下丘脑褪黑素受体亚型基因及蛋白表达的研究

目的：应用PT－PCR技术和免疫组织化学染色显示人胚胎下捕脑褪黑素受体及其亚型的分布。方法：取人胚胎下丘脑组织，抽提总RNA并应用RT－PCR方法检测其mRNA，扩增所得阳性产物用自动测序仪测序；石蜡包埋下丘脑组织，应用鼠抗人mt1和MT2受体单克隆抗体分别检测褪黑素mt1和MT2受体亚型mRNA及其蛋白的表达。结果和结论：人胚胎下丘脑组织中存在mt1和MT2受体亚型mRNA的表达及其蛋白的翻译，提示在该组织中有mt1和MT2两种受体亚型的表达。     

人食管下括约肌毒蕈碱受体的表达

目的：研究毒蕈碱受体亚型在人食管下括约肌（LES）套索纤维和钩状纤维的表达,对LES胆碱能收缩机制作进一步分析．方法：选取高位食管中段癌,行食管大部切除术患者12例,取食管胃接合部标本分离套索纤维和钩状纤维．分别应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白印记（Western Blot）检测5种M受体亚型在两种肌纤维中mRNA和蛋白的表达．结果：不同M受体亚型mRNA在两种肌纤维的表达有统计学差异（P〈0．05）,从数据观察5种受体亚型mRNA表达从强到弱顺序依次为M2,M3,M1,M4,M5;同一受体mRNA在两种肌纤维间表达无统计学差异;不同M受体亚型蛋白在两种肌纤维表达有统计学差异（P〈0．05）,5种受体亚型蛋白表达强弱同mRNA;同一受体在两种肌纤维间蛋白表达无差异．结论：5种M受体亚型mRNA和蛋白在两种肌纤维均有表达,M2受体表达量最高,其它依次是M3,M1,M4和M5受体;相同受体在两种肌纤维间mRNA和蛋白的表达相同．     

人胚胎胸腺褪黑素受体的亚型的分布

目的：应用免疫组织化学和核酸原位杂交技术显示人胚胎胸腺褪黑素受体及其亚型的分布。方法：人胚胎胸腺组织用4%多聚甲醛及0.1?PC固定,石蜡包埋组织,应用mt1和MT2受体亚型的特异性探针和鼠抗人mt1和MT2受体单克隆抗体分别检测mt1和MT2受体亚型mRNA的表达及蛋白的翻译。结果：人胚胎胸腺组织的皮髓质的上皮细胞及胸腺小体均存在mt1和MT2受体亚型mRNA的表达及其蛋白的翻译。结论：人胚胎胸腺组织中存在mt1和MT2受体亚型mRNA及蛋白,提示在该组织中有mt1和MT2受体亚型的表达。     

人外周血粒细胞褪黑素受体亚型的基因与蛋白表达

目的：研究人外周血粒细胞褪黑素受体(melatonin receptor，MR)亚型的基因与蛋白表达的特点。方法：通过密度梯度离心法分离得到健康成年人外周血粒细胞，采用异硫氰酸胍-苯酚-氯仿一步法抽提总RNA，分别采用Northern印迹和RT-PCR方法检测MR亚型mt1和MT2的mRNA，并将RT-PCR的阳性产物通过自动测序仪测序；同时应用免疫组化染色方法检测mt1和MT2受体亚型蛋白在粒细胞内的分布特点。结果：Northern印迹方法检测出长约1．1kb的mt1mRNA，但未检出长约1．1kb的MT2mRNA；RT-PCR方法则得到了约370bp的mt1 cDNA片段，无320bp的MT2 cDNA片段，mt1阳性条带测序结果显示扩增产物与人mt1受体亚型的基因序列相吻合；免疫组化结果显示：人外周血粒细胞存在mt1受体蛋白，主要分布于细胞膜和细胞质，呈棕褐色阳性颗粒，而细胞核上几乎未见阳性颗粒，MT2受体蛋白则未检出。结论：证实正常人外周血粒细胞存在mt1亚型的基因与蛋白的表达，而无MT2亚型的基因与蛋白的表达，提示外周血粒细胞为褪黑素(melatonin，Mel)作用的外周靶器官。     

正常大鼠逼尿肌P2X受体亚型mRNA表达的实验研究

目的研究正常大鼠逼肌P2X受体亚型的表达情况.方法提取大鼠逼尿肌组织总mRNA,并以脑组织作为阳性对照,行RT-PCR,反应所得产物于1.5%琼脂糖凝胶电泳,溴化乙啶染色(EB)观察,照相.结果在大鼠逼尿肌上发现了6种P2X受体亚型的mRNA表达,其中P2X1相对表达较高,而P2X6不表达.脑组织中7种P2X受体亚型均有表达.结论正常大鼠逼尿肌内有6种P2X受体亚型mRNA表达,提示P2X受体亚型对逼尿肌舒缩功能的调节作用具有深入研究的价值.     

人甲状腺肿瘤组织褪黑素受体改变及意义

目的:探讨成人甲状腺肿瘤及瘤旁正常组织褪黑素受体表达的改变及意义。方法:取成人甲状腺肿瘤(腺瘤及腺癌)组织及瘤旁正常组织,抽提总RNA,合成mt1、MT2受体引物,用RT—PCR半定量分析褪黑素受体亚型mRNA表达的改变。结果:人甲状腺腺瘤、腺癌及瘤旁正常甲状腺组织均有mt1、MT2受体表达。甲状腺腺瘤组织mt1、MT2受体亚型表达量与正常甲状腺组织无差异     

正常幼龄豚鼠巩膜组织毒蕈碱受体五种亚型的表达

目的 探讨正常幼龄豚鼠眼巩膜组织毒蕈碱受体(M受体)五种亚型的表达.方法 2周龄三色豚鼠6只,RT-PCR检测巩膜组织M受体亚型的mRNA的表达,免疫荧光法染色检测M受体的蛋白水平的表达.结果 豚鼠巩膜组织中有M受体五种亚型mRNA的表达,其中以M1亚型的表达最高.激光共聚焦显微镜观察发现,在巩膜基质中可见到M受体五种亚型的表达绿色荧光,围绕在成纤维细胞核周围.结论 豚鼠巩膜组织中存在M受体五种亚型,提示M受体参与调控眼球的生长.     

血管紧张素Ⅱ1型受体亚型鉴别的RNAi应用研究

[摘要] 目的 针对小鼠血管紧张素Ⅱ 1型受体(Angiotensin ⅡReceptor 1, AT1R)两亚型之间无工具药区分的现状, 研究应用RNA干扰(RNA interference, RNAi)技术来区分两种亚型受体功能的可行性。方法 选择雄性C57BL小鼠作为动物模型,通过在脑干孤束核（Nucleus Tractus Solitarius,NTS）注射携带短发夹RNA（short hairpin RNA, shRNA）腺病毒的方法,喂养10d后取出脑干组织做标本,使用原位杂交的方法检测每只小鼠脑干NTS部位 AT1R mRNA两种亚型的表达情况,同时使用免疫组织化学的方法显示受体蛋白表达的情况。结果 注入携带针对AT1aR mRNA的shRNA腺病毒后,AT1aR mRNA的表达降低了61.2±6.8%（p<0.01）,AT1bR mRNA的表达则不受影响（p>0.05）;改用AT1bR mRNA相应的shRNA腺病毒, AT1bR mRNA的表达降低了51.6±5.2%（p<0.01）,AT1aR mRNA的表达基本不受影响（p>0.05）。用免疫组织化学显示AT1R蛋白表达情况,发现两种情况下表达均出现不同程度的下降。结论 所设计的针对不同亚型AT1R的shRNA,可以特异地沉默各自不同受体的mRNA表达,并同时在蛋白水平上显示出AT1R受到抑制的结果。可以将其应用于区别AT1R两种亚型受体功能的研究。 [关键词] RNA干扰 血管紧张素 孤束核 受体     

T3核受体各亚型mRNA在不同甲状腺功能患者外周血白细胞中的表达

目的：T3对细胞的代谢调节作用是通过甲状腺激素核受体（T3R）介导的，细胞中T3R量与细胞对T3的反应性有关。本文探讨了T3R表达与人体不同甲功状态的关系。方法：应用半定量RT－PCR法，研究了Graves'甲 亢、桥本甲炎甲功正常、桥本甲炎甲减患者外周血白细胞中T3R各亚型m RNA表达量的变化，并与正常对照进行比较。结果：外周血白细胞中T3Rα1、T3Rα2、T3RβmRNA表达在Graves'甲亢患者降低，在桥本甲炎甲减炎患者升高，而桥本甲炎甲功正常者有升高倾向；T3Rβ1mRNA在不同甲功状态中变化不大。结论：在外周血白细胞中，T3R－mRNA各亚型表达与甲功状态密切相关，T3对其受体亚型mRNA表达水平有下调作用，但T3－Rβ1mRNA表达不受甲功状态影响。     

人胚胎甲状腺褪黑素受体mRNA的检测

目的：检测胚胎甲状腺中是否表达褪黑素受体。方法：取人胚胎甲状腺,抽提总ＲＮＡ并用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测其ｍＲＮＡ,阳性产物用自动测序仪测序。结果：人胚胎甲状腺总ＲＮＡ以ＭＴ１及ＭＴ２两种引物进行的ＲＴ－ＰＣＲ产物电泳呈现阳性条带,测序结果显示扩增产物与人类褪黑素受体ｃＤＮＡ相吻合。结论：人胚胎甲状腺组织中存在有褪黑素ＭＴ１,ＭＴ２两种受体的ｍＲＮＡ,表明该组织中有褪黑素ＭＴ１,ＭＴ２受体的表达。     

雌性性早熟大鼠下丘脑､垂体褪黑素受体表达的变化

目的:通过研究雌性性早熟大鼠血浆褪黑素(melatonin,MT)水平,下丘脑?垂体MT受体MT1?MT2表达,探讨MT及MT受体在性发育启动和性早熟中的作用?方法:正常26日龄雌性SD大鼠40只,随机分为性早熟组?性早熟干预组?生理盐水对照组,后者又分为青春前期组和青春期组?使用N-甲基-DL-天冬氨酸(NMA)建立雌性性早熟大鼠模型,促性腺激素释放激素(GnRH)类似物(曲谱瑞林)干预性早熟,通过酶联免疫法检测各组大鼠夜间血浆MT促黄体生成素(LH)水平,实时定量PCR法检测下丘脑?垂体GnRH?MT1?MT2 mRNA表达?结果:各组大鼠夜间血浆MT水平无明显差异,性早熟组下丘脑及垂体MT1 mRNA表达水平均低于青春前期组,差异具有统计学意义,与正常发育的青春期组比较无明显差异?与性早熟组相比,性早熟干预组下丘脑?垂体MT1 mRNA表达均升高,差异有统计学意义?下丘脑?垂体MT2表达各组间无差异?结论:雌性性早熟大鼠下丘脑?垂体MT1表达减少,GnRH类似物可上调MT1的表达?MT受体在青春期发育中可能起抑制性作用,通过下丘脑?垂体的MT受体表达的减少,减弱对中枢的抑制作用,参与正常青春发育或性早熟过程?     

Distribution of melatonin receptor in human fetal brain

Melatonin,synthesizedbypinealglands,hasmanyimportantbiologicalfounctions.Whenbindingwithmelatoninreceptors(MR),itactivatesthetrans-membranesignaltransductionbymodulatingthecon-centrationofthesecondmessengers.Melatoninrecep-torbelongstoGprotein-couplesuperfamilythatwidelyexistsinnervesystemandperipheraltissues.Thereare2kindsofmelatoninreceptorsinhuman,mt1andMT2,whichmostlyexistinthecentralner-voussystemandfetalleptomeninges［1］.Currentlytherearelittledocumentsaboutthedistributionofmelatoninr…     

褪黑素对乳腺癌的抑制作用

褪黑素对多种肿瘤尤其是乳腺癌有明显抑制作用。在雌激素受体(estrogen receptor,ER)阳性的乳腺癌中, 褪黑素对乳腺癌细胞和移植瘤的抗癌作用主要是通过其受体MT1介导抑制ER mRNA的表达与ER的转录活性而实现; 褪黑素还可调节核受体超家族中其他受体和雌激素代谢酶的转录激活及相关基因的表达,并能抑制肿瘤的有氧代谢 和细胞增殖、生存、转移和耐药的关键通路。在乳腺癌细胞中表现出细胞特异性的细胞生长抑制作用和细胞毒作 用。人类和动物模型的研究均表明褪黑素昼夜节律的紊乱促进了人类乳腺癌生长、代谢和信号转导,进而驱动了乳 腺肿瘤内分泌治疗无效和化疗耐药。     

RT—PCR分析探测人胚胎卵巢中的褪黑素受体

目的：研究入胚胎卵巢中是否存在褪黑素受体。方法：取人胚胎卵巢,用逆转录一多聚酶链反应方法鉴别褪黑素受体。结果：人胚胎卵巢总RNA以MT1及MT2两种受体引物进行的RT-PCR产物电泳呈现阳性条带,测序显示扩增产物与人类脑组织褪黑素受体cDNA相吻合,结论：人胚胎卵巢组织中存在有MT1、MT2两种褪黑素受体。证明卵巢是褪黑素作用的靶器官,褪黑素可能直接作用于卵巢,参与胚胎卵巢的发育或调节胚胎卵巢的功能。     

松果体对大鼠体温节律调节的研究

目的探讨大鼠体温调节的中枢机制。方法通过毁损ＳＣＮ和松果体以及在松果体中注入ＭＴＸ,观察大鼠一天中体温的变化规律。结果毁损ＳＣＮ后不影响大鼠的体温和昼夜节律性。毁损松果体以及在松果体中注入ＭＴＸ后,大鼠的体温明显下降,并且昼夜节律性也消失。结论松果体通过ＭＴ调节大鼠的体温节律。     

褪黑素受体在人胎脑中的分布

目的 探讨两种褪黑素受体MTl、MT2在人胚胎脑组织中是否存在及存在的部位。方法 收集胎龄为4—6个月的水囊引产胚胎16例，运用免疫组织化学和原位杂交方法，切片观察褪黑素受体MTl和MT2在不同脑区的分布。结果 褪黑素受体MTl在下丘脑、小脑皮层中存在；褪黑素受体MT2在下丘脑、枕叶和延髓中存在。结论 人胚胎脑组织细胞中存在MTl、MT2两种褪黑素受体，表明脑组织是褪黑素作用的靶器官。     

褪黑素对大鼠下丘脑视交叉上核神经元放电的影响

目的 观察内源性和外源性褪黑素对大鼠下丘脑视交叉上核神经元自发放电的影响。方法 在昼夜周期的不同时相（主观白天的CT4－8和主观黑夜的CT16－20），采用松果腺摘除（PINX）和氨甲蝶呤（MTX）抑制褪黑素（MEL）合成的方法，分别去除内源性MEL的主要来源后，观察大鼠SCN神经元自发放电的变化以及侧脑室注射外源性MEL的作用。结果 （1）不管是主观白天还是主观黑夜，SCN神经元存在规则放电、不规则放电和簇状放电3种形式的自发放电，摘除松果腺和抑制MEL合成，对这3种放电形式未见明显影响；（2）SCN神经元的自发放电频率在主观白天高，在主观黑夜低。摘除松果腺和抑制MEL合成后，放电频率尽高夜低的节律性消失，放电频率有所提高；（3）SCN神经元对外源性MEL起抑制反应，高亲和力（ML－1）受体拮抗剂luzindole能阻断这种抑制效应，而低亲和力（ML－2）受体拮抗剂哌唑嗪（prazosin)则不能，提示MEL的抑制作用是由ML－1受体介导的。结论 松果腺作为大鼠昼夜节律组构中的一个调整器，分泌MEL并由ML－1受体介导，对SCN神经元自发放电有抑制性的调节作用。     

青少年特发性脊柱侧凸患者骨髓间充质干细胞褪黑素受体表达的研究

目的:比较体外培养的青少年特发性脊柱侧凸(AIS)患者组和正常对照组骨髓间充质干细胞(BMSCs)褪黑素受体表达的差异性,并探讨其意义。方法:分别从患者髂前上棘处穿刺抽取10ml骨髓,肝素抗凝。采用密度梯度离心法分离BMSCs,体外培养并传至P3代,进行表型鉴定。抽提细胞的总RNA,采用RT-PCR方法检测2组褪黑素受体MT1、MT2 mRNA的表达水平。结果:分离的单个核细胞经培养至P3代,使用流式细胞仪进行细胞表型鉴定,体外培养细胞的表型与BMSCs的表面标志相符。AIS组MT1、MT2 mRNA的表达水平与正常对照组相比无统计学差异(P>0.05)。结论:AIS患者BMSCs褪黑素受体MT1、MT2的表达无异常。在干细胞水平,褪黑素受体与AIS的发病可能没有明显的相关性。