 ) ,而后两者比较无统计学意义 (P >0 0 5 )。有家族史的CH患者A等位基因频率 (0 15 0 )明显高于对照组 (0 0 5 5 ) (P <0 0 5 ) ,以CH为主的家系中患病组与未患病组A等位基因 (0 16 0 ,0 12 8)频率均明显高于对照组 (0 0 5 5 ) (P <0 0 5 )。apoH基因G341A(Ser88Asn)多态性与脑梗死无关。结论　G341A(Ser88Asn)多态A等位基因可能是长沙地区汉族人CH ,特别是高血压性CH及有家族史的CH患者的遗传危险因素。     

肾小球疾病中肾小管损伤机制探讨

近年来 ,无论是人类原发性或继发性肾小球肾炎 ,还是实验性动物模型的研究结果都表明 ,肾小管间质病变较肾小球病变更密切相关于肾功能的损伤和预后[1] 。目前 ,小管间质病变在进行性肾小球损伤中的重要性已经被越来越多的国内外学者所重视。本文针对肾小球疾病中肾小管损伤的机制进行探讨。1　完整肾单位学说196 0年NealBricker首次提出肾小球和肾小管做为一个完整的肾单位在肾脏疾病进展中密切相关[2 ] 。 1970年CarlGottsclalk等通过超微结构观察慢性肾炎鼠模型以及重金属所致肾小管损伤模型发现 :单个肾单位肾小球滤过率波动在正常的 …     

肾小球疾病合并肾小管间质损伤的研究

<正>近年来终末期肾脏病(End stage renal disease, ESRD)在全球的发病率逐年提高,并且预后差、年限长、花费高,目前已经成为全球范围内的严重危害人类健康、加重经济负担的公共卫生问题。导致ESRD的原因包括所有慢性肾脏病(Chronic kidney disease, CKD)和各类原发性、继发性肾小球疾病,肾小管、间质及血管疾病^[1]。     

人载脂蛋白H的分离、纯化和鉴定

 目的 探索一种相对简便而高效的方法,从人血浆中分离、纯化载脂蛋白H。方法 用高氯酸预处理血浆,以离子交换色谱和亲和色谱相结合的方法进行蛋白质的分离和纯化。用SDS-聚丙烯凝胶电泳和Western blot对纯化产品进行鉴定。用BCA蛋白质定量测定试剂盒测定获得载脂蛋白H的量。结果 连续分离、纯化3次,每次获得的产品纯度均大于98%,且经Western blot分析均能与抗β₂-Glycoprotein I单克隆抗体呈阳性反应。3次纯化共获得apoH 12.56 mg,平均21 mg/L。结论 本方法重复性好、可靠性高,较传统方法更为简便和经济。     

IgA肾病中ICAM-1和bFGF的表达与肾小管、肾间质损伤的关系

目的 探讨(IgAN)中ICAM-1和bFGF的表达与肾小管、肾间质损伤的关系。方法 对49例有不同程度肾小管、肾间质损伤的IgAN冰冻切片组织进行ICAM-1和bFGF的免疫组织化学检测。结果 ICAM-1主要表达在肾小管上皮细胞(53．1％)，少量表达在肾间质(25．5％)和肾小球(28．6％)。bFGF主要表达在肾间质中(30．6％)，少量表达在肾小管上皮细胞(10．2％)和肾小球(4．1％)。ICAM-1和bFGF在IgAN肾小管、肾间质2级和3级病变中的表达有差异，但无显著性。结论 ICAM-1和bFGF与IgAN的肾小管、肾间质损伤有密切关系，可作为IgAN病变进展的标志。     

参麦对大鼠肾小管细胞氧化性损伤的影响

目的 :探讨参麦注射液 (SMI)对H2 O2 所致小管细胞氧化性损伤的影响。方法 :通过H2 O2 致鼠肾小管细胞损伤模型建立 ,用组织化学方法显示培养小管细胞琥珀酸脱氢酶 (SDH)和乳酸脱氢酶 (LDH)。结果 :参麦注射液和辅酶Q1 0 能减轻氧化性损伤肾小管细胞SDH及LDH活性丧失的作用 ,与模型组比有显著差异 (P <0 .0 1 ) ,且对未损伤小管细胞具有明显的保护作用 (P <0 .0 1 )。结论 :SMI对H2 O2 所致的小管细胞氧化性损伤具有明显的修护作用 ,其效应略优于辅酶Q1 0 ,SMI能提高受损小管细胞有氧代谢的功能     

长沙地区小儿载脂蛋白E基因多态性及其对血脂的影响

采用改良的ＰＣＲＲＦＬＰ方法测定长沙地区２９１名儿童载脂蛋白（Ａｐｏ）Ｅ基因型。结果发现ε２,ε３,ε４等位基因的频率分别是００８１,０８５７和００６２。ＡｐｏＥ等位基因频率分布无明显的性别差异（Ｐ＞０．０５）。Ａｐｏε２等位基因携带者与其它ＡｐｏＥ基因携带者相比,血高密度脂蛋白胆固醇、ＡｐｏＥ和ＡｐｏＡ１浓度较高,而总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、ＡｐｏＢ１００水平较低（Ｐ＜０．０５）。ε４等位基因携带者的血脂、脂蛋白、Ａｐｏ改变则相反（Ｐ＜０．０５）。结果还显示ＡｐｏＥ等位基因对血甘油三酯、脂蛋白（ａ）浓度的影响不明显（Ｐ＞０．０５）。ε２,ε３,ε４等位基因与血总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、ＡｐｏＢ１００浓度呈等级正相关,与高密度脂蛋白胆固醇、ＡｐｏＡ１及ＡｐｏＥ水平呈等级负相关（Ｐ＜０．０５）。ＡｐｏＥ基因对血清脂类的影响存在性别差异。ＡｐｏＥ基因多态性影响小儿血清脂类代谢。     

结核杆菌H37Rv异柠檬酸裂解酶基因的克隆及表达

目的构建在大肠杆菌中高效表达结核杆菌H37Rv异柠檬酸裂解酶(ICL)的重组质粒,实现ICL在原核表达系统的高效稳定表达.方法采用PCR和克隆技术构建含有结核杆菌H37Rv ICL基因的表达质粒pET30(a)-Rv0467,转化至E.coli BL21(DE3)中诱导表达.目的蛋白经金属螯合层析纯化后,对其活性进行初步研究.结果构建了高效表达结核杆菌H37Rv ICL的质粒;在E.coli BL21(DE3)中得到高效表达,目的蛋白占总蛋白含量的30%;表达产物以可溶性形式存在,通过金属螯合层析纯化,所得酶的纯度为90%;目的蛋白具有ICL的活性.结论利用原核表达系统成功克隆表达了结核杆菌H37Rv的ICL,为以ICL为靶点建立新型抗结核药物奠定了基础.     

乙型肝炎病毒核糖核酸酶H基因表达及鉴定

目的　乙型肝炎病毒核糖核酸酶 H (HBV- RNase H)为该病毒生活周期中负链 DNA合成所必需 ,获取该基因片段及其表达蛋白 ,为进一步的基础研究及应用研究创造条件 .方法　以 HBV全基因片段为模板 ,PCR方法定位扩增 HBV-RNase H特异性片段 ,连接于 p T7Blue克隆载体 ,酶切鉴定并测序后克隆于 p GSTag载体进行原核表达 .PAGE电泳及Western杂交鉴定表达产物 .结果　DNA测序结果显示 PCR扩增产物及载体中插入片段与已知序列相同 ;Western杂交结果表明 ,所表达产物为 GST与 RNase H的融合蛋白 .结论　 HBV- RNase H基因的成功克隆及表达为进一步研究 HBV感染的早期诊断及乙肝患者的治疗奠定了基础     

胃癌及其癌前病变中rasP^21蛋白表达的定量研究

探索胃粘膜良，恶性病变中，细胞内ｒａｓＰ＾２１蛋白含量的变化规律与胃癌发生发展的关系。应用图像分析系统对９７例胃正常粘膜，各级异型增生和癌进行了抗ｒａｓ基因产物Ｐ＾２１抗体免疫组化标记物的定量测定     

Apolipoprotein E gene polymorphism and its association with human longevity in the Uygur nationality in Xinjiang

Objective To study the relationship between apoE alleles and life-span.Methods Apolipoprotein E genotypes were determined in 164 unrelated Uygurs including 35 persons aged 90 years or older, 71 men aged 20-35 and 54 men with myocardial in farction by using polymerase chain reaction-restriction fragment length polymor phism.Apolipoprotein E gene polymorphism was analyzed among three groups. Results There was statistically significant difference in the ε4 allele frequencies amo ng three groups.The ε4 allele frequency in olds was the lowest (0.057), whil e in patients suffering from myocardial infarction (MI) was the highest (0.213) .In MI patients the average age of first attack in ε4 allele carriers was sig nificantly younger than that of non-carries, 51.3 and 58.3 years, respectivel y (P&lt;0.05).Conclusion ApoE genotype may have some impact on human longevity.     

胃癌前组织和胃癌中Fas基因表达及其与细胞凋亡的关系

目的 探讨胃癌组织及胃癌中Fas基因表达状况及其与细胞凋亡的关系。方法 应用原位杂交和免疫组织化学技术检测10例正常胃粘膜、72例慢性胃炎和53例胃癌中Fas基因的表达,并采用凋亡细胞原位检测方法对组织切片中的凋亡细胞进行观察和比较。结果 正常胃粘膜无Fas基因表达。Fas mRNA在肠化生组织中的表达率为75．00％,显著高于萎缩性胃炎（37．50％,P＜0．01）和胃癌（52．83％,P＜0．05）。Fas蛋白在肠化生组织中的表达率为80．56％,显著高于萎缩性胃炎（37．50％,P＜0．01）、异型增生（55．00％,P＜0．05）和胃癌（45．28％,P＜0．01）。X^2检验表明两种方法检测阳性率差异无显著性。凋亡细胞原位检测结果显示,Fas蛋白表达阳性萎缩性胃炎、肠化生和胃癌组织中的凋亡细胞指数显著高于Fas蛋白阴性组（P＜0．05及P＜0．01）,Fas蛋白表达状态与细胞凋亡指数呈正相关（r=0．393,P＜0．01）。结论 Fas基因对胃癌前组织及胃癌细胞凋亡具有促进性调控作用,细胞凋亡调控异常在胃癌发病中可能起重要作用。     

北京自然人群载脂蛋白E基因多态性频率分布研究

应用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性技术 (PCR RFLP) ,以北京自然人群为基础 ,采用分层随机抽样的方法进行横断面研究 ,对 1 0 46人进行apoE基因分型 ,并分析不同特点人群apoE基因频率分布特点。结果表明 :1 )本组人群ε2、ε3、ε4基因频率分别为 9.1 %、81 .2 %和 9.7% ,男女和各年龄组间基因频率无显著差异 ;2 )与欧美国家相比 ,本组人群ε2基因频率增高 ,ε4频率减低 ,与日本人群相比也有相同趋势 ;3 )在空腹血糖受损及糖尿病人群中ε2频率明显增高 ;4)在高胆固醇血症人群中ε2频率减低、ε4基因频率增高     

EGCG对H2O2诱导的螺旋神经节细胞MnSOD基因表达的影响

目的：探讨表没食子儿茶素没食子酸盐（EGCG）在双氧水（H2O2）诱导耳蜗螺旋神经节细胞（SGCs）氧化损伤中对线粒体抗氧化酶基因-MnSOD基因表达的影响。方法：培养离体SGCs,采用半定量RT-PCR方法检测加入不同浓度H2O2和/或EGCG后螺旋神经元MnSOD基因的表达情况。以经典抗氧化剂维生素C作对照。结果：随着H2O2浓度提高,MnSOD基因的表达亦随之升高;在H2O2浓度大于100 μmol/L时MnSOD基因表达明显上调(P<0.05),100 μg/ml EGCG能明显抑制H2O2诱导的MnSOD基因表达(P<0.05)。 结论：EGCG可能通过清除氧自由基,提高MnSOD酶活性,抑制H2O2诱导的螺旋神经节细胞MnSOD基因表达。     

大鼠Smac基因的克隆及其在心肌细胞H9C2中的表达

目的：克隆大鼠促凋亡基因Smac,构建真核表达载体pcDNA3.1⁺-rSmac,并在心肌细胞中表达。方法：应用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）技术从大鼠肾组织中扩增到大鼠Smac基因的CDs片段,构建含Smac基因的真核表达载体pcDNA3.1⁺-rSmac并将此重组质粒、空载体pcDNA3.1⁺、pcDNA3.1⁺-EGFP通过脂质体介导转染大鼠心肌细胞H9C2,荧光显微镜、流式细胞术间接检测转染效率,RT-PCR法检测外源基因的表达。结果：经测序目的基因序列与GenBank（NM_001008292）公布的结果一致,所构建的重组质粒pcDNA3.1⁺-rSmac经PCR和酶切鉴定所释放的片段大小与预期结果相符。荧光显微镜和流式细胞术检测,细胞转染有效,转染效率达38.36%。转染重组载体pcDNA3.1⁺-rSmac 48 h后,H9C2细胞Smac的mRNA水平明显升高。其中,对照组Smac/β-actin为1.19,空载体组Smac/β-actin为1.31,二者之间差异无显著性（P>0.05）;转染pcDNA3.1⁺-rSmac组Smac/β-actin为1.67,与对照组比较差异具有显著性（P<0.01）。结论：克隆大鼠Smac基因成功,成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1⁺-rSmac,并在转染后的心肌细胞中表达,为研究Smac基因在心肌细胞凋亡过程中的调控作用奠定基础。     

Alzheimer病与多发梗死性痴呆患者载脂蛋白E基因多态性的研究

目的探讨载脂蛋白E基因多态性与Alzheimer病（AD）、多发梗死性痴呆（MID）的关系。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）技术对102例痴呆患者,76例健康人的apoE基因进行分型。结果AD组apoEε4明显升高,ε3明显降低,与对照组相比存在显著差异（P〈0.01）,MID组与对照组相比基因频率无明显差异。结论apoEε4是AD发病的一个危险因素,而其与MID的关系尚需进一步研究。