流行性出血热病毒感染家兔后外周血液淋巴细胞内病毒抗原反应的动态观察

家兔感染EHFV-J10株后,用PAP方法、单克隆荧光抗体法及间接IFA检测了外周血淋巴细胞内病毒抗原反应,发现:感染后第5天,病毒抗原开始在淋巴细胞胞浆内出现,第6～8天抗原反应性较强,第10天后阳性抗原逐渐消失。结果还表明,用PAP法对淋巴细胞内EHFV抗原检出的阳性动物数明显高于单克隆荧光抗体法和IFA法,且抗原检出时间早于后2种方法。     

间接免疫荧光法检测麻疹抗原在麻疹早期诊断中的临床应用

目的:探讨间接免疫荧光法(Indirect immunofluorescence Assay,IEA)检测麻疹病毒抗原对儿童麻疹病毒(measles virus,MV)感染的早期诊断价值.方法:观察86例临床诊断麻疹的患儿,在发病的不同阶段IFA检测痰液MV抗原和酶联免疫吸附试验(engymelinked imgmunosorbent assay,ELISA)检测血清中MV特异性LgM抗体,采集30份上呼吸道感染患者痰液进行IFA麻疹病毒抗原检测,比较分析检测结果.结果:86例中发病7 d内IFA测抗原ELISA测抗体两种方法的阳性率为分别为97.1%和16.2%;7 d后为33.3%和88.9%,P均＜0.01.IFA测抗原阳性率与检测时间的相关系数为-0.91,P=0.02;ELISA测抗体阳性率与检测时间的相关系数为0.97,P=0.04.30份对照组的标本MV抗原检测均为阴性,IFA测抗原的特异性与敏感性分别是100%和97.1%.结论:IFA测抗原在疾病早期检出阳性率高,阳性检出率与检测时间成负相关,IFA测抗原痰液麻疹病毒抗原是一种早期快速、特异敏感的实验室检测方法.     

组合抗原ELISA法和潜伏态IFA在HHV-8血清检测中的对比研究

目的比较HHV-8组合抗原ELISA检测法与潜伏态病毒IFA法的检测灵敏性与特异性,并验证组合抗原ELISA法作为分子流行病学调查方法的可行性。方法组合抗原ELISA检测法与潜伏态病毒IFA法对32例法国AIDS相关KS患者血清和23例法国肝移植后皮肤癌患者血清检测对比;组合抗原法对12例新疆地区KS患者血清和不同地区儿童血清进行HHV-8检测,结果32例KS患者血清组合抗原ELISA与潜伏态IFA的检出效率分别为75.0%和40.6%,其中潜伏态IFA检出的13例阳性血清,12例被组合抗原ELISA成功检出。潜伏态IFA检测阴性的19例KS血清中,组合抗原检出12例阳性血清;23例肝移植后皮肤癌患者血清潜伏态IFA检测全部阴性,而组合抗原ELISA检出1例弱阳性,2方法符合率达95.6%。组合抗原对不同地区小样本血清HHV-8检测显示出不同的结果:新疆地区12例KS血清阳性率100%;儿童血清HHV-8检测结果:新疆地区儿童感染率17.8%,四川儿童1.4%,法国儿童0。结论该实验室建立的HHV-8组合抗原ELISA法在灵敏性方面较传统方法有明显提高,特异性方面差异较小,HHV-8组合抗原ELISA初步具备分子流行病学调查的灵敏性、特异性要求。     

大鼠仙台病毒ELISA、间接免疫荧光和免疫印迹三种检测方法的比较

目的比较ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)、IFA(immuno-fluorescence assay)和WB(Western blot)三种方法在大鼠仙台病毒血清学检测中的差异。方法仙台病毒蛋白抗原经凝胶电泳分离转移后用于血清学检测的WB方法;使用IFA、ELISA方法对20份无菌大鼠、227份SPF大鼠以及63份清洁级大鼠送检血清样品进行检测,阳性及可疑样品用WB方法进行了验证。结果 20份无菌大鼠血清样品被3种方法检测为仙台病毒抗体阴性;SPF级大鼠样品被IFA方法判定为阴性,1.32%(3/227)被ELISA方法判定为阳性,其中有2/3被WB确认为阳性;ELISA、IFA和WB在清洁级大鼠样品中检出仙台病毒的阳性率分别为为18.12%、11.34%和15.87%。结论三种检测方法灵敏度从高到低依次为ELISA、WB和IFA。WB方法可作为IFA和ELISA难以确定结果的替代方法。     

流行性出血热病毒在MA-104和Vero-E_6传代细胞上繁殖动态的比较

<正> 流行性出血热病毒(EHFV)在某些原代及传代细胞上能适应增殖,国内外已有过报道。但用对轮状病毒十分敏感的恒河猴胚肾MA-104细胞培养和增殖EHFV并与通常使用分离该病毒的Vero-E_θ细胞进行繁殖动态观察,尚未有过报道。本文用间接免疫荧光法(IFA)比较观察EHF病毒在两种细胞上的增殖动态,为MA-104细胞代替常规Vero—E_θ细胞用于该病毒的分离、传代等研究以及抗原片的制备提供依据。材料与方法一、EHFV:陈株,采用A549人肺癌细胞系     

猴疱疹病毒(B病毒)抗体检测方法的比较研究

目的 对HSV-1作抗原的玻片酶免疫法（EIA）用于B病毒抗体检测的可靠性进行研究。方法 用HSV-1为抗原的玻片酶免疫法（EIA）和酶联免疫吸附法（ELISA）与B病毒为抗原的斑点酶免疫法（DIA）、免疫荧光法（IFA）及酶联免疫吸附法（ELISA）对猕猴血清进行B病毒抗体检测的比较分析。结果 HSV-1为抗原的EIA与B病毒为抗原的DIA、IFA和ELISA检测结果的符合率分别为100％、95．6％和97．4％；HSV-1为抗原的EIA检测确定的阴性血清样本，经B病毒抗原的IFA检测均为阴性；在HSV-1为抗原的EIA确定的779份阴性血清中，经B病毒抗原的ELISA检测，有2．6％（20份）为阳性；HSV-1抗原的EIA和HSV-1为抗原的ELISA检测均为阴性的20份血清样本，经B病毒抗原的ELISA检测，18份仍为检出阴性，2份为阳性。结论 HSV-1为抗原的EIA的检测结果与B病毒抗原的DIA、IFA和ELISA的检测结果一致性较好。同时，用HSV-1抗原进行B病毒抗体检测，存在极少数阳性动物漏检的可能。     

抗猴逆转病毒Ⅰ型(SRV-1)杂交瘤细胞株的建立及应用

以SRV-1蔗糖梯度离心纯化抗原免疫SPF级的BALB/c小鼠,用SP2/0骨髓瘤细胞与免疫小鼠脾细胞融合。应用间接免疫荧光法(IFA)检测抗体,抗原为感染SRV-110d的Raji细胞。筛选出两株SRV-1小鼠杂交瘤细胞株及单克隆抗体(McAb)C_4和C_(15)。两株杂交瘤细胞经3次克隆后分别注入同品系的小鼠腹腔,所产生的腹水经IFA和ELISA法测定其滴度为1:800～1:1600。经琼脂免疫双扩散法鉴定,C_4McAb     

ELISA快速检测单纯疱疹病毒抗原

用ELISA双抗体夹心法检测65份不同来源临床标本中HSV抗原,其结果分别与病毒分离和间接免疫荧光法(IFA)进行比较。病毒分离的阳性率为40％(26/65),接种后72h内出现典型细胞病变的占53.85％(14/26)。34份临床标本同时做IFA检测,阳性率为38.2％(13/34)。ELISA检测的阳性率为35.4％(23/65),与病毒分离和IFA结果的符合率分     

大鼠吸入EHFV气溶胶后体内抗原抗体的动态观察

本次试验研究表明:实验大白鼠吸入EHFV气溶胶后第5天部份实验鼠血中即可检测到EHFV抗原,14天后EHF抗原全部消失,病毒血症可持续7天左右;第7天肺组织中可检测到EHF抗原其IF强度和病毒感染滴度亦随感染时间而增高。EHF抗原阳性的肺组织中IgA水平显著高于EHF抗原阴性的肺。肺组织中IgA的增高可能有促进EHFV的感染,这对研究EHFV气溶胶感染提供了一定的科学依据。     

用McAb对湖北40株流行性出血热病毒抗原的分析研究

从湖北省不同疫区 EHF 病人中分离的40株 EHFV,用12个单克隆抗体以直接或间接 IFA 对其抗原性进行比较。证明它们的抗原性有差异。抗原性的差异不但存在于不同地区的毒株,而且存在于同一地区的不同毒株。且大多数的毒株能同抗汉坦病毒单克隆抗体反应,说明 EHFV 抗原结构的复杂性。     

流行性出血热患者血浆和尿液中EHF病毒的分离与鉴定

用 Vero-E。细胞从164份流行性出血热患者血浆或尿液中分离到126株流行性出血热病毒(EHFV)。经 IFA 和 ELISA 法检查,病毒在细胞培养中稳定地增殖,病毒效价随传代次数增加而升高,随意对其中两株病毒(来源于血浆的 EHFV_(435)株和尿液的 EHFV_(114)株)进行了初步血清学鉴定和单克隆抗体分析发现:①对恢复期血清抗体效价较急性期有4倍以上升高;②抗原性与EHFVA_9株和汉坦病毒76-118株关系密切;与来自湖北疫区黑线姬鼠的病毒有抗原性差异;③病毒的感染性能被兔抗 EHFVN 清所中和。④当病毒传至第7代时,电镜下可见圆形和椭圆形颗粒。以上结果表明早期患者约80％存在病毒血症。还提示肾损害与病毒的作用有关。     

流行性出血热病毒在MA_(104)、BSC细胞培养中的生长特性

将EFIFV_(114)株感染MA_(104)、BSC细胞获得成功,病毒抗原检出时间分别在病毒感染细胞后第一代的第4天和第6天,病毒抗原在 MA_(104)细胞上的检出时间较 Vero-E。细胞早两天,并且具有与 Vero-E_6细胞相同的生长特性。病毒释放商峰在其感染细胞后第9～13天,病毒在两株细胞中的效价均可达到 TCID_(50)10~(-6)/0.1ml,这一研究为 EHFV 提供了新的细胞系统。     

固定液种类和固定时间对免疫组化染色的石蜡切片中抗原检测效果的影响

采用３种不同的固定液（１０％中性缓冲福尔马林、乙醇、Ｂ－５固定液）及固定时间，分别对３种含有不同抗原的组织进行固定，应用石蜡切片免疫组化染色比较他们的结果，发现：固定时间以６～１２ｈ最佳；而检测不同抗原应选择不同的固定液，检测Ｂ淋巴细胞Ｌ２６抗原，应首选Ｂ－５固定液，检测Ｖｉｍｅｎｔｉｎ及ＥＨＦＶ抗原以１０％ＮＢＦ最佳。     

流行性出血热病毒在Vero-E_6细胞内的增殖特性研究

采用病毒盲传的方法,检测流行性出血热(EHF)早期患者血液标本中的 EHF 病毒,阳性率为79.7%(145/182).病毒抗原量随盲传时间延长而增加,病毒增殖高峰期在其感染细胞后的9～13d.细胞感染病毒后出现空泡样变,粗面内质网扩张,并在感染细胞内找到病毒颗粒和病毒包涵体.以上结果为研究 EHF 病毒的增殖特征提供了新的依据,并指出病毒盲传的方法是提高临床标本中病毒检出率的有益方法.     

鼠痘病毒潜伏感染的研究

对经实验前后的普通级和清洁级Ｋ Ｍ,ＢＡＬＢ／ｃ,Ｃ５７ＢＬ小鼠,分别用ＩＦＡ,ＥＬＩＳＡ、ＰＡＰ和ＡＢＣ法方法检测小鼠血清中的ＬＣＭＶ、ＥＨＦＶ、ＭＰＶ、ＭＨＶ,仙台病毒抗体和抗原,电镜检查组织中的病毒颗粒。结果显示：未经实验及经实验１５ｄ和３０ｄ后的抗体和抗原。电镜检查组织中的病毒颗粒。经实验６０天后检测普通级ＫＭ和ＢＡＬＢ／ｃ小鼠鼠痘各品系小鼠血清病毒抗体均为阴性,经实验６０于后检测普通级Ｋ     

Efficacy of inactivated vaccine containing cyto-hemagglutinin against epidemic hemorrhagic fever in rabbits

Using the Z-10 strain of epidemic hemorrhagic fever virus (EHFV) as seed, and the primary cell of Meriones unguiculatus kidney tissue as incubation cell, a propiolactone inactivated epidemic hemorrhagic fever (EHF) vaccine was prepared, according to a similar procedure required for the production of biological products such as the Japanese B encephalitis vaccine. Besides the EHFV antigen detected by ELISA or reversed passive hemagglutination test (RPHA) as were used for the formalin inactivated vaccine, higher titres (1:128-1:1024) of EHFV hemagglutinin antigen was also detected in this EHFV vaccine. Immunization with twice intramuscular injection of this vaccine produced high titred (1:20-1:160) neutralizing antibody and low titred (1:10-1:20) hemagglutination antibody, in addition to the immunofluorescence (IF) and reversed passive hemagglutination inhibition (RPHI) antibodies. These results indicated an apparent difference in the immunogenicity between the beta-propiolactone and formalin inactivated EHF vaccines. With the approval of the Ministry of Health, human test is now underway in this laboratory.     

咸宁黑线姬鼠中流行性出血热病毒的分离与鉴定

从湖北咸宁黑线姬鼠中分离到一株 EHF 抗原因子,经系统的血清学鉴定,与多个单克隆抗体和抗血清起反应,排除了呼肠病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型的污染,证实为 EHFV,并命名为 A_(24)株。