去甲斑蝥素诱导人T淋巴细胞白血病细胞株凋亡的实验研究

目的：探讨去甲斑蝥素诱导人T淋巴细胞白血病细胞株6T－CEM的凋亡作用。方法：利用DNA断裂点标记法（TUNEL）、DNA凝胶电泳、活细胞拒染以及光镜方法研究有关细胞的凋亡。结果：UNEL标记及DNA凝胶电泳显示：10－40μg/ml剂量的去甲斑蝥素作用6T－CEM细胞24h及10μg/ml剂量的去甲斑蝥素作用6T－CEM细胞超过18h后即出现典型的细胞凋亡特征。结论：一定剂量范围内的去甲斑蝥素可在直接杀伤作用较小的情况下明显诱导6T－CEM细胞凋亡,不会因细胞坏死而引起炎症反应,这对于去甲斑蝥素应用于临床将有十分重要意义。     

蜂毒素对肝癌细胞系BEL-7402细胞凋亡的影响

目的 :了解蜂毒素诱导肝癌细胞凋亡的作用。方法 :肝癌细胞BEL 74 0 2经不同浓度的蜂毒素处理后 ,采用台盼蓝排染法测定细胞增殖的抑制率 ,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡及Fas蛋白的表达。结果 :16 μg/ml蜂毒素作用肝癌细胞系BEL 74 0 2 ,12h抑制率为 (78.13±6 .15 ) % ,2 4h抑制率为 10 0 % ;4 ,8μg/ml蜂毒素对细胞的生长也有抑制作用 ,并且可诱导细胞凋亡的产生 ,能够增加细胞Fas蛋白的表达。结论 :蜂毒素高剂量有杀伤肿瘤细胞作用 ,低剂量可诱导细胞凋亡     

蜂毒素对胃癌细胞系SGC-7901细胞增殖抑制作用及机制

目的 研究蜂毒素影响人胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的机制.方法 使用不同浓度(1、2、4、8、16、32μg/ml)蜂毒素处理SGC-7901细胞不同时间(12、24、36、48、72 h)后,采用MTT法测定肿瘤细胞生长抑制率;透射电镜观察细胞超微结构的改变;琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞特征性DNA条带;流式细胞仪法检测细胞凋亡和细胞周期;免疫组化观察Bcl-2基因和Bax基因表达情况;RT-PCR检测Bcl-2、Bax、p53 mRNA的表达.结果 蜂毒素对胃癌SGC-7901细胞的生长抑制作用随着其作用时间的延长和浓度的增加而明显增强,作用48 h后,其IC50为2.43 μg/ml;透射电镜现察显示蜂毒素组细胞呈凋亡表现,核固缩、碎裂,染色质浓缩,边集;蜂毒素(4、8μg/ml)组培养48 h后DNA琼脂糖凝胶电泳可见典型的梯状条带,而对照组细胞DNA未见梯状条带;流式细胞DNA直方图上出现典型的亚二倍体"凋亡峰",2、4、8μg/ml浓度蜂毒素作用人胃癌细胞后的细胞凋亡率分别为(5.69±0.74)%、(10.58±1.32)%、(29.57±1.58)%.Bax、p53基因mRNA和蛋白表达降低、Bcl-2 mRNA和蛋白表达升高,并随蜂毒素浓度增加而加强.结论 蜂毒素能诱导人胃SGC-7901细胞凋亡和抑制增殖,且有一定的量效关系,其作用机制可能与调控Bcl-2、Bax、p53基因表达有关.     

微量元素硒对HL—60细胞凋亡的诱导及bcl—2／bax基因的表达调控

目的：研究微量元素硒诱导人类白血病细胞凋亡的作用及其相关的基因调控。方法：体外培养人急性早幼粒白血病细胞（HL－60）,加入硒使其终浓度分别为0、0．1μg/ml、1μg/ml、2μg/ml,作用48h后收集细胞,分别作形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞光度计分析、TUNEL及bcl-2/bax基因蛋白表达的细胞化学检测。结果：上述多项指标的分析结果均证明元素硒能诱导癌细胞凋亡。通过流式细胞光度计检测到对照组、0．1μg/ml、1μg/ml、2μg/ml加硒组的凋亡百分率分别为4．43％、8．36％、37．91％、63．47％。这说明浓度为0．1μg/ml的硒没有明显的诱导癌细胞凋亡的作用,而浓度为1μg/ml、2μg/ml时凋亡细胞显著增多并呈剂量依赖关系。随着凋亡细胞的增多,bcl-2基因表达相应减弱,而bax基因表达相应增强。结论：微量元素硒可诱导HL－60细胞凋亡,并且呈剂量依赖关系,凋亡的发生受bcl-2/bax基因调控。     

亚砷酸钠对哮喘患者及正常人外周血T细胞凋亡诱导作用的比较

目的比较亚砷酸钠对哮喘患者及正常人外周血T细胞体凋亡诱导作用.方法T细胞体外培养,用流式细胞术DNA含量分析法检测哮喘患者及正常人在不同浓度亚砷酸钠中培养24 h及在01μg/ml亚砷酸钠培养不同时间T细胞凋亡率的变化,并与地塞米松比较.结果随着亚砷酸钠浓度增加,哮喘组T细胞凋亡逐渐接近并超过正常组T细胞凋亡率.亚砷酸钠对哮喘患者T细胞的调亡诱导作用大于对健康正常人T细胞诱导作用,而地塞米松对正常组及哮喘组外周血淋巴细胞均有明显凋亡诱导作用.结论亚砷酸钠对正常人及哮喘患者T细胞调亡诱导作用具有选择性.     

大蒜素诱导卵巢癌细胞株OVCA-3凋亡

目的:探讨大蒜素诱导卵巢癌细胞株OVCA-3凋亡规律。方法:应用DNA断裂点标记（TUNEL）法、DNA凝胶电泳以及光镜等技术观察有关细胞的凋亡情况。结果:0.01-100μg/ml的大蒜素作用OVCA-3细胞2h及10μg/ml的大蒜素作用OVCA-3细胞不同时间,锥虫蓝染色阳性率均在18.5％以下。TUNEL显示：1-100μg/ml的大蒜素作用OVCA-3细胞2h,即出现典型的细胞凋亡特征;50μg/ml时凋亡率为65.9％。结论:一定剂量范围内的大蒜素可在直接杀伤作用较小的情况下明显诱导OVCA-3细胞凋亡,不会因细胞坏死而引起炎症反应,这对于大蒜素应用于临床将有重要意义。     

采用形态学实验研究双脱甲氧基姜黄素对人血管内皮细胞的诱导凋亡作用

目的：探讨双脱甲氧基姜黄素（又称姜黄素－3）对人肺微血管内皮细胞的诱导凋亡作用。方法：（1）采用Giemsa染色法观察浓度分别为4μg/ml、8μg/ml和12μg/ml的双脱甲氧基姜黄素诱导内皮细胞凋亡的效果；（2）采用透射电镜观察浓度分别为4μg/ml、8μg/ml的双脱甲氧基黄素诱导内皮细胞凋亡的效果；（3）采用丫啶橙荧光染色观察内皮细胞在8μg/ml双脱甲氧基姜黄素诱发凋亡后发生的形态结构改变。结果：（1）Giemsa染色实验表明，双脱甲氧基姜黄素作用24h后，4μg/ml组细胞凋亡率为15．8％，与阴性对照组（13．2％）比较无明显差异（P＞0．05），8μg/ml组和12μg/ml组细胞凋亡率分别为20．6％和38％，与阴性组比较差异显著（P＜0．01和P＜0．001），凋亡细胞多表现为胞体缩小、变圆，核浓缩，呈紫黑色；（2）透射电镜分析表明，4μg/ml组的内皮细胞形态结构与阴性对照组基本相同，无明显异常改变，8μg/ml组有大量凋亡小体形成，并观察到较多的典型凋亡细胞；（3）丫啶橙荧光染色可较细致地显示细胞凋亡时的多种结构、形态改变，能够发现较早期的凋亡细胞，因而其敏感度可能更高。结论：（1）双脱甲氧基姜黄素诱导内皮细胞凋亡作用的有效剂量为8μg/ml；（2）丫啶橙荧光染色是研究细胞凋亡的一种较好的形态学实验方法，同时也适于定量分析。     

蜂毒素对人膀胱癌T24细胞体外增殖的抑制作用

目的 探讨蜂毒素对人膀胱癌T24细胞体外增殖抑制作用及机制,为蜂毒素用于膀胱癌的临床应用提供依据.方法 体外培养T24细胞,分别用0、2.5、5.0、7.5、10.0、12.5和15.0 μg/mL蜂毒素处理,采用四甲基偶氮(MTT)法检测细胞增殖的抑制率;倒置显微镜观察细胞形态;TUNEL染色检测凋亡率和RT-PCR检测Bax和Bcl-2的mRNA的表达.结果 蜂毒素处理后,T24细胞生长明显受到抑制,呈剂量依赖性;细胞出现典型的凋亡形态学改变;凋亡率随剂量升高以及Bax的表达升高而Bcl-2表达下降.结论 蜂毒素在体外能抑制人膀胱癌T24细胞的增殖,机制可能为诱导其细胞凋亡.     

冬凌草甲素抗T细胞急性淋巴细胞白血病效应的实验研究

目的 探讨冬凌草甲素对T细胞急性淋巴细胞白血病的抗白血病效应及其机制。方法 以T细胞急性淋巴细胞白血病细胞株CEM为研究对象,应用改良MTT法测定不同浓度及不同时间冬凌草甲素对CEM细胞增殖和生存率的影响,计算72 h的半数抑制浓度（IC50）;显微镜下观察5、7.5、10 μmol/L冬凌草甲素处理24 h后CEM细胞的形态学变化;流式细胞术检测0.5、7.5、10 μmol/L冬凌草甲素作用24 h后CEM细胞的凋亡百分率;应用Western blot法检测7.5 μmol/L冬凌草甲素作用后细胞mTOR、P70、4EBP1、RAF、ERK、STAT5信号蛋白水平,以及凋亡调节蛋白Bcl-2和Bax的变化。结果 ①冬凌草甲素呈浓度及时间依赖性抑制CEM细胞增殖,作用72 h的IC50值为（7.37±1.99）μmol/L ;② 5、7.5、10 μmol/L冬凌草甲素作用24 h后CEM细胞边界不清晰,部分细胞崩解,且浓度越高,细胞形态改变越明显;③ 0、5、7.5、10 μmol/L冬凌草甲素作用24 h后,细胞凋亡百分率分别为（4.8±2.11）%、（19.03±2.54）%、（40.27±3.31）%;（57.23±6.69）%;④冬凌草甲素明显抑制CEM细胞mTOR、P70、4EBP1、RAF、ERK、STAT5信号蛋白的活化;下调CEM细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,上调促凋亡蛋白Bax的表达。结论 冬凌草甲素可能通过抑制mTOR/P70(4EBP1)、RAF/ERK、STAT5信号蛋白的活化,以及上调促凋亡蛋白Bax、下调抗凋亡蛋白Bcl-2而发挥抗白血病作用。     

蜂毒素诱导骨肉瘤细胞U2OS凋亡与坏死的实验研究

目的:研究蜂毒素是否能够诱导骨肉瘤细胞U2OS凋亡与坏死.方法:U2OS经不同浓度蜂毒素处理后,采用台盼蓝排染法测定细胞增殖抑制率,利用单克隆抗体,通过流式细胞仪检测AnnexinV、Apo2.7及Fas蛋白的表达.结果:64 mg/L蜂毒素作用U2OS 12 h、24 h,其坏死率在80%以上.16 mg/L、32 mg/L蜂毒素对细胞增殖有明显抑制作用,并且可诱导细胞凋亡和坏死的产生,增加细胞Aap2.7及 Fas 蛋白的表达.结论:蜂毒素高剂量有明显杀伤U2OS的作用,低剂量具有促细胞凋亡作用,并能上调Fas蛋白的表达.     

EGb对MPP^＋诱导的PC12细胞凋亡的影响

目的 观察EGb对MPP^ 诱导的PC12细胞凋亡的细胞。方法 MPP^ 诱导PC12细胞凋亡,AO／EB染色,荧光显微镜下观察凋亡细胞。结果 EGb50、100μg/ml在6h、12h、24h可抑制细胞凋亡,而EGb25μg/ml则无效。结论 EGb在6h、12h、24h时呈剂量依赖性降低细胞凋亡率,提示EGb有可能通过抑制DA能神经元凋亡而相对增加DA含量。     

蜂毒素的抗肿瘤生物活性及其稳定性研究

目的：通过中压液相色谱提取、纯化蜂毒素，研究其抗肿瘤生物学活性，及其稳定性。方法：通过中压液相色谱提取蜂毒素，经HPLC检测纯度，采用MTT法，体外观察蜂毒素对4种肝癌细胞系增殖的抑制作用，同时与蜂毒素标准品进行抗肿瘤生物活性的比较，并比较不同批次提纯蜂毒素的抗肿瘤作用。结果：蜂毒素在16～128μg/ml对肝癌细胞增殖有抑制作用，并呈剂量依赖性，对人正常肝脏来源细胞株L-02细胞抑制作用不明显。在60μg/ml浓度，各批次提取的蜂毒素与蜂毒素标准品间抗肿瘤活性无显著性差异。结论：采用中压液相色谱提取、纯化的蜂毒素具有抗肿瘤生物活性，并且稳定性良好。     

乌苯美司对人白血病细胞生长抑制及其机制探讨

目的：研究国产氨肽酶N抑制剂乌苯美司（Ubenimex）对人白血病细胞的作用及其机理。方法：应用MTT比色法观察Ubenimex对细胞的生长抑制作用，光学显微镜观察细胞形态结构的改变，DNA凝胶电泳、DNA片段原位末端标记及流式细胞仪（FCM）检测，分析细胞凋亡。结果：①Ubenimex明显抑制HL60细胞的生长，半数抑制浓度（IC50）为13．03μg/ml；而K562细胞的敏感性较差。其抑制作用均呈剂量效应关系。②典型的细胞形态改变，DNA末端原位标记的检出及流式细胞仪结果，均证实Ubenimex能诱导白血病细胞的凋亡。③10μg/ml Ubenimex作用12h即可明显诱导HL60细胞DNA断裂，K562细胞的凋亡敏感性显著低于HL60细胞；两者凋亡率均呈剂量和时间依赖性，经Ubenimex处理后，HL60细胞出现G1期阻滞。结论：Ubenimex能抑制K562，HL60细胞生长，诱导细胞凋亡是其机制之一。     

青蒿琥酯诱导人白血病细胞K562凋亡的实验研究

目的观察青蒿琥酯对人白血病细胞株K562抑制增殖和凋亡作用.方法通过MTT显色法观察不同浓度青蒿琥酯对K562的生长抑制作用,通过Annexin V/PI双标记法检测青蒿琥酯对K562细胞的凋亡诱导作用.结果青蒿琥酯在1～8μg/ml浓度范围内能分别明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度的依赖性;在2～8μg/ml浓度范围内青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡具有明显的量效关系;4μg/ml浓度组的青蒿琥酯在0～72h内,诱导K562凋亡具有明显的时效关系.结论青蒿琥酯在体外能抑制K562细胞的增殖,可能是通过诱导其发生凋亡而起作用.     

玉竹提取物B对CEM的抑制作用

目的　研究玉竹提取物B (ExtractionBofpoly -gonatomodoratum ,EB -PAOA)对CEM和人类正常T细胞作用。方法　以不同浓度的EB -PAOA处理CEM细胞和正常人T细胞 ,采用MTT法测EB -PAOA对CEM及人类T细胞增殖的抑制作用 ,采用电镜检测CEM细胞形态学的变化 ,采用流式细胞仪及琼脂糖电泳检测DNA的变化 ,观察CEM在EB -PAOA的作用下发生凋亡的情况。结果　最低浓度 (1∶4 0 0 0 /ml)对CEM的增殖抑制作用较小 ,随浓度的增大抑制作用逐渐增强 ,最高浓度的抑制作用最强 (P <0 0 1) ;可促进CEM细胞凋亡 ;EB -PAOA对人的正常T淋巴细胞的增殖没有影响 (P >0 0 5 )。结论　EB -PAOA可以抑制CEM的增殖 ,其抑制作用随浓度增加逐渐增强 ;并能诱导CEM细胞凋亡 ;EB -PAOA对人类T淋巴细胞的增殖没有影响。     

虫草素对MDA-MB-231细胞增殖及细胞凋亡的影响

目的研究虫草素对高转移潜能乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞增殖、凋亡及其TMSG-1蛋白表达的影响。方法采用MTT法观察不同浓度的虫草素(0、1、2、4和8μg/ml)对MDA-MB-231细胞增殖的作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率变化;免疫印迹法检测经不同浓度的虫草素(0、1、2、4和8μg/ml)处理48 h后,MDA-MB-231细胞TMSG-1蛋白的表达。结果虫草素能够以剂量依赖方式显著地抑制MDA-MB-231细胞增殖(P<0.01)。流式细胞术结果显示,虫草素可显著促进MDA-MB-231细胞凋亡(P<0.01)。虫草素可以呈剂量依赖方式增强MDA-MB-231细胞TMSG-1的表达。与对照组相比,2μg/ml虫草素即可明显上调MDAMB-231细胞TMSG-1蛋白的表达(P<0.05)。结论虫草素可以呈剂量依赖方式抑制MDA-MB-231细胞的生长并诱导其凋亡;虫草素可能通过上调MDA-MB-231细胞TMSG-1蛋白的表达,发挥其潜在的抑制肿瘤细胞浸润转移的作用。     

白杨素对5- 氟尿嘧啶诱导人肝癌Bel-7402 细胞凋亡的增敏机制研究

目的 探讨白杨素对5- 氟尿嘧啶（5-FU）诱导肝癌Bel-7402 细胞凋亡的增敏作用。方法 白 杨素单独或联合5-FU 作用Bel-7402 细胞,用MTT 法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡与周期分 布变化;Western blotting 检测Bcl-2、Bax、Bad 及Cleaved Caspase-3 蛋白。结果 50 ～ 250μmol/L 白杨 素作用Bel-7402 细胞48 h 呈浓度依赖性的抑制细胞活力,且100μmol/L 白杨素组细胞存活率为（82.261± 7.793）%。100μmol/L 白杨素单独作用24 h 对Bel-7402 细胞活力和凋亡均无影响（P >0.05）。与空白对照 组比较,100μmol/L 白杨素作用24 h 后,不同浓度5-FU（12.5、25.0 及50.0μg/ml）作用48 h 对Bel-7402 细胞活力的抑制作用增强（P <0.05）;25.0μg/ml 5-FU 诱导Bel-7402 细胞凋亡率增加（P <0.05）;G2/M 期 细胞比例升高（P <0.05）;促凋亡蛋白Bax、Bad 及Cleaved Caspase-3 蛋白表达水平上调（P <0.05）;抗凋亡 蛋白Bcl-2 表达水平下调（P <0.05）。结论 白杨素增强5-FU 诱导人肝癌Bel-7402 细胞凋亡,其机制可能 与线粒体凋亡通路激活有关。     

原苏木素B抗结肠癌细胞的作用及机制

目的：研究原苏木素B(PSB)对人结肠癌SW620、SW480细胞的增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响，并探讨其抗结肠癌细胞的作用及机制。方法：实验1:将SW620、SW480细胞各分为7组，分别为对照组(不加药物经DMSO处理)和PSB-1～PSB-6组(分别给予6.25μg/ml、12.50μg/ml、25.00μg/ml、50.00μg/ml、100.00μg/ml和200.00μg/ml PSB),并分别处理24 h、48 h、72 h和96 h。实验2:将结肠癌SW620、SW480细胞各分为4组：对照组(不加药物经DMSO处理)、PSB-7～PSB-9组(分别给予17.5μg/ml、35.0μg/ml和70.0μg/ml PSB处理24 h);另外SW620细胞中又分为实验1组(25.0 ng/ml IGF-1处理24 h)、实验2组(25.0 ng/ml IGF-1+35.0μg/ml PSB处理24 h)、实验3组(1μmol/L AZD2858处理24 h)和实验4组(1μmol/L AZD2858+35.0μg/ml PSB处理24 h)。检测SW620、SW480细胞增...     

鸦胆子油乳抗人胃腺癌增殖作用的初步研究

目的 研究鸦胆子油乳对人胃腺癌细胞的增殖抑制作用。方法 采用体外药物敏感试验和流式细胞仪技术检测鸦胆子油乳对SGC－7901细胞增殖周期影响及诱导凋亡作用。结果 鸦胆子油乳体外具有明显的抑制SGC－7901增殖的作用。与对照组相比,鸦胆子油乳2μg/ml分别孵育SGC-7901细胞24h和36h后,细胞周期被阻滞于DNA合成期（S期）。流式细胞仪检测未见明显的亚二倍体峰,鸦胆子油 同浓度、不同孵育时间诱导细胞凋亡的作用无显著差异（P＞0.05）。结论 鸦胆子油乳在体外能有效抑制SGC－7901细胞的增殖,初步研究表明其主要通过阻滞细胞周期于S期而不是通过诱导凋亡来抑制SGC－7901细胞的增殖。