玻璃体内注射Infliximab治疗大鼠葡萄膜炎的实验研究

目的 观察玻璃体内注射Infliximab治疗大鼠葡萄膜炎的效果.方法 Wistar大鼠60只,随机分为A、B、C3组,每组20只.A、B两组大鼠左眼玻璃体内注射牛血清蛋白诱导建立葡萄膜炎模型,C组不造模.造模成功后A组大鼠玻璃体内注射10 g·L-1 Infliximab 0.1 mL,B、C组注射生理盐水0.1mL.于造模前及造模成功后7d、14 d、21 d行大鼠活体眼部检查,并抽取房水,ELISA法检测房水中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)的含量,同时摘取眼球行组织病理学观察.结果 造模前,各组大鼠房水中TNF-α和IL-2含量差异均无统计学意义(均为P＞0.05);造模后7d,A组和B组大鼠房水中TNF-α和IL-2含量差异均无统计学意义(均为P＞0.05),但均较C组高(均为P＜0.05).造模后14d、21 d,A组大鼠房水中TNF-α含量为(331.49±74.40)ng·L-1、(164.59±69.49) ng·L-1,B组为(589.15±113.45) ng·L-1、(347.48±84.38)ng·L-1,两组相比差异均有显著统计学意义(均为P＜0.01);A组大鼠房水中IL-2含量为(35.74±14.87)ng·L-1、(31.58±16.94)ng· L-1,B组分别为(74.16±18.04)ng·L-1、(69.48±20.73)ng· L-1,两组相比差异亦均有统计学意义(均为P＜0.01).造模后21 d,A组炎症反应较B组明显减轻.结论 Infliximab能显著抑制葡萄膜炎大鼠模型房水中TNF-α、IL-2的产生,减轻大鼠眼部炎症反应和病理损害,对葡萄膜炎有较明显治疗效果.     

玻璃体内注射Infliximab对实验性自身免疫性葡萄膜炎的治疗作用

目的观察玻璃体内注射Infliximab对实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)的治疗作用。方法雌性新西兰大白兔32只,随机分为3组,其中模型对照组和正常对照组各8只,治疗组16只。模型对照组和治疗组用牛血清蛋白作为异体抗原,玻璃体内、耳缘静脉两次注射法诱导EAU模型(双眼均造模)。造模成功后次日,各组分别行玻璃体内注射1次,正常对照组和模型对照组注射生理盐水0.1mL,治疗组注射10g·L-1Infliximab0.1mL。于造模前及造模后5d、10d、15d4个时间点行兔活体眼部检查,并抽取房水行ELISA法检测房水中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)和白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)的含量;各时间点摘除双侧眼球行组织病理学观察。结果造模前,各组房水中TNF-α和IL-2含量比较差异均无统计学意义。造模后5d,模型对照组和治疗组房水中TNF-α和IL-2含量差异均无统计学意义(均为P>0.05),但均较正常对照组高(均为P<0.05)。造模后10d、15d,模型对照组房水中TNF-α分别为(652.29±102.76)ng·L-1、(372.63±47.59)ng·L-1,治疗组分别为(395.88±48.97)ng·L-1、(140.44±41.69)ng·L-1,两组相比差异均有统计学意义(均为P=0.00);模型对照组房水中IL-2分别为(85.55±7.74)ng·L-1、(64.10±7.78)ng·L-1,治疗组分别为(40.89±8.81)ng·L-1、(26.48±7.71)ng·L-1,两组相比差异亦均有统计学意义(均为P=0.00)。造模后10d,治疗组的组织病理学显示炎症较模型对照组有明显减轻。正常对照组始终无阳性体征和病理改变。结论 Infliximab能显著抑制牛血清蛋白诱导的EAU模型房水中TNF-α、IL-2的产生,减轻EAU眼部炎症反应和病理损害,对EAU有治疗作用。     

^99Tc—MDP对兔实验性葡萄膜炎的治疗作用

目的探讨^99锝-亚甲基二膦酸盐（^99Tc-MDP,云克）对兔实验性葡萄膜炎的治疗作用。方法实验兔22只随机分为生理盐水组、地塞米松组、云克组。ELISA法测定实验性葡萄膜炎兔动物模型造模前、造模后5d、给药治疗后10d、停药后5d、4个不同阶段白细胞介素（IL-2）、干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子（TNF-α）的血清质量浓度;浊度法及细胞技术池测定不同治疗阶段房水蛋白及房水细胞计数,于不同阶段摘除眼球行组织病理学观察。结果与生理盐水组比较,地塞米松组及云克组均可使兔血清IL-2、IFN-γ、TNF—α水平和房水细胞计数、房水蛋白质量浓度降低,差异均有统计学意义（P〈0．05）,地塞米松组与云克组2组间差异无统计学意义（P〉0．05）。地塞米松组及云克组在治疗后眼球的组织病理学显示炎症较治疗前减轻。结论云克在一定程度上有降低兔实验性葡萄膜炎血清IL-2、IFN-γ、TNF-α质量浓度及房水细胞计数、房水蛋白质量浓度以及减轻眼球炎症的作用。     

外伤性眼内炎兔房水中细胞因子的表达

目的分析干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)在兔眼外伤后不同时间房水中的浓度变化,探讨眼内炎的发病机制。方法将18只实验兔随机分为3组,每组6只兔。Ⅰ组为正常对照组,Ⅱ组和Ⅲ组右眼建立外伤性眼内炎模型,并将金黄色葡萄球菌接种于Ⅲ组受伤眼的玻璃体内。ELISA法测定造模前及造模后6h、12h、24h、48h、96h房水中IFN-γ、IL-6、IL-8、TGF-β的浓度;于6h、12h、24h、48h、96h、8d、16d分别用裂隙灯及间接显微镜观察眼部炎症情况并评分。结果造模后Ⅱ组炎症反应明显较Ⅲ组轻,造模12h后两组各时间点临床炎症评分间差异均有统计学意义(均为P<0.05)。Ⅱ组和Ⅲ组兔房水中IFN-γ在造模后均升高,24h时达到高峰,分别为(516.45±20.80)ng.L-1、(508.21±31.45)ng.L-1,与造模前(337.15±17.25)ng.L-1相比差异均有统计学意义(均为P<0.05);造模后24hIL-6在Ⅱ组和Ⅲ组兔房水中的浓度即达到高峰,分别为(61.69±2.11)ng.L-1、(61.81±2.18)ng.L-1,与造模前(46.34±2.09)ng.L-1相比差异均有统计学意义(均为P<0.05);Ⅱ组和Ⅲ组兔房水中IL-8在造模后48h浓度达到高峰,分别为(66.78±2.00)ng.L-1、(64.94±3.39)ng.L-1,与造模前(44.50±1.40)ng.L-1相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。造模后24hTGF-β在Ⅱ组和Ⅲ组兔房水中的浓度最低,分别为(288.79±7.17)ng.L-1、(293.99±1.93)ng.L-1,与造模前(404.45±2.86)ng.L-1相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论外伤性眼内炎导致机体免疫系统破坏,房水中细胞因子表达发生变化,因此在眼内炎的早期,应联合采取免疫干预措施来控制炎症反应。     

外伤性兔眼内炎房水中肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β及中性粒细胞趋化因子-1的相对含量变化及意义

目的 通过分析兔眼外伤后不同时间点房水中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、中性粒细胞趋化因子-1(cytokine induced neutrophil chemoattractant-1,CINC-1)含量的动态变化,探讨促炎细胞因子在外伤性眼内炎中的作用机制.方法 将18只兔随机分为3组,每组6只,其中Ⅰ组为正常对照组,Ⅱ组为无菌外伤组,Ⅲ组为有菌(金黄色葡萄球菌)外伤组.Ⅱ组和Ⅲ组兔右眼建立外伤性眼内炎模型,并将金黄色葡萄球菌接种于Ⅲ组兔右眼的玻璃体内.于造模后6h、12 h、1d、2d、4d、5d、7d、14 d用裂隙灯及间接检眼镜观察眼部炎症情况并进行临床炎症评分.ELISA法测定各组造模后6h、12 h、1d、2d、4d、5d房水中TNF-α、IL-1β、CINC-1的含量变化.结果 造模后12 h、1d、2d、4d、5d、7d、14 d,Ⅱ组各时间点临床炎症评分分别为(2.50±0.55)分、(3.67±0.82)分、(4.00±0.63)分、(6.12±0.75)分、(7.00±0.63)分、(7.33±0.52)分、(5.50±0.54)分,Ⅲ组分别为(4.00 ±0.63)分、(6.17±0.75)分、(7.67±0.52)分、(10.60±0.82)分、(11.50±0.55)分、(11.80±0.41)分、(10.33±0.51)分,两组各时间点临床炎症评分间差异均有统计学意义(均为P＜0.05),造模12 h后Ⅲ组炎症反应明显较Ⅱ组重.Ⅱ组和Ⅲ组兔房水中TNF-α在炎症初期就开始升高,1d时达到高峰,与Ⅰ组相比差异均有统计学意义(均为P＜0.05).Ⅱ组和Ⅲ组兔房水中IL-1β含量于造模后1d时达到高峰,与Ⅰ组相比差异均有统计学意义(均为P＜0.05).Ⅱ组和Ⅲ组兔房水中CINC-1含量在造模后12 h时即达到高峰,与Ⅰ组相比差异均有统计学意义(均为P＜0.05).Ⅱ组和Ⅲ组兔房水中TNF-α、IL-1β、CINC-1各时间点相比差异均无统计学意义(均为P＞0.05).结论 外伤后机体的免疫调节机制在外伤性眼内炎发生发展过程中发挥重要作用,房水中TNF-α、IL-1β、CINC-1表达升高与炎症程度相关,调控细胞因子网络可能成为未来眼内炎一个有效的联合治疗措施.     

双眼慢性原发性闭角型青光眼术前房水中炎症因子的表达及其对预后的影响

目的:探讨慢性原发性闭角型青光眼(CPACG)双眼先后行小梁切除术前房水中炎症因子的表达水平及其与术后滤过泡和眼压的相关性。方法:选取2021-09/12在南京医科大学附属眼科医院就诊并行小梁切除术的双眼CPACG患者15例30眼,双眼手术间隔7d,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测双眼术前房水中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-17(IL-17)、转化生长因子-β(TGF-β)和干扰素-γ(IFN-γ)的表达水平,并于术后1mo评估眼压及滤过泡形态。结果:纳入患者第一眼术前房水中MCP-1、IL-17、TGF-β和IFN-γ的含量分别为330.4±46.2、357.3±46.9、2347.5±363.8、527.7±101.6pg/mL,第二眼术前房水中MCP-1、IL-17、TGF-β和IFN-γ的含量分别为298.2±40.7、309.1±53.5、1938.3±426.0、628.2±104.9pg/mL,双眼术前房水中炎症因子表达水平均有差异(P≤0.05)。纳入患者双眼术前房水中IL-17、TGF-β表达水平与术后1mo眼压、滤过泡高度均具有相关性(P...     

HLA-B27阳性急性前葡萄膜炎患者前房水细胞因子水平的研究

目的通过分析HLA-B27阳性急性前葡萄膜炎患者前房水中细胞因子的浓度,探讨急性前葡萄膜炎的发病机制。方法采用非随机对照临床观察型病例研究,选取2008年10月至2009年3月在我院眼科就诊的HLA-B27阳性前葡萄膜炎患者21例(21眼)为患病组,并选取同期住院行白内障手术的患者19例(19眼)为正常对照组。将所有入选病例通过酶联免疫技术测量前房水中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素-10的浓度,并进行组间比较。结果TNF-α在患病组患者前房水中的浓度平均为(29.1±13.9)pg.L-1,而在正常对照组患者则为(19.8±7.2)pg.L-1,2组相比差异有统计学意义(P=0.011)。IFN-γ在患病组患者前房水中的浓度平均为(36.6±27.5)pg.L-1,而在正常对照组患者则为(14.6±12.9)pg.L-1,2组相比差异有统计学意义(P=0.003)。白细胞介素-10在患病组患者前房水中的浓度平均为(2.4±2.7)pg.L-1,而在正常对照组患者则为(3.3±3.9)pg.L-1,2...     

细胞因子在内毒素诱导的前葡萄膜炎小鼠房水和血清中的表达

目的 通过分析内毒素诱导的C3H/HeN小鼠的前葡萄膜炎模型中房水和血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1、IL-6、IL-10、干扰素-y(interferon-γ,IFN-γ)的浓度,探讨急性前葡萄膜炎可能的发病机制.方法 取180只C3H/HeN小鼠,分为对照组(n-30)和实验组(n=150),将霍乱弧菌内毒素(18 001株,古典生物型,小川血清型)溶于无菌生理盐水中,终浓度为2×103g·L-1,实验组小鼠足底注射100μL制作内毒素诱导的前葡萄膜炎模型;对照组注射等量生理盐水.于诱导后4 h、8 h、16 h、24 h、48 h断颈处死实验组小鼠(各30只).以10只小鼠为一单样本,微量进样器抽取前房水;眼球摘除后微量进样器于眼窝处取外周血.对照组于注射生理盐水后即刻处死小鼠,样本收集方法同实验组.微球流式技术栓测小鼠房水及血清中TNF-α、IL-1、IL-6、IL-10、IFN-γ的浓度.结果 所有实验组小鼠均成功诱导出急性前葡萄膜炎.在小鼠房水中,TNF-α于4 h达峰值,与对照组相比差异有统计学意义(P=0.002);4 h、8 h、16 h及24 h时,在房水和血清内的浓度差异均无统计学意义(均为P＞0.05).IL-1、IL-6在血清中均于16 h达峰值,与对照组相比差异均有统计学(P=0.001、0.000);且诱导后各时间点在房水内的浓度均高于血清.IL-10在房水中于24 h达峰值,与对照组相比差异有统计学意义(P=0.003),与相同时间点血清内的浓度相比差异亦有统计学意义(P=0.003).IFN-γ于4 h、24 h在房水和血清中的表达差异有统计学意义(P=0.033、0.032).各细胞因子在房水中的表达变化基本与炎症进程相符.结论 细胞因子在眼内炎症发生过程中起着重要作用,网络调控将成为治疗方向.     

角膜内皮细胞稳定表达转化生长因子-β1对小鼠脾脏淋巴细胞细胞因子表达的调控

目的探讨转化生长因子-β1(tromsforming growth factor-β1,TGF-β1)基因转染角膜内皮细胞后表达产物对小鼠脾脏淋巴细胞细胞因子表达的调控作用。方法利用脂质体介导法将TGF-β1基因转染入培养的兔角膜内皮细胞中,并用药物筛选抗性细胞克隆。用免疫组化法检测外源基因的稳定表达。ELISA法检测转染细胞培养上清中TGF-β1表达量,用RT-PCR检测小鼠脾脏淋巴细胞IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-6mRNA的表达。结果免疫组化染色显示基因转染后筛选出的克隆细胞TGF-β1蛋白表达均为阳性,胞浆呈棕色着色。转染细胞培养上清中TGF-β1的表达量为(597±7)pg/ml,高于对照组。基因转染组淋巴细胞IL-2、IFN-γ、TNF-αmRNA的表达量明显低于正常对照组(P<0.05);IL-4、IL-6mRNA的表达量明显高于正常对照组(P<0.05)。结论TGF-β1基因转染角膜内皮细胞后高表达TGF-β1,致使淋巴细胞发生免疫偏离,作为组织工程角膜种子细胞移植后具有抑制角膜移植免疫排斥反应的潜在可能性。     

新鲜羊膜移植对兔角膜碱烧伤房水中TNF-α的影响

目的探讨肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)在兔角膜碱烧伤新鲜羊膜移植术(amnioticmembranetransplantation,AMT)后不同时期房水中的表达状况。方法将24只新西兰白兔双眼碱烧伤,并于24h内右眼行人新鲜AMT,左眼滴氯霉素滴眼液(2次·d-1)作为对照眼,分别于术后3d、7d、14d、28d观察双眼眼内炎症反应,包括房水细胞计数和TNF-α含量的测定。结果7d、28dAMT眼房水细胞数量分别为(12.9±6.8)×106·L-1、(2.9±3.7)×106·L-1,明显低于对照眼[(21.7±6.6)×106·L-1、(16.3±8.8)×106·L-1](P<0.05),2组之间有显著差异;术后AMT眼TNF-α浓度随时间的延长而降低,而对照眼TNF-α浓度则保持较高水平,所有时间点AMT眼TNF-α浓度与对照眼对比差异均有显著意义(P<0.05)。结论角膜碱烧伤后早期实施新鲜AMT能有效控制眼内炎症反应。     

^99Tc-亚甲基二磷酸盐对细胞因子刺激后人球后成纤维细胞增生的影响

背景Graves眼病是一种器官特异性自身免疫性疾病。研究表明,^99Tc-亚甲基二磷酸盐（^99Tc-MDP）在治疗Graves眼病方面有一定的疗效,但其机制尚不明了。目的观察^99Tc-MDP对细胞因子刺激后Graves眼病患者球后成纤维细胞（RFs）增生、合成透明质酸和表达人类白细胞DR抗原（HLA—DR）、细胞间黏附分子1（ICAM-1）的影响。方法球后结缔组织取自严重Graves眼病行球后减压术的女性患者2例,用组织块培养法在含质量分数20％胎牛血清（FBS）的DMEM培养液中培养RFs并进行传代,取2～7代细胞用于实验。分别将干扰素γ（IFN-γ）、白细胞介素1（IL-1）、肿瘤坏死因子α（TNF—α）以及不同质量浓度的^99Tc—MDP加入不同组的细胞培养液中孵育后,利用。H—TdR掺人法检测^99Tc—MDP对RFs增生的影响,采用放射免疫法检测培养细胞合成透明质酸的情况,用流式细胞仪检测HLA—DR、ICAM-1的表达。结果培养的细胞呈成纤维原细胞型,波形蛋白染色阳性,细胞角蛋白染色呈阴性。TNF—α、IFN-γ和IL-1作用后,培养的RFs增生值、透明质酸值、RFs中HLA—DR表达率及ICAM-1表达率分别为（4918．33±297．91）cpm、（505．83±41．29）mg／L、（56．88±14．67）％和（63．57±14．11）％,均明显高于正常对照组,差异均有统计学意义（P〈0．01）,培养基中分别加入〉100mg／L ^99Tc—MDP后,RFs增生值、透明质酸值、RFs中HLA-DR表达率及ICMA-1表达率均明显低于TNF—α、IFN-γ、IL-1单独作用组,差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论^99Tc—MDP能够以剂量依赖的方式抑制体外培养的人RFs的增生。     

Toll样受体4对HLA-B27相关前葡萄膜炎患者外周血单个核细胞分泌细胞因子的影响

目的通过对比正常人与HLA-B27相关前葡萄膜炎恢复期患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)受脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激及抗Toll样受体4(Toll like receptor4,TLR4)抗体(HTA125)干预后分泌细胞因子的变化,探讨TLR4在HLA-B27相关前葡萄膜炎发病机制中的作用。方法选取HLA-B27阳性前葡萄膜炎恢复期患者10例,相同性别及年龄段的HLA-B27阴性正常人10例作为对照。抽取研究对象外周血分为以下5组体外培养PBMC:(1)正常人非LPS刺激组:加入终浓度为1mg·L-1的PBS进行培养;(2)正常人LPS刺激组:加入终浓度为1mg·L-1的LPS进行培养;(3)HLA-B27阳性患者非LPS刺激组:加入终浓度为1mg·L-1的PBS进行培养;(4)HLA-B27阳性患者LPS刺激组:加入终浓度为1mg·L-1的LPS进行培养;(5)HLA-B27阳性患者LPS+HTA125干预组:终浓度为5mg·L-1的HTA125预先干预PBMC 30 min后再加入1mg·L-1的LPS共同培养。分别于培养4h、8h、12h、24h后,利用ELISA法测定细胞培养上清液中的TNF-a、IL-10和(4)(5)组中IL-6的浓度。结果 LPS未刺激组,PBMC培养4h、8h、12h、24h后,HLA-B27阳性患者TNF-α浓度分别为(1329.46±155.09)ng·L-1、(1926.76±163.28)ng·L-1、(1424.61±141.63)ng·L-1、(526.98±112.29)ng·L-1,正常人分别为(562.83±106.45)ng·L-1、(839.57±73.98)ng·L-1、(559.60±88.48)ng·L-1、(200.81±51.39)ng·L-1,两组各时间点相比差异均有统计学意义(均为P<0.05);HLA-B27阳性患者PBMC培养8h、12h、24h后,IL-10浓度分别为(145.51±26.91)ng·L-1、(259.16±32.71)ng·L-1、(435.98±134.54)ng·L-1,正常人分别为(63.57±17.28)ng·L-1、(123.21±15.73)ng·L-1、(247.82±32.10)ng·L-1,两组各时间点相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。LPS刺激后,正常人与HLA-B27阳性患者PBMC分泌TNF-α和IL-10水平在各时间点均比LPS刺激前明显升高,且HLA-B27阳性患者升高更明显。HLA-B27阳性患者PBMC在LPS刺激后与LPS+HTA125干预组相比,后者各时间点分泌TNF-α、IL-10的水平均显著降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05),且HTA125干预组IL-6浓度在4h、8h时较单纯LPS刺激组低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 HLA-B27阳性患者PBMC对LPS的刺激更加敏感,抗TLR4单克隆抗体能够抑制HLA-B27阳性患者PBMC分泌细胞因子的水平。     

恒河猴血管内皮细胞移植替代角膜内皮细胞后房水血管内皮生长因子水平的变化

目的探索恒河猴血管内皮细胞移植替代角膜内皮细胞后房水血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)浓度的变化。方法实验组将体外培养增殖的恒河猴视网膜-脉络膜血管内皮细胞通过离心沉淀法移植到撕除后弹力层的恒河猴角膜内表面;对照组撕除角膜内皮层后,不做任何处理,直接原位缝合角膜植片。分别于术前及术后1周、2周、3周、4周、6周、8周、12周抽取房水,通过ELISA方法检测其中VEGF浓度,并进行统计分析。结果实验组和对照组术后1周时VEGF浓度差异无统计学意义(P>0.05),术后2周、3周、4周时实验组VEGF浓度分别为(374.74±3.30)ng·L-1、(419.06±1.39)ng·L-1、(481.83±3.36)ng·L-1,同时间点对照组分别为(271.11±1.12)ng·L-1、(345.18±3.27)ng·L-1、(380.33±5.03)ng·L-1,差异均具有统计学意义(均为P<0.05),相应时间点实验组显著高于对照组。实验组术后1周、2周、3周、4周VEGF浓度的差异均有统计学意义(均为P<0.05),各时间点与术前(128.75±3.83)ng·L-1差异均有统计学意义(均为P<0.05)。对照组术后各时间点VEGF浓度与术前差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论血管内皮细胞移植到角膜内表面后,房水VEGF浓度在术后4周内持续升高,之后稳定在一较高水平。     

整合素β1介导的ERK/MAPK通道在人晶状体上皮细胞转分化中的作用

目的研究转化生长因子-β2(transforming growth factor β2,TGF-β2)对培养的人氉晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)整合素β1、磷酸化ERK(pERK)及F-actin表达的影响,探讨整合素β1介导的ERK/MAPK通路在HLEC转分化中的作用。方法体外培养的HLEC,加入不同浓度(0ng·L-1和10ng·L-1、33ng·L-1、100ng·L-1、333ng·L-1、1000ng·L-1)的TGF-β2处理不同时间(12h、24h、48h、72h),采用MTT法测定TGF-β2对HLEC增殖的影响,并确定最佳干涉浓度和时间用于后续实验。实验分2组,实验组用含最佳干涉浓度TGF-β2的培养基培养HLEC,对照组使用无血清培养基培养,于最佳干涉时间对2组细胞行免疫细胞化学染色检测HLEC中整合素β1、pERK及F-actin的表达,RT-PCR检测整合素β1、pERK及F-actin mRNA的表达。结果 TGF-β2抑制HLEC的增殖,呈浓度和时间依赖性,TGF-β2的最佳干涉终浓度为100ng·L-1,作用48h后达到最大抑制效果。TGF-β2增加HLEC整合素β1、pERK及F-actin的表达,相对表达量分别为0.116±0.031、0.123±0.028、0.140±0.033,均较对照组(0.045±0.011、0.025±0.009、0.079±0.024)明显升高(均为P<0.01)。RT-PCR结果显示,TGF-β2明显促进整合素β1mR-NA、pERK mRNA及F-actin mRNA的表达,相对表达量分别为0.658±0.146、0.582±0.171、0.760±0.193,较对照组(0.246±0.051、0.338±0.092、0.138±0.027)明显升高(均为P<0.01)。结论 TGF-β2抑制了HLEC的增殖,促进整合素β1、pERK及F-actin的表达,整合素β1介导的ERK/MAPK信号通路可能参与了HLEC转分化过程,导致后囊膜混浊。     

兔眼超声乳化吸出术后非手术眼房水及血清中TNF-α、IL-1β表达变化与该眼角膜知觉敏感度变化之间的关系

目的　探讨超声乳化吸出术后不同时间点兔非手术眼房水及血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）表达变化与该眼角膜知觉敏感度变化之间的关系。方法　选取健康成年新西兰大白兔40只作为实验对象。采用随机数字表法将大白兔分为实验组与空白对照组,实验组25只,空白对照组15只。实验组:一眼行晶状体超声乳化吸出术,根据术后取材时间分为术后1 d、3 d、7 d、14 d、21 d共5组,每组5只动物。空白对照组:按照对应取材时间也分为5组,每组3只动物。术后观察并记录各组兔双眼的结膜充血、角膜混浊及前房炎症反应情况。实时定量PCR检测各组兔血清TNF-α mRNA和IL-1β mRNA表达水平,ELISA法检测房水中TNF-α、IL-1β蛋白浓度,角膜知觉计测量角膜知觉敏感度。结果　实验组非手术眼与空白对照组双眼在不同时间点,结膜充血、角膜混浊及前房炎症反应级别均为0级。术后1 d、3 d、7 d、14 d,实验组兔血清TNF-α mRNA和IL-1β mRNA表达水平均较基线值升高,术后7 d达高峰（TNF-α mRNA相对表达量为14.95±0.89,IL-1β mRNA相对表达量为7.56±>0.46）,之后逐渐下降,术后21 d降至术前水平。实验组各相邻取材时间点两两比较,血清TNF-α mRNA和IL-1β mRNA表达水平差异均有统计学意义(均为P<0.05)。术后1 d、3 d、7 d、14 d,非手术眼房水TNF-α和IL-1β蛋白浓度均较基线值升高,其中峰值出现于术后7 d［TNF-α蛋白浓度为（162.34±5.71） ng·L^-1,IL-1β蛋白浓度为（16.68±0.74）ng·L^-1］,之后逐渐下降,术后21 d降至术前水平。实验组相邻取材时间点两两比较,非手术眼房水TNF-α和IL-1β蛋白浓度差异均有统计学意义(均为P<0.05)。术后1 d、3 d、7 d、14 d,非手术眼角膜知觉敏感度较基线值升高,于术后7 d角膜知觉敏感度最高;之后角膜知觉敏感度逐渐下降,术后21 d基本恢复至基线水平。实验组非手术眼相邻时间点两两比较,角膜知觉敏感度差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　实验兔第一眼晶状体超声乳化吸出术后早期,非手术眼角膜知觉敏感度升高,该变化可能与该眼房水及血清中TNF-α和IL-1β表达的动态变化相关。     

短期高浓度葡萄糖摄入对小鼠实验性自身免疫性葡萄膜炎发展的作用

目的 探索短期高浓度葡萄糖摄入对小鼠实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)发展的促进作用.方法 选取健康SPF级6～8周龄小鼠38只,随机分为模型对照组(EAU组)和高糖模型组(GLU组),每组19只小鼠.GLU组小鼠从造模前14 d开始给予200 g·L-1葡萄糖溶液饮水直至处死,EAU组小鼠给予正常饮水,同时保证EAU...     

ResolvinE1对高危角膜移植免疫排斥反应的抑制作用

背景 以往防治角膜移植术后排斥反应的药物存在诱发局部或全身不良反应的风险,研究表明resolvinE1(RyE1)能够调节辅助性T细胞1(Th1)型免疫反应,但其对高危角膜移植术后的植片排斥反应有无抑制作用尚不清楚. 目的 观察高危角膜移植动物模型局部应用RvE1对植片免疫排斥反应的抑制作用.方法 以BALB/c小鼠为受体、C57BL/6小鼠为供体行角膜移植术.采用随机数字表法将90只BALB/c小鼠随机分成异体角膜移植组、异体角膜移植+RvE1组和自体角膜移植组,每组各30只.BALB/c小鼠右眼先用缝线法刺激2周以建立高危角膜移植眼模型,然后行穿透角膜移植术.异体角膜移植组和异体角膜移植+RvE1组小鼠右眼行异体角膜移植,自体角膜移植组小鼠将右眼角膜植片旋转180°后缝合于植床上.异体角膜移植组及自体角膜移植组小鼠术后每日用生理盐水10μl结膜下注射1次,异体角膜移植+RvE1组小鼠术后同法注射终质量浓度为0.1 μg/μl的RvE1 10μl,连续7d.术后裂隙灯显微镜下观察小鼠角膜植片反应并对其排斥反应进行评分.术后21 d处死各组小鼠各20只,收集小鼠术眼角膜、眼球和术眼侧颈部淋巴结,采用苏木精-伊红染色法观察各组小鼠角膜植片的组织病理学变化;采用免疫组织化学法检测术眼角膜中CD4及γ干扰素(IFN-γ)的表达;采用流式细胞术检测术眼侧颈部淋巴结淋巴细胞中Th1细胞(CD3+ CD8a-IFN-γ+)比例;采用荧光定量PCR法检测Th1细胞相关因子白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-c)、IFN-γ及T-bet mRNA的相对表达水平.结果 异体角膜移植+RvE1组小鼠角膜植片存活时间为(28.5±1.7)d,明显长于异体角膜移植组的(14.0±1.6)d,差异有统计学意义(t=4.14,P＜0.001),自体角膜移植组小鼠植片在术后50 d存活率为100％.苏木精-伊红染色显示,异体角膜移植+RvE1组和自体角膜移植组小鼠角膜植片水肿及炎性细胞浸润程度均轻于异体角膜移植组.免疫组织化学法检测显示,各组角膜全层均有CD4表达,而IFN-γ主要表达于角膜上皮层,异体角膜移植组小鼠角膜组织中CD4和IFN-γ阳性细胞数均明显多于异体角膜移植+RvE1组和自体角膜移植组.流式细胞术检测显示,异体角膜移植+RvE1组和自体角膜移植组小鼠淋巴细胞中Th1细胞比例分别为(1.07±0.25)％和(0.85±0.12)％,明显低于异体角膜移植组的(1.56±0.20)％,差异均有统计学意义(均P＜0.05).荧光定量PCR检测显示,异体角膜移植组小鼠角膜中IL-2、TNF-α、IFN-γ及T-bet mRNA的相对表达量明显高于异体角膜移植+RvE1组和自体角膜移植组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 RvE1可抑制小鼠高危角膜移植排斥反应,作用机制可能与其下调角膜植片和淋巴细胞中Th1细胞及相关细胞因子的表达有关.