人胶质瘤细胞的激素诱导型细胞凋亡

减少晚期癌症患者的痛苦,改善其生活质量和延长其生存时间往往比争取肿瘤病灶的客观缓解更加现实和更为重要.本研究观察了中药制剂“芳香和胃胶囊”在该方面的应用效果.晚期癌症患者50例,平均56.5岁,均经病理组织学和/或细胞学检查,其中原发性肺癌11例,胃癌13例,结直肠癌9例,胰腺癌5例,原发性肝癌12例.由姜半夏、陈皮、佩兰、麝香先进药物按10:10:5:0.1比例混合拌匀灌胶囊,制成“芳香和胃胶囊”,每粒0.5g,每次6粒,每日3次口服,连续应用4周.观察治疗前后患者的食欲、食量、体重、体力状况(根据Karnofsky评分)等,并观察有无不良反应.结果表明,多数患者在服用“芳香和胃胶囊”后3～5d食欲即开始增加,总的食欲改善率达72.0%(36/50),78.0%(39/50)的患者每日进食明显增加,仅2例减少,体重增加者达64.0%(32/50),KPS明显增加者占48.0%(24/     

IFN-β基因诱导裸鼠胶质瘤Fas 表达上调及细胞凋亡的实验研究

 目的 研究β干扰素基因对人脑胶质瘤的诱导凋亡作用,以及能否诱导胶质瘤细胞Fas表达上调,并探讨了β干扰素基因诱导细胞凋亡及Fas表达上调之间的联系. 方法 建立裸鼠SHG44胶质瘤模型,用脂质体包埋法将IFN-β基因的真核表达载体pSV2IFNβ注入裸鼠皮下SHG44脑胶质瘤,观察肿瘤生长情况并计算肿瘤体积,通过免疫组化、TUNEL染色,了解IFN-β基因诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的作用以及胶质瘤细胞Fas表达情况. 结果 IFN-β在荷瘤裸鼠瘤体内获得表达,裸鼠皮下胶质瘤生长受到抑制,并诱导SHG44胶质瘤细胞凋亡,胶质瘤细胞Fas表达明显高于对照组. 结论 IFN-β基因能够抑制人脑胶质瘤生长,并诱导胶质瘤细胞凋亡;IFN-β基因诱导胶质瘤细胞凋亡可能是Fas表达上调的结果.     

整合素与胶质瘤细胞凋亡

 目的　研究整合素 β1在胶质瘤细胞中的表达及在胶质瘤细胞增殖、生存方面的作用。 方法　流式细胞仪检测SHG4 4胶质瘤细胞整合素 β1的含量 ,以不同浓度的抗整合素 β1抗体处理在胶原蛋白I上培养的SHG4 4胶质瘤细胞 ,MTT法测定ID50 ,测定细胞生长曲线 ,流式细胞仪分析细胞周期改变。结果　流式细胞仪检测SHG4 4胶质瘤细胞表达整合素 β1,MTT曲线测定发现 ,2 0 μg/ml抗整合素 β1抗体处理SHG4 4胶质瘤细胞 4 8小时后 ,显著抑制SHG4 4胶质瘤细胞的增殖。流式细胞仪分析可检出凋亡峰。结论　整合素 β1在SHG4 4胶质瘤细胞中高表达 ,并与胶质瘤细胞增殖、生存密切相关 ,抑制整合素 β1的表达可促进胶质瘤细胞的凋亡及坏死。     

泰素帝诱导人肺腺癌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨泰素帝诱导人肺腺癌细胞凋亡的作用机制。方法 应用形态学方法、流式细胞术（ＦＡＣＳ）、ＤＮＡ凝胶电泳、ＡｎｎｅｘｉｎＶ标记等方法检测细胞凋亡的发生,应用ＲＴ－ＰＣＲ检测凋亡相关基因Ｆａｓ、ｂｃｌ－２、ｃ－ｍｙｃ表达的变化。结果 泰素帝对人肺腺癌细胞系Ａ５４９细胞的生长有明显的抑制作用,使细胞分裂阻滞于Ｇ２Ｍ期,并诱导肿瘤细胞发生凋亡。凋亡细胞表现为细胞固缩,核染色质聚集或断裂,ＤＮＡ凝胶电     

薏苡仁酯诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的实验研究

目的　探讨薏苡仁酯诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用机制。方法　应用形态学方法 ,流式细胞术 (FACS) ,DNA凝胶电泳等方法检测细胞凋亡的发生 ,应用RT PCR检测凋亡相关基因Fas与FasL的变化。结果　薏苡仁酯对人宫颈癌HeLa细胞的生长有明显的抑制作用 ,并诱导肿瘤细胞发生凋亡。凋亡细胞表现为细胞固缩 ,核染色质碎裂 ,DNA凝胶电泳显示清晰的DNA梯形条带 ,FACS检测到凋亡率最高为 13%。AnnexinV标记的方法检测凋亡时发现 ,坏死与凋亡共存。在薏苡仁酯诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡过程中 ,凋亡相关基因Fas转录水平比用药前增强 ,而FasL转录水平减低。结论　除了坏死 ,凋亡也为薏苡仁酯抑癌的机制之一。薏苡仁酯诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡可能与Fas基因与FasL基因表达有关。     

基因转移FasL诱导人黑色素瘤细胞凋亡的体外研究

目的：探讨体外基因转移Fas配体(FasLigand, FasL)对恶性人黑色素瘤细胞凋亡的影响。方法：用携带人FasL cDNA的缺陷型重组腺病毒载体(AdFL)，在体外转导2株黑色素瘤细胞，并使其表达；通过流式细胞仪、RTPCR法进行 Fas/FasL表达检测，TUNEL法及荧光显微镜检测细胞凋亡状况。结果：流式细胞仪和 RTPCR检测两株黑色素瘤细胞表面均表达Fas，不表达FasL，而AdFL转导的两株黑色素瘤细胞均能表达FasL；AdFL能显著诱导两株黑色素瘤细胞在体外凋亡或抑制其生长。结论：重组腺病毒FasL在体外诱导人黑色素瘤细胞凋亡效果显著。     

原发性肝癌中Fas表达及其与细胞凋亡的关系

目的：研究Fas蛋白在肝癌组织中的表达和意义，探讨Fas蛋白与细胞凋亡的关系。方法：应用SABC免疫组织化学染色方法和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术，对41例肝癌组织中Fas蛋白、凋亡细胞表达进行原位观察和比较。结果：肝癌中Fas蛋白阳性率为31．71％，癌旁肝硬化Fas阳性率80．00％，癌细胞Fas表达较癌旁显著减少，肝癌组织Fas表达与性别、肿瘤大小、组织分级无关，Fas基因表达与门静脉癌栓发生率呈负相关。Fas表达阳性的肝癌组织细胞凋亡指数明显高于Fas蛋白表达阴性组。结论：Fas／FasL系统在原发性肝癌肿瘤免疫逃避中起重要作用，Fas蛋白在原发性肝癌门静脉癌栓形成中作用值得进一步研究。     

多西他赛诱导HL60细胞凋亡的实验研究

目的：探讨多西他赛诱导HL60细胞凋亡的作用机制。方法：应用形态学方法、流式细胞术、DNA凝胶电泳和Annexin V标记等方法检测细胞凋亡的发生，应用RT-PCR检测凋亡相关基因Fas、bcl-2和c-myc表达的变化。结果：多西他赛对HL60细胞的生长有明显的抑制作用。多西他赛使细胞分裂阻滞于G2M期，并诱导肿瘤细胞发生凋亡：具有典型的凋亡形态，细胞固缩，核染色质呈周边凝聚，形成凋亡小体，胞膜完整；DNA凝胶电泳呈凋亡特有的ladder带；FCM检测出现Sub-G1峰，0．1μmol／L多西他赛作用72h的apo％最高为33．46％；凋亡相关基因Fas转录水平比用药前增强，bcl-2和c-myc无明显变化；结论：多西他赛可诱导HL60细胞凋亡，可能主要与促进Fas基因表达有关。     

阿司匹林对结肠癌细胞凋亡及Fas/FasL表达的影响

目的：探讨阿司匹林对结直肠癌化学预防的机理。方法：培养结肠癌细胞株Caco-2，用不同浓度阿司匹林进行干预，对细胞生长、增殖、凋亡及Fas／FasL表达进行观察、检测。结果：高浓度阿司匹林组细胞大量死亡。低浓度组促进细胞凋亡；25mmol／L阿司匹林组可见Fas表达，而对照组不表达；25mmol／L阿司匹林组FasL表达与对照组相比明显降低。结论：低浓度阿司匹林促进结肠癌细胞凋亡，其机理与诱导Fas表达、下调FasL表达有关。     

莱菔硫烷促进神经胶质瘤细胞凋亡的机制探讨

目的探讨莱菔硫烷(SFN)促进神经胶质瘤细胞凋亡的作用机制。方法采用噻唑蓝(MTT)法与流式细胞法检测不同浓度的SFN对神经胶质瘤U251细胞系生长的抑制作用,测定半数抑制浓度,空白对照设为对照组;采用Western blot研究SFN对U251细胞内Cyt-c的表达情况。结果不同浓度SFN组A值均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同浓度SFN均对U251细胞生长有一定抑制作用,12.5μmol/l、25μmol/l、50μmol/l、100μmol/l浓度的SFN对U251细胞生长抑制率逐渐增强,各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。但100μmol/l与200μmol/l浓度的SFN对U251细胞生长抑制率比较无统计学意义(P>0.05)。不同浓度SFN诱导细胞凋亡率及Cyt-c蛋白表达均显著高于对照组,且随着SFN浓度递增,U251细胞凋亡率、Cyt-c蛋白表达逐渐增加,各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论SFN可能参与神经胶质瘤细胞的凋亡过程,表现为诱导凋亡U251细胞,可能与Cyt-c表达增高存在关系。     

白藜芦醇抑制人脑胶质瘤细胞生长及诱导凋亡比较

 目的 探讨白藜芦醇（Resveratrol，Res）体外抑制U251、U87和SHG-44脑胶质瘤细胞生长及诱导凋亡的不同作用比较，验证Re8确可导致U251细胞凋亡。方法 MTT比色法测量不同剂量的Res作用U251、U87和SHG-44胶质瘤细胞24h后对增殖的影响及不同剂量的Res作用U251、U87和SHG-44细胞6h、24h、48h后的影响。流式细胞仪用Annexin V-FITC和PI双染检测U251、U87和SHG-44细胞凋亡率。HE染色、Hoechst 33342荧光染色、透射电镜（TEM）观察U251细胞形态改变，流式细胞仪测定U251细胞的细胞周期改变。结果 Res明显抑制U251、U87和SHG-44细胞的生长和增殖（P〈0．01）且对U87细胞的抑制作用最强，U251和SHG-44细胞次之；对U251细胞的抑制作用呈浓度及时间依赖性反应；Re8所致的U251、U87和SHG-44胶质瘤细胞凋亡为浓度依赖关系，且对U87细胞的凋亡作用强于U251和SHG-44细胞。U251凋亡细胞的细胞周期主要发生G，期阻滞。结论 Res对U251、U87和SHG-44细胞生长抑制及凋亡作用以U87细胞更明显，对U251细胞的抑制作用呈浓度及时间依赖性反应并引起了其细胞周期改变。     

胶质瘤细胞诱导分化后的凋亡现象

目的：研究胶质瘤细胞诱导分化后的去向,籽胶质瘤诱导化疗法提供理论基础。方法：采用MTT,免疫荧光等方法鉴定二甲基甲酰胺DMF诱导胶质瘤细胞系,SHG－44的分化,用形态学,吖啶橙／溴化乙啶活细胞染色（AO／EB）,流式细胞术,Annexin V检测凋亡。结果：DMF可以引起剂量依赖性的显著诱导分化作用,从细胞形态,AO／EB染色上可以观察到细胞经1％DMF诱导分化后发生了凋亡。经流式细胞术DNA图谱定量,诱导1,5天凋记细胞占3．5％,第3天占26．8％,用检测细胞膜不对称性的Annexin V凋亡检测发现,第1．5天即可观察到12．18％,的早期凋亡细胞,并排除坏死,结论：胶质瘤细胞系SHG－44经DMF诱导分化后,将逐渐凋亡。     

Tumor Necrosis Factor-α Gene Transfer Augments Anti-Fas Antibody-mediated Apoptosis in Human Glioma Cells

To effectively induce apoptosis in human glioma cells, we tried to transfer the tumor necrosis factor (TNF)-α gene into glioma cells to produce TNF-α locally in these cells. The stable transfectants of three gliorna cells (U251-SP, U251-MG, and T98G) were resistant to exogenous TNF-α, but their cell surface expression of the Fas antigen was dramatically enhanced by about 10 to 100-fold as compared with untransfected glioma cells exposed to exogenous TNF-α. The Fas antigen is a transmemhrane cytokine receptor protein of the nerve growth factor/TNF receptor superfamily. Although the untransfected glioma cells tested were resistant to anti-Fas antibody-mediated apoptosis, the TNF-α gene-transfected glioma cells exhibited high susceptibility to anti-Fas antibody-mediated apoptosis. Thus, TNF-α gene transfer combined with anti-Fas antibodies may be useful for the treatment of malignant glioma.     

ITSN1-S对胶质瘤细胞凋亡的作用研究*

目的:研究ITSN 1-S蛋白在调节恶性胶质瘤细胞增殖与凋亡方面的作用,并进一步探讨其相关的分子机制。方法:利用小RNA干扰技术抑制体外培养的人胶质母细胞瘤细胞LN- 229 中ITSN1-S蛋白的表达,并应用MTT 、流式细胞术、TUNEL染色等方法检测胶质母细胞瘤细胞的增殖与凋亡情况,进而应用Western blotting法检测与细胞凋亡密切相关的蛋白（Bad、Bcl- 2）的表达情况。结果:与对照组相比,转染组细胞的增殖受到明显抑制（P<0.05）,凋亡显著增加（P<0.05）,并且促凋亡蛋白Bad 的表达增加,抗凋亡蛋白Bcl- 2 的表达下降。结论:ITSN1-S参与调节胶质母细胞瘤细胞的增殖与凋亡,该作用可能与其调节凋亡相关蛋白的表达有关。      

Induction of Apoptosis in Resistant Glioma Cells by Synthetic Caspase-Activation

The detailed mechanisms behind the resistance of malignant gliomas to therapy are not known. Inherent resistance to apoptosis is, however, one plausible explanation. In the present study we tried to delineate the molecular defects and to induce apoptosis by inducible caspases in three apparently apoptosis resistant glioma cell lines. U-105 MG, U-251 MG, and SF-767 were resistant to Fas-induced apoptosis as shown by the lack of Fas-induced cell death, morphological changes, annexin-V reactivity, Parp cleavage, caspase-3 cleavage, and caspase-3 activation. The glioma cells showed no consistent down-regulation of the pro-apoptotic proteins Fas, Fadd, caspase-3, caspase-8, caspase-9, Apaf-1, Bid, Bad, or Bax, and no consistent up-regulation of the anti-apoptotic proteins Bcl-x or Bcl-2. In U-105 MG, Fas was, however, not detected at the cell surface indicating intracellular retention. To assess if the apoptotic blocks could be by-passed, we introduced the so-called artificial death switches, i.e., inducible caspases and Fadd, into the glioma cells. Synthetic activation of inducible caspase-3, but not of caspase-8, resulted in apoptosis in the three glioma cell lines and inducible Fadd induced apoptosis in SF-767. The results were consistent with a block in the apoptotic signaling pathways of glioma cells between caspase-8 and caspase-3 activation, and that inducible Fadd could induce caspase-8 independent apoptosis in some cells. Apparently resistant glioma cells could thus be induced to undergo apoptosis by activation of appropriate death switches. This might have implications for the design of future therapeutic strategies.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂诱导脑胶质瘤细胞凋亡及其机制的研究

背景与目的:使用分子靶向药物治疗胶质瘤是神经肿瘤领域的研究热点。本文探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对脑胶质瘤细胞株U251细胞增殖和迁移的影响及其机制。方法:以不同药物浓度梯度与U251细胞分别共培养24、48和72h后,应用CCK-8法检测肿瘤细胞增殖,Transwell法检测药物作用前后U251细胞迁移能力的变化,Annexin V-FITC/PI法经流式检测细胞凋亡率,实时定量PCR检测IκB-α的RNA含量,免疫印迹检测IκB-α蛋白、磷酸化IκB-α蛋白和聚ADP核糖聚合酶(PARP)表达。结果:MS-275能显著抑制U251细胞的增殖。MS-275药物浓度40nmol/mL,与U251共培养72h,细胞增殖抑制率为(79.0±1.7)%;经药物作用72h后,U251细胞凋亡率为(29.000±2.306)%;实时定量PCR检测IκB-α的RNA含量随药物作用时间的延长而降低,免疫印迹检测提示IκB-α蛋白表达水平降低,IκB-α蛋白磷酸化被抑制,PARP被剪切。结论:MS-275对胶质瘤细胞的增殖和迁移抑制作用具有浓度和时间依赖性,其机制是通过抑制IκB-α蛋白磷酸化诱导凋亡实现的。     

Staurosporine Induced Apoptosis Rapidly Downregulates TDP-43 in Glioma Cells

TDP-43 is a ubiquitously expressed DNA/RNA binding protein that has recently attracted attention for itsinvolvement in neurodegenerative diseases. While TDP-43 has been found to participate in various importantcellular activities including stress and apoptosis, little is known about its role in cancer cells. Here we report thatstaurosporine (STS) induced apoptosis in U87 glioma cells is associated with rapid downregulation of TDP-43at both mRNA and protein levels. The latter is dependent on activation of caspase 3. More importantly, we haveshown that knockdown of TDP-43 by specific siRNA dramatically enhanced cytotoxicity of STS. These resultssuggest that normal level of TDP-43 may be protective for cancer cells under apoptotic insult.