槲皮素对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其动力学分析

目的 观察槲皮素对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制。方法 利用基因工程克隆，表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和β亚基，在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组CK2全酶，在不同条件下测定CK2的活性，CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-^32P]ATP的[^32P]放射活度来检测。结果 重组人蛋白激酶CK2是一种Ca^2 ,cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶，与天然CK2的性质一致，槲皮素对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用，IC50为522nmol/L，抑制作用大于CK2已知抑制剂DRB和A3，槲皮素对重组人蛋白激酶CK2的动力学研究表明；它与ATP和酪蛋白分别呈竞争性和非竞争性抑制作用。结论 槲皮素是CK2有效抑制剂，该抑制作用可能是槲皮素抗肿瘤作用又一分子机制。为今后筛选更有效的CK2抑制剂提供了一种较为简便的筛选方法。     

3,6-二羟黄酮对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其动力学分析

 目的观察3,6二羟黄酮对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制,寻找CK2的抑制剂。方法以重组人CK2全酶为分子靶点,检测不同浓度3,6二羟黄酮对CK2活性的影响,并通过酶的动力学分析其抑制作用机制。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ³²P]ATP的[³²P]放射活度来检测。结果重组人CK2与天然CK2的性质完全一致。3,6二羟黄酮对重组人CK2全酶具有较强的抑制作用,IC₅₀为1393μmol·L^-1;进一步分析,它与ATP呈竞争性抑制CK2的活性,抑制常数K_i值为10.67μmol·L^-1;与酪蛋白呈以非竞争性为主的混合性抑制CK2的活性,抑制常数K_i值为17.34μmol·L^-1。结论3,6二羟黄酮是一种重组人蛋白激酶CK2的抑制剂。重组人CK2可作为一种较为简便地筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点。     

《中国药学杂志》2002年第37卷关键词索引

ＡＡＧ372　～对重组人蛋白激酶ＣＫ2全酶的抑制动力学研究　 7- 54 0阿苯达唑　～固体分散物制备及体外溶出特性研究　 4 - 2 83阿氟嘧啶　ＨＰＬＣ测定～霜中阿昔洛韦和氟尿嘧啶的含量　 11- 873阿克他利　～治疗类风湿关节炎随机对照研究　 12 - 951阿仑膦酸钠　不同剂量～对卵巢切除大鼠骨丢失和骨质量的影响4 - 2 72　～不同时间预防去势后家兔骨质疏松作用的实验研究　 6 -42 7阿霉素　联合用药对～兔体内药动学的影响　 6 - 44 1阿莫西林　液中干燥法制备～微囊的研究　 5- 352　～胃滞留缓释片人体内药动学研究　 5- 36 0阿托伐他汀…     

蛋白激酶CK2黄酮类抑制剂的研究进展

 目的　阐述蛋白激酶CK2的黄酮类抑制剂的研究进展。方法　结合文献和作者的工作,简述CK2与肿瘤及病毒感染性疾病的关系;CK2抑制剂的分类;CK2的底物专一性与抑制剂结构、功能的关系;CK2黄酮类抑制剂的理化性质,结构特点,抑制效果,抑制作用的特异性、机制及类型。结果与结论　根据抑制剂的结构特点及其作用规律,借助计算机辅助设计并利用化学方法在某些基本化合物的基础上进行改造,有望获得更有效乃至选择性更强的CK2抑制剂。     

槲皮素-7,4′-二硫酸酯二钠对重组人肌醇磷脂3-激酶p110催化亚基活性的影响

目的观察槲皮素-7,4′-二硫酸酯二钠(SQDS)对重组人肌醇磷脂3-激酶(PI3-K)p110β催化亚基的直接作用。方法通过基因工程技术的方法获得PI3-Kp110β催化亚基,用PtdIns(4,5)P2和[γ-32P]ATP与重组PI3-Kp110β催化亚基一起保温的方法测定PI3-K的活性;32P标记的磷脂用氯仿和甲醇抽提,加闪烁液于液闪计数仪计数。结果SQDS对重组人PI3-Kp110β催化亚基有抑制作用,IC50为14.88μmol/L。结论SQDS是PI3-K的抑制剂。重组人PI3-Kp110β催化亚基可作为一种较为简便地筛选和开发有效的PI3-K抑制剂的分子靶点。     

槲皮素-7,4''''-二硫酸酯二钠对重组人肌醇磷脂3-激酶p110β催化亚基活性的影响

目的观察槲皮素-7,4'-二硫酸酯二钠(SQDS)对重组人肌醇磷脂3-激酶(PI3-K)p110β催化亚基的直接作用.方法通过基因工程技术的方法获得PI3-K p110β催化亚基,用PtdIns(4,5)P2和[γ-32P]ATP与重组PI3-K p110β催化亚基一起保温的方法测定PI3-K的活性;32P标记的磷脂用氯仿和甲醇抽提,加闪烁液于液闪计数仪计数.结果SQDS对重组人PI3-K p110β催化亚基有抑制作用,IC50为14.88 μmol/L.结论SQDS是PI3-K的抑制剂.重组人PI3-K p110β催化亚基可作为一种较为简便地筛选和开发有效的PI3-K抑制剂的分子靶点.     

槲皮素-7，4′-二硫酸酯二钠对重组人肌醇磷脂3-激酶p110β催化亚基活性的影响

目的观察槲皮素-7，4′-二硫酸酯二钠(SQDS)对重组人肌醇磷脂3-激酶(PI3-K)p110β催化亚基的直接作用。方法通过基因工程技术的方法获得P13-K p110β催化亚基，用PtdIns(4，5)P2和[γ-^32P]ATP与重组PI3-K p110γ催化亚基一起保温的方法测定PI3-K的活性；^32P标记的磷脂用氯仿和甲醇抽提，加闪烁液于液闪计数仪计数。结果SQDS对重组人P13-K p110β催化亚基有抑制作用，IC50为14．88μmol／L。结论SQDS是PI3-K的抑制剂。重组人PI3-K p110β催化亚基可作为一种较为简便地筛选和开发有效的PI3-K抑制剂的分子靶点。     

柚皮素和橙皮素对重组人肌醇磷脂3-激酶p110β催化亚基的影响

目的:研究柚皮素和橙皮素对重组人肌醇磷脂3-激酶(PI3-K)p110β催化亚基酶活性的影响。方法:通过基因工程技术的方法获得PI3-Kp110β催化亚基。用PtdIns(4,5)P2,[γ-32P]ATP与重组PI3-Kp110β催化亚基一起保温的方法测定PI3-K的活性;32P标记的磷脂用氯仿和甲醇抽提,加闪烁液于液闪计数仪计数。结果:柚皮素对重组人PI3-Kp110β催化亚基有抑制作用,IC50为10.57μmol/L;但橙皮素对重组人PI3-K没有抑制作用。结论:柚皮素是PI3-K的抑制剂。重组人PI3-Kp110β催化亚基可作为一种较为简便地筛选和开发有效的PI3-K抑制剂的分子靶点。     

20种中草药醇提液与水提液清除自由基活性的比较

[目的]测定20种中草药的清除自由基活性,从而筛选出具有较强清除自由基活性的中草药。[方法]分别以乙醇和水作为提取剂,超声提取,采用1,1-二苯基-2-苦肼基自由基(DPPH)法测定各提取液清除自由基作用的强弱。[结果]金银花、山楂、大黄、菊花的水提取液具有很强的清除自由基活性;金银花、黄芩、菊花、大黄、荷叶、麻黄的醇提液具有很强的清除自由基活性。[结论]中草药醇提液与水提液有较强的清除自由基活性的能力。     

黄芪活性成分QST、QT对CHOml细胞M1受体及其偶联G-蛋白结合活性的影响

目的 :观察黄芪活性成分QST、QT对CHOml细胞M1受体及其偶G 蛋白结合活性的影响。方法 :以放射配基结合分析法检测CHOml细胞M1受体的结合特性 ,用 [3 5S]GTPγS结合活性检测M1受体偶联的G 蛋白的结合活性 ,并计算偶联效率。结果 :QST对M1受体密度、[3 5S]GTPγS结合活性、偶联效率有上调作用 (P <0 0 1) ,而QT无作用 (P >0 0 5)。结论 :QST对M1受体的偶联功能有上调作用     

白藜芦醇对MGC803细胞凋亡因子Bad,p-Bad,Caspase-3的影响

目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对人胃癌细胞MGC803细胞凋亡因子及其磷酸化的影响,研究白藜芦醇抗胃癌的作用机制。方法:采用0,50,100,200μmol·L~(-1)Res处理MGC803细胞后,采用台盼蓝法测定MGC803细胞生长抑制率;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;免疫组化法检测促凋亡蛋白(Bad),含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)蛋白表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测Bad,磷酸化Bcl-x1/Bcl-2相关死亡启动子(p-Bad),Caspase-3蛋白的表达。结果:随着浓度增加Res抑制胃癌MGC803细胞生长作用明显增强(P0.01);Res(100μmol·L~(-1))能明显下调MGC803细胞中Bad,p-Bad蛋白表达,同时可上调Caspase-3蛋白表达。结论:Res可以诱导MGC803细胞凋亡,其凋亡与浓度、时间有一定的依赖性;Res诱导MGC803细胞凋亡可能与其下调Bad,p-Bad蛋白和上调Caspase-3蛋白表达有关。     

2种仙人掌多糖对S180小鼠红细胞膜蛋白和膜脂流动性影响的研究

目的 :研究 2种仙人掌多糖对S180小鼠红细胞膜带 3蛋白含量、交联蛋白含量、膜脂流动性的影响。方法 :应用SDS 聚丙烯酰胺电泳实验分析膜蛋白含量 ,按Skinitzky法测定膜脂流动性。结果 :2种仙人掌多糖可增加荷瘤小鼠红细胞膜带 3蛋白的含量 ,降低膜交联蛋白含量 ,提高膜脂流动性。其中 ,药用仙人掌多糖的中剂量组效果显著 (P<001) ,食用仙人掌多糖的高剂量组效果显著 (P<001)。结论 :两种仙人掌多糖通过改善荷瘤小鼠红细胞膜功能 ,增强了小鼠的免疫功能 ,可能是仙人掌多糖抗肿瘤作用的机制之一。     

禾肾丸对阿霉素肾病大鼠蛋白尿及肾组织nephrin蛋白表达影响

目的:研究禾肾丸对阿霉素肾病大鼠蛋白尿及肾组织足细胞裂孔膜蛋白nephrin表达的影响,为其治疗肾病蛋白尿提供实验依据。方法:SPF级雄性Wistar大鼠随机分为模型组,禾肾丸组(1.8 g·kg~(-1)),贝那普利组(1 mg·kg~(-1))及空白组。采用一次性尾静脉注射阿霉素6 mg·kg~(-1)复制阿霉素肾病大鼠模型。造模成功后,禾肾丸组及贝那普利组分别给予相应药液,模型组及空白组给予等体积蒸馏水,1次/d,连续28 d。给药结束后,收集24 h尿液,检测尿蛋白,腹主动脉采血,检测血中白蛋白(albumin,Alb),血肌酐(serum creatine,SCr),血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)。苏木素-伊红(HE)检查肾脏组织形态变化,透射电镜观察肾小球足细胞足突及基底膜改变,免疫组化及蛋白免疫印迹(Western blot)法检测肾组织nephrin表达。结果:经禾肾丸治疗后,24 h蛋白尿较模型组显著下降(P0.01),血清SCr,BUN显著降低(P0.01),Alb显著升高(P0.01)。组织病理学检查显示,禾肾丸组肾小球上皮细胞肿胀明显减轻,部分肾小球体积略增大,系膜细胞及系膜基质仅见轻微增生,管腔内未见小管有蛋白管型。超微结构研究显示,禾肾丸组肾小球基底膜光滑均匀,略见增厚,足突清晰完整、偶见融合。免疫组化结果显示,禾肾丸组nephrin蛋白阳性面积率显著高于模型组(P0.01)。Western blot结果显示,nephrin蛋白表达量较模型组显著升高(P0.01)。结论:禾肾丸可能通过上调nephrin表达水平,修复受损足细胞而减少蛋白尿、保护肾脏。     

冬连胶囊对糖尿病大鼠蛋白非酶糖基化的影响

目的 观察冬连胶囊对蛋白非酶糖基化的干预作用.方法 采用小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射,配合高脂饮食制备糖尿病大鼠模型,给药12周后观察冬连胶囊对大鼠血糖、糖化血清蛋白(GSP)、醛糖还原酶(AR)的影响.结果 较空白对照组,模型组血糖明显升高:冬连胶囊高剂量组和西药对照组大鼠血糖有下降趋势,较模型对照组有显著性差异(P＜0.05);冬连胶囊高、低剂量组和西药对照组均能降低大鼠GSP含量、抑制AR活性,较模型对照组有显著性差异(P＜0.01).结论 冬连胶囊对蛋白非酶糖基化反应有抑制作用.     

脂联素与肾脏疾病的研究进展

脂联素（Adiponectin）是近年来发现的一种由脂肪细胞特异性分泌的蛋白质。研究发现脂联素与肥胖、胰岛素抵抗、2型糖尿病、动脉粥样硬化等有一定相关性，且在这些疾病的发生发展中起着重要的作用。脂联素与肾脏疾病的关系,也很密切，不仅在肾脏疾病的发生发展中起着独特的作用，而且在各种肾脏病中亦有变化。     

两亲磁性高分子微球与人血清白蛋白的相互作用

 目的将制备的聚苯乙烯/聚氧乙烯两亲磁性高分子微球用于与人血清白蛋白(HSA)的相互吸附作用研究。方法利用磁性微球在磁场作用下易于分离的特性和两亲微球在有机相和水相都易于分散的特点,考察吸附时间、pH值、温度等因素对两亲磁性高分子微球和HSA相互作用的影响。结果随着pH的升高,微球对HSA的吸附量下降;延长时间有利于HSA的吸附,两亲磁性微球对HSA的吸附不具有温敏性。结论两亲磁性高分子微球可作为分离人血清白蛋白的有效手段。     

两种真菌多糖对HL-60细胞酪氨酸蛋白磷酸化作用的影响

 目的：研究猪苓多糖和茯苓多糖对人早幼粒白血病细胞(HL-60)酪氨酸蛋白磷酸化作用的影响。方法：用一定浓度的药物处理体外培养的HL60细胞。用放射免疫法测定经过培养12,24,48,72和120 h对照组和药物处理组细胞浆和膜部分的酪氨酸蛋白激酶(TPK)和磷酸酪氨酸蛋白磷酸酶(PTPP)的活力,比较酶活力变化情况。结果：两种多糖对胞浆和膜部分TPK活力均有不同程度的抑制作用。而对两部分PTPP的活力均有不同程度的激活作用。结论：两种真菌多糖均可使HL-60细胞酪氨酸蛋白磷酸化水平下降,提示两种多糖杭肿瘤作用的机制可能与酪氨酸蛋白磷酸化作用有关。     

辛伐他汀调节p38和CARP与改善心肌重塑的关系

 目的探讨p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38MAPK,p38)和心锚重复蛋白(cardiac ankyrin repeat protein,CARP)与心肌梗死后心肌重塑的关系,及辛伐他汀改善心肌梗死后心肌重塑的机制。方法结扎大鼠冠脉前降支致心肌梗死,术后24h存活大鼠随机分为心肌梗死组(MI组)、p38抑制剂SB203580组(SB组)、辛伐他汀组(Sim组)和假手术组(sham组)。7d后测定左心室重量指数(LVWI),心肌细胞横切面面积(CSA),RT-PCR和免疫组化法测定p38和CARP在非梗死区心肌中的表达。结果与Sham组相比,MI组LVWI和CSA明显增加(P<0.01),磷酸化p38(P-p38)和CARP表达明显增加(P<0.05)。与MI组相比,SB组和Sim组LVWI和CSA明显降低(P<0.01),SB组CARP表达低于MI组(P<0.01),Sim组p38和CARP表达明显低于MI组(P<0.01)。结论大鼠心肌梗死后p38和CARP表达增加;抑制p38可抑制CARP的表达,CARP可能部分受p38信号通路调节;辛伐他汀改善心肌梗死后心肌重塑的作用可能与抑制p38和CARP有关。     

生黄合剂对缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡相关基因Bax,Bcl-2和Caspase-3蛋白表达的影响

目的:观察生黄合剂对缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B型白细胞/2型淋巴细胞样蛋白( Bcl-2)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)蛋白表达的影响.方法:将48只SD大鼠随机分为6组,即对照组、模型组、阳性药物组、生黄含剂低、中、高剂量组(17.5,35,70 mg·kg-1分别加入5 mL·kg-生脉饮),每组8只,分别给药7d后,建立心肌缺血再灌注损伤(MIRI)模型.采用原位末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡情况,蛋白印迹法检测心肌细胞凋亡相关基因Bax,Bcl-2,Caspase-3蛋白的表达.结果:与模型组比较,生黄合剂能减少心肌细胞凋亡指数(AI)及Bax,Caspase-3蛋白的表达,增加Bcl-2蛋白的表达,提高Bcl-2/Bax的比值( P＜0.05),其中以生黄合剂高剂量组作用较为明显.结论:生黄合剂对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,其抗心肌细胞凋亡的机制可能与通过上调Bcl-2,下调Bax和Caspase-3基因表达,提高Bcl-2/Bax的比值有关.     

清开灵注射液中杂蛋白的检测方法研究

目的:建立清开灵注射液中大分子杂蛋白的检测方法。方法:以三氯乙酸沉淀结合双缩脲法初步测定清开灵注射液中杂蛋白的浓度,再用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测杂蛋白的分子量。结果:清开灵注射液成品中杂蛋白的分子量在3～7 KD之间。结论:本方法可用于检测清开灵注射液中的大分子杂蛋白。