周围神经损伤修复中感觉神经元内转化生长因子β1变化的作用

目的:观察大鼠坐骨神经损伤后背根神经节内转化生长因子β1(TGF-β1)表达的变化,探讨TGF-β1在周围神经损伤修复过程中所起的作用。方法:实验于2001-08/2002-05在第四军医大学西京医院全军骨科研究所实验室完成。35只雄性SD大鼠,造成右侧坐骨神经挤压伤。分别于正常及术后1,3,5,7,14,21d取材,行组织学、免疫组织化学观察。结果:免疫组织化学染色结果,神经挤压后TGF-β1表达逐渐升高,5d时达到高峰,以后TGF-β1表达的量有所减少。结论:TGF-β1参与周围神经挤压伤后的病理生理改变,在损伤神经修复过程中具有一定的作用。     

周围神经损伤修复中感觉神经元内转化生长因子β1变化的作用

目的：观察大鼠坐骨神经损伤后背根神经节内转化生长因子β1(TGF．β1)表达的变化，探讨。TGF-β1在周围神经损伤修复过程中所起的作用。方法：实验于2001-08／2002一05在第四军医大学西京医院全军骨科研究所实验室完成。35只雄性SD大鼠，造成右侧坐骨神经挤压伤。分别于正常及术后1，3，5，7，14，21d取材，行组织学、免疫组织化学观察。结果：免疫组织化学染色结果，神经挤压后TGF-β1表达逐渐升高，5d时达到高峰，以后TGF-β1表达的量有所减少。结论：TGF-β1参与周围神经挤压伤后的病理生理改变，在损伤神经修复过程中具有一定的作用。     

坐骨神经分支选择性损伤模型大鼠脊髓背角内5-羟色胺4-7受体亚型mRNAs的表达变化

目的：观察坐骨神经分支选择性损伤模型大鼠脊髓背角内5-羟色胺4—7受体亚型mRNAs的表达变化。 方法：实验于2004—10／2005-06在第四军医大学解剖学教研室进行。①取SD大鼠27只，随机分为正常对照组3只；手术组24只。②手术组大鼠在戍巴比妥钠（40mg／kg）腹腔麻醉下，切开左侧后肢皮肤暴露并钝性分离腓肠肌两头，暴鼹坐骨神经，在邻近坐骨神经分叉处结扎胫神经和腓总神经，于结扎远端0．5cm处切断神经，建立坐骨神经分支选择性损伤大鼠模型，全过程中注意勿伤及腓肠神经；右侧为假手术对照．只暴露不结扎切断坐骨神经，其余过程同手术侧。③分别在术后1，2，3，4，7，14，21，28d，取b～k节段脊髓背角，采用反转录-聚合酶链式反应技术检测脊髓背角内5-羟色胺4—7受体亚型mRNAs的表达变化。 结果：27只大鼠进入结果分析。①正常大鼠脊髓背角检测到5一羟色胺4、5-羟色胺5A、5-羟色胺7受体亚型mRNAs的表达，但未检测到5-羟色胺5B．5-羟色胺6受体亚型mRNAs的表达。②手术组手术侧检测到5-羟色胺4、5-羟色胺5A和5-羟色胺7受体亚型mRNAs的表达上调。其中，5-羟色胺4受体亚型mRNA的表达在术后4d明显升高，21d达高峰后下降，28d趋于正常。5-羟色胺5A受体亚型mRNA的表达在术后3d开始升高，持续升高至28d。5-羟色胺7受体亚型mRNA的表达变化同5-羟色胺5A受体亚型。假手术侧的脊髓背角，各受体亚型mRNAs的表达未出现明显变化。在脊髓背角未检测到5-羟色胺5B和5-羟色胺6受体亚型mRNAs的表达。 结论：5-羟色胺受体亚型mRNA在坐骨神经分支选择性损伤模型脊髓背角中的表达具有不同的时程变化特点，提示它们在坐骨神经分支选择性损伤所致的神经病理性痛中发挥不同作用。     

吡哆醇诱导性大鼠感觉神经元病的神经再生微环境

目的 观察吡哆醇诱导的感觉神经元病大鼠在坐骨神经挤压伤后神经再生相关蛋白的表达水平,探讨神经元分子微环境变化对神经再生修复的重要意义.方法 制作吡哆醇诱导的感觉神经元病模型,在此基础上制作双侧坐骨神经挤压伤模型.观察神经挤压损伤后7、14、21和28 d大鼠的背根神经节TUNEL标记阳性细胞百分比变化;利用蛋白印迹技术,观察神经再生相关蛋白(GAP-43)和神经生长因子受体(trk A)表达水平变化.结果 背根神经节细胞早期有较多的TUNEL标记细胞,但21～28 d由于大部分细胞变性坏死,TUNEL标记细胞反而减少.背根神经节细胞GAP-43和trk A蛋白有一定水平的表达,但总体水平低于单纯坐骨神经损伤时.结论 中毒造成的感觉神经节病变危及神经元的生存,导致基因表达体系不完整,使损伤神经的再生修复能力下降.     

生长相关蛋白-43及mRNA在大鼠损伤坐骨神经中的表达

目的 探讨坐骨神经离断后。其远侧靖组织中生长相关蛋白-43mRNA(GAP-43mRNA)及其蛋白表达的变化。为临床神经修复过程中更好地改善微环境提供实验依据。方法 正常SD大鼠24只，行坐骨神经横断术，术后l，2，3，4周取坐骨神经远侧端组织，以WesternBlot和RT-PCR法检测GAP-43及其mRNA的表达。结果 RT-PCR结果显示。正常大鼠坐骨神经组织中GAF-43mRNA表达量较低。损伤坐骨神经远侧端GAP-43mRNA的表达量明显增加，于损伤第2周时达高峰。采用抗GAP-43抗体，进行WesternBlot检测结果：正常坐骨神经43kDa处出现弱阳性反应的蛋白区带。损伤后坐骨神经远侧端43kDa处阳性反应条带着色明显加深。损伤后第3周时阳性反应着色最强。结论 GAP-43及其mRNA在大鼠损伤坐骨神经远侧端组织中表达增强，其mRNA表达上调高峰在神经损伤后的第2周；而其蛋白合成增加最为明显的时间是在神经损伤后的第3周。     

局部亚低温干预对实验大鼠脑出血后MMP-2/9表达及脑水肿的影响

目的探讨局部亚低温干预对大鼠自体血注入法脑出血模型基质金属蛋白酶-2／9（MMP-2／9）表达及脑水肿的影响。方法将165只Wistar大鼠随机分为常温假手术组（15只）、常温实验组（75只）及亚低温实验组（75只）。亚低温实验组于脑内注血后给予持续4h的局部亚低温治疗。各组大鼠分别于术后6h，24h，72h，5d及7d时进行脑组织水含量、血脑屏障（BBB）通透性测定，并同时应用免疫组化法测定脑组织MMP-2／9表达水平。结果常温实验组大鼠脑组织水含量、BBB通透性及MMP-9表达水平均于术后6h时开始增高，于72h时达到高峰，至术后7d时仍明显高于常温假手术组；MMP-2在术后24h才开始有少量表达，于术后5d时达到高峰，至7d时仍保持较高表达水平。亚低温实验组大鼠脑组织水含量、BBB通透性及MMP-2／9的表达情况均与常温实验组接近，但其各项指标数据均较常温实验组明显降低。常温实验组和亚低温实验组大鼠MMP-9的表达与脑组织水含量及BBB通透性的变化均呈正相关，而MMP-2的表达与二者变化均无明显相关性。结论亚低温干预可能具有抑制脑出血后MMP-2／9表达的作用，从而保护BBB，减轻脑水肿及炎症反应。     

大鼠周围神经条件性损伤促进对侧神经再生

目的了解条件性损伤与神经再生的关系.方法50只雄性SD大鼠,按术式随机分成两组.A组显露左侧坐骨神经,不损伤.B组造成左侧坐骨神经挤压伤.于伤后5d,两组均造成右侧坐骨神经挤压伤.分别于术后0、1、3、5、7d行挤压反射试验,检测神经轴突再生的距离及组织学观察.结果试验组的初期延迟1.05d明显短于对照组的初期延迟1.70d(P<0.05).结论大鼠坐骨神经条件性损伤通过缩短再生延迟,而促进神经再生.     

大鼠心肺复苏后脑组织基质金属蛋白酶及其组织抑制剂表达的研究

目的探讨心肺复苏早期脑组织基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、MMP-9及基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）的mRNA表达变化。方法用窒息法建立大鼠心肺复苏模型。80只SD大鼠随机分为假手术对照组和复苏组，然后依据时间分为假手术或复苏自主循环恢复（ROSC）后即刻及0．5、3、6和9h组。检测各组大鼠脑组织MMP-2、MMP-9及TIMP-1的mRNA表达情况。结果心肺复苏后3h大鼠脑组织MMP-9及TIMP-1的mRNA表达水平均开始上升，6h时显著增高，MMP-9／TIMP-1比值也相应增大。MMP-2 mRNA水平在心肺复苏后9h内未见明显升高。结论心肺复苏后早期就出现MMP-9、TIMP-1的mRNA表达增加及比例失衡，而MMP-2 mRNA水平在早期无明显变化。     

坐骨神经分支选择性损伤模型大鼠脊髓背角内5-羟色胺4-7受体亚型mRNAs的表达变化

目的:观察坐骨神经分支选择性损伤模型大鼠脊髓背角内5-羟色胺4-7受体亚型mRNAs的表达变化。方法:实验于2004-10/2005-06在第四军医大学解剖学教研室进行。①取SD大鼠27只,随机分为正常对照组3只;手术组24只。②手术组大鼠在戍巴比妥钠(40mg/kg)腹腔麻醉下,切开左侧后肢皮肤暴露并钝性分离腓肠肌两头,暴露坐骨神经,在邻近坐骨神经分叉处结扎胫神经和腓总神经,于结扎远端0.5cm处切断神经,建立坐骨神经分支选择性损伤大鼠模型,全过程中注意勿伤及腓肠神经;右侧为假手术对照,只暴露不结扎切断坐骨神经,其余过程同手术侧。③分别在术后1,2,3,4,7,14,21,28d,取L3～L6节段脊髓背角,采用反转录-聚合酶链式反应技术检测脊髓背角内5-羟色胺4-7受体亚型mRNAs的表达变化。结果:27只大鼠进入结果分析。①正常大鼠脊髓背角检测到5-羟色胺4、5-羟色胺5A、5-羟色胺7受体亚型mRNAs的表达,但未检测到5-羟色胺5B、5-羟色胺6受体亚型mRNAs的表达。②手术组手术侧检测到5-羟色胺4、5-羟色胺5A和5-羟色胺7受体亚型mRNAs的表达上调。其中,5-羟色胺4受体亚型mRNA的表达在术后4d明显升高,21d达高峰后下降,28d趋于正常。5-羟色胺5A受体亚型mRNA的表达在术后3d开始升高,持续升高至28d。5-羟色胺7受体亚型mRNA的表达变化同5-羟色胺5A受体亚型。假手术侧的脊髓背角,各受体亚型mRNAs的表达未出现明显变化。在脊髓背角未检测到5-羟色胺5B和5-羟色胺6受体亚型mRNAs的表达。结论:5-羟色胺受体亚型mRNA在坐骨神经分支选择性损伤模型脊髓背角中的表达具有不同的时程变化特点,提示它们在坐骨神经分支选择性损伤所致的神经病理性痛中发挥不同作用。     

坐骨神经切断后胶质细胞源性神经营养因子mRNA的表达变化

目的 探讨大鼠坐骨神经切断后，胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)mRNA在两侧断端的表达变化及其意义。方法 采用Trizol一步法提取坐骨神经总RNA，取少量作紫外扫描分析和琼脂糖电泳分析，切断SD大鼠左侧坐骨神经，不同时间、半定量RT—PCR方法，观察两侧断端GDNF mRNA的表达变化。结果 坐骨神经切断前，GDNF mRNA在两侧坐骨神经微量表达，为(6．5&;#177;1．3)％，坐骨神经切断后远断端表达逐渐增加，伤后1d(7．8&;#177;1．9)％，伤后7d(10．3&;#177;2．1)％，伤后14d(11．9&;#177;2．3)％，伤后28d(12．3&;#177;2．4)％，近断端表达逐渐减少，伤后1d(5．8&;#177;1．3)％，伤后7d(4．0&;#177;1．0)％，伤后14d(3．6&;#177;1．1)％，伤后28d(3．1&;#177;1．0)％。伤后1d与伤前比较(P&;gt;0．05，t=1．193，0．879)，伤后7，14，28d与伤前比较(P&;lt;0．01，t=3．762，3．565，5．059，4．083，5．164，4．905)。结论 GDNF在损伤信号的刺激下表达急剧增加，起到修复神经元的作用，为外源性GDNF治疗脊髓损伤提供了理论基础。     

Pro-inflammatory cytokine, matrix metalloproteinases and TIMP-1 are involved in wound healing after mastectomy in invasive breast cancer patients.

BACKGROUND: Mastectomy provides a good model to study the wound healing process after surgery. The involved factors include selectins, pro-inflammatory cytokines such as interleukin 6 (IL-6) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha), matrix metalloproteinases (MMPs), and their natural inhibitors (TIMPs). In the present study, we observed the kinetic changes of these factors in the process of wound healing after a mastectomy, and analyzed the relationship between these factors and the clinical outcomes. MATERIALS AND METHODS: Twenty-nine patients, who received a modified radical mastectomy, were recruited to this study. The wound was inspected daily for the presence of flap necrosis, infection and seroma. Drain fluid was collected on days 1, 2 and 5. IL-6, P-selectin, MMP-2, 3, 9 and TIMP-1 were screened by ELISA kits for their impacts on wound healing after mastectomy. RESULTS: IL-6 demonstrated the highest level on Day 1 after operation and was negatively correlated with MMP-2, which in turn showed a consistently negative correlation with MMP-9 for days 1, 2 and 5. Incidences of seroma formation and skin flap necrosis were 27.6% and 20.7%, respectively. Seroma formation was associated with low MMP-2 levels on Day 5. While skin flap necrosis seemed to correlate with high MMP-2 levels and low levels of MMP-9 and TIMP-1. CONCLUSION: IL-6, P-selectin, MMP-2, MMP-3, MMP-9 and TIMP-1 are important in the process of wound healing after mastectomy. A low MMP-2 level correlates with the formation of seroma, while MMP-2, MMP-9 and TIMP-1 are associated with skin flap necrosis.     

Biglycan及血管内皮生长因子对结肠癌细胞迁移、侵袭能力的影响及机制

目的:观察biglycan及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对结肠癌细胞系HCT116迁移、侵袭能力的影响并探讨其可能的机制。方法:在稳定转染biglycan的结肠癌细胞系HCT116中转染VEGF siRNA,实验设置未转染对照组(mock组)、空载质粒和非特异性干扰片段转染对照组(vector+siRNA-NC组)、biglycan cDNA和非特异性干扰片段转染组(biglycan+siRNA-NC组)以及biglycan cDNA和VEGF siRNA共转染组(biglycan+siRNA-VEGF组)。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测biglycan和VEGF的mRNA表达;采用划痕实验检测细胞的迁移能力;采用Transwell法检测细胞的侵袭能力;采用蛋白质印迹(Western blotting)法检测SNAIL、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达;采用明胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9的活性。结果:与mock组及vector+siRNA-NC组比较,biglycan+siRNA-NC组细胞的迁移、侵袭能力均显著提高(P0.05),vimentin、MMP-2、MMP-9、SNAIL蛋白的表达水平显著提高,E-cadherin蛋白的表达水平则显著下降(P0.05),MMP-2和MMP-9的活性显著提高(P0.05)。与biglycan+siRNA-NC组比较,biglycan+siRNA-VEGF组细胞的迁移、侵袭能力均显著降低(P0.05),SNAIL、vimentin、MMP-2、MMP-9蛋白的表达水平均显著下降,E-cadherin蛋白的表达水平显著提高(P0.05),MMP-2、MMP-9的活性显著下降(P0.05)。结论:biglycan通过促进VEGF的表达来促进结肠癌细胞系HCT116的迁移和侵袭,下调结肠癌细胞中VEGF的表达可逆转biglycan对HCT116迁移和侵袭的促进作用。     

hCG对滋养细胞系侵袭性相关基因表达的影响

目的：揭示人类绒毛膜促性腺激素（hCG）对滋养细胞侵袭性的影响。 方法：以永生化的滋养细胞系JEG-3为研究对象，采用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）方法，观察了hCG对滋养细胞系侵袭性相关基因表达的影响。 结果：JEG-3细胞自身表达MMP-2，而不表达MMP-9或uPA，同时还表达这些蛋白酶的抑制因子TIMP-1、TIMP-2和PAI-1。JEG-3细胞还表达组织蛋白酶B，而未见组织蛋白酶D的表达。在与25 IU/ml hCG温育50h后，MMP-2的表达无显著变化，而TIMP-1和PAI-1的表达显著降低，同时TIMP-2的表达被诱导增加，其它基因的表达无明显变化。 结论：高浓度(25 IU/ml)的hCG可能通过改变蛋白水解酶及其抑制因子的表达而减弱滋养细胞的侵袭性。     

锌对前列腺癌PC-3M细胞侵袭能力的影响

目的探讨锌对人前列腺癌PC-3M细胞侵袭能力的影响。方法用MIT比色法检测不同剂量锌对PC-3M细胞增殖的影响;Tramwell小室检测锌对PC-3M细胞侵袭能力的影响;RT-PCR检测锌作用24h后MMP-2、MMP-9mRNA的表达;酶谱分析检测锌作用后PC-3M细胞MMP-2、MMP-9的活性变化。结果MTT检测结果表明一定剂量的锌可抑制PC-3M细胞的生长;Transwell小室实验结果显示,锌作用下PC-3M细胞穿透Matrigel膜的细胞数减少;RT-PCR结果显示锌抑制了PC-3M细胞bIMP-2和MMP-9的表达;酶谱分析表明锌作用后PC-3M细胞MMP-2、MMP-9的活性下降。结论一定剂量的锌可降低PC-3M细胞的侵袭能力,其机制可能与抑制MMP-2、MMP-9的合成和激活有关。     

MMP-2和MMP-9在急性B淋巴细胞白血病中的表达及临床意义

本研究探讨急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）患者骨髓细胞中基质金属蛋白酶-2和-9（MMP-2,MMP-9）的表达及临床意义。采用半定量RT-PCR方法检测初治、复发B-ALL患者和正常对照骨髓中单个核细胞MMP-2,MMP-9mRNA的表达。采用明胶酶谱检测B-ALL患者和正常对照骨髓单个核细胞孵育上清中MMP-2,MMP-9的酶活性。结果表明,初治、复发组B—ALL患者中MMP-2表达率明显高于正常对照组（P〈0．05）;MMP-9表达率明显低于正常对照组（P〈0．05）。髓外浸润组患者MMP-2和MMP-9表达率均明显高于无髓外浸润组（P〈0．05）,而MMP-2／MMP-9（＋）组髓外浸润发生率明显高于MMP-2／MMP-9（-）组。高危组B—ALL患者MMP-9表达率明显高于标危组,而两组间MMP-2表达率无显著性差异（P〉0．05）。结论：B-ALL患者白血病细胞可以产生MMP-2,MMP-9,可能参与了B-ALL的髓外浸润,MMP-9表达可能提示预后不良。     

清解扶正颗粒体外抑制血管新生的作用机制研究

目的:探讨清解扶正颗粒(Qingjiefuzheng Granules,QFG)对体外人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC)新生的影响及可能的作用机制。方法:以HUVEC为研究对象,给予不同浓度QFG后观察细胞形态变化,MTT检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,管腔形成实验检测细胞成血管能力,蛋白免疫印迹检测促血管新生因子、血管内皮生长因子A、血管内皮生长因子受体2、基质金属蛋白酶2及基质金属蛋白酶9的蛋白表达。结果:QFG对HUVEC形态与细胞生长没有明显影响,但可显著抑制HUVEC的活力、迁移及体外成血管能力;QFG显著抑制血管内皮生长因子A、基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9等蛋白表达。结论:QFG在体外具有抑制血管新生的作用,其作用机制与其抑制血管内皮生长因子A、基质金属蛋白酶2及基质金属蛋白酶的表达有关。     

瑞舒伐他汀对心肌肥厚大鼠心肌组织MMP-2和MMP-9蛋白表达的影响

目的：探讨瑞舒伐他汀对心肌肥厚大鼠心肌组织基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9的影响。方法：40只远交群（SD）大鼠随机分为正常对照组、模型组、卡托普利组和瑞舒伐他汀组,每组10只。模型组、卡托普利组和瑞舒伐他汀组大鼠皮下注射异丙肾上腺素制作心肌肥厚大鼠模型,正常对照组同期皮下注射生理盐水。模型制作成功后,瑞舒伐他汀组给予瑞舒伐他汀4mg／kg,每日1次灌胃;卡托普利组予卡托普利60mg／kg,每日1次灌胃,其他两组均给予等量生理盐水。4周后测定4组全心质量指数（全心湿质量与体质量比）、左心室质量指数（左心室湿质量与体质量比）,采用分光光度法检测左心室心肌组织胶原含量,免疫组织化学法检测MMP-2、MMP-9蛋白的表达水平。结果：模型组大鼠的心肌肥厚指数、胶原含量及MMP-2和MMP-9蛋白的表达水平均明显高于对照组（P〈0．05）,瑞舒伐他汀组和卡托普利组大鼠心肌组织胶原含量、MMP-2及MMP-9蛋白的表达明显低于模型组（P〈0．05）,瑞舒伐他汀组和卡托普利组各项指标比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：瑞舒伐他汀能有效减轻心肌肥厚后心肌组织的纤维化程度,这一效应可能与其降低心肌中高表达的MMP-2、MMP-9有关。     

NF-κB在急性白血病患者骨髓细胞中的表达及其与P21,MMP-2和MMP-9表达的关系

本研究应用免疫细胞化学法检测初治急性白血病患者、缓解期患者及正常对照者骨髓细胞中NF κB ,Ras基因编码的P2 1蛋白及MMP 2和MMP 9表达阳性细胞的百分率 ,以明确核因子κB (nuclearfactor kappaB ,NF κB)在急性白血病细胞高表达的意义 ,及其与P2 1,基质金属蛋白酶 2和 9(matrixmetalloproteinase,MMP 2和MMP 9)表达间的关系。结果表明 :初治组NF κB ,P2 1及MMP 2和MMP 9的阳性率明显高于缓解组及正常对照组 (P <0 .0 5 ) ,而缓解组与正常对照组间没有显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,且NF κB与P2 1蛋白 ,MMP 2和MMP 9表达均呈正相关 (r值分别为 0 .76 7,0 .72 9和 0 .80 3,P <0 .0 5 ) ,说明白血病细胞中NF κB及P2 1蛋白异常高表达。结论 :NF κB经Ras启动活化后可上调MMP 2和MMP 9在白血病细胞的表达 ,使其分解细胞外基质的能力明显升高而释放入血     

MMP-2mRNA和MMP-9mRNA在脑膜瘤中的表达及与其脑浸润性的关系

目的　研究基质金属蛋白酶 - 2和基质金属蛋白酶 - 9( matrix metalloproteinase,MMP- 2、MMP- 9)的 m RNA在脑膜瘤中的表达及其脑浸润性的关系。方法　应用原位杂交法检测了 44例脑膜瘤组织中MMP- 2 m RNA和 MMP- 9m RNA的表达。结果　 MMP- 2 m RNA和 MMP- 9m RNA的表达与脑膜瘤的脑浸润、瘤周水肿及组织学类型相关 ;脑浸润与瘤周水肿关系密切 ( P<0 .0 0 5 )。结论　MMP- 2 m RNA和MMP- 9m RNA对脑膜瘤的脑浸润、瘤周水肿的形成有重要影响