高糖对体外培养兔视网膜Müller细胞AQP4表达的影响

目的：观察体外培养兔视网膜Müller细胞在高糖条件下水通道蛋白-4（AQP4）表达的变化。方法：采用体外培养的兔视网膜Müller 细胞，分为正常对照组及高糖组（葡萄糖浓度：30、40和50 mmol•L^-1），分别培养1、3和5 d；采用免疫细胞化学、流式细胞术及RT-PCR方法对Müller 细胞AQP4的表达情况进行检测。结果：高糖组Müller 细胞AQP4表达的绿色荧光明显弱于正常对照组（P<0.01）；流式细胞仪检测中波峰位置明显提前，AQP4表达强度较对照组明显减弱（P<0.01），且随着葡萄糖浓度的增高和作用时间的延长，AQP4表达强度逐渐减弱；血糖浓度50 mmol•L^-1培养3 d时，RT-PCR半定量分析显示，AQP4 mRNA的表达比对照组明显降低（P<0.01）。结论：高糖能降低视网膜Müller细胞AQP4的表达，且随着葡萄糖浓度的增高和作用时间的延长，AQP4的表达强度也逐渐减弱；高糖时AQP4的表达下降可能是机体对糖尿病视网膜病变的一种保护性反应。     

糖基化终产物对体外培养兔视网膜Müller细胞的影响

目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对体外培养兔视网膜Müller细胞的影响.方法 培养兔视网膜Müller细胞,体外制备AGEs及其对照物,实验分为牛血清白蛋白AGE(AGE-BSA)作用3 d组、AGE-BSA作用9 d组、AGE-BSA对照3 d组、AGE-BSA对照9 d组、空白对照3 d组及空白对照9 d组.采用光镜下观察及流式细胞仪检测AGEs对Müller细胞凋亡发生率的影响.结果 AGEs对Müller细胞作用3 d后,与对照组相比,细胞形态和数量无明显变化,无明显细胞凋亡;而作用9 d后,细胞数量明显减少,细胞凋亡率明显增高.结论 AGEs可抑制视网膜Müller细胞的生长.     

高糖和缺氧对体外培养视网膜M üller细胞VEGF表达的影响

目的 :观察体外培养兔视网膜 Müller细胞在高糖和缺氧条件下血管内皮生长因子( vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的变化。方法 :采用免疫细胞化学、原位杂交和ELISA方法对高糖和缺氧条件下体外培养兔视网膜 Müller细胞 VEGF的表达进行定性定量测定。结果 :高糖能刺激 VEGF表达 ,且通过转录水平调节 ,这种调节呈时间和剂量依赖性。 Co Cl2 能造成 Müller细胞不完全缺氧 ,刺激 VEGF的分泌。结论 :Müller细胞在高糖、缺氧条件下 VEGF表达增强 ,VEGF表达水平的升高可能是高糖及缺氧条件下促进糖尿病视网膜病变的因素之一。     

兔视网膜Müller细胞原代培养

目的 :建立兔视网膜 Müller细胞原代培养的方法。方法 :组织块悬浮法培养兔视网膜Müller细胞 ,用电镜和免疫组织化学法对细胞进行鉴定。结果 :培养的细胞贴壁生长 ,呈长梭形 ,胞体肥大 ,胞浆丰富。电镜下可见特征性的中间丝 (直径 8～ 1 0 nm) ;免疫组织化学显示细胞呈神经胶质纤维酸性蛋白 ( GFAP)和 S- 1 0 0阳性 ,八因子相关抗原阴性。结论 :组织块悬浮法培养兔视网膜Müller细胞是一种稳定、可靠的方法     

人视网膜Müller细胞的培养

目的:研究人视网膜Müller细胞的简易酶消化培养法。方法:使用单一酶消化法培养人视网膜Müller细胞,运用免疫荧光法和透射电镜技术进行细胞鉴定。结果:培养的Müller细胞胞浆丰富,电镜下胞浆中可见大量线粒体,粗面内质网,糖原颗粒和直径为8～10 nm的微丝,免疫荧光显示95%以上细胞可见阳性谷氨酰胺合成酶、神经胶质纤维酸性蛋白、α-平滑肌肌动蛋白、中间丝波形蛋白。结论:简易酶消化法可成功用于人视网膜Müller细胞的培养。     

体外不同压力对视网膜Müller细胞的GLAST表达的影响

目的:研究不同压力对体外培养的视网膜Müller细胞形态、活性和L-谷氨酸/L-天门冬氨酸转运体(GLAST)表达的影响。方法:按不同压力将Sprague Dawley大鼠Müller细胞第4代细胞随机分为5组,其中对照组为A组(+0mmHg),实验组分别为B组(+15mmHg)、C组(+30mmHg)、D组(+45mmHg)、E组(+60mmHg),每组3瓶,37℃,5%CO2培养箱培养2h。倒置显微镜观察Müller细胞形态;噻唑蓝比色法(MTT)测定波长570nm处的吸光度(A)值,以各组A值计算细胞相对存活率;免疫蛋白印迹法(Western blot)检测各组大鼠视网膜Müller细胞上GLAST的蛋白表达。结果:光镜下,与对照组相比,体外培养的视网膜Müller细胞经不同压力处理下形态改变不明显。MTT检测显示,A、B、C、D、E组A值分别为1.676 3±0.054 7、1.503 3±0.053 6、1.209 3±0.045 5、1.020 0±0.040 0、0.706 3±0.034 1,细胞相对存活率分别为100%、89.3%、71.3%、59.7%、40.3%。其中,B、C、D、E组A值均较A组降低(P<0.05)。随着压力的升高,细胞相对存活率逐渐降低,各组间总体差异均有统计学意义(P<0.05);Western blot检测显示,与A组相比,其余各组的大鼠视网膜Müller细胞的GLAST蛋白表达均下降,差异有统计学意义(P<0.05)。大鼠视网膜Müller细胞上GLAST的蛋白表达随着压力的升高逐渐降低,各组间总体差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:压力直接影响体外培养的Müller细胞存活状况。随压力升高,大鼠视网膜Müller细胞存活率下降,且细胞上的GLAST的蛋白表达下降。     

糖基化终产物对体外培养兔视网膜Mǖller细胞的影响

目的探讨糖基化终产物（AGEs）对体外培养兔视网膜Mǖller细胞的影响。方法培养兔视网膜Mǖller细胞，体外制备AGEs及其对照物，实验分为牛血清白蛋白AGE（AGE—BSA）作用3d组、AGE—BSA作用9d组、AGE—BSA对照3d组、AGE—BSA对照9d组、空白对照3d组及空白对照9d组。采用光镜下观察及流式细胞仪检测AGEs对Mǖller细胞凋亡发生率的影响。结果AGEs对Mǖller细胞作用3d后，与对照组相比，细胞形态和数量无明显变化，无明显细胞凋亡；而作用9d后，细胞数量明显减少，细胞凋亡率明显增高。结论AGEs可抑制视网膜Mǖller细胞的生长。     

高糖对体外培养兔视网膜Müller细胞表达血管内皮生长因子的影响

目的探讨高糖对体外培养兔视网膜Müller细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法体外培养兔视网膜Müller细胞,采用免疫细胞化学方法半定量检测不同浓度葡萄糖对视网膜Müller细胞表达VEGF的影响。结果高糖可以明显增加Müller细胞VEGF的表达,且具有一定的浓度依赖性。结论高糖促进体外培养兔视网膜Müller细胞VEGF的表达,提示高血糖作为糖尿病视网膜病变(DR)的始动因素,其可能机制之一为诱导Müller细胞VEGF的表达。     

ApoAI对原代培养人Müller细胞生长的影响

目的：研究ApoAI对原代培养人Müller细胞生长的影响。方法：原代培养人的视网膜Müller细胞后用不同浓度的ApoAI刺激Müller细胞24 h,采用流式细胞术检测ApoAI作用24 h后Müller细胞的细胞周期,比较各组细胞的细胞周期;采用流式细胞术和荧光照相法检测各组Müller细胞细胞凋亡水平,采用单因素方差分析方法比较各组间不同细胞周期间不同细胞数的变化以及各组细胞的凋亡数。结果与结论：流式细胞术结果显示,ApoAI可以抑制人Müller细胞的增殖,且随ApoAI浓度的增加抑制作用增强（P＜0．05）;ApoAI对细胞的凋亡无明显作用（ P＞0．05）。     

花色苷对高糖高胰岛素培养下Müller细胞的保护

目的:观察高糖高胰岛素作用下Müller细胞的活性改变及花色苷对其的保护作用。方法:用50mmol/L葡萄糖和不同浓度胰岛素处理大鼠视网膜Müller细胞24h,分为高胰岛素组:3kU/L胰岛素;低胰岛素组:3U/L胰岛素;对照组:不含胰岛素。分别用121.1,22.8,0μmol/L花色苷对各组细胞进行保护。48h后用MTT法测定Müller细胞的活性。结果:高胰岛素(3kU/L)处理后Müller细胞活性降低(P<0.05),低胰岛素组(3U/L)则与对照组无显著性差异(P>0.05)。在低胰岛素和高胰岛素组中,经高浓度花色苷处理过的Müller细胞较未加入花色苷的Müller细胞活性提高(P<0.05),且与未经胰岛素处理的Müller细胞相比差异消失(P>0.05);而低浓度花色苷无此作用(P>0.05)。结论:高浓度胰岛素在短期内可使Müller细胞的活性降低,一定浓度的花色苷可恢复高胰岛素对Müller细胞活性的改变。     

视网膜Müller细胞病变与糖尿病视网膜病关系的研究进展

糖尿病视网膜病(DR)是糖尿病的主要微血管病变之一,可导致视力下降甚至失明,其发病机制尚未完全明了.该病典型的病理改变为视网膜水肿和新生血管生成.近年来,随着对视网膜Müller细胞的深入研究,发现Müller细胞可参与多种病理和生理过程,并且在糖尿病视网膜病进展中起了重要作用.本文就视网膜Müller细胞与糖尿病视网膜病进展之间的联系以及目前对Müller细胞研究的最新进展作一综述.     

高糖对体外培养兔视网膜Müller细胞表达血管内皮生长因子的影响

目的探讨高糖对体外培养兔视网膜Müller细胞表达血管内皮生长因子（VEGF）的影响。方法体外培养兔视网膜Müller细胞，采用免疫细胞化学方法半定量检测不同浓度葡萄糖对视网膜Müller细胞表达VEGF的影响。结果高糖可以明显增加Müller细胞VEGF的表达，且具有一定的浓度依赖性。结论高糖促进体外培养兔视网膜Müller细胞VEGF的表达，提示高血糖作为糖尿病视网膜病变（DR）的始动因素，其可能机制之一为诱导Müller细胞VEGF的表达。     

胰岛素对视网膜Müller细胞生长活力的影响

目的:研究不同浓度胰岛素对视网膜Müller细胞生长活力的影响,探讨Müller细胞在视网膜神经损伤中的作用.方法:取兔视网膜Müller细胞进行培养及鉴定.取第3代细胞.应用MTT测定方法,测定1U/ml、4U/ml、8U/ml、12U/ml胰岛素分别在6小时、12小时、24小时对视网膜Müller细胞增殖的影响.结果:在胰岛素作用6h、12h时,均为4U/ml浓度组MTT值最高,与对照组的差异最显著(F值5.60、7.31,均P<0.001).结论:不同浓度胰岛素在一定浓度范围、一定作用时间内,对视网膜Müller细胞的生长有显著的促进作用.     

高浓度葡萄糖和高浓度胰岛素对体外培养视网膜Müller细胞胞内[Ca2+]i的影响

目的 探讨高浓度葡萄糖、高浓度胰岛素对体外培养的视网膜Müller细胞胞内[Ca2+]i的影响.方法 采用荧光探针技术,应用激光共聚焦显微镜动态、定量测定细胞外高钙、钙拮抗剂条件下,正常、高浓度葡萄糖、高浓度胰岛素、高浓度葡萄糖+高浓度胰岛素培养的视网膜Müller细胞胞内[Ca2+]i的变化.结果 高浓度葡萄糖、高浓度胰岛素、高浓度葡萄糖+高浓度胰岛素培养的视网膜Müller细胞胞内[Ca2+]i明显升高,在细胞外高钙条件下各组[Ca2+]i均降低,在细胞外钙拮抗剂条件下各组[Ca2+]i均再次下降.结论 高浓度葡萄糖和高浓度胰岛素均能使视网膜Müller细胞胞内[Ca2+]i明显升高,而钙拮抗剂通过干扰细胞外钙离子进入细胞来降低[Ca2+]i.     

花色苷对高糖高胰岛素培养下Müiller细胞的保护

目的:观察高糖高胰岛素作用下Müller细胞的活性改变及花色苷对其的保护作用.方法:用50 mmol/L葡萄糖和不同浓度胰岛素处理大鼠视网膜Müller细胞24 h,分为高胰岛素组:3 kU/L胰岛素;低胰岛素组:3 U/L胰岛素;对照组:不含胰岛素.分别用121.1,22.8,0μmol/L花色苷对各组细胞进行保护.48 h后用MTT法测定Miller细胞的活性.结果:高胰岛素(3 kU/L)处理后Müller细胞活性降低(P＜0.05),低胰岛素组(3 U/L)则与对照组无显著性差异(P＞0.05).在低胰岛素和高胰岛素组中,经高浓度花色苷处理过的Müller细胞较未加入花色苷的Müller细胞活性提高(P＜0.05),且与未经胰岛素处理的Müller细胞相比差异消失(P＞0.05);而低浓度花色苷无此作用(P＞0.05).结论:高浓度胰岛素在短期内可使Müller细胞的活性降低,一定浓度的花色苷可恢复高胰岛素对Müller细胞活性的改变.     

Trim9调控视网膜Müller细胞向神经节细胞定向分化

目的：青光眼是不可逆性致盲性眼病的主要病因,目前尚无有效疗法逆转青光眼的视觉系统损害。最近发现干细胞疗法有望使受损的视网膜神经元修复和再生,但是在干细胞来源方面仍然存在较大挑战。本研究探寻一种将视网膜Müller细胞去分化为视网膜干细胞,进一步高效定向分化为视网膜神经节细胞的方案,以期为青光眼的干细胞治疗提供新的细胞获取途径。方法：用表皮细胞生长因子和成纤维细胞生长因子2诱导大鼠视网膜Müller细胞去分化为视网膜干细胞。构建Trim9过表达慢病毒(PGC-FU-Trim9-GFP),感染由Müller细胞诱导去分化而来的视网膜干细胞,通过荧光显微镜观察和流式细胞术评估病毒感染效率。用视黄酸和脑源性神经营养因子处理过表达或未过表达Trim9的视网膜干细胞以诱导其分化为神经元和神经胶质细胞。采用免疫荧光、PCR/real-time RT-PCR和蛋白质印迹法检测各细胞标志物(GLAST、GS、rhodopsin、PKC、HPC-1、Calbindin、Thy1.1、Brn-3b、Nestin、Pax6)的表达。结果：表皮细胞生长因子和成纤维细胞生长因子2处理后的大鼠视网膜Müller细胞...     

大鼠视网膜Müller细胞的培养与鉴定

目的:仿照前人建立的方法,优化SD大鼠视网膜Müller细胞体外培养的技术和方法,为后续相关研究建立实验室条件.方法:使用胰蛋白酶消化的方法分离新生SD大鼠视网膜Müller细胞,以DMEM为培养基体外培养,光镜观察.采用电镜观察及荧光免疫组织化学染色的方法进行鉴定.结果:培养的细胞贴壁生长,原代细胞胞体狭长,细胞质丰富,折光性好.电镜下可见特征性的中间丝(直径8～10 nm),细胞器丰富;荧光免疫组织化学显示细胞呈神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和谷氨酰胺合成酶(GS)阳性.结论:酶消化法培养SD大鼠视网膜Müller细胞是一种稳定、可靠的方法.     

单核细胞源性趋化因子对培养的牛视网膜Müller细胞的趋化作用

目的研究单核细胞源性趋化因子对培养的牛视网膜Müller细胞的趋化作用.方法以刀豆蛋白A激活小牛的单核细胞,以此单核细胞条件培养基作为趋化因子的来源,用改良的Boyden小室微孔滤膜法检测其对培养的牛视网膜 Müller细胞的趋化活性,并检测经明胶结合处理掉纤维连接蛋白(FN)后条件培养基的活性.结果该条件培养基对培养的 Müller细胞具有趋化活性,且该条件培养基在经明胶处理后其趋化活性降低,但仍然存在.结论该条件培养基对Müller细胞趋化作用的物质成份不是单一的,是多种因素作用的结果,单核巨噬细胞系统在增殖性玻璃体视网膜病变发病中具有重要的作用.     

缺氧对Müller细胞水通道蛋白4及血管内皮生长因子的影响

目的:观察缺氧条件下,体外培养的人视网膜Müller细胞上水通道蛋白4(AQP4)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况。方法:酶消化法培养人视网膜Müller细胞,免疫荧光和透射电镜进行细胞鉴定,CoCl2诱导细胞缺氧,RT-PCR测定视网膜Müller细胞AQP4和VEGF基因的表达。结果:免疫荧光显示95%以上细胞谷氨酰胺合成酶、神经胶质纤维酸性蛋白、α-平滑肌肌动蛋白、中间丝波形蛋白呈阳性。Müller细胞AQP4 mRNA和VEGFmRNA的表达在缺氧条件下均升高,VEGF更明显,且呈部分浓度和时间相关性。缺氧12 h时VEGF mRNA表达达高峰,24 h时AQP4 mRNA达高峰。结论:AQP4和VEGF均与缺氧时的细胞水肿有关,二者关系密切,VEGF的作用较早且强。