外源性单磷酸鸟苷环二聚体防龋的实验研究

目的初步探讨外源性单磷酸鸟苷环二聚体(c-di-GMP)对大鼠口腔内龋齿的防龋效果。方法 SPF大鼠感染致龋菌后,随机分成3组,分别用外源性c-di-GMP、氟化钠水溶液、质量体积比为0.9%氯化钠给大鼠施药,用唾液取样细菌培养、龋齿记分观察外源性c-di-GMP在动物口内对致龋菌的生长繁殖以及对龋病发生、发展的影响。结果通过唾液取样进行变形链球菌培养计数,c-di-GMP组与阴性对照组相比,无显著性差别(P>0.05);Keyes龋齿记分结果显示,c-di-GMP组龋损程度及数量都均少于对照组(P<0.05),从龋病发展程度看,c-di-GMP组最为缓慢,仅存在釉质和牙本质浅层龋损。结论外源性c-di-GMP可以有效抑制大鼠龋齿的发生和发展,有望成为一种新型防龋药物。     

外源性单磷酸鸟苷环二聚体防龋的动物实验研究

初步探讨外源性单磷酸鸟苷环二聚体（c-di-GMP）对大鼠口腔内龋齿的防龋效果。方法 SPF大鼠感染致龋菌后,随机分成3组,分别用外源性c-di-GMP、氟化钠水溶液、质量体积比为0.9%氯化钠给大鼠施药,用唾液取样细菌培养、龋齿记分观察外源性c-di-GMP在动物口内对致龋菌的生长繁殖以及对龋病发生、发展的影响。结果 通过唾液取样进行变形链球菌培养计数,c-di-GMP组与阴性对照组相比,无显著性差别（P>0.05）;Keyes 龋齿记分结果显示,c-di-GMP组龋损程度及数量都均少于对照组（P<0.05）,从龋病发展程度看,c-di-GMP组最为缓慢,仅存在釉质和牙本质浅层龋损。结论 外源性c-di-GMP可以有效抑制大鼠龋齿的发生和发展,有望成为一种新型防龋药物。     

减毒鼠伤寒沙门菌防龋疫苗的免疫防龋效果

【目的】采用减毒鼠伤寒沙门菌S .typhimuriumSL32 6 1(pET 17b/A)防龋疫苗经不同途径免疫定菌大鼠 ,观察其对变形链球菌在大鼠牙面黏附、龋病发生的影响等免疫防龋效果。【方法】将 5 0只大鼠随机分组 ,经口服、皮下、黏膜下途径免疫 ,接种变形链球菌并给予致龋饲料。对各组大鼠口腔中变形链球菌的定居菌落进行计数、黏附率计算 ,收集大鼠颌骨标本 ,根据Keyes评分标准作龋齿计分统计。【结果】口服活菌苗 S typhimuriumSL32 6 1(pET 17b/A)组变形链球菌数为(3 4± 1 4)× 10 4 CFU ;磨牙龋齿Keyes计分总和为 30 7± 6 0 ,均明显低于其它组 (P <0 0 5 )。【结论】口服S typhimuriumSL32 6 1(pET 17b/A)活菌苗可抑制变形链球菌黏附于牙面 ,并能减少龋病发生 ,具有较好的防龋效果。     

光动力疗法对大鼠龋齿模型的防龋效果及机制

目的观察光动力疗法(PDT)对大鼠龋齿模型的防龋效果,并探讨其防龋机制。方法将以变异链球菌为致龋菌建立大鼠龋齿模型成功的40只21 d鼠龄、断奶的无特定病原体级Wistar雄性大鼠随机分为生理盐水组、血卟啉单甲醚(HMME)-PDT组、单纯激光组、单纯光敏剂组和氟化钠组,每组8只。生理盐水组大鼠用浸有150μL生理盐水的小棉球反复涂搽磨牙各面5 min;HMME-PDT组大鼠用浸有150μL 40 mg·L-1HMME的小棉球放于磨牙各牙面上,避光孵育5 min后,用532 nm的半导体激光垂直照射磨牙各面,功率密度为140 m W·cm~(-2),照射时间为90 s,能量密度为12.6 J·cm~(-2);单纯激光组大鼠不进行光敏剂HMME处理,仅用532 nm的半导体激光垂直照射磨牙各面,照射时间、功率密度、能量密度均同HMME-PDT组;单纯光敏剂组大鼠仅用浸有150μL 40 mg·L~(-1)HMME的小棉球放于磨牙各牙面上,避光孵育5 min,不进行激光照射;氟化钠组大鼠用浸有150μL 2 g·L-1氟化钠溶液的小棉球反复涂搽磨牙各面5 min;各组大鼠每周处理1次,连续4周,每次处理后及时采集大鼠口腔变异链球菌进行培养,平板菌落计数记录细菌抑制情况,连续4周后处死大鼠,记录龋齿Keyes计分,扫描电镜观察牙齿表面形态。结果时间因素对大鼠口腔变异链球菌的生长无影响(F=0.11,P>0.05),处理因素对大鼠口腔变异链球菌的生长有影响(F=230.89,P<0.05),且处理和时间因素存在交互效应(F=6.36,P<0.05)。第1、2、3、4周处理后,HMME-PDT组和氟化钠组大鼠牙齿变异链球菌菌落数均少于生理盐水组、单纯光敏剂组和单纯激光组(P<0.05);第1、2、3周处理后,HMME-PDT组大鼠牙齿变异链球菌菌落数均少于氟化钠组(P<0.05)。各组大鼠平滑面龋齿均未检出Dx级龋损;HMME-PDT组和氟化钠组大鼠平滑面龋齿均未检出Dm级龋损。HMME-PDT组、氟化钠组大鼠平滑面龋齿E、Ds级龋损的Keyes计分均显著低于生理盐水组、单纯光敏剂组和单纯激光组(P<0.05),但HMME-PDT组与氟化钠组大鼠平滑面龋齿E、Ds级龋损的Keyes计分比较差异无统计学意义(P>0.05)。各组大鼠窝沟龋齿中,仅生理盐水组检出Dx级龋损。HMME-PDT组、氟化钠组大鼠窝沟龋齿E、Ds、Dm级龋损Keyes计分均显著低于生理盐水组、单纯光敏剂组和单纯激光组(P<0.05),但HMME-PDT组与氟化钠组大鼠之间窝沟龋齿E、Ds、Dm级龋损的Keyes计分比较差异无统计学意义(P>0.05)。扫描电镜显示,生理盐水组和单纯光敏剂组大鼠牙釉质表面粗糙,凸凹不平,有大量凹坑状脱矿区和划痕;单纯激光组大鼠牙釉质表面相对光滑,有少量圆形凹坑并可见凹坑内熔融状结构;氟化钠组大鼠牙釉质表面相对光滑,脱矿区较少,并可见到脱矿区的再矿化;HMME-PDT组大鼠牙釉质表面较平整,点状凹陷减少,深脱矿区少,且脱矿区域大多表浅。结论 HMME-PDT可通过减少致龋菌数量、改善牙齿表面结构等途径对大鼠致龋模型起到明显的预防作用。     

可生物降解聚合物载体微球口服防龋疫苗免疫效果

 【目的】以PAc多肽(301～319)作为抗原,PBLG-PEG-PBLG做载体制备防龋微球疫苗,口服免疫SD大鼠,观察其对变链菌在大鼠牙面的黏附及对龋病发生的影响效果。【方法】28只出生30d的雄性SD大鼠随机分成4组建立龋模型,对各组大鼠口腔中变链菌的黏附菌落计数,根据Keyes评分标准做龋齿记分。【结果】PAc多肽抗原微球疫苗口服组的变形链球菌数为(13.2±8.16)×104CFU/ml;磨牙龋齿Keyes计分为31.8±6.77,均显著低于对照组(P<0.01)。【结论】口服PAc多肽抗原微球防龋疫苗均能减少龋模型大鼠龋齿的发生,以光滑面龋的减少更显著。     

绿原酸防龋的实验研究

目的 研究绿原酸对龋病发生发展的抑制效果。方法 制备不同浓度绿原酸,采用液体稀释法检测其体外抑制变形链球菌和远缘链球菌的效果;建立SD大鼠人工龋模型,分别用绿原酸溶液、甲硝唑洗必泰溶液和蒸馏水给大鼠施药,采用Keyes记分法观察绿原酸对大鼠口腔内龋齿发生发展的抑制效果。结果 绿原酸溶液对变形链球菌ATCC10449株和远缘链球菌OMZ65株的最小抑菌浓度均为2.5 mg/mL,最小杀菌浓度分别为7.5 mg/mL和5 mg/mL。在人工龋大鼠模型中,与蒸馏水相比,绿原酸组龋齿计分明显降低,而与甲硝唑洗必泰组相近。结论 绿原酸对变形链球菌和远缘链球菌生长有明显抑制作用,并可有效抑制大鼠龋齿的发生。     

氟化物对变形链球菌生长和产酸影响的体外实验研究

目的:通过研究氟化物浓度对致龋菌生长和代谢的影响,以进一步阐明氟化物的防龋机制。方法:在含有不同浓度(0～1.0%)氟化钠的培养基内培养变形链球菌标准菌株,以分光光度法检测培养前后培养基光密度值(OD值),以反映变形链球菌的生长情况;以复合玻璃pH电极法检测培养前后培养基pH的变化(△pH),以反映变形链球菌的产酸代谢情况。结果:与对照组相比,各实验组变形链球菌的生长受到明显抑制,且随着培养基内氟化钠浓度的增加,变形链球菌的数量呈浓度依赖性减少;同时随着培养基内氟化钠浓度的增加,各组培养基的pH变化也逐渐减小,当氟化钠的浓度达0.5%～1.0%时,培养前、后培养基的pH几乎未发生明显的变化。各组培养基的OD值与△pH间无明显相关性。结论:氟化钠可显著抑制致龋菌的生长及产酸代谢活动,但氟化钠可能主要通过干扰牙菌斑内致龋菌的产酸代谢活动来发挥其局部防龋作用,而其对致龋菌生长的抑制或杀灭仅起次要作用。     

可生物降解聚合物载体微球口服防龋疫苗免疫效果

【目的】以PAc多肽（301～319）作为抗原，PBLG—PEG—PBLG做载体制备防龋微球疫苗，口服免疫SD大鼠，观察其对变链菌在大鼠牙面的黏附及对龋病发生的影响效果。【方法】28只出生30d的雄性SD大鼠随机分成4组建立龋模型。对各组大鼠口腔中变链菌的黏附菌落计数，根据Keyes评分标准做龋齿记分。【结果】PAc多肽抗原微球疫苗口服组的变形链球菌数为（13．2±8．16）×10^4CFU／ml；磨牙龋齿Keyes计分为31．8±6．77，均显著低于对照组（P〈0．01）。【结论】口服PAc多肽抗原微球防龋疫苗均能减少龋模型大鼠龋齿的发生。以光滑面龋的减少更显著。     

龋病和无龋儿童牙菌斑内细菌菌属的差异性研究

目的：通过检测、分析龋病与无龋儿童牙菌斑内细菌菌属的差异,初步认识牙菌斑菌属的改变与龋病的关系。方法：5~7岁的龋病儿童(龋齿牙面≥6)和无龋儿童(龋齿牙面=0)各20例,刮取牙表面牙菌斑,提取基因组DNA,16S rDNA扩增后与基因芯片杂交,检测牙菌斑中的细菌菌属。结果：从两组儿童牙菌斑生物膜样本中共检出86个细菌种系型,归为5个门类28个属类,龋病组细菌的种系型少于无龋组(P<0.05);其中戈登链球菌在龋病组中的检出率显著低于无龋组(P<0.05),韦荣球菌属在龋病组中的检出率则显著高于无龋组(P<0.05),而唾液链球菌在两组间的检出率差异无统计学意义(P>0.05)。结论：儿童牙菌斑生物膜中微生物结构富有多样性,菌群的改变可能导致了龋病的发生和发展。     

变形链球菌重组质粒pcDNA3-pacA/pcDNA3-pacP免疫定菌鼠的龋齿记分研究

目的　观察已构建的基因重组质粒 pc DNA3- pac A和 pc DNA3- pac P作为防龋疫苗的防龋效果。方法　分别将基因重组质粒 pc DNA3- pac A、pc DNA 3- pac P和 pc DNA3- pac A+pc DNA3- pac P联合使用作为基因疫苗注入免疫定菌鼠颌下腺区皮下 ,以 Keyes龋齿计分法评估免疫后定菌鼠磨牙的患龋情况。结果　重组质粒单独免疫组和联合免疫组大鼠的龋齿计分均明显低于阴性对照组和空白对照组 (P<0 .0 5 ) ;联合免疫组和 pc DNA3-pac A组的龋齿记分均明显低于 pc DNA3- pac P组 (P<0 .0 5 )。结论　重组基因质粒 pc DNA3- pac A和 pc DNA3- pac P均可有效的控制龋损的发生 ,降低龋坏程度 ,有望成为防龋基因疫苗。     

光动力疗法对人工口腔生物膜致龋变形链球菌抑靛作用的研究

目的探讨光动力疗法对口腔生物膜致龋变形链球菌抑制作用。方法选择40颗新鲜健康恒牙标本制备成釉质块,随机分为4组每组10块釉质块,依此置人人工唾液孵育形成人工获得性膜,再置人变形链球菌液孵育人工致龋,单纯HMME组,单纯使用20μg／mLHMME孵育;单纯激光组,单纯采用激光照射;光动力组,20txg／mLHMME溶液孵育后进行再激光照射;阴性对照组,采用生理盐水处理。检测菌斑生物膜变形链球菌菌落数及抗菌率、变形链球菌代谢产物、人工龋釉质块表面湿微硬度评价各组抗菌作用及对釉质质量的影响。结果各组菌落数和抗菌率差异均有统计学意义（P〈0．05）,光动力组菌落数最少,抗菌率最高。各组终末pH值和△pH值差异均有统计学意义（P〈0．05）,光动力组终末pH值最高,ApH值最小。各组人工龋釉质块表面显微硬度差异有统计学意义（P〈0．05）,光动力组人工龋釉质块表面显微硬度最高。结论光动力疗法对人工龋模型生物膜致龋变形链球菌抑制作用明显,抑制变形链球菌产生代谢酸,保护牙釉质提高抗龋能力,是一种有效的防龋方法．具有广泛的应用前景。     

放射性治疗对SD大鼠唾液中变形链球茵数量的影响

目的：通过建立动物模型,探讨放射性治疗对SD大鼠唾液中变形链球菌数量的影响。方法：选自20只雌性sD大鼠,随机分成试验组和对照组,每组各10只。经接种变形链球茵后,试验组予以15Cy／d放射剂量对双侧腮腺进行照射,连续照射30d。于放射始、30、60d以及90d时,观察大鼠唾液中变形链球茵的数量,并于放射90d时,统计患龋率及根据Keyes评分法评定大鼠患龋状况。结果：随着观察时间的延长,两组大鼠唾液中变形链球菌的数量均不断增加,但实验组各时间点变形链球菌增加数量明显高于对照;放射90d时,大鼠唾液变形链球菌的数量可达l（8．60±O．21）＊107]mL,而对照组仅为[（1．914-0．12）×107^]mL,两组间差异有统计学意义（P〈0．05）。实验组的患龋率及Keyes评分法均明显高于对照组,两组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：放疗可促进SD大鼠唾液中变形链球菌的繁殖而增加其患龋的风险。     

碳酸饮料与清洁级大鼠龋齿发生相关性的实验研究

目的 比较不同的酸性饮料对清洁级大鼠龋齿发生率的影响.方法 将40只清洁级BABL/c鼠分为去离子水组(A组)、可口可乐组(B组)、鲜橙多组(C组)和雪碧组(D组),每组10只,去离子水组为对照组,其余为试验组,采用Keyes经典评分方法进行龋齿发生的评估.结果 除去离子水外其余实验饮料均对实验鼠的牙齿均有酸蚀作用,并可以导致龋齿.结论 碳酸饮料对牙釉质具有酸蚀作用,可以导致龋齿.     

两种不同充填材料与牙界面致龋菌附着量的体外实验研究

目的了解两种不同充填材料与牙界面致龋菌的附着量,为选择充填材料提供参考依据。方法收集30颗新鲜的离体前磨牙,随机分成3组,空白对照组、A组及B组,将A、B两组于颊侧制备V类洞。分别采用银汞、Beautiful氟化玻璃聚合体2种材料充填。将各样本置于变异链球菌悬浮液中培养24 h。采集样本单位面积界面处的细菌,稀释,测量光密度值(A)。结果各组界面的细菌附着量之间相比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 Beautiful氟化玻璃聚合体在龋齿的充填方面优于银汞合金。     

酪蛋白磷酸肽-磷酸钙溶液抑制牛牙早期釉质龋的体外研究

目的 研究酪蛋白磷酸肽-磷酸钙溶液(CPP-ACP)在体外对牛牙釉质早期人工龋的抑制作用.方法 将28颗牛牙釉质样本随机分成4组,每组7颗,浸入唾液24 h以形成人工获得性膜,然后用4种不同溶液(A组:去离子水;B组:1% CPP-ACP溶液;C组:0.05%的NaF溶液;D组:1% CPP-ACP和0.05% NaF...     

蜂胶涂膜抗乳牙人工龋的体外研究

目的研究以蜂胶醇提取物制成的缓释涂膜对乳牙人工龋的预防作用,为蜂胶涂膜防龋的临床应用奠定基础。方法选用48颗离体滞留乳牙随机分为4组,表面开窗区分别用10g/L、100g/L蜂胶涂膜和氟保护漆处理,并设1组阴性对照。处理后的标本置于变形链球菌和远缘链球菌培养基中培养96h,取出制成磨片并拍摄软X线照片。用TMR软件对各组标本进行脱矿量和龋损深度分析。结果2种浓度的蜂胶涂膜与氟保护漆预防早期人工龋的效果差异均无统计学意义(P>0.05),而与对照组差异有统计学意义(P<0.001)。结论蜂胶涂膜能够缓释药物,延长作用时间,可达到与氟化物涂膜相似的预防乳牙龋效果。     

两种浓度氟保护漆在体外对变形链球菌、远缘链球菌生长抑制作用的实验研究

目的 比较两种浓度氟保护漆对致龋链球菌生长抑制作用.为推广氟保护漆进行群体防龋提供可靠的理论依据.方法 将实验组:0.5%氟保护漆、0.1%氟保护漆;对照组:0.1%洗必泰、0.05%氟化钠、0.9%生理盐水分别加入含有变形链球菌、远缘链球菌菌悬液的BHI培养基中,采用厌氧连续培养技术,观测菌落计数变化.比较其对致龋链球菌生长抑制作用效果.结果 0.5%氟保护漆、0.1%氟保护漆对致龋链球菌具有一定的抑制作用,但是其作用明显小于0.1%洗必泰.二者之间抑制生长效果存在显著性差异.结论 两种浓度氟保护漆在体外能直接杀灭一定数量的致龋链球菌.     

激光共聚焦扫描显微镜观察变异链球菌高致龋力临床株与标准株合成胞外多糖能力差异

目的了解变异链球菌(简称变链菌)593号高致龋力临床分离株在生物膜状态不同时期与标准株ATCC25175(均为血清型c)合成胞外多糖的能力差异。方法在聚苯乙烯塑料片上分别形成3、12、20 h变链菌生物膜标本,采用异硫氰酸荧光素标记的伴刀豆球蛋白A对合成的胞外多糖进行染色,用激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察。采用静置法培养形成黏附生长的细菌,蒽酮法测定3～24 h其合成胞外多糖的量。结果胞外多糖与染料结合后发出绿色荧光,各时间段593号临床株绿色荧光的分布较ATCC 25175标准株更致密和广泛。3～20 h 593号临床株合成水溶性葡聚糖能力强于标准株(P<0.05);3～16 h 593号临床株合成水不溶性葡聚糖能力强于标准株(P<0.05);其他时间两者合成胞外多糖的能力差异无统计学意义(P>0.05)。结论在生物膜形成过程中两菌株合成胞外多糖的模式相同,均随时间延长而合成量增加,但在生物膜形成早期(3～16 h)高致龋力临床株表现出不同于标准株的胞外多糖合成模式,其更强的合成胞外多糖能力可能是其具高致龋力的原因之一,提示研究致龋机制时使用临床株作为研究样本较标准株更为敏感。