超抗原葡萄球菌肠毒素在肿瘤治疗中的应用

葡萄球菌肠毒素(SE)可通过细胞毒作用、细胞因子分泌和黏附因子的表达等发挥抗癌作用,在肿瘤治疗中有较好的应用前景.作为天然的细菌外毒素,SE有着潜在的不良反应.目前研究主要集中在靶向治疗、肿瘤疫苗、使用策略等方面,以提高其临床疗效,降低不良反应.     

单克隆抗体导向的超抗原抗肿瘤研究新进展

 超抗原(Superantigen, SAg)抗肿瘤是90年代才出现的肿瘤生物治疗方式。     

单克隆抗体导向的超抗原治疗肿瘤

超抗原是强有力的Ｔ淋巴细胞激活物，它以与普通抗原不同的递呈方式，经ＭＨＣⅡ类分子的辅助与ＴＣＲ和Ｖβ成分结合，促使Ｔ细胞大量增殖，产生细胞因子，发挥细胞毒作用。最近利用肿瘤特异性的单克隆抗体和超抗原的融合物定位于肿瘤细胞表面，定向活化Ｔ细胞，从而杀伤肿瘤细胞，取得一定进展，为肿瘤的免疫治疗开辟了一个新途径。     

超抗原分子SEA在肝癌细胞的表达和HLA—I分子递呈

目的 将超抗原葡萄球菌肠毒素A（staphylococcal enterotoxinA,SEA)分子转入肝癌细胞以增强其免疫原性,开辟肝癌免疫排斥的新途径。方法 从产SEA标准菌株中获得SEA基因全长片段,构建SEA逆转录真核表达载体。通过病毒包装和滴度测定。最后转导肝癌细胞,并进行T细胞杀伤实验,同时利用抗体阻断的方法研究递呈途径。结果 成功的获得了表达SEA人肝癌细胞株HHCSEA。结果显示微量表达的SEA蛋白即可引发高效的免疫活性,将细胞表面的HLA-I分子利用抗体阻断后,杀伤活性明显降低。结论 肝癌细胞表达的SEA分子具有较高的免疫激活能力。且有可能主要通过HLA-I分子递呈。     

超抗原活化Th1细胞介导的对肿瘤细胞杀伤效应的研究

目的：本文对超抗原葡萄球菌肠毒素Ｂ（ＳＥＢ）活化的Ｔｈ１细胞介导的对肿瘤细胞杀伤作用进行了研究。方法：人外周血淋巴细胞与ＳＥＢ共同培养,用流式细胞术测定增殖细胞亚群;用酶联双夹心法测定ＩＬ－２、ＩＬ－４水平,用Ｋ５６２,ＨＬ－６０肿瘤细胞和自身淋巴细胞作为靶细胞测定效应细胞和细胞因子的杀伤活性。结果：ＳＥＢ共同培养６ｄ的淋巴细胞,ＣＤ４＾＋Ｔ细胞由３７．５％增加到４８．５％;ＣＤ１６＾＋淋巴细胞由     

超抗原SEA抗肿瘤研究进展

葡萄球菌肠毒素Ａ（ＳＥＡ）作为一种超抗原具有独特高效的免疫激活能力，其与ＭＨＣⅡ分子与ＴＣＲ之Ｖβ成分的相互作用在引发免疫活性及毒副作用过程中的机制近年来已逐渐被明确，同时也被广泛应用到抗肿瘤实验和临床研究当中并显示出良好的效果。本文综述ＳＥＡ抗肿瘤作用机制和在实际应用中的研究进展。     

单克隆抗体与超抗原结合物介导的T细胞抗肿瘤作用研究进展

超抗原(SAg)是一类能高效地刺激T细胞增殖并且使之释放大量细胞因子的细菌或病毒产物.SAg与抗肿瘤单克隆抗体(McAb)的偶联物或者利用基因工程手段制成的它们的融合蛋白对MHCⅡ类分子阳性或阴性的肿瘤细胞都有强大的杀伤作用.体外细胞毒实验和动物体内实验的研究结果表明,它很有可能成为一种有效的新型肿瘤免疫导向治疗剂.但是目前尚未见临床应用的报道.本文综述了用McAb与SAg结合物介导的T细胞对肿瘤进行免疫导向治疗的实验研究进展.     

超抗原SEA研究进展

超抗原是一类只需极低浓度（1－10ng/ml)即可激活大量的淋巴细胞克隆,产生极强的应答效应的抗原性物质。葡萄球菌肠毒素A（staphylococcal enterotoxinA,SEA)是金黄色葡萄球菌产生的葡萄球菌肠毒素家族中一员,是最有效的T细胞活化因子之一。研究发现,SEA可通过刺激T细胞增殖,促进IL－2,TNF－α,IFN－γ等淋巴因子的产生,从而发挥抗肿瘤治疗作用。     

葡萄球菌肠毒素C对胶质瘤的作用

目的观察经葡萄球菌肠毒素(staphylococcal enterotoxin C,SEC)活化的淋巴细胞对胶质瘤的体外杀伤作用,并观察SEC联合手术、放疗、化疗对胶质瘤的治疗效果及SEC诱导生成细胞因子作用。方法常规分离并培养外周血淋巴细胞,其中加入不同浓度的SEC(2.5、5、10、20U/mL),将淋巴细胞和胶质瘤细胞(SHG-44、MGR2、MGR3、SF767、SF295、SKMG-1、T98G及UW28)混合培养,按MTT法测定淋巴细胞对瘤细胞的杀伤作用。37例胶质瘤患者,均经手术切除,结合放疗、化疗,随机分为对照组、处理A组(全身应用SEC)及处理B组(局部应用经SEC活化的淋巴细胞),结合颅脑CT片观察疗效。采用ELISA法测定SEC促淋巴细胞分泌IL-6、IL-12、TNF-α及IFN-γ作用。结果经SEC活化的淋巴细胞对8株胶质瘤细胞均产生强大的杀伤作用,其中以10U/mL剂量组作用最明显。临床资料显示对照组有效率为40%,处理A组及处理B组有效率分别为50%及62.5%。经SEC活化的淋巴细胞在作用的第1天就分泌多种细胞因子,第3~5天达峰值。结论SEC作为一种超抗原,体外实验证实被其活化的淋巴细胞对胶质瘤有明显的抗瘤活性,并能大量分泌IL-6、IL-12、TNF-α及IFN-γ等多种细胞因子。SEC与手术、放疗、化疗结合能明显提高临床疗效。     

单抗靶向超抗原SEA体内抗膀胱肿瘤实验研究

背景与目的:超抗原葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal enterotoxin A,SEA)在体内、外以及临床的膀胱灌注治疗试验中对膀胱癌均具有明显的抑瘤效应,本研究旨在探讨单抗靶向的超抗原SEA体内对人膀胱癌的抑瘤作用。方法:以腹腔注射人外周血单个核细胞、皮下注射人膀胱癌BIU87细胞建立人免疫重建荷人膀胱癌SCID小鼠复合模型,再将模型小鼠随机分为对照组、SEA组及单抗靶向SEA实验组,分别予以PBS、SEA及单抗靶向SEA瘤周注射,以SonoSite彩超在建模后6周内检测小鼠皮下移植瘤体积、瘤体血流。结果:单抗靶向SEA组瘤体体积、瘤体血流均小于对照组及SEA组,在建模后4、5、6周差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:单抗靶向的超抗原SEA对膀胱癌皮下移植瘤生长的抑制作用更强,可能与其进一步减少瘤体血流有关。     

葡萄球菌肠毒素B抗肿瘤作用的研究进展

金黄色葡萄球菌分泌的肠毒素B（SEB）是一种具有超抗原性质的外毒素,具有刺激T细胞活性,提高机体免疫水平,尤其是细胞免疫水平。SEB具有对MHCⅡ类分子的选择性作用,可激活外周血T细胞,调节NK细胞的抗肿瘤作用,以及刺激淋巴细胞产生TFN-α和活化TH1细胞的抗肿瘤作用等功效。大量的体外和动物试验证明,SEB治疗肿瘤具有效果显著且毒副作用小的优点,是一种能有效治疗肿瘤的生物制剂,具有广泛的医用前景。     

肝癌靶向性SEA基因重组腺病毒载体的构建及体外生物学活性鉴定

[目的]构建肝癌靶向性葡萄球菌肠毒素A（SEA）基因重组腺病毒载体。[方法]首先利用现有的腺病毒穿梭质粒pShuttle和pShuttle-CMV,构建新的不带CMV增强子/启动子而带有polyA加尾信号穿梭质粒,命名为pShuttle2。将AFP增强子、启动子及SEA基因分别从已构建的pKS-EP载体和pMD18-T-SEA载体上,亚克隆至pShuttle2中,再与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化E.coliBJ5183。以获得的重组子转染HEK293细胞后制备重组腺病毒,然后感染高表达AFP的肝癌细胞系Hepa1-6和不表达AFP的黑色素瘤细胞系B16、成纤维细胞系NIH3T3。采用间接免疫荧光法,经荧光显微镜观察和流式细胞术检测SEA在细胞膜表面的表达。采用3H掺入法检测膜表达的SEA体外诱导淋巴细胞增殖的活性。[结果]SEA能够靶向性地表达在高表达AFP的Hepa1-6细胞膜上,在不表达AFP的B16、NIH3T3细胞膜上不表达,并且体外能够诱导淋巴细胞增殖。[结论]成功地构建了肝癌靶向性SEA基因重组腺病毒载体,为进一步研究SEA在肝癌靶向基因治疗中的应用及其抗肿瘤免疫机制奠定了基础。     

单抗导向超抗原对人大肠癌细胞的抑制作用研究

[目的]研究单抗导向超抗原对人大肠癌细胞的抑制作用。[方法]MTT法观察融合蛋白对Colo205细胞的体外抑制效应;DNA电泳法和电子显微镜法检测融合蛋白处理后肿瘤细胞的凋亡。[结果]在效应细胞介导下,肿瘤细胞的生长抑制率与随融合蛋白作用浓度的增加而逐渐增大;DNA电泳法和电子显微镜法显示被融合蛋白活化的免疫效应细胞攻击后的肿瘤细胞表现出典型的凋亡特征性变化。[结论]在效应细胞介导下,融合蛋白能对表达相应抗原的肿瘤细胞显示出有效的抑制作用;在融合蛋白介导的肿瘤细胞体外生长抑制过程中伴随有靶细胞的凋亡。     

抗p53融合蛋白单克隆抗体的性质鉴定

目的 :研制出能特异与p5 3结合的单克隆抗体 ,使对 p5 3的检测得到更为广泛的应用。 方法 :以原核表达的 p5 3-GST融合蛋白为免疫原 ,常规方法作细胞融合 ,间接酶联免疫吸附试验 (ELISA)双筛和免疫组织化学(IHC)筛选 ,将能稳定分泌抗人p5 3单抗的杂交瘤细胞株的细胞上清 (命名为M12 6 )与常用p5 3进口单抗PAB180 1(ZYMED公司 )作对比实验。结果 :此单抗适用于ELISA、IHC、免疫印迹及免疫沉淀等方面的研究 ,并且在一定程度上优于PAB180 1。结论 :新制备的单抗M12 6可考虑取代进口单抗PAB180 1而用于p5 3的表达及突变研究。     

重组金葡菌肠毒素A的抗癌效应研究

目的: 金黄色葡萄球菌肠毒素A作为一种超抗原,其抑瘤活性一直受到关注,其直接应用于肿瘤治疗的报道较少,本研究对其抑瘤活性进行了分析.方法: 利用亲和层析纯化出重组SEA,注射接种了黑色素瘤的小鼠,观察其抑瘤效应.结果: 各组剂量的重组SEA均能有效抑制肿瘤的生长,其高、中、低剂量重组SEA的抑瘤率分别为79.3%、75.6%和73.8%,而原位注射(中剂量)的抑瘤率为90.6%.治疗小鼠的肿瘤组织出现大量的T细胞浸润;此外,SEA以免疫的形式刺激动物,能明显产生特异性抗体,并在一定程度上增强小鼠对肿瘤转移的抵抗力.结论: 重组SEA对小鼠黑色素瘤的能产生明显的抑制效应,尤其是原位注射,这为SEA的靶向治疗肿瘤奠定了基础.     

单克隆抗体--抗肿瘤药物研究的聚焦点

单克隆抗体作为抗癌药物研究已取得重要进展，人源化抗体技术的成熟，为单克隆抗体抗癌药物在临床上应用奠定了基础。单克隆抗体再次成为抗肿瘤药物研究的聚焦点，并且展现了良好诱人的市场前景。我国在抗肿瘤单克隆抗体研发方面也取得了重大进展．     

单克隆抗体12H6的靶抗原在肺癌细胞中的表达及功能研究

[目的]分析抗肺癌单抗12H6的靶抗原在肺癌细胞系和肺癌组织中的表达,研究单抗12H6体内外生物学功能.[方法]细胞免疫荧光、流式细胞荧光法检测单抗12H6靶抗原在3种肺癌细胞系中的表达及其定位,免疫组化法检测其在人肺癌组织中表达及特异性;Transwell法和CCK-8法分别检测12H6体外对肺癌细胞系侵袭和增殖功能的影响.共接种模型裸鼠体内治疗实验研究12H6对移植瘤生长的抑制作用.[结果]单抗12H6的靶抗原在人肺腺癌细胞(A549、GLC-82)、人肺鳞癌细胞(GLC-P)的胞内及胞膜均有表达,在3种细胞系胞膜的表达比例分别为31.2％、15.4％和16.7％.单抗12H6在人肺癌组织中的表达比例为80.6％,较配对癌旁组织显著上调.单抗12H6在体外能明显抑制肺癌细胞侵袭和增殖;体内能明显抑制移植瘤生长,抑制率为40％.[结论]单抗12H6具有优良的体内外抑瘤功能,可能为肺癌靶向治疗提供潜在的靶向治疗药物.     

Therapeutic Effect of Ansamitocin Targeted to Tumor by a Bispecific Monoclonal Antibody

We have constructed a murine hybrid hybridoma that secretes a bispecific monoclonal antibody (mAb) by fusing a hybridoma secreting an anti-ansamitocins mAb with a hybridoma secreting an anti-human transferrin receptor (TfR) mAb that binds to human A431 epidermoid carcinoma cells. The bispecific mAb, reactive to both ansamitocins and TfR, was purified by a combination of hydrophobic column chromatography and hydroxyapatite high-performance liquid chromatography, and evaluated in in vivo experiments using human tumor cell-implanted nude mice. Ansamitocin P-3 targeted through one of the antigen combining sites of the bispecific mAb was potentially more effective in suppressing the growth of established A431 tumor xenografts implanted on nude mice than unconjugated ansamitocin P-3 or the immunoconjugate of ansamitocin P-3 and monospecific anti-ansamitocins antibody, and the targeted ansamitocin P-3 finally eradicated the tumor mass. The bispecific mAb also played an important role in reducing such undesirable side-effects of ansamitocin P-3 as the loss of body weight, the damage to liver functions and the decrease in the number of white blood cells.     

胃癌、大肠癌及癌前病变中MGcl单克隆抗体的表达及其意义

应用肠型胃癌单克隆抗体ＭＧｃｌ，ＰＡＰ免疫组化染色，对大肠癌、胃癌、大肠腺瘤等进行标记，发现胃癌ＭＧｃｌ阳性率为８５．７％；大肠癌、大肠腺瘤和炎性息肉阳性率分别为９０．７％、４５．８％和１３．０％，三组有显著差异（Ｐ＜０．０５）。绒毛状和绒毛管状腺癌明显阳性者高于管状腺瘤（Ｐ＜０．０５）。结果表明，ＭＧｃｌ免疫组化标记对于大肠癌和癌前病变的诊断和估计预后有意义。     

A Novel Human Monoclonal Antibody Directed to a Tumor-associated Antigen

Twelve human monoclonal antibodies (HuMAb) were established by the fusion of (mouse × human) heteromyeloma cells with B-lymphoblastoid cells derived from the regional lymph nodes of three patients with squamous cell carcinoma of the lung. They were tested for reactivity to two kinds of proteins (purified protein derivatives and bovine serum albumin) by ELISA, Sq-19 (squamous cell carcinoma) culture cells by indirect membrane immunofluorescence tests, and Sq-19 tumor xenograft by immunohistological study. Among them, one HuMAb 904F (IgM, λ) was selected. In indirect membrane immunofluorescence tests, this 904F antibody reacted with various kinds of cell lines, e.g. lung cancer, esophageal cancer, endometrial cancer, and stomach cancer. It did not react with malignant hematopoietic and diploid fibroblast cell lines. Immunohistologically, it stained the tumor nests of squamous cell carcinoma, adenocarcinoma, and large cell carcinoma of the lung. It also stained those of esophagus and colon, but not those of small cell carcinoma of lung, or stomach. On frozen-section specimens of normal tissues from various organs, it showed only limited areas of positive staining. Limited positive findings were observed at a reticular zone of the adrenal gland, at the esophagus as weak staining, and at islets of the pancreas as very weak staining. Western blotting analysis demonstrated that it recognized a 54 kDa trypsin-sensitive molecule which is expressed on the surface of tumor cells. These results suggest the 904F monoclonal antibody detects a novel tumor-associated antigen which is recognized by the human immune system.