亚硝酸氧化法测定血清总胆红素

目的　探讨建立 1种新的化学氧化剂氧化法测定血清总胆红素 (TBil)。方法　在特定pH值下 ,当反应液中含有加速剂时 ,血清中的直接胆红素和间接胆红素同时被介质溶液中的亚硝酸氧化成淡绿色化合物 ,导致 45 0nm处的吸光度下降 ,比较反应前后的吸光度变化 ,求得胆红素浓度。结果　亚硝酸的最适浓度为 2 .0mmol/L。胆红素在 2 40s后完成氧化褪色反应。低、高TBil值的批内CV分别为 0 .92 %、1.0 2 %,天间CV分别为 3.14%、3.96 %。胆红素浓度在 5 13μmol/L内呈线性相关。平均回收率为 10 1.5 %。与J G法 (X)对比 ,高值TBil:Y =0 .991X 0 .6 34 ,r =0 .990 ;低值TBil:Y =1.0 2 1X 0 .484,r =0 .994。Hb 4.5g/L ,Vc 0 .1g/L ,TG 8.4mmol/L ,对结果无干扰。结论　该方法简便 ,使用试剂价格低廉、稳定 ,结果可靠 ,能同时满足于手工和自动分析。     

血清葡萄糖及1,5-脱水葡萄糖醇双项同测的建立

目的建立新全酶终点法同时测定血清中1,5-脱水葡萄糖醇(1,5-AG)和葡萄糖(Glu)。方法用葡萄糖激酶(GK)和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)偶联系统使血清中Glu彻底转化为不与呋喃糖氧化酶(PROD)反应的6-磷酸葡萄糖酸内酯(6-PGA),以其吸光度变化计算出Glu浓度;以PROD氧化1,5-AG,生成1,5-脱水果糖和H2O2,用Trinders反应比色测定出1,5-AG的浓度。结果1,5-AG在550μmol/L(Y=0.001X+0.065 8,r=0.999)以内,Glu浓度在40 mmol/L(Y=0.051X+0.128,r=0.998 9)以内线性良好。Glu和1,5-AG的平均批内变异系数(CV)分别为0.88%和1.05%,批间CV分别为1.40%和1.94%。Glu和1,5-AG的平均回收率分别为100.2%和101.6%。三酰甘油(TG)≤8.9 mmol/L、血红蛋白(Hb)≤4 g/L、总胆红素≤350μmol/L时不影响Glu和1,5-AG的测定。本法测定1,5-AG与Lana微柱法及GK法与HK法测定Glu相关性均良好(r2=0.999)。Glu与1,5-AG的95%参考值范围分别为3.7~5.7 mmol/L和83.1~240.7μmol/L。结论本法简便快速、灵敏、准确和稳定,可自动化双项同测Glu和1,5-AG,为糖尿病的检测与治疗监控提供了新的方法。     

新型化学氧化法测定胆红素试剂的研制

目的 探讨建立一种新型化学氧化法测定血清总胆红素和直接胆红素的新方法.方法 采用化学氧化法测定血清胆红素反应前后吸光度的变化,与标准品相比较,求得标本中总胆红素和直接胆红素的浓度.结果 TBIL精密度试验批内高低浓度CV值为0.65%-1.56%;DBIL为0.82%～1.93%.批问TBIL为3.5%、1.71%及1.24%;DBIL批间为4.38%、2.77%及1.60%.线性范围:TBIL可达686μmol/L:DBIL可达400μmol/L;总胆回收率101.8%～107.6%,平均104.5%.DBIL回收率为99.1%～100.5%,平均为100.2%.与其他相关试剂比较TBIL γ=0.9973～0.9992;DBIL γ=0.9962～0.9994.溶血、脂浊和维生素C干扰试验表明:标本中Hb小于2.7g/L,TG小于5.94mmol/L.VitC小于0.1g/L,对TBIL和DBIL的测定基本无干扰.结论 本试剂方法简便,结果准确、线性范围宽,试剂稳定,价格低廉.完全可用于检测临床标本.     

循环酶法双试剂测定血清同型半胱氨酸的方法学评价

目的对循环酶法双试剂测定血清同型半胱氨酸(Hcy)进行评价。方法样品中的氧化型Hcy被还原剂还原成游离型Hcy,游离型Hcy与试剂中的底物和酶发生反应,引起吸光度变化,通过检测反应中的吸光度变化的速率,可以计算出待测样本中Hcy的浓度。结果测定线性范围达0.6～65μmol/L;批内CV分别为2.85%、1.88%,日间CV分别为4.26%、3.19%,总CV分别为6.35%、5.33%;回收率93.5%～97.7%;本法和酶免疫分析法(ELA)比较:Y=1.040 0 X-0.549 8,r2=0.995 9,P>0.05,差异无统计学意义;样品中三酰甘油浓度小于或等于10mmol/L,血红蛋白浓度小于或等于4.5g/L,维生素C浓度小于或等于500mg/L,胆红素浓度小于或等于300μmol/L时,血氨小于或等于70μmol/L时,对结果无明显干扰。结论循环酶法双试刘测定Hcy,具有灵敏度高、线性范围宽、抗干扰因素强、精密度较好、易于自动化等特点,可作为临床实验室Hcy常规测定方法。     

钒酸盐氧化法测定血清胆红素的分析性能评价

目的对钒酸盐氧化法测定血清总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)进行方法学评价.方法系统研究钒酸盐氧化法测定血清胆红素的精密度、灵敏度、稳定性及干扰因素,并比较其与重氮法结果的相关性.结果钒酸盐氧化法测定TBil批内变异系数(CV) 1.67%,批间CV 2.92%,平均回收率99.8%.DBil批内CV 1.25%,批间CV 3.52%,平均回收率99.6%.维生素C(VitC)≤0.5 g/L时对钒酸盐法和重氮法均无干扰.三酰甘油(TG)<6 mmol/L时对钒酸盐法无干扰,对重氮法有明显干扰.血红蛋白(Hb)在4 g/L以下对钒酸盐法无干扰,对重氮法有较大干扰.结论钒酸盐氧化法灵敏度高、重复性好,抗干扰能力强,适用于实验室常规应用.     

对吡喃糖氧化酶法测定血清中葡萄糖的评价

目的对毗喃糖氧化酶法测定血清中的葡萄糖进行评价。方法进行方法学评价试验和方法间比较试验。结果检测限为0．039mmol／L,反应进程检测低值血清498s时吸光度趋于稳定,反应吸光度为0．35A;检测高值血清10min时吸光度趋于稳定,反应吸光度为2．0A,批内CV低、中、高值分别为0．70％、0．58％、0．70％,日间CV低、高值分别为2．32％、0．63％,线性范围36．61mmol／L,平均回收率102．7％,血红蛋白14．2g／L以下、总胆红素546．65μmol／L以下、甘油三酯25．78mmol／L以下、维生素C（Vc）100mg／dL以下无显著性干扰,与己糖激酶法相关,Y=0．9906X-0．0412,r=0．9998;与葡萄糖氧化酶法相关,Y=0．9980X-0．0379,r=0．9998,相关良好。结论该法简单、稳定,与己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法相关性良好,能较好地抗溶血、黄疸、乳糜、Vc的干扰。     

脲酶和亮氨酸脱氢酶偶联法动力学测定血清或尿液中尿素

目的　建立适合于自动化分析血清和尿液尿素的脲酶和亮氨酸脱氢酶偶联的连续监测法。方法　对pH、2 酮基异乙烯酸钠、亮氨酸脱氢酶和脲酶浓度等反应条件进行实验研究 ,并对建立的方法进行评价。结果　用双试剂连续监测法 ,试剂Ⅰ :10 0mmol/LN ,N 二乙醇胺基乙酸缓冲液 (pH 8.80 ) ,含 2 酮基异乙烯酸钠 3.0mmol/L、NADH 0 .3mmol/L、亮氨酸脱氢酶 2 .0kU/L。试剂Ⅱ :试剂Ⅰ中加入脲酶 70kU/L。本法线性范围血清 0 .5～ 15 0mmol/L ,尿液 8.0～ 6 5 0mmol/L。血清和尿液的平均回收率分别为 10 2 .1%和 10 1.5 %。血清批内和批间平均CV分别为 1.0 2 %和 1.70 % ;尿液批内平均CV为 1.98%。本法 (Y)和脲酶偶联谷氨酸脱氢酶法 (X)对比相关良好 (血清Y =0 .992X +0 .0 4 0 ,r=0 .993;尿液Y =0 .990X +0 .6 1,r=0 .991)。胆红素 <32 5 μmol/L、血红蛋白 <5g/L、抗坏血酸 <80 0 μmol/L、三酰甘油 (TG) <7.5mmol/L和NH+ 4 <0 .5mmol/L对测定无明显干扰。结论　本法简便、准确、线性范围广 ,可用于常规自动分析。     

酶法测定结合胆红素的方法学评价

目的评价胆红素酶法测定血清结合胆红素(CB il),并与干化学法作比较。方法在pH值5.5、120mmol/L苯二甲酸氢钾缓冲液中,胆红素氧化酶(BOD)选择性地氧化CB il,引起450 nm处吸光度(A)值下降,求得CB il浓度。加入氟化钠(NaF)和N-乙酰半胱氨酸(NAC),抑制BOD对未结合胆红素(UB il)和δ-胆红素(δB il)的氧化,消除其干扰。结果BOD法测定的线性范围达230μmol/L,批内变异系数(CV)为4.1%(低值)、1.4%(高值),批间CV为11.65%(低值)、10.26%(高值),平均回收率为97.8%。BOD法与干化学法比较,Y干化学法=1.016 0X酶法 1.603 1,r=0.990 7。结论该法能有效地抑制BOD对UB il和δB il的氧化,特异性的检测CB il,并可用于自动生化分析仪。     

化学氧化法测定血清直接胆红素试剂的研制

利用过硫酸钾为氧化剂,在含有稳定剂的Tris-HCL缓冲液条件下,仅使血清中结合胆红素被氧化,以此作直接胆红素测定.本法与改良J-G法(X1)和胆红素酶法(X2)的直接胆红素测定相关良好,分别Y=1.047 X1+1.120,r=0.9896;Y=1.039 X2+1.567,r=0.9831 .线性为0～350 μmol/L.低、中、高血清标本的CV值批内为3.42%、3.26%;2.04%,批间为4.97%;3.84%、3.18%.平均回收率105.6%.血红蛋白、维生素C干扰不明显.结论: 化学氧化法测定结果的准确性和精密度均符合临床要求.     

新型化学氧化法测定胆红素试剂的研制

目的探讨建立一种新型化学氧化法测定血清总胆红素和直接胆红素的新方法。方法采用化学氧化法测定血清胆红素反应前后吸光度的变化,与标准品相比较,求得标本中总胆红素和直接胆红素的浓度。结果TBIL精密度试验批内高低浓度CV值为0.65%～1.56%;DBIL为0.82%～1.93%。批间TBIL为3.5%、1.71%及1.24%;DBIL批间为4.38%、2.77%及1.60%。线性范围:TBIL可达686μmol/L;DBIL可达400μmol/L;总胆回收率101.8%～107.6%,平均104.5%.DBIL回收率为99.1%～100.5%,平均为100.2%。与其他相关试剂比较TBILγ=0.9973～0.9992;DBILγ=0.9962～0.9994。溶血、脂浊和维生素C干扰试验表明:标本中Hb小于2.7g/L,TG小于5.94mmol/L。VitC小于0.1g/L,对TBIL和DBIL的测定基本无干扰。结论本试剂方法简便,结果准确、线性范围宽,试剂稳定,价格低廉。完全可用于检测临床标本。     

对钒酸氧化法测定血清中胆红素的评价

目的 :评价钒酸氧化法测定血清中总胆红素和直接胆红素。方法 :钒酸氧化法的精密度、准确度实验及其重氮法相关和干扰因素实验。结果 :批内 CV总、直接胆红素分别为 0 .8%与 1 .3%。日间 CV为1 .8%与 1 .7% ,平均回收总胆红素为 1 0 1 .1 % ,直接胆红素 1 0 0 .1 %。与重氮试剂法相关 ( J- G法 )总胆为 Y(本法 ) =1 .0 1 5X(重氮法 ) - 0 .1 1 9,r=0 .998,直接胆红素为 Y(本法 ) =1 .1 0 1 x(重氮法 ) 0 .81 ,r=0 .952。相关良好 ,血红蛋白浓度和脂血分别高达 3g/L和 9.0 mmol/L不干扰。结论 :该法简单、快速、稳定 ,而且对溶血、乳糜等干扰因素的影响比重氮法小     

脲酶结合邻甲酚酞络合剂显色检测血清及尿液尿素含量

目的　建立一种实用的血清和尿液中尿素含量的比色测定方法。方法　脲酶水解尿素产生氨(NH3),使溶液pH升高,以邻甲酚酞络合剂(OCPC)作为pH指示剂,波长570nm吸光度变化与尿素浓度成正相关。结果　该法线性范围血清1.00～200mmol/L,尿液10.0～1000mmol/L;检测界限血清0.36mmol/L,尿液2.19mmol/L。精密度分析血清批内CV1.13%～2.78%,批间CV1.81%～3.91%,总CV2.13%～4.80%。尿液批内CV0.68%～1.72%,批间CV0.96%～2.24%,总CV1.17%～2.82%。平均回收率血清100%,尿液102%。该法(Y)与酶速率法(X)比较相关性良好(血清Y＝1.048X+0.511,r＝0.998,S     

钒酸盐氧化法测定血清胆红素的分析性能评价

目的　对钒酸盐氧化法测定血清总胆红素 (TBil)、直接胆红素 (DBil)进行方法学评价。方法　系统研究钒酸盐氧化法测定血清胆红素的精密度、灵敏度、稳定性及干扰因素 ,并比较其与重氮法结果的相关性。结果　钒酸盐氧化法测定TBil批内变异系数 (CV) 1.6 7% ,批间CV 2 .92 % ,平均回收率 99.8%。DBil批内CV 1.2 5 % ,批间CV 3.5 2 % ,平均回收率 99.6 %。维生素C(VitC)≤ 0 .5 g/L时对钒酸盐法和重氮法均无干扰。三酰甘油 (TG) <6mmol/L时对钒酸盐法无干扰 ,对重氮法有明显干扰。血红蛋白 (Hb)在 4g/L以下对钒酸盐法无干扰 ,对重氮法有较大干扰。结论　钒酸盐氧化法灵敏度高、重复性好 ,抗干扰能力强 ,适用于实验室常规应用。     

酶偶联放大法测定血清总胆汁酸

目的建立简便的酶偶联放大法,直接检测血清总胆汁酸(TBA).方法基于脱氢酶-辅酶体系的原理,用丙酮酸钠作乳酸脱氢酶(LDH)的阻止剂,在Tris-HCl缓冲溶液中,由NAD+-NBT-Brij-98组成酶偶联放大系统.用自动生化分析仪测定血清TBA.结果线性范围0～180μmol/L;精密度批内CV＜2.7%,日间CV＜4.3%,总CV＜5.4%.与日本ENZABILE.AUTO(X)比较r=0.990,Y=1.114X-2.137,与朗道BILEACIDS(Z)比较r=0.997,Y=1.032Z+0.906.LDH＜3 kU/L,乳酸＜20 mmol/L,维生素C＜0.5 mmol/L,胆红素＜300μmol/L,血红蛋白＜5 g/L时,对结果无显著干扰.结论该法简便、灵敏,试剂稳定,适用于血清TBA的常规和自动分析.     

钒酸盐氧化法测定血清总胆红素、直接胆红素的方法评价

目的对钒酸盐氧化法测定血清总、直接胆红素进行方法学评价.方法采用钒酸盐氧化法测定血清总、直接胆红素,与重氮法测定血清总、直接胆红素进行了比较.结果钒酸盐氧化法(Y)与重氮法(X)相关性良好,相关方程:YTBIL=1.184XTBIL-1.29(r=0.9954),YDBIL=0.982XDBIL+1.43(r=0.9947);总胆红素批内、批间平均变异系数分别为1.67%、3.02%,平均回收率达98.3%,在0～628μmol/L范围内线性良好.直接胆红素批内、批间平均变异系数分别为1.72%、3.28%,平均回收率达97.6%,在0～229μmol/L范围内线性良好.标本中甘油三酯含量≤5mmol/L、维生素C含量≤0.5g/L时,对钒酸盐氧化法测定总、直接胆红素均无干扰,但对重氮法有明显干扰;血红蛋白对钒酸盐氧化法和重氮法测定总、直接胆红素均产生正干扰.结论钒酸盐氧化法是一种准确、灵敏、特异性较重氮法高的方法,适用于常规自动化测定血清总、直接胆红素,但在抗血红蛋白干扰方面有待改进.     

肌氨酸氧化酶法测定血清肌酐在CX9分析仪上的应用

目的建立肌氨酸氧化酶-PAP法测定血清肌酐的自动分析方法.方法根据测定条件的优化实验采用肌氨酸氧化酶法直接测定.结果本法300s达反应终点,线性达8840μmol/L(Y=0.9835X+0.124,r=0.9997),批内CV＜1.87%,日间CV＜3.56%,总CV＜4.19%,回收率平均100.3%,加入,BIL＜456μmol/k;Hb＜200g/L;抗坏血酸2.48mmol/L时无显著干扰.结论本法适合全自动分析.     

改良酶法肌酐测定试剂的研制

目的探讨建立一种改良酶法肌酐(Cr)测定试剂,并考察其与进口Cr测定试剂(日本东洋纺公司酶法Cr试剂)对血清测定的可比性及偏倚。方法采用酶法测定Cr反应前后吸光度的变化,探讨试剂各成分和浓度对检测性能的影响,并在同一台全自动生化分析仪上同时测定两种试剂的空白吸光度(A值)、分析灵敏度,对自主研发试剂的精密度、线性范围及方法学指标进行评价。结果自主研发试剂的空白A值为0.009,分析灵敏度的A值变化率为0.13,优于进口试剂。自主研发试剂高、低值血清测定变异系数分别为1.5%和1.1%;线性范围为0~2 850μmol/L;方法学比对回归方程为Y=0.98 X+1.15,r=0.999;估计偏倚低于允许误差。以相对偏差不小于10%作为有明显干扰的评判指标,结果显示35mmol/L肌酸、3.42mmol/L胆红素、0.03g/L维生素C、5g/L血红蛋白、1 450浊度乳糜对高、低值浓度标本检测结果均无干扰。结论自主研发的Cr测定试剂性能良好,与进口试剂之间具有良好的相关性,符合临床应用基本要求。     

钒酸氧化法测定血清胆红素的实验评价

目的对钒酸氧化法测定血清胆红素进行方法学评价。方法收集40例高、中、低浓度的血清样本进行钒酸氧化法与重氮法的比对,分析钒酸氧化法的精密度、灵敏度、稳定性并做干扰实验。结果钒酸氧化法测定血清总胆红素（TBil）批内变异系数（CV）为1．58％,批间CV为2．94％;血清直接胆红素（DBil）批内CV为1．23％,批间CV为2．7％;平均回收率TBil为101．1％,DBil为100．1％。维生素C（Vit C）≤0．5g/L时对钒酸氧化法和重氮法均无干扰,三酰甘油≤6mmol／L时对钒酸氧化法无干扰,对重氮法有明显干扰。血红蛋白浓度≤8g/L时对钒酸氧化法无干扰,对重氮法有较大干扰。结论钒酸氧化法测定TBil和DBil是较理想的方法。     

偶氮氯膦Ⅰ测定血清钙

目的建立灵敏度高、选择性好、试剂稳定的血清钙测定方法.方法在pH9.6的2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇(AMP)缓冲介质中,以偶氮氯膦I作显色剂,8-羟基喹啉-5-磺酸为掩蔽剂,分光光度法测定血清钙.对反应条件和方法性能进行系统研究.结果该方法显色络合物最大吸收波长为580 nm,线性范围达5.0 mmol/L,回收率为98.8%～99.1%,平均99.0%.批内变异系数(CV)和批间变异系数(CV)分别为0.95%和1.74%.与邻甲酚酞络合酮(OCPC)(X1)比较:Y=1.003X1-0.036,r=0.996;与偶氮胂Ⅲ(X2)比较:Y=1. 001X2-0.030,r=0.997;与酶速率(X3)法比较:Y=0.999X3-0.045,r=0.998.在血清胆红素高达412 μmol/L,血红蛋白7 g/L,镁2.50 mmol/L及Intralipid高达8 g/L时均对该法无显著干扰.结论该法具有简便、快速、试剂稳定和灵敏可靠的优点,适合血清钙的手工测定和自动分析.     

酶循环法检测血清总胆汁酸的方法学评价

目的通过对方法学评价试验,选择一种检测血清总胆汁酸的方法.方法ThioNADH黄色发光系统酶循环法检测血清总胆汁酸.结果本法线性达150μmol/L,精密度高,批内CV分别为0.98%和0.85%,批间CV为4.58%和4.13%.本法与普通酶显色法比较,r=0.903x-1.45,r=0.995 5,n=50,配对t检验P＞0.05,胆红素＜830μmol/L,血红蛋白＜5g/L,肝素钠＜120mmol/L,枸椽酸钠＜120mmol/L,乳酸＜30mmol/L,抗坏血酸＜28mmol/L,对测定结果无显著性干扰.结论本法线性好,精密度高,结果无明显干扰,对仪器管道比色杯基本无色素沉着污染,是测定血清总胆汁酸的一种理想方法,值得扩广应用.