槲皮素对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其动力学分析

目的 观察槲皮素对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制。方法 利用基因工程克隆，表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和β亚基，在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组CK2全酶，在不同条件下测定CK2的活性，CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-^32P]ATP的[^32P]放射活度来检测。结果 重组人蛋白激酶CK2是一种Ca^2 ,cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶，与天然CK2的性质一致，槲皮素对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用，IC50为522nmol/L，抑制作用大于CK2已知抑制剂DRB和A3，槲皮素对重组人蛋白激酶CK2的动力学研究表明；它与ATP和酪蛋白分别呈竞争性和非竞争性抑制作用。结论 槲皮素是CK2有效抑制剂，该抑制作用可能是槲皮素抗肿瘤作用又一分子机制。为今后筛选更有效的CK2抑制剂提供了一种较为简便的筛选方法。     

3,6-二羟黄酮对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其动力学分析

 目的观察3,6二羟黄酮对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制,寻找CK2的抑制剂。方法以重组人CK2全酶为分子靶点,检测不同浓度3,6二羟黄酮对CK2活性的影响,并通过酶的动力学分析其抑制作用机制。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ³²P]ATP的[³²P]放射活度来检测。结果重组人CK2与天然CK2的性质完全一致。3,6二羟黄酮对重组人CK2全酶具有较强的抑制作用,IC₅₀为1393μmol·L^-1;进一步分析,它与ATP呈竞争性抑制CK2的活性,抑制常数K_i值为10.67μmol·L^-1;与酪蛋白呈以非竞争性为主的混合性抑制CK2的活性,抑制常数K_i值为17.34μmol·L^-1。结论3,6二羟黄酮是一种重组人蛋白激酶CK2的抑制剂。重组人CK2可作为一种较为简便地筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点。     

蛋白激酶CK2黄酮类抑制剂的研究进展

 目的　阐述蛋白激酶CK2的黄酮类抑制剂的研究进展。方法　结合文献和作者的工作,简述CK2与肿瘤及病毒感染性疾病的关系;CK2抑制剂的分类;CK2的底物专一性与抑制剂结构、功能的关系;CK2黄酮类抑制剂的理化性质,结构特点,抑制效果,抑制作用的特异性、机制及类型。结果与结论　根据抑制剂的结构特点及其作用规律,借助计算机辅助设计并利用化学方法在某些基本化合物的基础上进行改造,有望获得更有效乃至选择性更强的CK2抑制剂。     

人参皂苷CK诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的研究

目的探讨人参皂苷CK对人肝癌HepG-2细胞凋亡的作用及机制。方法采用MTT法测定不同浓度(30,60,90μmol/L)人参皂苷CK对人肝癌HepG-2细胞的增殖抑制作用;通过HE染色、AO/EB染色观察人参皂苷CK诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的形态学变化;WesternBlotting检测凋亡相关蛋白P53、Bax和Bcl-2的表达情况。结果人参皂苷CK可明显抑制人肝癌HepG-2细胞的增殖,且呈剂量依赖性和时间依赖性。随着人参皂苷CK给药浓度的增加,出现典型凋亡形态特征的细胞逐渐增多,抗凋亡蛋白Bcl-2和P53表达量逐渐下降,而促凋亡蛋白Bax的表达逐渐升高,Bcl-2/Bax比例明显降低。结论人参皂苷CK可诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡,其作用机制可能与下调P53蛋白表达和降低Bcl-2/Bax比例有关。     

重组水蛭素-2脂质体的制备及大鼠鼻腔给药药代动力学

目的：为了提高重组水蛭素-2(rHV2)鼻腔给药的生物利用度,研制rHV2脂质体并对其理化性质和大鼠经鼻给药后药代动力学特点进行研究。方法：以逆相蒸发法制备rHV2脂质体；通过研究rHV2脂质体的包封率、粒径、稳定性来考察其理化性质；将制备的rHV2脂质体鼻腔给予大鼠,用呈色肽法测定不同时间血浆中rHV2的浓度,通过3p87程序拟合药代动力学参数。结果：用该法制备的脂质体包封率约为76.95%,平均粒径为168.3 nm,分布在24～286 nm,相对峰宽±0.47,稳定性较好；药代动力学研究表明,rHV2脂质体较rHV2生理盐水溶液的鼻腔吸收明显增加。结论：将rHV2制备成脂质体可明显增加鼻腔给药的生物利用度。     

人参皂苷CK抑制人结肠癌SW480细胞增殖的机制研究

目的研究人参皂苷CK对人结肠癌SW480细胞增殖及凋亡的影响,并进一步探讨其作用机制。方法采用CCK-8法检测细胞活力;通过流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡、活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位(MMP)变化;Hoechst染色检测细胞凋亡;蛋白免疫印迹法检测细胞色素C(CytC)释放以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和cleaved Caspase-3等的表达。结果人参皂苷CK对SW480细胞的增殖有显著抑制作用。人参皂苷CK诱导SW480细胞周期阻滞于G0/G1期,促进细胞发生早期凋亡。人参皂苷CK可以显著增加细胞内ROS水平,降低MMP水平;人参皂苷CK促进Bax和cleaved Caspase-3的表达,抑制Bcl-2的表达。此外,人参皂苷CK使SW480细胞内CytC大量释放。结论人参皂苷CK对SW480细胞的增殖具有显著的抑制作用,其作用机制可能是通过促进线粒体超氧化物升高,导致胞内ROS水平显著增加和MMP显著下降,进而导致CytC释放,上调Bax的表达,下调Bcl-2的表达,最终导致细胞发生凋亡。     

补肾活血化痰方对阿尔茨海默病模型大鼠海马细胞外调节蛋白激酶1、蛋白激酶2蛋白表达的影响

目的:观察补肾活血化痰方对阿尔茨海默病模型大鼠海马细胞外调节蛋白激酶1、蛋白激酶2蛋白表达的影响。方法:建立阿尔茨海默病大鼠模型,造模后第3 d开始用药,补肾活血化痰方配置成1.5g·m L-1的浓度,按12 mg·(kg·d)-1的剂量灌胃给药,盐酸多奈哌齐按0.52mg·(kg·d)-1的剂量灌胃,模型组及假手术组灌胃液为等体积的生理盐水,均每日两次,每天分上午8点和下午4点两次灌胃,共4周,用免疫组化方法观察AD大鼠海马神经元中细胞外调节蛋白激酶的表达变化。结果:模型组大鼠海马CA1区细胞外调节蛋白激酶1、蛋白激酶2阳性细胞的平均光密度明显少于假手术组,且大多细胞的胞浆染色较淡,差异具有显著性(P0.01);而盐酸多奈哌齐组和补肾活血化痰方组平均光密度较模型组显著增加,可见较多胞浆呈稍浅棕黄色颗粒状的阳性细胞,差异具有显著性(P0.01);但盐酸多奈哌齐组和补肾活血化痰方与假手术组相比,染色要淡,阳性细胞平均光密度明显减少,具有显性差异(P0.01);盐酸多奈哌齐组和补肾活血化痰组之间比较,差异不显著(P0.05)。结论:补肾活血化痰方治疗阿尔茨海默病有效,作用机制与其减少Aβ沉积,促进神经存活的信号传导途径有关。     

精蛋白重组人胰岛素混合注射液与甘精胰岛素 治疗 2 型糖尿病的效果

〔摘 要〕 目的：分析精蛋白重组人胰岛素混合注射液与甘精胰岛素（GI）治疗 2 型糖尿病（T2DM）的效果以及对胰 岛素抵抗的影响。方法：选取嘉应学院医学院附属医院 2017 年 5 月至 2020 年 5 月收治的 82 例 T2DM 患者资料,根据不 同治疗方法分为对照组与观察组,各 41 例。对照组采取 GI 联合瑞格列奈治疗,观察组采取 GI 联合精蛋白重组人胰岛素 混合注射液治疗,比较两组患者治疗效果、胰岛素抵抗情况等。结果：治疗前两组患者的空腹血糖（FPG）、餐后 2 h 血糖 （2h PG）、糖化血红蛋白（HbAlc）、空腹胰岛素（FINS）比较,差异无统计学意义（P ＞ 0.05）。治疗后两组患者的 FPG、2h PG、HbAlc、FINS 均有不同程度降幅,且观察组患者低于对照组,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）;两组患者 治疗前的胰岛素抵抗指数（HOMA–IR）比较,差异无统计学意义（P ＞ 0.05）;两组患者治疗后的 HOMA–IR 均有不同程 度降低,且观察组的 HOMA–IR 低于对照组,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）;观察组患者不良反应发生率为 4.88 %, 低于对照组的 19.51 %,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）。结论：相较于 GI 联合瑞格列奈,GI 联合精蛋白重组人胰岛素 混合注射液更能稳定 T2DM 患者血糖等代谢水平,改善胰岛素抵抗症状,且安全可靠性更高。     

精蛋白锌重组人胰岛素及格列美脲对新诊断2型糖尿病患者血糖的影响

目的探讨精蛋白锌重组人胰岛素及格列美脲对新诊断2型糖尿病患者血糖的影响。方法将新诊断2型糖尿病患者158例随机分为2组,采用诺和锐30治疗的79例为对照组,采用精蛋白锌重组人胰岛素联合格列美脲治疗的79例为观察组,治疗3个月后患者进行72 h动态血糖监测,比较2组患者的血糖波动情况。结果观察组早餐前、早餐后2 h、午餐前、午餐后2 h、晚餐前、晚餐后2 h、凌晨1点时血糖水平均低于对照组,观察组平均血糖、血糖平均绝对差均小于对照组,但差异均无统计学意义(P均0.05)。观察组血糖标准差、平均血糖波动幅度、血糖波动次数、血糖极差、餐后血糖峰值、餐后血糖波动均值、高血糖曲线下面积、低血糖曲线下面积、血糖达标时间均明显小于对照组(P均0.05),低血糖发生率明显低于对照组(P0.05),血糖达标情况明显好于对照组(P0.05)。结论精蛋白锌重组人胰岛素联合格列美脲是治疗2型糖尿病的有效方法,可明显降低患者的血糖水平,减轻患者的血糖波动状况,安全性较高。     

重组天花粉蛋白的真核表达及其对人宫颈癌 Caski细胞增殖的影响

目的:观察重组天花粉蛋白(recombinant trichosanthin,rTCS)高表达对人宫颈癌Caski细胞增殖的影响.方法:构建真核表达质粒pcDNA3.1(- )/6His-TCS,稳定转染Caski细胞后,RT-PCR,Western-blot筛选rTCS高表达细胞株.以转染空载质粒pcDNA3.1(一)细胞株作为对照组,MTT法检测2组细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期变化.结果:成功获得高表达rTCS的Caski细胞株,rTCS高表达能够显著抑制Caski细胞增殖(P＜0.01),并能将细胞抑制在G1和G2期(P＜0.05).结论:rTCS在细胞内高表达具有抗人宫颈癌细胞生长的作用,该研究为宫颈癌治疗提供了新的思路.     

莱菔硫烷联合茶多酚对蛋白激酶A锚定蛋白95、细胞周期蛋白E2在肺癌组织中表达的影响研究

目的：探讨莱菔硫烷联合茶多酚对肺癌组织中蛋白激酶A锚定蛋白95、细胞周期蛋白E2的表达的影响。方法选取经病理证实并手术治疗的肺癌患者56例,随机分为治疗组和对照组。采用ELISA测定组织中蛋白激酶A锚定蛋白95、细胞周期蛋白 E2的浓度,免疫组化法测定组织中蛋白激酶 A 锚定蛋白95、细胞周期蛋白 E2的表达并统计微血管密度（MVD）,Western blotting法检测组织中蛋白激酶A锚定蛋白95、细胞周期蛋白E2蛋白表达情况。结果肺癌患者组织中蛋白激酶A锚定蛋白95、细胞周期蛋白E2的浓度水平高于治疗组（P＜0.05）;肺癌患者癌变组织中蛋白激酶A锚定蛋白95、细胞周期蛋白E2的表达均呈阳性,且对照组织中MVD高于治疗组（P＜0.05）,Western blotting法检测对照组组织中蛋白激酶A锚定蛋白95、细胞周期蛋白E2表达高于治疗组（P＜0.05）。结论蛋白激酶A锚定蛋白95、细胞周期蛋白E2在肺癌患者组织中均存在表达升高,与肿瘤生长呈正相关,莱菔硫烷联合茶多酚用药对两种蛋白起到抑制作用。     

Influence of side chains on phorbol ester binding to protein kinase C

The phorbol esters, natural products derived from plants of the family Euphorbiaceae, are potent tumor promoters and modulators of biological response. Their major site of action is protein kinase C. Three classes of derivatives were examined to better assess the influence of the ester side chains on phorbol ester binding affinity for protein kinase C. A series of phorbol diesters substituted at the 13-OH with biotin separated from the phorbol nucleus by linker arms of variable length were prepared. Although all showed good potency by themselves (half-maximally effective doses of 12–67 nM), addition of avidin greatly inhibited activity, suggesting significant steric constraints on the side chains for retention of activity. At the other extreme, very high concentrations of the unsubstituted parent alcohol phorbol were examined to determine whether phorbol was actually inactive or whether it might simply possess weak binding activity. Inhibition was in fact observed with an apparent K_i of approximately 10 mM. The inhibition was time dependent and not stereospecific, however, suggesting that the inhibition was not due to competitive binding. The third class of compounds examined were phorbol 12- and 13-monoesters. Although approximately 20-fold less potent than the 13-monoesters, the 12-monoesters showed substantial binding activity, in contrast to their reported lack of activity in vivo.     

柚皮素和橙皮素对重组人肌醇磷脂3-激酶p110β催化亚基的影响

目的:研究柚皮素和橙皮素对重组人肌醇磷脂3-激酶(PI3-K)p110β催化亚基酶活性的影响。方法:通过基因工程技术的方法获得PI3-Kp110β催化亚基。用PtdIns(4,5)P2,[γ-32P]ATP与重组PI3-Kp110β催化亚基一起保温的方法测定PI3-K的活性;32P标记的磷脂用氯仿和甲醇抽提,加闪烁液于液闪计数仪计数。结果:柚皮素对重组人PI3-Kp110β催化亚基有抑制作用,IC50为10.57μmol/L;但橙皮素对重组人PI3-K没有抑制作用。结论:柚皮素是PI3-K的抑制剂。重组人PI3-Kp110β催化亚基可作为一种较为简便地筛选和开发有效的PI3-K抑制剂的分子靶点。     

The effects of phorbol esters with different biological activities on protein kinase C

The sapintoxins are a series of naturally occurring fluorescent phorbol esters with a range of selective biological activities (e.g. pro-inflammatory but non-tumour promoting). Their ability to activate protein kinase C (PKC) in vitro has been studied. Both tumour promoting and non-promoting phorbol derivatives activate the enzyme in vitro at low concentrations. 12-deoxyphorbol-13-phenylacetate-20 acetate (DOPPA) acts as a partial agonist in the activation of protein kinase C. Structurally distinct phorbol esters may therefore preferentially activate different forms of protein kinase C. α-sapinine, a biologically inactive compound, binds to protein kinase C without stimulating the enzyme and prevents subsequent activation by phorbol esters such as 12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetate (TPA).     

葛根素对糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶C活性的作用

目的 研究葛根素(Pue)对糖尿病大鼠。肾脏蛋白激酶C(PKC)活性、肾功能及肾脏结构的影响。方法 链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠模型，随机分为糖尿病组、Pue(500、250、125mg／kg)治疗组、维生素E(VitE)组，同时另设正常对照组，给药12周后，测定肾功能及。肾脏指数，ELISA法测定肾脏PKC活性，放免法测定尿蛋白排泄率，并对肾组织进行光镜及电镜观察。结果 糖尿病大鼠尿白蛋白排泄率、肾脏指数(肾脏质量／体重)、肾小球细胞膜PKC活性明显升高，给予Pue治疗12周后，治疗组糖尿病大鼠尿白蛋白排泄率较糖尿病组显著降低，肾脏肥大也有明显改善，肾小球细胞膜PKC：活性显著下降，光镜及电镜下肾脏病理改变较糖尿病组有较大改善。结论 Pue可以纠正糖尿病大鼠早期肾脏高滤过、高灌注，并对糖尿病大鼠肾脏病变有一定的保护作用，其部分机制可能是通过下调。肾脏PKC活性而实现的。     

针刺对实验性视网膜脱离中蛋白激酶C的影响

目的 探讨针刺疗法对实验性视网脱离中蛋白激酶Ｃ（ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓａＣ,ＰＫＣ）活性的影响。方法 ５６只实验性单眼视网膜脱离家免随机分为针刺组与对照组;每组分４个小组,每小组７只家免,每只家兔的对侧眼作为对照眼。在发生视网膜脱离并接受针刺治疗后的１周、２周、３周和４周分别取视网膜脱离部位的视网膜组织和对照眼相应部位的组织匀浆,进行视网膜ＰＫＣ活性检测。结果 视网膜部离后的不同时期内视网膜部     

荷泽颗粒对脾虚大鼠血清胃泌素、D-木糖浓度、磷酸肌酸激酶的影响

目的观察荷泽颗粒对苦寒泻下、劳倦过度及饮食失节等复合因素所致脾虚模型大鼠血清胃泌素(GAS)、D-木糖浓度、磷酸肌酸激酶(CK)的影响。方法将120只Wistar大鼠分成6组,即正常组,模型组,荷泽颗粒低、中、高剂量组,阳性组(四君子汤)。空白组每日予3 m L蒸馏水灌服,余各组予采用苦寒泻下加劳倦过度加饥饱失常建立大鼠脾虚证模型,造模21 d,造模成功后给以相应的药物治疗,分别于造模完成后0、7、14 d留取血标本,测定各组大鼠血清中GAS含量、D-木糖浓度、CK活性。结果与正常组比较,模型组各项指标明显异常(P<0.05);用药后与模型组比较,各治疗组大鼠血清中GAS含量,D-木糖浓度、CK活性不同程度上升(P<0.05或P<0.01),随用药时间的延长,各用药组上述指标逐步恢复正常,中剂量组与阳性组疗效相当(P>0.05)。结论苦寒泻下+劳倦过度+饥饱失常法建立大鼠脾虚模型,成功率高,达89%。荷泽颗粒可有效改善脾虚大鼠血清中GAS含量,D-木糖浓度、CK活性,具健脾作用。     

银耳多糖对小鼠脾脏淋巴细胞蛋白激酶C活性的影响

目的观察银耳多糖(TPS)体外对小鼠脾脏淋巴细胞蛋白激酶C(PKC)活性的影响,探讨TPS对免疫细胞信息传递系统的效应。方法应用反向离子对高效液相色谱法测定小鼠脾脏淋巴细胞PKC活性。结果TPS能促进体外培养的小鼠脾脏淋巴细胞PKC活性。结论TPS的免疫调节作用与淋巴细胞的信号传导系统密切相关。