大鼠脊髓损伤后坐骨神经电生理学以及损伤脊髓GAP-43蛋白表达的变化

目的：研究大鼠脊髓损伤后不同时间点坐骨神经兴奋阈值、动作电位（AP）幅度和传导速度,以及损伤脊髓GAP-43蛋白表达的改变。方法：采用改良的Allen′s重物坠落致大鼠脊髓损伤实验模型、电生理学和免疫组织化学染色。结果：大鼠SCI后1、3、7d时,坐骨神经兴奋阈值升高,AP幅度和传导速度降低,呈时间依赖性改变;SCI后14d,AP产生阈值、幅度和传导速度较SCI第7d有所恢复。正常大鼠脊髓灰质神经元的胞浆和轴突中有少量GAP-43蛋白表达;SCI后第1、3、5、7d时损伤脊髓周围区灰质GAP-43蛋白表达逐渐增强;在SCI后第14d其阳性表达开始减弱。结论：大鼠SCI后能够导致坐骨神经电生理学兴奋性和传导性的降低,以及神经结构重构蛋白GAP-43表达增加。     

GAP-43治疗大鼠完全性脊髓损伤后Nogo-A在神经元的表达

目的制备完全性脊髓损伤成年SD大鼠模型,研究生长相关蛋白(GAP-43)治疗大鼠脊髓损伤后神经元上Nogo-A的变化,探讨GAP-43在再生修复中的作用,为临床治疗提供实验信息.方法雌性8周龄SD大鼠75只,制成脊髓损伤模型,随机分为3组:GAP-43抗体组,GAP-43抗原组,对照组,每组25只.使用直接注射法将GAP-43抗原和GAP-43多克隆抗体分别注入抗原组和抗体组的大鼠脊髓断端,观察各组大鼠肢体功能的恢复情况,用BBB评分法进行不同时段的行为学评分;用HE染色和免疫组化染色及图像分析方法观察Nogo-A阳性神经元数目的变化,并对其进行相关性分析.结果对照组在不同的时间段行为学评分最低,抗原组评分最高,抗原组Nogo-A阳性神经元数量最少,且数量与后肢功能恢复呈反相关.结论说明GAP-43能够与Nogo-A相拮抗,促进损伤脊髓的恢复,对脊髓损伤的研究与治疗具有重要的意义.     

电针对缺血性脑卒中大鼠大脑GAP-43和VEGF表达的影响

目的探讨电针对缺血性脑血管病的治疗作用及其机制,为电针治疗缺血性脑血管病提供实验依据。方法将SPF级雄性SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组和电针组,每组大鼠16只。电针组针刺双侧内关、水沟、三阴交及配穴:百会,并电针内关、三阴交穴位。最后免疫组化SP法观察VEGF、GAP-43表达的变化。采用JD801形态学图像分析系统进行分析,并对结果进行统计学分析。结果电针组GAP-43阳性细胞数表达在各时间点较模型组显著增加(P<0.01);电针组VEGF表达在各时间点较模型组显著增加(P<0.01)。结论电针能促进各时间点缺血性脑卒中大鼠脑组织内VEGF、GAP-43的表达。     

生长相关蛋白43与脊髓损伤

生长相关蛋白43(growth-associated protein 43,GAP-43)是一种胞膜磷酸蛋白质,它广泛存在于神经组织中,尤其是在生长、分化和再生的轴突末端以及突触前膜,被认为是神经元发育和再生的一个内在决定因子.GAP-43对于神经系统发育过程中的轴突生长和突触形成具有重要作用,周围神经损伤后.其含量可增加20～100倍[1-2].增强损伤脊髓组织中GAP-43的表达水平,能促进损伤脊髓神经元的再生和修复,对脊髓损伤起保护作用,近年对其研究日渐深入.     

电针对脊髓损伤后硫酸软骨素蛋白多糖表达的影响

目的观察电针对脊髓损伤后硫酸软骨素蛋白多糖(CSPGs)表达的影响,探讨电针对脊髓损伤修复的可能作用机制。方法将成年SD大鼠40只分为正常对照组、模型组和电针组。建立成年大鼠T9～T10段脊髓全横断损伤模型。除电针组于术后当天进行电针治疗外,3个组均分别于术后7、14、28 d取材,用免疫组织化学ABC法和图像分析技术检测脊髓内CSPGs的表达。结果术后7～28 d,与正常对照组相比模型组脊髓损伤邻近组织内CSPGs表达明显增强(P<0.05);与模型组相比,电针组脊髓损伤邻近组织内CSPGs表达明显受到抑制,差异显著(P<0.05)。结论电针能显著降低脊髓损伤后CSPGs的表达,从而减弱CSPGs对轴突再生的抑制作用,这可能是其促进脊髓损伤修复的可能机制之一。     

参芎葡萄糖注射液对脊髓损伤后运动功能恢复及GAP-43和NF200表达的影响

目的探讨参芎葡萄糖注射液对急性脊髓损伤后运动功能恢复的影响和可能机制。方法应用改良的Allen’s法复制大鼠脊髓损伤模型60只,随机分为对照组(30只)和治疗组(30只),在建模后1、7、14、21和28 d用BBB评分和斜板试验评定脊髓损伤后后肢运动功能恢复并获取损伤段脊髓标本,用免疫组织化学方法和免疫印迹法检测两组脊髓在损伤后不同时段生长相关蛋白(GAP-43)和神经丝蛋白(NF200)的表达,对BBB评分、GAP-43、NF200进行相关分析。结果 BBB评分和斜板试验结果提示,治疗组大鼠7、14、21、28 d时的神经功能恢复较对照组明显提高(P<0.05);免疫组织化学方法和免疫印迹法提示,与对照组相比治疗组在一定时间段能上调损伤脊髓区GAP-43和NF200的表达(P<0.05);在术后7 d和14 d,BBB评分与GAP-43、NF200的表达正相关,在术后7、14、21、28 d GAP-43与NF200的表达正相关。结论参芎葡萄糖注射液能促进损伤脊髓的功能恢复,其机制可能与参芎葡萄糖注射液上调损伤区脊髓GAP-43、NF200的表达有关。     

促红细胞生成素对大鼠脊髓损伤后神经生长蛋白43和微管相关蛋白-2表达的影响

目的 观察促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的保护作用及神经细胞神经生长蛋白43(GAP-43)、微管相关蛋白-2(MAP-2)表达的影响。方法 制作SCI模型,分为假手术组、生理盐水组、EPO治疗组。用免疫组织化学染色方法检测神经细胞内GAP-43和MAP-2的表达变化,同时通过BBB运动评分检测动物的运动功能。结果 EPO治疗组较生理盐水组GAP-43和MAP-2表达水平高,EPO治疗组的BBB运动评分明显优于生理盐水组。结论 EPO能够通过增加GAP-43和MAP-2表达,促进神经细胞生长。     

A型肉毒素重链干预对大鼠脊髓损伤后生长相关蛋白表达的影响

目的探讨人工重组A型肉毒素重链(Bo NT/A重链)对在体大鼠脊髓损伤局部生长相关蛋白表达的影响,为阐明Bo NT/A重链促神经突起再生机制提供依据。方法建立大鼠单侧腰段脊髓横断损伤模型并局部及鞘内给予Bo NT/A重链;对用药后不同时间局部骨髓组织进行双向电泳检测总体蛋白表达;选择生长相关蛋白-43(GAP-43)和颈上神经节蛋白10(SCG 10)进行蛋白印迹和免疫荧光检测以观察二者在Bo NT/A重链影响下的表达及分布。结果 (1)单侧腰髓离断损伤模型动物呈现明显单侧运动及感觉功能障碍;(2)脊髓损伤后给予Bo NT/A重链可影响损伤局部蛋白表达谱变化:Bo NT/A重链可引起损伤局部蛋白点群在变化的基础上逆转或表达进一步增加,尤以MW位于35~45 k Da及18~25 k Da、等电点在5~7范围的蛋白点表现明显;(3)蛋白印迹和免疫荧光染色结果提示:Bo NT/A重链可促进p-GAP 43和SCG 10的表达(P0.05),且p-GAP 43及SCG 10主要以损伤周围细胞阳性明显,胞浆及突起皆呈阳性。结论脊髓损伤后给予Bo NT/A重链可促进脊髓损伤后选择性生长相关蛋白p-GAP 43和SCG 10的表达。     

督脉电针对脊髓损伤后硫酸软骨素蛋白聚糖表达的影响

目的：探索督脉电针对大鼠脊髓损伤（spinal cord injury SCI）后硫酸软骨素蛋白聚糖类分子（CSGPs）表达和后肢功能的影响。方法：取Wistar大鼠80只,用改良的Allen法制成脊髓损伤模型,随机分为对照组（40只）、督脉电针组（40只）,督脉电针组于术后开始接受督脉电针治疗。于术后第1、3、7、14、21、28天进行BBB（Basso-Beattle-Bresnahan）运动功能评分,应用免疫组织化学技术检测脊髓组织硫酸软骨素蛋白聚糖类分子（CSGPs）的表达,并用图像分析仪进行定量分析。结果：术后第3~28天,督脉电针组的BBB评分较对照组明显提高,术后第1天,对照组和督脉电针组受损脊髓中CS-GPs的表达明显增加;第3天时均达到高峰,但督脉电针组低于对照组（P〈0.05）。第7、14、21、28天,与对照组比较,督脉电针组CSGPs表达也较低（P〈0.01）。结论：督脉电针使脊髓损伤后CSGPs表达减少,促进其肢体运动功能恢复。这可能有利于抑制脊髓损伤后抑制因子的表达、消除脊髓继发性损伤,保存了残存正常脊髓组织并促进神经轴突再生,改善其肢体运动功能。     

督脉电针对脊髓损伤神经干细胞影响的研究

脊髓损伤（SCI）年发病率为20-40／100万^[1]，其所致的截瘫是一种比较常见的严重伤残，常引起各种并发症甚至死亡，给人们的生产、生活和国家的经济带来一定负面影响。督脉电针是中医治疗SCI的重要手段，并且有肯定的疗效，但是其机理尚不清楚，其对脊髓损伤后神经干细胞的影响，将为相关研究提供新的思路和途径。     

雌激素对脊髓损伤大鼠运动功能及GAP-43表达的影响

目的 探讨雌激素对脊髓损伤(SCI)大鼠运动功能和损伤区域生长相关蛋白-43 (GAP-43)表达的影响。方法 72只雄性SD大鼠按随机数表法分为假手术组(A组)、生理盐水模型组(B组)、雌激素组(C组),每组24只,B组、C组制作SCI模型,B组等量生理盐水腹腔注射,C组雌激素腹腔注射。术后3 d、1周、2周、3周检测BBB评分和Rivlin斜板试验。术后3 d、1周、2周、3周时间点处死大鼠取脊髓组织,行免疫组织染色观察GAP-43的表达情况。结果 A组大鼠术后3 d、1周、2周、3周BBB评分分别为(20.48±0.57)分、(21.00±00)分、(21.00±00)分、(21.00±00)分,B组分别为(3.18±0.12)分、(4.28±0.15)分、(6.93±0.50)分、(8.95±0.34)分,C组分别为(3.27±0.15)分,(9.67±0.30)分、(14.06±0.69)分、(16.46±0.39)分,术后3 d、1周、2周、3周比较,A组明显高于B组和C组,C组术后1周、2周、3周明显高于B组,差异均有统计学意义(P<0.05);A组大鼠术后3 d、...     

GDNF基因修饰的神经干细胞促进脑中风后大鼠的GAP-43表达

目的研究胶质源性神经营养因子(GDNF)基因修饰的神经干细胞(NSCs)移植对脑中风后大鼠缺血侧脑组织内生长相关蛋白-43(GAP-43)表达的影响,探讨GDNF基因修饰的神经干细胞(GDNF/NSCs)移植对大鼠脑中风的神经保护作用机制。方法取新生大鼠脑组织分离培养NSCs,收集第6代前的NSCs备用。用重组腺病毒GDNF转染神经干细胞,制备GDNF/NSCs。暂时性阻塞大鼠大脑中动脉制备脑中风模型,3天后,用脑立体定位仪向中风侧侧脑室分别给予NSCs、GDNF/NSCs和生理盐水。再灌注时间1w、2w、3w、5w、7w后处死大鼠(n=3)。裂解中风侧脑组织,离心后得到脑组织蛋白样品,通过蛋白免疫印迹(Western Blotting)检测GAP-43表达。结果 GDNF/NSCs、NSCs、NS各组GAP-43的表达在1w、2w、3w、5w、7w各时间点均逐渐降低。NSCs组、GDNF/NSCs组显著高于NS组(P<0.05);GDNF/NSCs组高于NSCs组(P<0.05)。结论 GDNF/NSCs移植治疗脑中风的机制可能与促进GAP-43表达有关。     

微囊化异种坐骨神经组织细胞移植对大鼠脊髓损伤后生长相关蛋白-43表达的影响

目的 :探讨微囊化异种坐骨神经组织细胞移植对大鼠脊髓损伤后再生的促进作用。方法 :A组微囊化坐骨神经组织细胞组、B组坐骨神经组织细胞组、C组空囊组、D组明胶海绵组及E组损伤对照组。无菌条件下取家兔坐骨神经 ,过滤后加入生理盐水制成悬液。将悬液与 1.5 %海藻酸钠溶液充分混合 ,经双腔喷头喷入 2 0mmol/L的氯化钡溶液制得微囊化坐骨神经组织细胞。同法制备空囊 ,但不包被细胞。以T10为中心打开椎管 ,虹膜刀自脊髓后正中沟插入并向左半侧横向切开 ,去除约 2mm脊髓组织 ,分别将浸有微囊化坐骨神经组织细胞、坐骨神经组织细胞及空囊的明胶海绵植入A、B、C组损伤处 ,D组植入明胶海绵 ,E组不作移植。分别于术后不同时间 ,每个时相 4只大鼠 ,取出脊髓损伤平面为中心的 8mm脊髓 ,分别行Nissl及GAP -4 3组化染色。结果 :A组尼氏体恢复 ,7天时GAP -4 3阳性表达达高峰 ,以后渐下降。结论 :微囊化异种坐骨神经组织细胞移植可促进损伤脊髓的再生     

褪黑素对脊髓损伤大鼠GAP-43表达的影响

目的 研究褪黑素对大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后生长相关蛋白(growth associated protein 43,GAP-43)表达的影响,从新的角度探讨褪黑素修复脊髓损伤的机制.方法 72只SD大鼠按照完全随机分组法分为3组:褪黑素治疗组、脊髓损伤组、空白对照组,每组24只.褪黑素治疗组、脊髓损伤组以改良Allen's法建立T11～T12水平脊髓损伤模型,褪黑素治疗组于术后即刻腹腔注射褪黑素(按100 mg/kg剂量注射),脊髓损伤组腹腔注射等体积5％无水乙醇(褪黑素溶剂),空白对照组不做任何处理.术后1、3、7d对各组大鼠进行BBB评分,检测血清中GAP-43的含量,并应用免疫组织化学染色法观察脊髓中GAP-43的表达.结果 术后1、3、7d大鼠血清中GAP-43含量各组间比较有差异统计学意义(P＜0.05),其中褪黑素治疗组最高,脊髓损伤组次之,空白对照组最低.免疫组织化学染色结果表明:褪黑素治疗组脊髓切片中GAP-43染色阳性细胞数最多,脊髓损伤组次之,对照组最低,各组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 褪黑素治疗后可改变脊髓损伤区局部的微环境,并提高血清和脊髓中GAP-43的含量,促进损伤脊髓的恢复.     

大鼠坐骨神经损伤后脑源性神经营养因子对脊髓前角内生长相关蛋白GAP-43 表达的影响

目的探讨大鼠坐骨神经损伤后内源性脑源性神经营养因子(BDNF)对脊髓前角内生长相关蛋白GAP-43表达的调节。方法大鼠坐骨神经压榨损伤后,腹腔注射BDNF抗体中和内源性BDNF,对照组注射生理盐水,动物存活7d或14d,用Western blot与RT-PCR观察GAP-43在脊髓腰骶膨大部前角的表达。结果与对照组相比,注射BDNF抗体后坐骨神经损伤侧脊髓前角内GAP-43蛋白与其mRNA的表达明显下降,上述改变在统计学上均有显著意义(P<0.01)。结论大鼠坐骨神经损伤后内源性BDNF可能参与脊髓前角内GAP-43表达的调节。     

电针对脑梗死大鼠患侧海马CA3区GAP-43和c-fos的影响及其与学习记忆的关系

目的：通过观察电针对脑梗死大鼠患侧海马CA3区GAP-43和c—fos的影响及其与学习记忆的关系,探讨电针对脑梗死大鼠学习记忆能力、中枢神经系统的可塑性影响及其可能机制。方法：56只雄性Wistar大鼠随机选取8只作为假手术组,其余48只脑梗死造模成功的大鼠随机分为脑梗死自由活动组（对照组）和脑梗死电针组（电针组）。电针组于术后24h开始进行电针针刺“百会”,“大椎”穴。用水迷宫法检测学习记忆能力,用GAP-43和c—los试剂盒SABC显色法检测患侧海马CA3区GAP-43和c—los的表达情况。结果：电针组大鼠Morris水迷宫逃避潜伏期短于对照组（P〈0．05）。电针组大鼠在平台象限游泳时间占时间之比和经过平台的次数明显大于对照组（P〈0．05）;海马CA3区GAP-43蛋白阳性表达神经元数在对照组呈现出随着时间的推移而逐渐下降的趋势,而在电针组则呈现为先上升再下降的趋势,在每个时间段上,电针组GAP-43蛋白阳性表达神经元数均比对照组多,该差异具有显著性（P〈0．05）;电针组c-fos蛋白阳性表达神经元数均比对照组多,该差异具有显著性（P〈0．05）。结论：电针“百会”,“大椎”穴能增加海马CA3区GAP-43和c-fos的表达,使细胞受到保护,细胞凋亡减少,海马最终得以保存更多神经元;明显改善脑缺血大鼠的神经和学习记忆能力。     

氯胺酮对SD幼鼠海马GAP-43蛋白的影响

目的观察氯胺酮对7d龄SD幼鼠海马神经元细胞GAP-43表达的影响。方法对7d龄SD幼鼠注射氯胺酮25mg/kg(k1组)、50mg/kg(k2组),对照组注射生理盐水50 ml/kg(k0组),24h后取材,采用免疫组化染色和Western blot技术检测SD幼鼠海马GAP-43蛋白的表达,进行图像分析。结果注射氯胺酮后24h,免疫组化染色GAP-43蛋白阳性细胞计数:k0组为(85.4±15.2)个/mm2,k1组为(67.6±11.5)个/mm2,k2组为(36.6±9.7)个/mm2。Western blot GAP-43蛋白电泳条带灰度值k0组为186.375±7.45,k1组为165.754±7.012,k2组为158.852±8.721。k1组和k2组GAP-43蛋白的表达明显减少。结论注射氯胺酮后24h,SD大鼠海马神经元细胞GAP-43蛋白的表达下调,可能和氯胺酮神经毒性有关。     

电针对兔脊髓损伤后神经源性膀胱尿动力学的影响

目的探讨电针对兔脊髓损伤后神经源性膀胱尿动力学的影响。方法将30只健康成年雌性新西兰兔随机分为空白组、模型组、电针组,每组10只。采用改良Allen’s法建立脊髓损伤后神经源性膀胱模型。于术前、术后1d、7d、14d、28d行尿动力学检查。结果术后1d:模型组与电针组最大膀胱测量容量(MCBC)较空白组明显升高,膀胱最大逼尿肌压力(Pdetmax)较空白组明显降低,有显著性差异(P<0.05);术后7d:模型组与电针组进行比较,MCBC、Pdetmax差别均无统计学意义(P>0.05);术后14d:模型组与电针组进行比较,MCBC差别无统计学意义(P>0.05);电针组Pdetmax明显高于模型组(P<0.05);术后28d:电针组MCBC与Pdetmax均较模型组明显改善(P<0.05)。结论电针夹脊穴和会阳穴可改善脊髓损伤后的膀胱功能。