血小板源性生长因子与肾小球硬化的关系

血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)最初是在血小板的α颗粒中发现的,具有强烈的促有丝分裂和细胞趋化作用,广泛表达于多种肾脏疾病当中.近来研究表明,PDGF 可以通过促进系膜细胞和成纤维的增殖、促进系膜细胞转分化以及细胞外基质(extracellular matrix,ECM)积聚,还通过趋化巨噬细胞浸润和其他细胞因子,进一步加重上述损伤,参与肾小球硬化的发展.现就 PDGF 与肾小球硬化的关系作一综述.     

鸦胆子乙醇提取物对血小板源性生长因子受体介导细胞迁移的抑制作用

目的：观察鸦胆子乙醇提取物对血小板源性生长因子受体β（PDGFRβ）介导细胞迁移的影响,阐明其起作用的有效成分。方法：用脂质体介导的细胞转染技术将人PDGFRβ 表达载体转染体外培养的不表达PDGFRβ的PAE细胞,G418抗性筛选建立稳定转染的细胞株,采用RT-PCR法检测PDGFRβ的表达;用细胞损伤修复实验观察细胞损伤24 h完全修复所需的血小板源性生长因子BB（PDGFBB）最低浓度;划痕实验观察加入不同浓度鸦胆子乙醇提取物24 h后,计算细胞迁移的抑制率及鸦胆子发挥抑制作用的主要成分溶于乙醇溶液的浓度。结果：RT-PCR检测转染组细胞表达PDGFRβ;细胞损伤修复实验检测细胞损伤24 h完全修复所需的血小板源性生长因子BB（PDGFBB）最低浓度为10  μg·L^-1;划痕实验检测随着鸦胆子乙醇提取物（70%乙醇溶液）浓度的增加,对细胞迁移的抑制率增加（P<0.05）,呈剂量效应关系;50%乙醇提取物和25%乙醇提取物（浓度≤10  μg·L^-1）对细胞迁移抑制不明显,鸦胆子乙醇提取物浓度>10  μg·L^-1主要导致细胞死亡。结论：鸦胆子抗肿瘤作用机制可能是通过抑制 PDGFRβ 介导的细胞迁移来实现的,其发挥作用的主要成分更易溶于70%的乙醇溶液中。     

牛磺酸抑制血小板衍生生长因子诱导的系膜细胞增殖及细胞外基质分泌

目的：观察牛磺酸对血小板衍生生长因子（PDGF）诱导的系膜细胞增殖及细胞外基质分泌的影响，并探讨其作用的可能机制。方法：体外传代培养的大鼠系膜细胞，经一定量的牛磺酸和（或）PDGF作用48h后，用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期，ELISA检测细胞外基质（Ⅳ型胶原及层粘连蛋白）含量，免疫细胞化学方法检测C－jun,C-fos的表达。结果：与对照组比较，10，20ng/ml PDGF可明显促进系膜细胞增殖，影响细胞周期，使G0－G1期细胞减少，S期细胞增加，并能明显促进细胞外基质的分泌及C-jun,C-fos的表达（P＜0．01），而20或40mmol/L牛磺酸作用于系膜细胞后，可明显抑制PDGF（20ng/ml)诱导的细胞增殖，细胞外基质分泌及C-jun,C-fos的表达。结论：牛磺酸对PDGF诱导的系膜细胞增殖及细胞外基质分泌有显著抑制作用，其机制可能与牛磺酸抑制C-jun,C-fos表达有关。     

氯沙坦对血管损伤后再狭窄大鼠血浆内皮素含量及动脉平滑肌细胞中血小板源生长因子表达的影响

目的观察氯沙坦对颈总动脉损伤后再狭窄大鼠血浆内皮素(ET)和颈总动脉平滑肌细胞(SMC)中血小板衍生生长因子(PDGF)表达的影响。方法采用大鼠颈总动脉挤压术制备再狭窄模型,设假手术组、手术组和氯沙坦组,每组10只。观察颈总动脉形态学变化,放射免疫法测定血浆ET含量,免疫组织化学法观察颈总动脉PDGF-B的表达。结果假手术组颈总动脉各层结构正常、清晰,无明显血管平滑肌细胞增殖;手术组大鼠颈总动脉SMC大量增殖,内膜显著增厚;氯沙坦组SMC增殖程度降低。与假手术组比较,手术组大鼠血浆ET含量显著升高(P<0.01),颈总动脉SMC中PDGF-B表达显著增强(P<0.01);与手术组比较,氯沙坦组大鼠血浆ET含量与PDGF-B表达显著下降(P<0.05)。结论ET、PDGF参与血管再狭窄的形成,氯沙坦可通过降低ET含量与PDGF-B表达实现抗再狭窄的作用。     

ERK通路抑制剂对PDGF-BB诱导的大鼠系膜细胞细胞外基质合成的影响

目的:探讨ERK通路在血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导的大鼠肾小球系膜细胞细胞外基质(ECM)合成中的作用.方法:将体外培养大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)分为7组:对照组;PDGF-BB刺激组(终浓度分别为10、25和50 ng/ml);PDGF-BB和ERK通路抑制剂UO126共刺激组(PDGF-BB 25ng/ml UO126 5 μmol/ml,PDGF-BB 25 ng/ml UO126 10 μmol/ml);UO126 10 μmol/ml刺激组.应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)和纤连蛋白(FN)mRNA的相对表达量.结果:PDGF-BB能剂量依赖性的上调 PAI-1和FN mRNA的表达(P＜0.05),同时下调MMP-2 mRNA的表达(P＜0.05).U0126则呈剂量依赖性地抑制PDGF-BB诱导的肾小球系膜细胞PAI-1和FN mRNA的表达(P＜0.05),促进MMP-2 mRNA的表达(P＜0.05).结论:PDGF-BB可能通过ERK通路作用于大鼠肾小球系膜细胞,抑制细胞外基质的降解,促进其FN的合成,从而参与肾小球硬化的过程.     

血小板源性生长因子诱导大鼠心脏成纤维细胞胶原合成的信号转导途径研究

①目的探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)途径在血小板源性生长因子(PDGF)刺激大鼠心脏成纤维细胞胶原合成中的作用。②方法分离培养新生大鼠心脏成纤维细胞。免疫细胞化学法、Western blot法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的变化。③结果与对照组相比,在PDGF刺激下,大鼠心脏成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达增加,PD98059 25μmol/L预孵育1小时能够抑制PDGF的刺激作用。④结论PDGF能够通过ERK1/2途径调节大鼠心脏成纤维细胞的胶原合成。     

血小板源性生长因子在狼疮性肾炎患者肾小球中的表达

目的 探讨血小板源性生长因子(Platelet—derived growth factor，PDGF)在狼疮性肾炎(LN)肾小球病理改变中的作用。方法 选择18例狼疮患者肾组织与6例正常肾组织，应用免疫组织化学方法检测血小板源性生长因子BB亚型(PDGF—BB)在肾小球中的表达。结果 LN患者肾小球PDGF—BB表达绝对量和相对量均较正常组显著增高(P＜0．001)；不同病理类型LN肾小球PDGF—BB表达量不同，以Ⅳ型LN为最高，总体上增殖型LN肾小球PDGF—BB表达量高于非增殖型狼疮肾炎患者(P＜0．001)；LN患者肾小球PDGF—BB表达绝对量和相对量均与肾小球细胞数呈正相关(P＜0．001)。结论 PDGF在LN的细胞增生和炎症浸润过程中发挥一定作用，可能是造成不同LN病理类型的中间因素之一。     

姜黄素对血小板衍生生长因子诱导活化的肝星状细胞细胞外基质的影响

目的 研究姜黄素对血小板衍生生长因子（PDGF）诱导活化的肝星状细胞细胞外基质沉积的干预机制。方法 以Western blotting和RT-PCR方法分别检测姜黄素对PDGF诱导活化的肝星状细胞中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、细胞外基质主要成分I型前胶原（α1I胶原）和纤黏蛋白的表达,以及对调控细胞外基质降解平衡的基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9与其组织抑制剂（TIMP-1）蛋白与mRNA表达的影响。结果 姜黄素可显著下调α-SMA、α1I胶原和纤黏蛋白的蛋白与mRNA表达,减少细胞外基质的沉积;还可调节细胞外基质的降解平衡,表现为TIMP-1表达下调和MMP-2的表达上调。结论 姜黄素能够抑制PDGF诱导的肝星状细胞合成与分泌细胞外基质增加,促进细胞外基质降解,减少细胞外基质在肝脏中的沉积,进而发挥治疗肝纤维化的作用。     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏转化生长因子β1及细胞外基质表达的影响

目的 :观察氯沙坦对链脲佐菌素 (STZ)诱导的糖尿病大鼠肾脏转化生长因子 β1(TGF β1)和细胞外基质 (ECM )%DⅣ型胶原、纤维连接蛋白 (FN)表达的影响 ,以探讨糖尿病早期肾脏肥大和氯沙坦对糖尿病肾病 (diabetesnephropathy ,DN)保护作用的可能机理。方法 :实验大鼠随机分为 3组 ,每组 12只 :正常对照组 (C组 )、糖尿病组 (D组 )和氯沙坦治疗组 (DL组 )。左下腹腔注射STZ 6 0mg/kg体重制成糖尿病模型 ,DL组在糖尿病模型确立后第 2d予氯沙坦 10mg/(kg .d)灌胃 ,C组与D组仅给予等量自来水灌胃。检测各组第 4、 8wk末 (每组各取 6只 )的血糖、尿白蛋白、血浆血管紧张素Ⅱ含量及相对肾重 ;免疫组化检测肾内TGF β1、FN和Ⅳ型胶原蛋白表达水平 ,图像分析系统分析光密度值。结果 :DL组较D组尿白蛋白排泄量明显减少 ,相对肾重减轻 (P <0 0 1) ;免疫组化显示糖尿病大鼠肾内TGF β1蛋白表达增多 ,肾小球FN和Ⅳ型胶原沉积增多 ;DL组TGF β1蛋白表达均明显低于D组 ,治疗 8wk后FN和Ⅳ型胶原蛋白表达低于D组 (P <0 0 5 )。结论 :肾脏ECM积聚是糖尿病肾脏肥大的重要原因 ;氯沙坦对糖尿病肾脏病变的保护作用机制可能部分是通过下调糖尿病大鼠肾脏的TGF β1表达 ,减少ECM积聚     

非限制性外支架对兔移植静脉血小板源性生长因子表达的影响

目的 探讨非限制性外支架防治移植静脉再狭窄的可能作用机制. 方法新西兰白兔随机分为支架组和对照组,每组18只.均实施颈外静脉-颈总动脉移植术,支架组在移植静脉外套以外支架(直径6 mm的人造涤纶血管),对照组无外支架.术后7、14、28 d每组各6只兔手术取出移植静脉,分别进行血小板源性生长因子B链(PDGF-B)免疫组织化学染色,计算PDGF-B阳性率;以RT-PCR方法检测PDGF-B mRNA的表达量. 结果支架组移植静脉内膜PDGF-B阳性率术后14、28 d均明显低于对照组(15.2%±3.6%vs 21.6%±4.6%,6.5%±2.6%vs 12.5%±4.4%,均P＜0.05);中膜阳性率术后7、14、28 d均明显低于对照组(13.8%±4.6%vs 25.4%±6.2%,21.3%±4.4%vs 35.7%±7.3%,7.2%±3.2%vs 19.2%±5.4%,均P＜0.01);外膜阳性率术后28 d达高峰,而对照组在术后14 d达高峰,28 d时支架组阳性率明显高于对照组.RT-PCR检测显示术后7、14、28 d 2组移植静脉均可见PDGF-B特异条带(457 bp),各时间点支架组PDGF-B mRNA的表达均明显低于对照组(31.2%±6.5%vs 45.4%±8.4%,P＜0.05;42.3%±6.2%vs 65.2%±11.5%,P＜0.01;21.3%±5.6%vs 36.2%±9.4%,P＜0.01). 结论抑制移植静脉PDGF合成、改变PDGF分布规律可能是非限制性外支架防治移植静脉再狭窄的作用机制之一.     

大鼠系膜细胞醛固酮的合成及其对细胞外基质生成的影响

目的　证明肾脏系膜细胞能够自身合成醛固酮 ,并探讨醛固酮对系膜细胞细胞外基质生成的影响。方法　用RT PCR法检测大鼠系膜细胞醛固酮合成酶CYP11B2mRNA表达 ,PCR产物存化后直接测序 ;放免法测定系膜细胞培养上清液中醛固酮的浓度。用RT PCR半定量法比较 (3 磷酸甘油醛脱氢酶theenzymeglyceraldehyde 3 phosphatedehydrogenase ,GAPDH为内参照 )经 10 -10 ～ 10 -6mol/LAngⅡ或 7mmol/L、9mmol/LKCl干预 4 8h ,系膜细胞CYP11B2mRNA的表达量。大鼠系膜细胞醛固酮特异性受体 (mineralocorticoidreceptor,MR)和保护其配体特异性的 11β -羟类固醇脱氢酶 2 (11β -HSD2 )的mRNA和蛋白质表达分别用RT PCR法和细胞免疫化学法检测。以ELISA和Western印迹方法检测经 10 -7mol/L醛固酮干预 2 4h ,细胞培养上清液中层黏蛋白 (FN)和Ⅳ型胶原的浓度。结果　大鼠系膜细胞能表达CYP11B2mRNA ,且细胞培养上清液中检测到醛固酮 ,浓度为 1 0 6 5pg/ 10 6个细胞。 10 -8、10 -7mol/LAngⅡ (10 -8mol/L :2 15± 0 10 ,10 -7mol/L :1 16± 0 0 4vs非干预组 0 77± 0 0 3,P <0 0 0 1;)和 9mmol/L的KCl (1 2 7± 0 11vs非干预组 0 89± 0 12 ,P <0 0 5 )均能显著提高CYP11B2mRNA的表达。大鼠系膜细胞有MR和 11β -H     

TSP-1 promotes glomerular mesangial cell proliferation and extracellular matrix secretion in Thy-1 nephritis rats

The proliferation of glomerular mesangial cells (GMC) and secretion of the extracellular matrix (ECM) in rat with Thy-1 nephritis (Thy-1N) resembling human mesangioproliferative glomerulonephritis have been explored for many years; however, the molecular mechanisms of GMC proliferation and ECM production remain unclear. Our previous studies have demonstrated that the thrombospondin-1 (TSP-1) gene was involved in mediating rat GMC proliferation and ECM synthesis induced by sublytic C5b-9 in vitro. In the pre...     

延肾胶囊对残肾肾小球系膜细胞凋亡及其细胞外基质代谢的影响

目的探讨“延肾胶囊”对残肾肾小球系膜细胞凋亡及其细胞外基质代谢的影响。方法将Wistar大鼠120只随机分为6组，A组为假手术对照组；B组为5／6肾切除；C、D、E组分别为5／6肾切除 低、中、高剂量延肾胶囊；F组为5／6肾切除 肾衰宁。术后A、B两组给予等容积生理盐水灌胃。定量喂养。自由饮水。于术后15、90天测定各指标，每组每时相点观察10只大鼠。结果术后B组血浆血管紧张素Ⅱ浓度、肾小球系膜细胞增殖指数和凋亡指数、肾组织TGF-β1、Cot Ⅳ、Fas、FasL积分光密度等指标高于A组。C、D、E组血浆血管紧张素Ⅱ浓度、肾小球系膜细胞增殖指数、肾组织TGF-β1和Col Ⅳ积分光密度高于A组，但显著低于B组，随着延肾胶囊剂量增加，上述指标有逐渐降低的趋势；肾小球系膜细胞凋亡指数、Fas和FasL积分光密度显著高于A、B两组。随着延肾胶囊剂量增加。上述指标有逐渐升高的趋势。F组血浆血管紧张素Ⅱ浓度、肾小球系膜细胞增殖指数、肾组织TGF—β1和Col Ⅳ积分光密度低于B组，但高于D、E两组；肾组织Fas和FasL积分光密度显著高于A、B组。稍低于D、E两组；肾小球系膜细胞凋亡指数与B组无显著差异，显著低于C、D、E3组。结论“延肾胶囊”能显著抑制5／6肾切除大鼠残肾血管紧张素Ⅱ和TGF—β1的高表达，增加Fas和FasL的表达。抑制残肾肾小球系膜细胞过度增生，促进增生的系膜细胞凋亡。稳定残肾肾小球系膜细胞数量，减轻细胞外基质的堆积。呈剂量依赖性；“肾衰宁”能抑制系膜细胞增生，但不能促使增生的系膜细胞凋亡。     

血红素加氧酶-1在大鼠肾小球系膜细胞增殖中的作用

目的系膜细胞增殖是多种肾疾病的共同表现,血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)可减轻多种疾病的肾损害,文中拟观察不同状态下大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)HO-1的表达,探讨其在系膜细胞增殖中的作用。方法大鼠系膜细胞分为对照组、蟾蜍灵刺激组、血小板衍化生长因子-BB(platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB)刺激组、蟾蜍灵+PDGF-BB刺激组,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测各组细胞HO-1 mRNA的表达,采用Western blot技术检测细胞HO-1蛋白的表达。结果与对照组相比,PDGF-BB刺激组细胞HO-1 mRNA的表达明显减少(P<0.05),蟾蜍灵干预后可抑制PDGF-BB引起的系膜细胞HO-1 mRNA的表达下调(P<0.05),而蟾蜍灵对正常系膜细胞HO-1 mRNA的表达无影响(P<0.05)。Western blot结果显示各组细胞HO-1蛋白的表达与HO-1 mRNA的表达变化趋势一致。结论 PDGF-BB可能通过诱导大鼠系膜细胞HO-1的表达减少引起系膜细胞增殖,蟾蜍灵可抑制此作用,对系膜细胞损伤起保护作用。     

贮脂细胞TGF-1反义基因转移及对细胞外基质合成的抑制作用

目的探讨ＴＧＦβ１在肝纤维化贮脂细胞激活和细胞外基质产生中的作用。以及对细胞外基质基因的表达和自身ｍＲＮＡ表达的作用。方法将ＴＧＦβ１的基因序列反向插入逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ,构建反义ＴＧＦβ１的逆转录病毒载体ｐＬＡＴＳＮ,用ＰＡ３１７包装细胞包装,获得高滴度的逆转录病毒。将携有反义ＴＧＦβ１ｃＤＮＡ的逆转录病毒载体ｐＬＡＴＳＮ导入人的贮脂细胞株ＬＩ９０内,选择稳定转染的贮脂细胞株培养,应用ＰＣＲ、ＲＴＰＣＲ检测反义基因的表达,用ＥＬＩＳＡ、免疫组织化学和原位杂交等方法检测ＴＧＦβ１和细胞外基质的产生。结果贮脂细胞株ＬＩ９０内有反义ＴＧＦβ１的表达,且其合成分泌ＴＧＦβ１和细胞外基质如ＦＮ、ＣｏｌＡ１降低。结论反义ＴＧＦβ１ＲＮＡ可以抑制贮脂细胞的激活和内源性ＴＧＦβ１和细胞外基质的产生,为抗纤维化基因治疗提供理论基础     

血小板衍生生长因子对人脐带间充质干细胞胞外基质的影响

目的 探讨血小板衍生生长因子(PDGF)对人脐带间充质干细胞(UCMSCs)增殖和细胞外基质(ECM)表达的影响及其可能的作用机制。方法 体外传代培养UCMSCs,分为对照组和实验组,其中对照组不加PDGF,实验组分别加入不同质量浓度(2、5、10、20、50μg/L)的PDGF。加入PDGF 12h后,用qRT-PCR法检测ECM基因和凋亡相关基因(Bcl 2、Bax)的表达;加入PDGF 24h后,用四甲基偶氮唑(MTT)法检测细胞增殖。结果 与对照组比较,随着PDGF质量浓度的增加,反映细胞代谢活性的OD值逐渐增加,且PDGF质量浓度在20μg/L时达到最高值,但PDGF质量浓度为50μg/L时OD值反而降低;PDGF质量浓度为2μg/L时,ECM表达和Bcl 2/Bax比值较对照组有所降低,随着PDGF质量浓度的增加,ECM的表达和Bcl 2/Bax比值呈现先增高后降低的趋势,且在10μg/L时达到最高值。 结论 PDGF可以促进脐带间充质干细胞的增殖,同时能促进其ECM的表达,还能提高细胞耐受凋亡的能力,最佳作用质量浓度为10μg/L。     

实验性大鼠肺血栓栓塞单核细胞趋化蛋白-1和血小板源生长因子-B表达的改变与肺血管重建

目的探讨实验性肺血栓栓塞症(PTE)后单核细胞趋化蛋白1(MCP1)和血小板源生长因子B(PDGFB)表达及其在栓塞后肺血管重建中的作用。方法60只雄性SD大鼠随机分为假手术组和肺栓塞组,每组30只,肺栓塞组经颈静脉注入自体血栓制备PTE模型。两组分别于术后第1、4、7、14及28d各处死6只,分别测PaO2、mPAP,HE染色观察栓塞后肺动脉内膜增生情况,免疫组化方法检测MCP1和PDGFB在肺动脉和周围肺组织的表达,半定量观察其动态变化。结果PTE组栓塞后1周内PaO2明显低于假手术组(P<0.05),1周后恢复正常。两组mPAP比较无显著性差异。栓塞后第4d即见肺动脉内膜增生并持续至第28d。MCP1和PDGFB主要由肺动脉平滑肌细胞和巨噬细胞表达,MCP1在栓塞后第1～14d、PDGFB在栓塞后第1～7d持续高表达,之后表达逐渐减弱。结论急性PTE后肺动脉MCP1、PDGFB表达增强,参与了栓塞后肺血管重建过程。     

氟伐他汀对肾小球系膜细胞产生细胞外基质的影响

[目的]观察不同葡萄糖浓度环境、氟伐他汀对人系膜细胞表达FN、IV型胶原作用。[方法]培养人肾小球系膜细胞,分为正常葡萄糖组、高葡萄糖组及加氟伐他汀组,培养244、8 h收集细胞上清液,用酶联免疫法检测FN、IV型胶原。[结果]在高糖组24、48 h FN分别是(1.552±0.546)和(2.547 0±0.968)ng/mL,明显高于正常糖组244、8 h,FN:(0.777±0.076)和(1.180±0.091)ng/mL(P<0.01);在高糖组244、8 h IV型胶原分别是(64.577±5.543)和(80.140±6.605)ng/mL,明显高于正常糖组24、48 h IV型胶原:(42.468±5.615)和(46.368±5.714)ng/mL(P<0.01)。氟伐他汀可减少高糖浓度下细胞上清液中FN、Ⅳ型胶原的表达水平。在高糖组与氟伐他汀(1μmol/L,10μmol/L)作用24、48 h FN和IV型胶原分别是(0.955±0.102)(、0.858±0.081)ng/mL,(0.652±0.078)(、0.822±0.257)ng/mL(P<0.01)、(34.908±4.283)、(32.163±2.220)、(28.260±4.287)(、23.233±7.284)ng/mL(P<0.01)。[结论]氟伐他汀可抑制高糖刺激的系膜细胞表达FN、Ⅳ型胶原。