SARS病毒基因检测结果与患者病情、病程和体液免疫的关系研究

目的:研究严重急性呼吸综合征患者的病情、病程和特异性抗体产生对SARS病毒基因阳性检出率的影响。方法:采用巢式反转录PCR检测健康人,发烧非SARS患者,不同时期和不同病情SARS患者以及存不存在特异性抗体的SARS患者痰标本中的SARS病毒核酸即RNA。结果:巢式RT—PCR检测SARS患者痰标本中的SARS病毒RNA的敏感度为60.0％。6 d～10 d组阳性检出率最高,为100％,高于11 d～25 d组,而11 d～25 d组的阳性检出率又高于>25 d组(P<0.01);病情轻组比病情重组的阳性检出率高(P<0.05);抗体阴性组比抗体阳性组检出率高(P<0.05)。结论:SARS病毒基因检测阳性率在轻病情组比重病情组高,住院时间短组比住院时间长组高,血清特异性抗体阴性组比阳性组高。     

SARS病毒基因检测结果与患者病情、病程和体液免疫的关系研究

目的:研究严重急性呼吸综合征患者的病情、病程和特异性抗体产生对SARS病毒基因阳性检出率的影响.方法:采用巢式反转录PCR检测健康人,发烧非SARS患者,不同时期和不同病情SARS患者以及存不存在特异性抗体的SARS患者痰标本中的SARS病毒核酸即RNA.结果:巢式RT-PCR检测SARS患者痰标本中的SARS病毒RNA的敏感度为60.0 %.6 d～10 d组阳性检出率最高,为100 %,高于11 d～25 d组,而11 d～25 d组的阳性检出率又高于＞25 d组(P＜0.01);病情轻组比病情重组的阳性检出率高(P＜0.05);抗体阴性组比抗体阳性组检出率高(P＜0.05).结论:SARS病毒基因检测阳性率在轻病情组比重病情组高,住院时间短组比住院时间长组高,血清特异性抗体阴性组比阳性组高.     

广东地区SARS标本检测方法的对比研究

目的比较和评价严重急性呼吸综合征的检测方法。方法采用巢式RT-PCR和实时荧光定量PCR检测病人咽痰标本，采用ELISA方法检测血清IgG抗体，同时采用细胞培养技术对咽痰标本进行病毒分离，并对检测结果进行统计学分析。结果两种RT-PCR检测结果完全一致；巢式RT-PCR与荧光定量PCR检测比较，两种检测方法之间的吻合度较强，检测结果基本一致；比较PCR方法和ELISA方法检测病毒基因和IgG抗体，结果发现PCR方法与ELISA方法之间的吻合度很弱，两种方法对于临床诊断具有互补性；采用细胞培养(Vero-E6细胞株)方法，分离了13株SARS-CoV毒株。结论采用巢式RT-PCR和实时荧光定量PCR、ELISA IgG抗体检测和细胞培养技术对于SARS临床诊断、研究、预防和控制具有重要意义，目前的诊断技术已稳定可靠；但确诊周期过长，同时须防止标本污染和实验室污染。     

病毒基因的检测

一乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)测定乙型肝炎是由乙肝病毒引起的以肝脏损害为主要临床特征的急、慢性传染病,严重者可发展成慢性肝炎、肝硬化和肝癌.在我国,乙肝是危害人类健康的一种主要传染病.     

血、便、痰和尿标本中SARS冠状病毒核酸的检测和病毒基因谱的初步建立

目的：利用冠状病毒全基因组芯片检测SARS患者血、便、痰和尿标本中的冠状病毒核酸并试图建立其基因谱。方法：提取SARS患者血、便、痰和尿样本中的冠状病毒RNA，经全基因组随机反转录和PCR扩增标记成荧光探针，与SARS病毒全基因组芯片进行杂交，同时用体外培养的病毒RNA和从健康人血液中提取的RNA做对照。结果：SARS患者的4种标本中都能检测到冠状病毒核酸的存在，与整个病毒基因组相比，大都为一些不连续的片断。其中尿、痰和便标本中的基因谱较为相似，另外，发现编码S1蛋白的核酸在一些标本中是连续的，具体为23份血标本中有2份是连续的，13份痰标本中有8份是连续的，51份便标本中有48份是连续的，2份尿标本中都是连续的。结论：冠状病毒全基因组芯片能够检测出SARS患者血、便、痰和尿标本中的冠状病毒核酸，并能建立各来源标本中病毒核酸的基因谱。     

SARS时期焦虑情绪对老年军人患者病情的影响

焦虑是机体适应环境过程中的一种情绪反应 ,这种情绪对病人的身心健康不利[1] 。北京地区于 2 0 0 3年 3月至 6月遭到严重急性呼吸道综合征 (SARS)感染传播。我们调查SARS流行期间老年患者焦虑情绪产生的因素及焦虑对躯体疾病的影响 ,以指导今后在突发事件时正确引导医疗。对象     

SARS冠状病毒多聚酶基因临床检测方法的建立

目的 分析SARS冠状病毒广东株多聚酶基因片段的异质性。建立RT-PCR检测SARS冠状病毒的方法，为SARS的快速诊断提供依据。方法 合成针对SARS冠状病毒多聚酶基因区段的特异性引物，从广东省SARS病人及疑似病人标本中提取RNA，经反转录和巢氏PCR扩增出相应大小的DNA片段。对这些片段克隆后进行DNA序列分析，并将序列与SARS冠状病毒和其他已知冠状病毒进行同源性分析。结果 从多例SARS病人痰、咽拭子或血液标本中得到RT-PCR阳性片段，随机选取其中8例经克隆和DNA序列分析证实均为SARS冠状病毒序列(同源性100％)，而所有阴性参照标本RT-PCR均为阴性。克隆片段BNll09与已知冠状病毒在核苷酸和氨基酸水平进行分析显示，该片段与牛冠病毒(bovinecoronavirus，BCV)和鼠肝炎病毒(murine hepatitis virus，MHV)同源性最高，在氨基酸水平上同源性高达75％。结论 SARS冠状病毒多聚酶基因片段BNll09的保守性极强，适合建立RT-PCR法检测SARS冠状病毒。     

反转录巢式PCR方法检测SARS冠状病毒

目的探索SARS冠状病毒早期诊断的有效手段.方法对临床病例样品采用反转录巢式PCR方法鉴定SARS冠状病毒.提取样品RNA,用巢式PCR外侧下游引物进行反转录,以反转录产物为模板,进行巢式第1次、第2次PCR.PCR产物克隆到pMD18-T载体后进行测序鉴定.结果被检样品扩增出特异片段,经测序验证确实来自SARS相关冠状病毒.Blast比较结果与SARS冠状病毒多伦多株相应片段只有一个碱基的差异.结论反转录巢式PCR方法验证在非典型肺炎患者标本中存在SARS相关冠状病毒的序列,证实该法不失为一种检测SARS冠状病毒的快速、简便、易行的方法.     

反转录巢式PCR方法检测SARS冠状病毒

目的探索SARS冠状病毒早期诊断的有效手段。方法对临床病例样品采用反转录巢式PCR方法鉴定SARS冠状病毒。提取样品RNA,用巢式PCR外侧下游引物进行反转录,以反转录产物为模板,进行巢式第一次、第二次PCR。PCR产物克隆到pMD18-T载体后进行测序鉴定。结果被检样品扩增出特异片段,经测序验证确实来自SARS相关冠状病毒。Blast比较结果与SARS冠状病毒多伦多株相应片段只有一个碱基的差异。结论反转录巢式PCR方法验证在非典型肺炎患者标本中存在SARS相关冠状病毒的序列,证实该法不失为一种检测SARS冠状病毒的快速、简便、易行的方法。     

针对SARS患者的特异性抗体检测结果不容乐观

为了探讨SARS患者体内抗SARS冠状病毒抗体的产生和变化规律，北京佑安医院采用经国家食品药品监督管理局（SDA）审批的，由中国医学科学院，军事医学科学院和北京华大基因工程有限公司共同开发研制的抗SARS冠状病毒抗体检测试剂盒（ELISA试剂盒），对75例住院SARS患者的390份血清标本进行了IgM抗体和IgG抗体的检测。     

反转录巢式PCR方法检测SARS冠状病毒

目的 探索SARS冠状病毒早期诊断的有效手段。方法 对临床病例样品采用反转录巢式PCR方法鉴定SARS冠状病毒。提取样品RNA，用巢式PCR外侧下游引物进行反转录，以反转录产物为模板，进行巢式第一次、第二次PCR。PCR产物克隆到pMDl8-T载体后进行测序鉴定。结果 被检样品扩增出特异片段，经测序验证确实来自SARS相关冠状病毒。Blast比较结果与SARS冠状病毒多伦多株相应片段只有一个碱基的差异。结论 反转录巢式PCR方法验证在非典型肺炎患者标本中存在SARS相关冠状病毒的序列，证实该法不失为一种检测SARS冠状病毒的快速、简便、易行的方法。     

呼吸道鼻病毒、SARS病毒的Teflo滤膜采集及RT-PCR检测的初步研究

目的：建立Teflo滤膜采集检测呼吸道鼻病毒及SAILS病毒颗粒的技术模型，初步检测分析我院重点病区环境(病房内)空气的SAILS病毒是否存在及分布情况。方法：利用Teflo滤膜过滤式采集病房空气中的鼻病毒及SAILS病毒，然后采用逆转录PCR方法，从滤膜分离标本中进行病毒特异性基因的扩增(鼻病毒5’端非编码区；SARS病毒聚合酶基因)。结果：准确检测到重症哮喘患者房间内的鼻病毒；我院重点病区环境包括病房内空气中未检测到SAILS病毒的存在。结论：Teflo滤膜／RT-PCR方法用于医院病区空气中SAILS病毒及其他呼吸道病毒颗粒的监测可行性强，我院重点病区无SARS病毒分布。     

SARS病毒基因和特异性抗体检测效果评估

目的 :评估严重急性呼吸综合征 (SARS)病毒基因检测和特异性抗体检测效果。方法 :采用巢式反转录PCR检测健康人、普通发热患者、不同时期 SARS患者痰标本中的 SARS病毒核酸即 RNA;采用酶联免疫吸附试验(EL ISA)法检测上述几组血清标本中的特异性抗体 Ig G和 Ig M。结果 :SARS患者住院 6 d～ 5 7d期间 ,采用巢式 RT-PCR检测痰 SARS病毒基因 ,5 6例患者中 34例阳性 ,阳性率 6 0 .7% ;而采用间接 EL ISA检测血清抗 SARS病毒抗体 ,5 6例患者中 32例阳性 ,阳性率为 5 7.1%。两种方法均阳性的有 15例 ,均阴性的有 6例。2种病原学诊断方法检测2 0例正常人和 15例发热非 SARS患者 ,结果均为阴性。住院 6 d～ 13d组 (92 .3% )巢式 RT- PCR基因阳性率明显高于 EL ISA特异性抗体阳性率 (7.7% ) ;住院 >35 d组巢式 RT- PCR基因阳性率 (36 .8% )则明显低于 EL ISA特异性抗体阳性率 (94 .7% ) (P<0 .0 1)。结论 :痰中 SARS病毒基因检测可用于 SARS的早期诊断 ,这对于提前确诊和治疗SARS患者 ,以及尽早排除疑似病例具有非常关键和现实的意义。血清特异性抗体检测可用于流行病学调查 ,但对SARS早期诊断和鉴别没有意义。     

发热门急诊病例分析（附2例SARS患者病情分析）

目的 探讨发热门急诊工作中发热病因素，为在实际工作中能尽早的对发热患者做出正确的诊断提供帮助，同时探讨SARS患者的发病过程，为实际工作中SARS的诊断提供帮助。方法 分析2003年4-6月间瑞金医院发热门急诊患者的临床资料。结果 就诊人员中性别、年龄之间无显著差别。发病年龄以21-60岁之间为最多。发热患者首次发病伴有以呼吸道为主要症状148例占65．8％。肺炎患者97例，占43．1％。SARS患者2例。结论 年轻患者多可能与他们工作压力大，社会交往多有关。要加强做好对呼吸道疾病的防范工作。对有明显SARS接触史的患者，一定要高度警惕，密切观察，不要轻易放过。在SARS诊断中，病情的动态观察十分重要，特别是对病情在短时间内变化进展快的患者。     

SARS病毒基因和特异性抗体检测效果评估

目的:评估严重急性呼吸综合征(SARS)病毒基因检测和特异性抗体检测效果.方法:采用巢式反转录PCR检测健康人、普通发热患者、不同时期SARS患者痰标本中的SARS病毒核酸即RNA;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测上述几组血清标本中的特异性抗体IgG和IgM.结果:SARS患者住院6 d～57 d期间,采用巢式RT-PCR检测痰SARS病毒基因,56例患者中34例阳性,阳性率60.7 %;而采用间接ELISA检测血清抗SARS病毒抗体,56例患者中32例阳性,阳性率为57.1 %.两种方法均阳性的有15例,均阴性的有6例.2种病原学诊断方法检测20例正常人和15例发热非SARS患者,结果均为阴性.住院6 d～13 d组(92.3 %)巢式RT-PCR基因阳性率明显高于ELISA特异性抗体阳性率(7.7 %);住院>35 d组巢式RT-PCR基因阳性率(36.8 %)则明显低于ELISA特异性抗体阳性率(94.7 %)(P<0.01).结论:痰中SARS病毒基因检测可用于SARS的早期诊断,这对于提前确诊和治疗SARS患者,以及尽早排除疑似病例具有非常关键和现实的意义.血清特异性抗体检测可用于流行病学调查,但对SARS早期诊断和鉴别没有意义.     

RT-PCR结合GeneScan检测SARS病毒的高灵敏度技术的建立及应用

目的建立高度敏感的检测SARS病毒(SARS—CoV)RNA的技术，提高SARS病毒检出率。方法用RT—PCR技术扩增SARS—CoV 138bp片段并荧光标记后，用ABI-310毛细管电泳仪和GeneScan软件对扩增产物进行分析，并以峰高的方式给出产物的相对产量，参考空白对照和阴性对照的峰高定出本批实验检测基线。高于基线为SARS病毒阳性。结果检测了来自20例SARS患的67份标本，与常规的琼脂糖凝胶电泳法的结果(23／67)相比，GeneScan法(38／67)检测SARS—CoV的灵敏度提高22．4％。全部20例患的1-5种标本中都有1种、2种甚至3种、4种检出为阳性。病程1-22天的患均能检出阳性。结论ABI-310仪检测SARS—CoV的灵敏度较高，有助于早期诊断。     

SARS实验室检测方法

目前 ,一些国家的研究者正在努力寻找快速而精确的SARS实验室检测方法。然而 ,直到这些检测方法有足够的实际试验结果且被证明可靠之前 ,SARS的诊断仍然依赖于患者的临床表现、曾有暴露于可疑SARS病例环境的历史或者对其呼吸道分泌物和其他体液的实验室检查。　　一、检测结果的临床意义　　结果为阳性 :近期已被SARS病毒感染。目前尚需建立其他特异性实验室检查。结果为阴性 :病毒实验室检测为阴性包括以下几点原因 :1、病人并未感染SARS病毒 ;2、疾病是由其他病原体引起的(包括病毒、细菌及真菌等 )或为非感染性诱因 ;3、检测结果…     

SARS病原学和特异性检测的研究进展

经研究分析SARS的病原体为变异的冠状病毒-SARS冠状病毒(SARS Coronavrirus，SARS-CoV)。这是一种全新的病毒，为一种单链正义RNA病毒；其基因组由约29727个核苷酸、11个开放阅读框(Opening Reading Frames，ORFs)组成，与已知冠状病毒核苷酸有50％～60％同源性。但通过比较遗传史和序列比对表明，SARS-CoV的特征和以前发现的冠状病毒的特征并不完全相似，     

采用RT-PCR技术进行SARS冠状病毒基因检测

目的 建立RT—PCR检测SARS冠状病毒基因的方法，用于早期诊断。方法 对临床确诊的20例SARS患的血、鼻拭子、咽拭子、尿、便等69份标本进行总RNA提取，反转录成cDNA后再以本研究室自行设计合成的一对特异引物进行PCR扩增，2％琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物，出现140bp带为SARS病毒阳性。采用测序仪对140bp带进行特异性检测，并进行灵敏度试验。结果 140bp扩增序列与公布的SARS病毒的基因序列完全一致，灵敏度可达10个拷贝。SARS患II份尿标本中6份检出140bp阳性扩增带，8份便标本中检出3份阳性，从15份鼻拭子和15份咽拭子中分别检出6份和5份阳性标本，血清15份、白细胞5份分别检出2份阳性。20例SARS患中送检1至4种标本检测到SARS病毒阳性共15例(75％)。结论 本研究建立的RT—PCR方法灵敏、特异，可用于早期诊断。尿、便标本中的SARS病毒检出率较高且取材简便、病人无痛，是取材的极好选择。每例待测患最好同时取其尿、便、拭子、血等多种标本，可以提高SARS病毒检出率。     

SARS患者住院时特种蛋白检测的临床意义

1　对象和方法1.1　对象 30例已确诊的非典型肺炎患者中男 15例 ,女15例 ,年龄 19～ 5 1岁 ,平均年龄 (36 .4± 10 .1)岁。1.2　正常对照组 30例体检的正常人中男 15例 ,女 15例 ,年龄 2 1～ 5 1岁 ,平均年龄 (33.8± 9.2 )岁。1.3　血清标本SARS患者和正常人 ,按常规留取血标本 ,2h内分离血清 ,- 2 0℃冻存 ,1～ 3d内完成相关测试。SARS住院后第 1天留血标本。1.4检测方法速率散射免疫比浊法 ,由德灵公司的BN Ⅱ特种免疫蛋白分析仪检测血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM ,补体C3、C4及CRP。1.5统计学方法检测数据用均数±标准差 (x±s)…