应用噬菌体生物扩增技术快速检测痰标本中结核分枝杆菌

目的探讨噬菌体生物扩增法(PhaB)快速检测结核分枝杆菌的临床应用价值。方法应用涂片镜检法、L-J罗氏培养法、Bactec-960快速培养法及PhaB法共同检测151例痰标本。结果痰标本四种方法检测结果比较:151份临床确诊的活动性肺结核患者痰标本,涂片镜检、L-J罗氏培养、Bactec-960快速培养和PhaB法检查结果分别是20.5%、38.4%、59.6%和60.9%;比较PhaB与涂片和培养的阳性检测率,Phab检出率远高于涂片法(χ2=51.04,P<0.05),差异有统计学意义,Phab检出率高于罗氏法检出率(χ2=15.31,P<0.05),差异有统计学意义。结论PhaB方法能快速、简便地检测结核分枝杆菌,且检出率较高,可作为结核病诊断的重要方法。     

TB-LAMP法检测阳性痰标本再培养增加耐药肺结核发现率

目的 评价结核分枝杆菌环介导等温扩增法(TB-LAMP)在检测肺结核患者痰标本LAMP阳性后再培养及表型药物敏感试验对耐药结核分枝杆菌的检出效果。方法 随机收集2017年5月至2019年2月于遵义医科大学附属医院结核病专科门诊就诊和结核病区住院的疑诊肺结核患者7823例,每例留取4份痰标本,随机分别进行1份痰涂片镜检、2份传统罗氏培养和1份TB-LAMP核酸检测,将TB-LAMP阳性标本进一步行传统罗氏培养及表型药物敏感试验,分析TB-LAMP阳性标本再培养对耐药结核病的诊断价值,提高对耐药结核病的防治意识。采用graphpad prism6.0软件进行分析,χ2检验,P<0.05为差异具有统计学意义。结果 所纳入的可疑肺结核患者7823例,TB-LAMP法、传统罗氏培养和涂片镜检的阳性检出率分别为16.6%、7.8%和4.6%,痰TB-LAMP法阳性检出率与痰涂片抗酸染色、传统L-J培养检查相比,差异具有统计学意义(分别为χ2＝593.57,P＜0 .01;χ2＝283.49,P＜0 .01)。TB-LAMP阳性痰标本再培养阳性率为44%(574/1298),其中52.8%(303/574)与传统结核分枝杆菌培养共同阳性,另外47.2%(271/574)为传统结核分枝杆菌培养阴性,而TB-LAMP阳性标本再培养阳性;228株结核分枝杆菌临床分离株进行结核分枝杆菌药物敏感试验,敏感结核分枝杆菌占75%(171/228),耐药结核分枝杆菌25%(57/228),其中RR-/MDR-TB为12.72%(29/228)。结论 TB-LAMP阳性标本再培养可提高RR-/MDR-TB发现率,为耐药结核病的早诊断、早治疗、减少传播提供了检测思路,值得推广应用。     

环介导等温扩增法诊断初诊肺结核病研究

目的:初步评价环介导等温扩增法(Lamp)检测痰中结核分枝杆菌的准确性,探讨临床诊断初诊肺结核病人的应用价值。方法:选取249例初诊疑似肺结核病人的痰标本,同时进行Lamp、直接涂片抗酸染色法和改良罗氏培养基培养法检测。结果:剔除培养失败和非结核杆菌的标本,共检测了739份痰标本,其中直接涂片抗酸染色法检出阳性标本70份,阳性率9.47%;培养检出阳性标本118份,阳性率15.97%;Lamp检出阳性标本99份,阳性率13.40%。以培养法为标准,涂片法的灵敏度57.63%,特异度99.68%,符合率为94.30%;Lamp的灵敏度77.12%,特异度98.71%,符合率为96.61%。结论:Lamp在检测初诊疑似肺结核病人中有较高的灵敏度和特异性,适用于基层结核病工作中初诊肺结核病人的诊断。     

噬菌体生物扩增法检测肺结核患者痰标本的临床应用价值

目的探讨噬菌体生物扩增法对肺结核临床诊断的应用价值。方法对298例肺结核患者的痰标本,20例非结核性其他肺部疾病患者痰标本进行噬菌体生物扩增法检测,同份标本同时进行涂片抗酸染色、分枝杆菌罗氏培养。结果 298例痰标本有167例噬菌体生物扩增法检测结果阳性,阳性率56.0%;有78例涂片抗酸染色阳性,阳性率26.2%;有129例罗氏培养阳性,阳性率43.3%。结论噬菌体生物扩增法检测肺结核痰标本中结核分枝杆菌只需2d时间,操作简便、灵敏度高、特异性强,可作为诊断肺结核的一种检测方法。     

夹层杯集菌离心涂片法与改良罗氏培养法检测抗酸杆菌的比较

目的评价夹层杯集菌离心涂片法（夹层杯法）检测抗酸杆菌的临床诊断价值。方法收集2008年7-12月就诊于湖南省湘潭、湘乡、邵东和耒阳4个县（市）结核病防治部门共1 190例肺结核可疑症状者的1 782份痰标本（晨痰642份,即时痰1 140份）,每份标本同时采用夹层杯法与改良罗氏培养法（培养法）平行处理,对其检测结果进行比较。结果对晨痰标本检测的阳性率,培养法为26.64%(171/642), 高于夹层杯法的阳性率23.52%（151/642）,两者差异有显著性（χ2=4.56, P=0.04）;对即时痰标本检测的阳性率,培养法为23.33%(266/1 140),高于夹层杯法的阳性率18.07%(206/1 140),两者差异有高度显著性（χ2=34.60, P=0.00）。夹层杯法对晨痰的阳性检出率高于即时痰（χ2=7.62,P=0.01）;培养法对晨痰的阳性检出率与即时痰比较,差异无显著性（χ2=2.42,P=0.12）。结论夹层杯法检测抗酸杆菌的阳性率低于培养法,但简单、省时,便于进行质量控制,是一种很有推广价值的检测方法;夹层杯法检测晨痰抗酸杆菌的阳性率较高,故应尽量留取晨痰作抗酸杆菌检测。     

浓缩集菌法与其他方法检测结核杆菌结果比较分析

目的评价浓缩集菌法、直接涂片镜检法、罗氏培养法、Xpert MTB/RIF法检测痰标本结核分枝杆菌阳性率,探讨浓缩集菌法在结核病检查中的应用。方法选取2016年6月-2017年6月本院疑似肺结核患者痰标本355份,分别采用浓缩集菌法、直接涂片镜检法、罗氏培养法、Xpert MTB/RIF法检测结核分枝杆菌结果比较分析。结果浓缩集菌法、直接涂片镜检法、罗氏培养法和Xpert MTB/RIF法的结核分枝杆菌阳性检出率分别为32.96%、17.18%、33.52%、33.80%;浓缩集菌法的结核杆菌检出率明显高于直接涂片镜检法,差异有统计学意义(P0.05)。而浓缩集菌法与罗氏培养法、Xpert MTB/RIF法在结核杆菌检出率差异无统计学意义(P0.05)。结论痰浓缩集菌法用于痰标本结核分枝杆菌检测具有操作简便、阳性检出率高及实验室安全等优点,可与培养法、Xpert MTB/RIF等检测法联合运用,提高结核分枝杆菌的检出率。     

3种方法检测肺结核患者痰标本结果分析

目的比较3种检测方法对肺结核患者痰菌检出率,探索噬菌体生物扩增法提高肺结核病患者结核菌阳性检出率的可行性。方法对同1例肺结核患者的痰标本,采用直接厚涂片法、结核分枝杆菌培养法和噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌。结果在150例肺结核患者痰标本中,直接厚涂片法检出菌阳26例（检出率为17．3％）,痰结核分枝杆菌培养阳性33例（检出率为22．0％）,噬菌体生物扩增法阳性85例（检出率为56．7％）,噬菌体扩增法阳性检出率高于直接厚涂片法和分枝杆菌培养法（χ^2=51．8,38．8,P〈0．01）。结论噬菌体生物扩增法可提高肺结核病例的痰菌检出率。     

噬菌体生物扩增法检测痰中结核分枝杆菌的价值

目的评价噬菌体生物扩增法快速检测痰中结核分枝杆菌的应用价值。方法应用噬菌体生物扩增法快速检测27例痰标本,通过与改良罗氏培养法进行比较,对应用噬菌体生物扩增法检测痰中结核分枝杆菌进行初步的分析和评价。结果对于27例痰标本,噬菌体生物扩增法检测出阳性12例(44.44%),改良罗氏培养法检出阳性9例(33.33%),两种方法均阳性8例(29.63%);噬菌体生物扩增法检测痰中结核分枝杆菌与改良罗氏培养法无显著性差异(2=0.80,p>0.05)。结论噬菌体生物扩增法可简便、快速地检测痰中的结核分枝杆菌,具有很好的临床应用价值。     

噬菌体生物扩增法与常规方法在结核分枝杆菌检测中的比较

目的评价噬菌体生物扩增技术在结核分枝杆菌快速检测中的临床应用价值,并与其他两种常规方法进行比较。方法应用噬菌体生物扩增法（PhaB法）、Bactec 960培养法、涂片法同时对135份临床确诊为结核病（包括肺结核、结核性胸膜炎、结核性脑膜炎）的患者的标本（痰、胸腔积液、肺泡灌洗液、脑脊液）以及排除结核病的患者（21例慢性支气管炎、20例支气管扩张病、18例肺癌、8例肺炎）的痰液共计67份进行检测。结果 135份标本应用噬菌体生物扩增法、Bactec 960培养法与涂片法的阳性率为48.2%、44.4%、28.2%。噬菌体生物扩增法的阳性检出率较高于涂片法,差异有统计学意义,阳性符合率为58.5%（38/65）,阴性符合率为95.7%（67/70）,总体符合率为77.8%（105/135）。噬菌体生物扩增法与Bactec 960培养法比较差异有统计学意义,阳性符合率为78.5%（51/65）,阴性符合率为72.9%（51/70）,总体符合率为75.6%（102/135）。在涂片阴性、Bactec 960培养法检测均为阴性的75例标本中,用噬菌体生物扩增法检测出11例阳性,其检出率为14.7%。67份排除结核病的痰标本应用三种方法的阳性率均为0%。结论噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌在诊断结核病中有较好的灵敏度和特异度,是辅助诊断和鉴别诊断结核病的有效手段。     

应用噬菌体空斑法快速检测煤工尘肺结核病人的研究

目的探讨噬菌体空斑法结核菌快速鉴定技术(噬菌体空斑法)在煤工尘肺结核病人中的应用价值及与其他检测方法的比较。方法对我科已被确诊的120例煤工尘肺结核病人的痰标本同时进行涂片、集菌、改良罗氏培养、细菌(BACTEC)培养和噬菌体空斑法检测,对比其检查结果。结果涂片法、集菌法、改良罗氏培养法、BACTEC培养法和噬菌体空斑法的阳性率分别为:10.00%、23.33%、8.33%、28.33%和52.50%;对所有经噬菌体空斑法检测阳性的病例进行重复检测,其重复符合率为84.21%。结论噬菌体空斑法具有灵敏度高、特异性强、重复性好的特点,而且方法简单、快速,无需贵重仪器,完全可以应用于煤工尘肺结核病人的初筛和结核病的常规诊断。     

荧光定量PCR在结核分枝杆菌检测中的应用价值

目的比较荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)与抗酸染色、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异性,探讨FQ-PCR检测痰标本中结核分枝杆菌的应用价值。方法对311例临床确诊的肺结核病患者和40例非结核呼吸系统疾病患者的痰标本应用FQ-PCR法、痰涂片抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌。结果FQ-PCR、抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌的阳性率分别为47.0%(146/311)、28.3%(88/311)、35.4%(110/311),特异性分别为100.0%、100.0%、95.2%,以FQ-PCR检测的阳性率最高。结论FQ-PCR是一种快速、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法,在临床上有重要应用价值。     

BacT／ALERT 3 D检测技术应用于结核分枝杆菌快速培养的效果评价

目的：评价BacT/ALERT 3D快速培养系统对结核分枝杆菌（MTB）的检测和肺结核早期诊断的应用价值。方法采用BacT/ALERT 3D液体培养技术和L-J固体培养法分别对病例标本培养,比较2种方法检出结果及检出时间。结果平均出现阳性天数BacT/ALERT 3D法为（13±2.05）d,L-J固体培养法为（34.7±4.76）d,差异有统计学意义（P＜0.05）;BacT/ALERT 3D法和L-J固体培养法对治疗2月后肺结核病例的涂阳标本MTB培养阳性检出率分别为71.18％（42/59）和67.80％（40/59）,而对涂阴标本BacT/ALERT 3D法 MTB培养阳性率39.62％（42/106）高于L-J固体培养法阳性率26.42％（28/106）,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论与传统L-J固体培养法比较,BacT/ALERT 3D液体培养技术明显缩短检出时间,并能提高低浓度（痰涂阴）标本的结核分枝杆菌阳性检出率。     

显微镜观察药物敏感度检测技术在结核病早期诊断中的应用

目的 利用显微镜观察药物敏感度检测技术(MODS)直接检测痰标本中结核分枝杆菌(MTU),评价其在结核病快速诊断中的应用价值.方法 收集264份肺结核临床疑似患者的痰标本和20份非结核病患者痰标本,分别采用抗酸染色法、罗氏培养基(L-J)培养法和MODS技术进行MTU检测,观察3种方法对痰标本中MTU的检出情况;对抗酸染色法和L-J培养法检测均为阴性的肺结核临床疑似患者进行为期90 d的临床随访,由专科医师在此基础上作出临床诊断,再以临床诊断为标准,对比分析3种方法的检测性能,评价MODS技术的临床应用价值.结果 3种方法检测20份非结核病患者痰标本结果均阴性;在264份肺结核临床疑似患者的痰标本中,抗酸染色法、L-J培养法和MODS技术的阳性检出率分别为28.8％、36.0％、42.8％,其中在102份抗酸染色和(或)L-J培养阳性的痰标本中,MODS检出97份(95.1％),在162份抗酸染色和L-J培养均为阴性的标本中,MODS阳性16份;若以临床诊断为标准,MODS、L-J培养法及抗酸染色法的敏感度和特异度分别为63.4％和97.8％、54.3％和100.0％、43.3％和100.0％,三者敏感性差异有统计学意义(P＜0.01);MODS的阳性检出中位时间为10d,明显短于L-J培养的25 d.结论 MODS技术与传统病原学检测方法相比,具有敏感性好、检出时间短的优势,适用于结核病的临床快速诊断.     

以多表位融合抗原检测结核分枝杆菌抗体、TB-SA抗体检测和噬菌体裂解法快速检测在结核病诊断中应用价值研究

目的:评价以融合抗原检测结核分枝杆菌抗体、TB-SA抗体检测和噬菌体裂解法快速检测在结核病诊断中应用价值。方法:选择结核组病例134例与非结核组265例按说明书方法进行检测。结果:噬菌体裂解法灵敏度72.39%,特异度91.7%;TB-SA抗体灵敏度75.37%,特异度77.7%;融合抗原检测抗体灵敏度85.8%,特异度92.1%。结论:融合抗原检测抗体与噬菌体裂解法和TB-SA抗体试验相比敏感度更高,值得在各级医疗单位使用。     

结核分枝杆菌新型改良罗氏快速培养基的研究

目的研究结核分枝杆菌（结核菌）快速培养方法，提高阳性率，以协助临床早期诊断。方法在新型改良罗氏快速培养基和改良罗氏培养基上接种结核菌后置5．0％的CO2环境中培养，观察结核菌生长情况。结果10株结核菌生长平均所需时间在改良罗氏培养基上为（17．25±5．88）d，而在新型改良罗氏快速培养基上仅为（9．75±1．64）d，两者差异有显著性（P=0．001）；在后者，结核菌生长更快速，菌落形成茂盛。结论新型改良罗氏快速培养基比改良罗氏培养基培养结核菌所需时间明显缩短，且生长结果更易观察。     

BACTEC MGIT 960用于结核分枝杆菌快速培养的初步评价

目的评价BACTEC MGIT 960系统快速分离结核分枝杆菌及药敏试验的效果。方法对临床拟诊结核病患者痰样本,采用直接涂片萋-尼法抗酸染色显微镜检、BACTEC MGIT 960和改良罗氏(L-J)培养法进行检测,并对分离到的结核分枝杆菌进行药敏试验。比较其分离的阳性率、培养及药敏所需的时间。结果共对634例拟诊结核病患者痰样本进行了检测,MGIT960培养的阳性率(51.7%)明显高于L-J法(37.7%),直接涂片法阳性率最低(14.7%)。MGIT960和L-J法的污染率分别为4.9%和4.4%。MGIT960和传统的L-J法的检出时间分别为12.0 d和32.0 d。MGIT960和L-J法对异烟肼、利福平、链霉素和乙胺丁醇的药物敏感性检出时间分别为9.0 d和36.5 d。结论 BACTEC MGIT 960可以明显提高分离培养阳性率、缩短培养和药敏试验的时间。     

夹层杯集菌离心涂片法检测抗酸杆菌及影响检出率的因素分析

目的探讨夹层杯离心集菌涂片法检测痰液抗酸杆菌的临床应用价值以及了解影响痰液抗酸杆菌检出率的因素。方法收集735例确诊肺结核住院患者的痰标本,每例患者分别留取晨痰、夜间痰、即时痰各一份,每份标本同时采用夹层杯法与改良罗氏培养法平行处理,比较两种方法的阳性检出率以及不同性质和不同时段痰标本的抗酸杆菌阳性检出率。结果夹层杯法和改良罗氏培养法检测2205份痰标本的阳性率分别为28．9％和32．1％,二者相比较差异有统计学意义（χ^2=54．744,P〈0．001）;以培养法为标准,夹层杯法的敏感性、特异性、阳性预期值和阴性预期值分别为89．39％、99．53％、98．90％和95．21％;夹层杯法检测抗酸杆菌的阳性率脓性痰和血痰高达53．3％和48．5％,黏液痰和唾液痰只有9．9％和3．7％,培养法亦以脓性痰阳性率最高,达到54．8％,血痰次之,阳性率为51．3％,黏液痰阳性率为13．5％,唾液痰阳性率最低,仅为8．8％;对于不同时段的痰标本,两种方法检测抗酸杆菌的阳性率均以晨痰最高。结论夹层离心集菌涂片法是一种简单、省时、阳性检出率高,更利于标准化的抗酸杆菌检验方法,且与改良罗氏培养法相比有较好的符合率,可能是一种具有推广价值的检测方法;晨痰、脓性痰、血痰阳性检出率高,应强调收集晨痰、脓性痰、血痰送检。     

3种方法检验结核分枝杆菌的比较

目的比较直接涂片抗酸染色法、罗氏培养基培养法、环介导等温扩增法(lamp)检测痰结核分枝杆菌的准确度和特异性,及在临床诊断中的应用价值。方法用3种方法对送检的845个痰标本进行检验,并对检验结果进行分析。结果 845个痰标本中,涂片阳性81个,阳性率9.6%;培养阳性136个,阳性率16.1%;lamp阳性124个,阳性率14.7%。结论培养法是检测结核分支杆菌的金方法,检出率高,其次是环介导等温扩增法,其灵敏度较高与培养法检测结果相比差异无统计学意义(P>0.05);涂片法检出率较低,与另外两种方法相比差异有统计学意义(P<0.05)。     

Cyscope~荧光显微镜技术用于结核病检测的临床应用评价

目的评价Cyscope荧光显微镜技术用于结核病检测的临床诊断价值。方法收集拟诊肺结核病人痰标本,分别用金胺-罗丹明染色发光二极管Cyscope荧光显微镜涂片检查(LED荧光法)、萋尼氏抗酸染色明场显微镜涂片检查(萋尼法)、改良罗氏培养基培养(罗氏培养法)和BACTEC MGIT960快速培养系统培养(BACTEC MGIT960法)进行检测。将LED荧光法与其他3种方法的检测结果进行比较。结果本研究共收集、检测拟诊肺结核病病人痰标本106份。LED荧光法、萋尼法、罗氏培养法和BACTECMGIT960法的阳性检出率分别为31.13%、26.42%、39.62%和45.28%。以罗氏法为金标准,LED荧光法与萋尼法的灵敏度分别为69.05%和64.29%,χ2值为0.17,P值为0.687,差异无统计学意义,而特异性分别为95.08%和100.00%。以BACTEC MGIT960法为金标准,LED荧光法与萋尼法的灵敏度分别为60.42%和54.17%,特异性分别为93.10%和96.55%,χ2值分别为0.80和0.17,P值分别为0.375和0.687,差异均无统计学意义。LED荧光法与罗氏培养法和BACTEC MGIT960法的一致率分别为84.47%和78.30%。结论 Cyscope荧光法较准确,并且镜检敏感、快速,是目前诊断结核病的一种较为理想的检测方法。     

Xpert MTB/RIF技术在初治涂阴肺结核中的诊断价值

目的 探讨XpertMTB/RIF技术在初治涂阴肺结核患者诊断中的价值。方法 选取2014年10月至2016年1月盐城市阜宁县和滨海县临床诊断的341例初治涂阴肺结核患者,对其痰标本进行结核分枝杆菌涂片抗酸染色镜检、罗氏固体培养,并同时进行XpertMTB/RIF技术检测。结果 341例初治涂阴肺结核中罗氏固体培养阳性39例(11.44%),阴性302例(88.56%);Xpert MTB/RIF技术检测阳性52例(15.25%),阴性289例(84.75%)。以罗氏固体培养为金标准,Xpert MTB/RIF技术检测结核菌灵敏度为92.3%,特异性为94.70%,一致率为94.43%。Xpert MTB/RIF技术阳性检出中位时间为0 天(IQR 0-3),罗氏固体培养阳性检出的中位时间为38天(IQR 19-65)。Xpert MTB/RIF技术共有276例(80.9%)患者在当天出检测结果,与痰涂片的时效性相仿。结论 Xpert MTB/RIF技术操作简便,时效性好,检测结核分枝杆菌特异性和敏感性较高,对于初治涂阴肺结核的辅助诊断有一定的价值。