表达Angiostatin基因的B16黑色素瘤体内抑制作用

目的:研究表达Angiostatin基因的B16黑色素瘤的体内生长行为.方法:通过改造Plasminogen cDNA得到Angiostatin基因,构建成真核表达载体pAGAGS3后导入B16黑色素瘤细胞使其表达.结果:表达Angiostatin的B16黑色素瘤细胞体外生长速率和软琼脂中克隆形成能力均未改变.但接种小鼠26d后,体内生长抑制率达87%(P<0.01).结论:表达Angiostatin的B16黑色素瘤体内生长受到显著抑制.     

人内皮抑素转基因治疗B16黑色素瘤的实验研究

目的　研究瘤内直接注射携带人内皮抑素 (hEN)基因逆转录病毒包装的细胞株对体内B16黑色素瘤细胞生长的抑制作用。方法　修饰、鉴定hEN基因。构建含hEN基因的逆转录病毒载体pLNC hEN ,转染包装细胞株 ,筛选稳定转染该基因之PA317 pLNChEN细胞。建立小鼠B16黑色素瘤动物模型。瘤内直接注射PA317 pLNChEN细胞 ,分时间测量肿瘤体积 ,切取肿瘤 ,免疫组化检测肿瘤组织微血管密度 (MVD) ,TUNEL染色检测肿瘤组织中的凋亡细胞。结果　细胞接种后第 7～ 9天 ,全部小鼠均长出 2～ 3mm直径肿瘤。hEN基因转染后第 3,5 ,7,9天 ,转基因组肿瘤的平均体积 (mm3 )分别为 4 .6 7± 1.10、2 2 .2 5± 13.0 6、84 .17± 4 3.5和 15 5 .0 8± 81.1;空载体对照组分别为 136 .17± 30 .6 1、390 .17± 2 2 0 .4 7、10 2 1.6 7± 5 37.4 0和 2 92 0 .2 0± 2 2 0 .0 1,两组差异有显著性。转基因组和对照组的平均MVD分别为 8.0 0± 2 .2 8和 2 8.17± 5 .31,平均凋亡细胞数分别为 2 3.33± 3.83和 2 .33± 1.2 1,差异均有显著性。结论　瘤内注射携带hEN基因逆转录病毒包装的细胞 ,可抑制小鼠种植性B16黑色素瘤的微血管数目 ,促进肿瘤细胞凋亡 ,抑制肿瘤生长     

TNF-α诱导小鼠B16黑色素瘤细胞凋亡及其对小鼠B16细胞移植瘤生长的抑制作用

目的:探讨TNF-α对小鼠B16黑色素瘤(MM)细胞凋亡的诱导及其对小鼠B16移植瘤生长的抑制作用.方法:用不同浓度的TNF-α直接作用于培养的小鼠B16黑色素瘤细胞,36h后,采用流式细胞仪(FCM)及原位末端标记法(TUNEL法)检测B16细胞的凋亡率.动物实验观察TNF-α小量瘤体内注射对小鼠B16移植瘤生长的抑制作用.结果:在1000、3000、5000及10000U/mL TNF-α作用下,B16细胞的凋亡指数均明显高于空白对照组(P＜0.01),随着TNF-α浓度增加,B16凋亡细胞数呈增加趋势.动物实验结果显示,TNF-α治疗3周后,治疗组荷瘤小鼠MM移植瘤的体积和重量明显低于对照组(P＜0.01).结论:TNF-α能够诱导小鼠B16黑色素瘤细胞发生凋亡,且小剂量TNF-α瘤体内注射能显著抑制小鼠移植性MM的生长.     

纤维连接蛋白双结构域重组多肽对B16黑色素瘤生长的抑制作用

目的 研究纤维连接蛋白双结构域重组多肽（ＣＨ５０）抑制体内肿瘤细胞形成转移灶的作用。方法 采用皮下和腹腔接种黑色素瘤Ｂ１６／Ｆ１细胞,在治疗后测定肿瘤大小及转移灶数量。结果 对于皮下接种肿瘤,局部注射较远距离注射更为有效,对肿瘤生长抑制可达５０％：对腹腔仙形成的微小肿瘤转移灶的抑制达８０％;     

沉默pim-3基因对黑色素瘤细胞B16的抑制作用

目的:观察靶向沉默原癌基因pim-3对小鼠黑色素瘤细胞B16的抑制作用.方法:用脂质体将特异性靶向沉默pim-3载体(pim-3-shRNA)和pin-3过表达载体(pim-3-MIGR1)转染到黑色素瘤细胞B16中,荧光定量PCR和Western blotting法检测pim-3 mRNA和蛋白表达的变化,Annexin V/PI染色和TUNEL染色检测细胞凋亡情况,荧光定量PCR和Western blotting法检测p-Bad、Bcl-2、Bcl-xl、Bax、caspase-3等凋亡相关分子表达的变化,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,RTCAxCELLigence系统检测细胞迁移情况,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭的变化.结果:转染pim-3-shRNA组B16细胞的pim-3mRNA及蛋白表达较对照组明显下降(P＜0.05),转染pim-3过表达质粒组B16细胞的pim-3 mRNA及蛋白表达较对照组显著增加(P＜0.05).转染pim-3-shRNA后,B16细胞的凋亡明显增加,在此基础上共转pim-3过表达质粒后则明显逆转沉默pim-3所引起的凋亡(p＜0.05);进一步检测发现沉默pim-3明显下调凋亡相关分子p-Bad、Bcl-2、Bcl-xl的表达,上调Bax的表达,最终引起caspase-3活性增加(P＜0.05).沉默pim-3后B16细胞增殖和迁移受到抑制(P.＜0.05),而细胞周期无明显变化.结论:靶向沉默pim3基因能促进黑色素瘤细胞的凋亡,抑制细胞的增殖和迁移,提示pim-3基因可以作为黑色素瘤基因治疗的新靶点.     

洛伐他汀对恶性黑色素瘤B16细胞株的作用及其机制的研究

目的探讨洛伐他汀(Lovastatin)在体内对恶性黑色素瘤(malignant melanoma, MM)B16细胞株的作用及其相关机制。方法 C57小鼠随机分为5组:对照组:给予等渗盐水灌胃1次/日;Lov1组:给予Lov 4mg/(kgd)灌胃;Lov2组:给予Lov 16mg/(kgd)灌胃;DDP组:给予DDP 10mg/kg(d14、21), 腹腔注射;联合组:给予Lov 16mg/(kgd)+DDP 10mg/kg(d14、21)。观察肿瘤的生长情况。采用免疫组化S-P法测定Survivin、Fas、VEGF表达水平。结果 C57小鼠接种B16细胞后3-5天, 多数小鼠可以触及到瘤体, 第21天测得各处理组肿瘤体积明显小于对照组, 差异具有显著性(P＜0.05)。3周后处死小鼠, 联合组Survivin免疫组织化学评分最低;对照组VEGF呈高表达(5.750±0.619);对照组Fas表达最低。对于每一种指标, 比较各处理组与对照组的IHS评分, 差异均具有统计学意义(P＜0.05)。结论 Lov可通过下调Survivin、VEGF的表达而发挥其抑制B16细胞增殖、浸润和转移的作用, 并可通过上调Fas的表达而诱导B16细胞凋亡。     

赖氨匹林对黑色素瘤B16细胞的增殖抑制作用

[目的]探讨非甾体抗炎药赖氨匹林（Aspisol）对小鼠黑色素瘤细胞株B16的增殖抑制作用及其可能的机制。[方法]应用MTF比色法分析细胞生长抑制作用,流式细胞技术测定凋亡率,应用Western blot分别检测COX-2蛋白和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。[结果]2～8mmol／L赖氨匹林可抑制B16细胞的生长,且其作用具有剂量和时间依赖性（P〈0．01）。赖氨匹林（2、4、8mmol／L）作用24h后诱导B16细胞的凋亡率分别为5．05％±1．23％、9．25％±1．46％、14．80％±1．98％,并呈浓度依赖性;与对照组（0．18％±0．13％）比较差异有显著性（P〈0．01）。赖氨匹林抑制B16细胞COX-2蛋白的表达（P〈0．05）;赖氨匹林可促进Bax蛋白表达（P〈0．05）,但抑制Bcl-2的表达（P〈0．05）。[结论]赖氨匹林通过影响COX-2蛋白的表达,调节凋亡相关蛋白表达,抑制B16细胞增殖。     

乙双吗啉对B16黑色素瘤细胞作用的形态学研究

乙双吗啉(Bimolane,AT-1727)是我所研制的新药。临床上用于治疗银屑病和眼葡萄膜炎。动物实验观察到它有抑制肿瘤生长的作用。临床上也已试用于治疗恶性肿瘤。但其作用机理还不太清楚。本文应用显微缩时电影和电子显微镜观察此药对体外培养的B_(16)黑色素瘤细胞的作用。方法和材料乙双吗啉由本所合成室提供,白色粉剂,用少量DMSO溶解,无菌生理盐水稀释,置4℃冰箱避光保存。 B_(16)黑色素瘤细胞由日本引进原代瘤源,经体内外交叉传代10次以上获肺100％高转移株,以1×10~5/ml细胞数接种于玻璃培养瓶中,含10％小牛血清,100 IU/ml青霉素,100μg/ml链霉素的RPMI-1640     

分泌性表达载体V-pLNCX-s-hri对小鼠B16黑色素瘤生长的抑制作用

背景与目的：已有研究表明从人胎盘中提取纯化的人核糖核酸酶抑制因子（human ribonuclease inhibitor,hRI）对小鼠某些实体肿瘤的生长具有明显的抑制作用。本研究的目的是构建分泌性表达载体V-pLNCX-s-hri,并观察其对小鼠B16黑色素瘤生长的抑制作用。方法：将合成的小鼠IgG信号肽碱基序列与hRI基因序列连接后,重组到逆转录病毒载体V-pLNCX上构建分泌性表达载体V-pLNCX-s-hri。将PA137细胞用于病毒包装,NIH3T3细胞用于测定病毒滴度。采用RT-PCR和Western blot法检测hRI基因的表达。构建小鼠荷B16黑色素瘤模型,注射V-pLNCX-s-hri,同时用生理盐水、V-pLNCX和V-pLNCX-hri作为对照,用肿瘤组织重和微血管密度来评价V-pLNCX-s-hri对小鼠B16黑素瘤生长的抑制作用。采用ELISA方法测定B16细胞培养上清和小鼠血清中RI含量。结果：V-pLNCX-s-hri对培养的B16细胞的感染效率为38．5％。在感染V-pLNCX-s-hri后的B16细胞中检测到RI mRNA和蛋白的表达。感染后的B16细胞的培养上清中hRI的含量为0．228μg／mL。V-pLNCX-s-hri组小鼠外周血中RI的含量为0．249μg／mL,明显高于生理盐水组、V-pLNCX组和V-pLNCX-hri组的0．035μg／mL、0．028μg／mL和0．169μg／mL（P值均〈0．01）。生理盐水组、V-pLNCX组和V-pLNCX-hri组小鼠的瘤组织重分别为（1．90±1．12）g、（1．77±0．21）g和（1．10±0．46）g,显微镜下每10个视野的微血管平均数分别为89±6、87±7和41±8;而V-pLNCXI-s-hri组的瘤组织重为（0．82±0．34）g,血管平均数为34±4。V-pLNCX-s-hri组与各对照组相比,其瘤组织重和血管数量的差异都有统计学意义（P值均〈0．01）。结论：构建的分泌性表达载体V-pLNCX-s-hri能对B16细胞进行有效的感染,且在感染的B16细胞中分泌性高表达。V-pLNCX-s-hri对小鼠B16黑色素瘤的生长有明显的抑制作用,且效果优于V-pLNCX-hri。     

Adinbitor对B16黑色素瘤细胞侵袭能力的影响

目的观察Adinbitor对黑色素瘤细胞侵袭迁移能力的影响。方法应用细胞培养技术,培养B16黑色素瘤细胞,经不同浓度的Adinbitor处理后,采用结晶紫染色法,检测其对基膜黏附的影响;Transwell小室模型观察其侵袭和迁移能力的变化。结果Adinbitor能显著抑制黑色素瘤细胞与基膜的黏附、抑制其迁移和侵袭（P〈0．01）,随Adinbitor浓度的增高其抑制作用增强。结论Adinbitor具有抑制B16黑色素瘤细胞侵袭迁移的作用。     

输血对局部B16黑色素瘤生长的影响

用小鼠的输血模型，探讨输血对局部Ｂ１６黑色素瘤生长的影响，结果发现，同种异品系间的输血，可降低血鼠的ＮＫ细胞活性和淋巴细胞转化率，并能促进肿瘤的生长，肿瘤的体积及重量均明显高于输生理盐水组，而同种同品系间的输血则无此不良影响，本研究提示，Ｈ－２不相容性输血可促进肿瘤的生长，免疫功能下降可能是输血促进肿瘤生长的重要因素。     

B16黑色素瘤皮内移植瘤模型的建立

背景与目的： 建立B16黑色素瘤细胞(简称B16细胞)皮内移植瘤模型。 材料与方法： 制备商品源B16细胞悬液,按每只C57BL鼠接种0.1 ml (3×105个)B16细胞于后肢外侧皮内;分离、培养移植瘤源B16细胞,倒置显微镜下观察细胞形态。 结果： 移植瘤出现时间为(9.6±1.2)d,致瘤率为100％;皮内注射B16细胞18 d内,肿瘤形态呈圆形或类圆形,边缘清楚;移植瘤源原代B16细胞多为圆形、类圆形或短梭形,商品源B16细胞为梭形或不规则形;HE染色表明移植瘤内有大量B16细胞。 结论： B16细胞皮内移植瘤模型易于对肿瘤生长的观察和测量,是早、中期肿瘤研究的合适模型之一。     

莲房原花青素对黑色素瘤B16细胞的诱导分化作用

背景与目的:探讨莲房原花青素(LSPC)对荷瘤小鼠体内黑色素瘤B16细胞的诱导分化作用.材料与方法:以荷黑色素瘤B16小鼠为模型,随机分LSPC 3个剂量(60、120、240 mg/kg)组和阴性对照组,每组10只,实验组用LSPC、阴性对照组用等体积溶剂分别灌胃13 d后取材,检测黑色素瘤B16细胞中酪氨酸酶活力、黑色素含量、S-100蛋白表达,并用光学显微镜和透射电镜观察其细胞形态的变化.结果:60～120 mg/kg的LSPC能抑制黑色素瘤B16细胞在小鼠体内生长,且呈浓度依赖关系.其中,120 mg/kg LSPC组作用最显著(P＜0.01),抑瘤率达55.3%,并使B16细胞内酪氨酸酶活力和黑色素含量分别提高28.5%和23.8%,与阴性对照比较,差异有统计学意义(P＜0.05),并使S-100蛋白表达下降.结论:LSPC显著抑制B16细胞在小鼠体内的生长,并从形态上和功能上诱导B16细胞分化.     

蟾蜍灵对B16细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究中药蟾蜍灵对B16细胞增殖和凋亡的影响,探讨蟾蜍灵对黑色素瘤的抑制作用。方法 采用MTT法测定蟾蜍灵对B16细胞活力的影响;Hoechst 33342荧光染色检测细胞形态学变化;流式细胞术检测蟾蜍灵对细胞周期的影响。结果 蟾蜍灵对B16细胞的增殖有抑制作用,且呈浓度和时间的依赖性。蟾蜍灵作用24、48和72 h的IC50值分别为37.80、6.00和9.12 μmol/L。荧光染色显示蟾蜍灵作用于B16细胞24 h后,细胞呈现典型的凋亡形态特征;细胞周期分析显示,蟾蜍灵处理组S期细胞降低,蟾蜍灵可引B16细胞G0/G1期阻滞,而对G0/G1期阻滞随作用时间延长而增强。结论 蟾蜍灵可能通过阻滞B16细胞增殖周期进程而诱导凋亡。     

Blue Light Inhibits the Growth of B16 Melanoma Cells

Although a number of studies have been carried out to examine the biological effects of radiation and ultraviolet radiation (UV), little is known concerning the effects of visible light. In the present study, exposure of B16 melanoma cells to blue light (wavelength 470 nm, irradiance 5.7 mW/cm²) from a light-emitting diode (LED) inhibited cell growth in proportion to the period of exposure, with no increase observed in the number of dead cells. The number of B16 melanoma colonies that formed after exposure to blue light for 20 min was only slightly less than that in non-exposed controls, but the colony size as assessed by the area covered by colonies and cell counts per colony were markedly decreased. The percentages of G0/G1 and G2/M phase cells were markedly increased, with a reduction in S phase cells as determined by flow cytometry after exposure to blue light. Furthermore, analysis of the incorporation of 5–bromo–2'–deoxyuridine (BrdU) into DNA also showed a reduction in the percentage of S phase cells after exposure. These results indicate that blue light exerts cytostatic effects, but not a cytocidal action, on B16 melanoma cells.     

三氧化二砷抑制恶性黑色素瘤B16细胞生长及对端粒酶活性的影响

背景与目的： 研究三氧化二砷(As2O3)对恶性黑色素瘤B16细胞生长抑制作用及对端粒酶活性表达的影响,探讨砷及其化合物治疗恶性黑色素瘤的作用机制,为临床治疗恶性黑色素瘤提供新的理论和实验依据。 材料与方法：四甲基噻唑氮蓝(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测As2O3对B16 细胞的生长抑制作用：端粒重序列扩增酶联免吸附实验(Telomeric repeat amplification protocol enzyme-linked immunosorbant assay,TRAR-ELISA)和聚内烯酰胺凝胶电泳银染(Telomeric repeat amplification protocol,poly acryl amide gel electrophoresis silver-staining,TRAP-PAGE)法检测B16细胞的端粒酶活性。 结果： As2O3可显著抑制B16细胞的生长并可下调端粒酶活性,其抑制作用有显著的时间和剂量依赖关系。 结论： As2O3对恶性黑色素瘤B16细胞生长抑制作用及对端粒酶活性表达的抑制作用随药物浓度的增加和作用时间的延长而增强。     

Antiproliferative and Antiproteolytic activity of Pentoxifylline in cultures of B16F10 Melanoma cells

Purpose: Pentoxifylline (PTX), a methyl xanthine derivative is widely used as a haemorheological agent in the treatment of peripheral vascular disease. In the present study, we investigated the in vitro effects of PTX on B16F10 melanoma cell proliferation, adhesion and secretion of Matrix metalloproteinases. Methods: The toxic range of PTX was evaluated using MTT test and colony formation assay. The cell cycle study of PTX treated cells was carried out using flow cytometric analysis. Adhesion assay of pretreated melanoma cells was carried out on extracellular matrix (ECM) substrates. The relative levels and activity of matrix metalloprotienase-9 (MMP-9) and MMP-2 were determined by gelatin zymography and western blotting. Results: Pentoxifylline significantly inhibited the in vitro proliferation of B16F10 cells in a concentration dependent manner and displayed an IC₅₀ of 15.2 mM. Non-cytotoxic concentration of 1–3 mM of PTX for an exposure of 24 h demonstrated significant changes in cell morphology. A significant inhibition in G1-S phase transition was observed on PTX treatment. Pretreated F10 cells showed inhibition in adhesion to ECM components and markedly inhibited the secretion of MMP-9 and MMP-2 gelatinases. Conclusion: The results suggest that PTX even at non-toxic pharmacological concentrations acts as an effective antiproliferative agent with significant antiproteolytic and antiadhesive effects.     

Punarnavine Induces Apoptosis in B16F-10 Melanoma Cells by Inhibiting NF-kB Signaling

The objective of this study was to assess the effect of Punarnavine, an alkaloid isolated from Boerhaaviadiffusa, on apoptosis in B16F-10 melanoma cells. Treatment of B16F-10 melanoma cells with nontoxicconcentrations of Punarnvine resulted in the presence of apoptotic bodies and DNA fragmentation in a dosedependent manner. Cell cycle analysis and TUNEL assays also confirmed the observation. The apoptotic genesp53 and caspase-3 were found upregulated in Punarnavine treated cells, whereas the antiapoptotic gene Bcl-2was downregulated. The inhibited nuclear translocation of NF-κBp65, NF-κBp50, NF-κB-c-Rel, c-Fos, ATF-2and CREB-1 in Punarnavine treated B16 F-10 cells pointed to suppression of NF-κB signaling by Punarnavine.All these results demonstrate that Punarnavine induces apoptosis via activation of p53 induced caspase-3 mediatedpro-apoptotic signaling and suppression of NF-κB induced Bcl-2 mediated survival signaling.     

三羟异黄酮对黑色素瘤B16细胞的诱导分化作用

背景与目的评价三羟异黄酮对黑色素瘤B_(16)细胞的诱导分化作用。材料与方法以4',5,7三羟异黄酮处理黑色素瘤B_(16)细胞1~4d后,以生长曲线反映其增殖活力,以B_(16)细胞形态、黑色素含量、及流式细胞仪检测细胞周期变化等观察三羟异黄酮对黑色素瘤B16细胞的诱导分化作用。结果用10、30、90μmol/L的三羟异黄酮作用肿瘤细胞,有不同程度的抑瘤作用。表现为黑色素生成能力增加,细胞生长缓慢。可使B16细胞阻断在S期。结论三羟异黄酮不同剂量(10、30、90μmol/L)对B_(16)细胞均有明显的分化诱导作用,对体外黑色素瘤增殖有明显的抑制作用。