微小 RNA-216b-5p对骨肉瘤 MG63细胞功能的影响及其与高迁移率族蛋白 B1的靶向关系

目的 探讨微小RNA-216b-5p(miR-216b-5p)对骨肉瘤MG63细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其与高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的靶向关系.方法 将体外培养的MG63细胞分为mimics-NC组、miR-216b-5p mimics组、inhibitor-NC组和miR-216b-5p inhibitor组,采用实时荧光定量PCR检测miR-216b-5p的表达,MTT法、Transwell小室和流式细胞仪分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡能力.采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-216b-5p和HMGB1的靶向关系,蛋白质印迹法(Western blot-ting)检测HMGB1蛋白的表达.结果 与mimics-NC组相比,miR-216b-5p mimics组细胞中miR-216b-5p的表达水平[(5.36±0.54)比(1.00±0.11)]和细胞凋亡率[(20.36±3.15)％比(8.58±1.22)％]明显升高,而细胞增殖活力、侵袭能力和细胞中HMGB1蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05);miR-216b-5p inhibitor组细胞中miR-216b-5p的表达水平[(0.24±0.03)比(0.96±0.08)]和细胞凋亡率[(2.05±0.38)比(9.27±1.16)]较inhibitor-NC组明显降低,而细胞增殖活力、侵袭能力和HMGB1蛋白的表达水平较inhibitor-NC组均明显升高(P<0.05).双荧光素酶报告基因实验证实HMGB1是miR-216b-5p的靶基因.结论 miR-216b-5p可能通过靶向调控HMGB1表达,抑制骨肉瘤MG63细胞增殖、侵袭并诱导细胞凋亡.     

微小 RNA-425-5p靶向调控 PTEN表达促进宫颈癌海拉细胞增殖、侵袭和迁移的实验研究

目的 探讨微小RNA(miR)-425-5p对宫颈癌海拉细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制.方法 2018年10月至2019年10月,利用Lipofectamine TM 2000将miR-425-5p模拟物(mimics)、抑制剂(inhibitor)及其阴性对照转染至海拉细胞中,采用实时荧光定量PCR检测细胞中miR-425-5p的表达情况,MTT法检测细胞增殖活力,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭和迁移,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞中磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)蛋白的表达.采用生物信息学软件预测、双荧光素酶报告基因实验验证miR-425-5p和PTEN的靶向关系.将PTEN过表达质粒pcDNA3.1-PTEN和PTEN干扰序列siRNA-PTEN转染至海拉细胞后,观察PTEN对海拉细胞增殖活力、克隆形成能力、侵袭能力和迁移能力的影响.结果 与各自阴性对照比较,miR-425-5p过表达可促进海拉细胞增殖[(142.25±11.32)％比(100.00±6.67)％]、克隆形成、侵袭[(133.28±9.86)个比(77.46±5.32)个]和迁移[(187.56±15.12)个比(115.35±10.26)个]并下调PTEN蛋白表达,而miR-425-5p低表达则抑制海拉细胞增殖[(58.38±3.45)比(100.00±5.74)]、克隆形成、侵袭[(43.32±3.62)个比(75.65±6.15)个]和迁移[(62.28±4.05)个比(109.72±9.84)个]并上调PTEN蛋白表达(P<0.05).双荧光素酶报告基因实验证实,PTEN是miR-425-5p的靶基因;PTEN过表达可促进海拉细胞增殖[(66.52±4.36)％比(100.00±6.18)％]、克隆形成、侵袭[(46.23±3.13)个比(71.65±5.24)个]和迁移[(62.65±4.26)个比(108.42±8.57)个],而PTEN低表达则抑制海拉细胞增殖[(136.52±9.85)个比(100.00±7.05)个]、克隆形成、侵袭[(110.27±9.85)个比(70.52±6.18)个]和迁移[(168.78±16.96)个比(113.26±10.13)个].结论 miR-425-5p可通过靶向调控PTEN表达促进宫颈癌海拉细胞增殖、侵袭和迁移.     

长链非编码前列腺癌相关转录因子 6靶向微小 RNA-139-3p对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)前列腺癌相关转录因子6(PCAT6)对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响和分子机制.方法 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测20例骨肉瘤组织和与其对应的癌旁组织中PCAT6和微小RNA-139-3p(miR-139-3p)的表达水平.双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR验证PCAT6对miR-139-3p的靶向调控关系.将PCAT6小干扰RNA(si-PCAT6)、miR-139-3p模拟物(miR-139-3p mimics)分别转染骨肉瘤细胞SAOS2,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测SAOS2细胞增殖活力,流式细胞术检测SAOS2细胞凋亡,蛋白质印迹法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、细胞周期素D1(Cyclin D1)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和P21、的表达水平.将si-PCAT6和miR-139-3p抑制物(anti-miR-139-3p)共转染至SAOS2细胞,采用上述方法检测细胞增殖、迁移侵袭能力以及凋亡变化.结果 与瘤旁组织相比,骨肉瘤组织中PCAT6的表达水平[(2.76±0.27)比(1.01±0.09)]显著升高,miR-139-3p的表达水平[(0.51±0.05)比(1.00±0.08)]显著降低(P<0.05).miR-139-3p是PCAT6的靶基因,PCAT6靶向负性调控miR-139-3p表达.抑制PCAT6表达或过表达miR-139-3p均可下调SAOS2细胞CyclinD1和Bcl-2蛋白表达,上调p21和Bax蛋白表达,降低细胞活力,促进细胞凋亡(P<0.05).抑制miR-139-3p表达可逆转si-PCAT6对骨肉瘤SAOS2细胞增殖抑制和凋亡的影响(P<0.05).结论 lncRNA PCAT6在骨肉瘤组织中表达上调,抑制miR-139-3p通过靶向miR-139-3p抑制骨肉瘤细胞增殖,诱导骨肉瘤细胞凋亡.     

舒芬太尼通过miR-365-3p/AKT1抑制胃癌细胞迁移、侵袭的研究

摘要：目的:探讨舒芬太尼对微小RNA-365-3p（miR-365-3p）/蛋白激酶B-α（AKT1）表达及其对胃癌细胞迁移、侵袭的影响。方法:采用不同浓度的舒芬太尼(终浓度0.5,5,50,500 nmol·L-1)分别处理胃癌细胞48 h,Transwell实验检测胃癌细胞迁移及侵袭能力,实时定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测胃癌细胞中miR-365-3p的表达。分别将miR-NC（miR-NC组）、miR-365-3p mimics（miR-365-3p组）、anti-miR-NC（anti-miR-NC组）、anti-miR-365-3p（anti-miR-365-3p组）转染至胃癌细胞,检测胃癌细胞迁移及侵袭能力变化。靶基因网站预测miR-365-3p的靶基因,双荧光素酶报告基因验证miR-365-3p与AKT1的靶基因关系。将anti-miR-365-3p、pcDNA-AKT1及其阴性对照分别转染至胃癌细胞12 h后用舒芬太尼处理48 h,分别为舒芬太尼+anti-miR-NC组、舒芬太尼+anti-miR-365-3p组、舒芬太尼+pcDNA3.1组、舒芬太尼+pcDNA-AKT1组,检测各组胃癌细胞迁移及侵袭能力变化,蛋白免疫印迹（Western Blot）检测细胞中钙黏附蛋白E（E-cadherin）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、p-AKT1蛋白表达。结果:舒芬太尼可抑制胃癌细胞迁移、侵袭及MMP-2表达,促进miR-365-3p、E-cadherin表达;miR-365-3p过表达可通过上调E-cadherin表达及下调MMP-2的表达进而抑制胃癌细胞迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验证明AKT1是miR-365-3p的靶基因,miR-365-3p可负性调控靶基因AKT1的表达;抑制miR-365-3p表达或AKT1过表达可逆转舒芬太尼对胃癌细胞迁移、侵袭的抑制作用。结论:舒芬太尼可通过上调miR-365-3p表达而抑制AKT1表达进而抑制胃癌细胞迁移及侵袭。     

微小 RNA-4478下调鼠双微体 -2对结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探讨微小RNA-4478(miR-4478)对结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用并阐明相关机制.方法 实时定量聚合酶链式反应(PCR)检测miR-4478在结肠癌组织中的表达.结肠癌SW1116细胞转染miR-4478 mimics及阴性对照后,分别采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)和小室(Transwell)法检测细胞的增殖、迁移及侵袭.预测miR-4478的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证靶基因.结肠癌SW1116细胞转染miR-4478 mimics或抑制物后,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测细胞靶基因表达.靶基因过表达验证细胞增殖、迁移及侵袭.Western blot法检测细胞周期蛋白D1(Cy-clin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、P21、钙粘附蛋白E(E-cadherin)蛋白表达.结果 相对于癌旁组织,miR-4478在结肠癌组织中的表达显著降低[(0.84±0.07)比(0.26±0.02),t=48.461,P<0.05];转染miR-4478 mimics可显著抑制细胞增殖、迁移及侵袭(P<0.001).miR-4478可负向调控MDM2表达(P<0.001).miR-4478过表达可抑制由MDM2过表达导致的结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭(P<0.001).结论 miR-4478通过抑制MDM2表达而抑制结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭.     

微小 RNA-744-5p靶向整合素连接激酶对膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探讨微小RNA-744-5p(miR-744-5p)对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制.方法 选取2016年2月至2018年11月枣庄矿业集团枣庄医院接收的经病理确诊的56例膀胱癌病人病理组织切片,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测56例膀胱癌组织和对应癌旁组织中miR-744-5p表达水平.分别转染miR-744-5p模拟物(mimics)、miR-744-5p抑制剂或共转染miR-744-5p mimics与整合素连接激酶(ILK)过表达载体至膀胱癌BIU-87、T739细胞,MTT检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹法(Western Blotting)检测过细胞中细胞周期蛋白(Cyclin D1)、P21、基质金属蛋白酶(MMP-2)和钙黏附蛋白E(E-cadherin)蛋白表达.双荧光素酶报告基因实验验证miR-744-5p与ILK调控关系.结果 与癌旁组织相比,膀胱癌组织中miR-744-5p表达水平显著降低[(0.98±0.10)比(0.25±0.02),P<0.05].过表达miR-744-5p后,BIU-87和T739细胞OD值、迁移数和侵袭数及Cyclin D1和MMP-2蛋白表达降低(P<0.05),而P21和E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05).抑制miR-744-5p后,BIU-87和T739细胞OD值、迁移数和侵袭数升高(P<0.05).miR-744-5p靶向结合并负调控ILK,过表达ILK逆转过表达miR-744-5p对BIU-87和T739细胞增殖、迁移和侵袭的影响.结论 膀胱癌组织中miR-744-5p呈低表达,过表达miR-744-5p可阻碍膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭,而抑制miR-744-5p则起相反的作用,其可能通过靶向负调控ILK表达发挥作用.     

微小 RNA-15a-5p靶向蛋白质二硫键异构酶 A6前体蛋白抑制前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的 探讨微小RNA-15a-5p(miR-15a-5p)是否可通过靶向蛋白质二硫键异构酶A6前体蛋白(PDIA6)而抑制前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭.方法 选取2018年2月至2019年3月江南大学附属医院接受治疗的前列腺癌病人50例,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)与蛋白印迹法(Western blotting)分别检测前列腺癌组织、癌旁组织中miR-15a-5p、PDIA6的表达量;体外培养人前列腺癌DU145细胞,将细胞分为miR-NC组、miR-15a-5p组、si-NC组、si-PDIA6组、miR-15a-5p+pcDNA组、miR-15a-5p+pcDNA-PDIA6组;噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验验证miR-15a-5p、PDIA6的靶向关系.结果 与癌旁组织相比,前列腺癌组织中miR-15a-5p的表达水平降低[(1.00±0.17)比(0.68±0.11)],PDIA6 mRNA[(0.99±0.09)比(1.64±0.18)]和蛋白[(0.44±0.07)比(0.76±0.17)]表达水平升高;转染miR-15a-5p mimics或转染si-PDIA6可降低细胞存活率(P<0.05),减少迁移及侵袭细胞数(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-15a-5p可靶向结合PDIA6;PDIA6过表达可降低miR-15a-5p过表达对DU145细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用.结论 过表达miR-15a-5p通过降低PDIA6的表达对列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力有抑制作用.     

微小RNA-143-3p对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响北大核心CSCD

目的研究微小RNA-143-3p(microRNA-143-3p,miR-143-3p)通过调节基质金属蛋白酶2(Matrix metalloproteinase-2,MMP2)对胶质瘤细胞增殖,迁移和侵袭的影响。方法体外培养胶质瘤U87 MG细胞,并随机分为miR-NC组和miR-143-3p mimic组;miR-NC组为转染阴性对照寡核苷酸的U87 MG细胞,miR-143-3p mimic组为转染miR-143-3p模拟物的U87 MG细胞。以细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测胶质瘤U87 MG细胞存活率,以划痕实验检测胶质瘤U87 MG细胞迁移能力,以Transwell实验检测胶质瘤U87 MG细胞侵袭能力,以蛋白质印迹(Western blot)法检测胶质瘤U87 MG细胞中MMP2表达水平。结果48 h时,miR-NC组和miR-143-3p mimic组的细胞增殖率分别为(94.33±7.59)%和(71.43±7.01)%;72 h时,miR-NC组和miR-143-3p mimic组的细胞增殖率分别为(93.45±8.11)%和(68.31±6.51)%;miR-NC组和miR-143-3p mimic组的细胞迁移率分别为(42.03±5.72)%和(21.33±1.98)%;细胞侵袭数目为62.09±8.35和41.46±6.27;MMP2的表达量分别为1.01±0.10和0.68±0.07;以上指标,miR-143-3p mimic组与miR-NC组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-143-3p通过MMP2抑制胶质瘤细胞增殖,迁移和侵袭。     

IRX5促进肝癌细胞的侵袭迁移及其与miR-136-5p靶向关系的验证#br#

摘要：目的 探讨易洛魁族同源盒基因5（IRX5）对肝癌细胞侵袭与迁移的影响,并验证其与miR-136-5p的靶向 关系。方法 取对数生长期肝癌 SMMC7721 细胞,过表达 IRX5 实验设空载质粒（pcDNA3.1）组和过表达 IRX5 （pcDNA3.1-IRX5）组,敲低 IRX5实验设阴性对照（sh-NC）组和敲低 IRX5（sh-IRX5）组。采用 Western blot验证 IRX5 过表达和敲低效率;采用划痕实验和 Transwell 实验检测 IRX5 对肝癌细胞迁移与侵袭的影响;采用 miRanda、 Targetscan生物信息学软件预测 IRX5结合的 miRNA和位点;构建野生型和突变型 IRX5 3'UTR双荧光素酶报告基因 质粒,采用酶切、基因测序方法鉴定重组质粒是否构建成功。取对数生长期 293T 细胞,设野生型质粒+阴性对照 （IRX5-3'UTR-Wt+NC）组和野生型质粒+miR-136-5p（IRX5-3'UTR-Wt+miR-136-5p）组,突变型质粒+阴性对照 （IRX5-3'UTR-Mut+NC）组和突变型质粒+miR-136-5p（IRX5-3'UTR-Mut+miR-136-5p）组,双荧光素酶报告系统检 测各组荧光素酶活性。结果 过表达 IRX5组 IRX5蛋白表达水平、细胞迁移及侵袭数量均高于空载质粒组,敲低 IRX5组IRX5蛋白表达水平、细胞迁移及侵袭数量均低于阴性对照组（均P＜0.05）。成功构建IRX5基因3'UTR野生 型和突变型双荧光素酶报告质粒;双荧光素酶实验结果显示,IRX5-3'UTR-Wt+miR-136-5p组双荧光素酶活性低于 IRX5-3'UTR-Wt+NC 组（P＜0.01）,IRX5-3'UTR-Mut+miR-136-5p 组与 IRX5-3'UTR-Mut+NC 组差异无统计学意 义。结论 IRX5可促进肝癌细胞的侵袭与迁移,IRX5是 miR-136-5p的一个靶基因,miR-136-5p可能通过 IRX5的 3'UTR抑制肝癌细胞的侵袭与迁移。     

miR-98-5p靶向CCR7对乳腺癌细胞MCF-7运动能力的影响及其机制研究

【目的】探究miR-98-5p靶向作用于趋化因子受体(CCR7)对乳腺癌细胞MCF-7运动能力的影响及相关机制。【方法】MCF-7细胞分为Ctrl组、miR-98-5p mimic组、miR-98-5p NC组、pc-CCR7组、miR-98-5p+pc-CCR7组,分别转染相应的miRNA和CCR7过表达载体,RT-PCR检测miR-98-5p和CCR7基因表达水平,荧光素酶报告实验检测miR-98-5p和CCR7靶向关系,Transwell法检测细胞侵袭,划痕法检测细胞迁移,Western blot检测CCR7、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、血管内皮生长因子(VEGF)、E-钙粘着蛋白(E-cadherin)、N-cadherin、波形蛋白(Vimentin)蛋白表达水平。【结果】荧光素酶报告实验中,与CCR7 WT+miR-98-5p NC比较,CCR7 WT+miR-98-5p mimic荧光素酶活性显著降低。与Ctrl组比较,miR-98-5p mimic组中miR-98-5p表达水平、E-cadherin蛋白表达水平显著升高,CCR7基因和蛋白表达水平、细胞侵袭和迁移能力、MMP-2、MMP-9、VEGF、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平显著降低,pc-CCR7组细胞侵袭和迁移能力、CCR7、MMP-2、MMP-9、VEGF、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平显著升高,E-cadherin蛋白表达水平显著降低;与pc-CCR7组比较,miR-98-5p+pc-CCR7组细胞侵袭和迁移能力、CCR7、MMP-2、MMP-9、VEGF、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平显著降低,E-cadherin蛋白表达水平显著升高。【结论】miR-98-5p可靶向作用于CCR7,抑制乳腺癌细胞MCF-7运动能力,其作用机制与上皮细胞间充质转化(EMT)有关。     

庆大维B胶囊中维生素B1、B2、B6和B12的HPLC法测定

建立HPLC法测定庆大维B胶囊中维生素B1、B2、B6和B12的含量。采用C18柱，乙腈-10mmol／L磷酸二氢钾（pH3．2）为流动相，梯度洗脱，检测波长280nm。维生素B1、B2、B6和B12分别在50～150、20-60、20～60和0.5～1．5μg/ml浓度范围内线性关系良好，平均回收率分别为101．9％、98．1％、99．6％和99．4％。     

HPLC法测定复合维生素B片中维生素B1、B2、B6的含量

目的 建立高效液相色谱法测定复合维生素B片中维生素B1、维生素B2、维生素B6的含量.方法 色谱柱:Wondasil C18色谱柱,流动相为醋酸-醋酸钠缓冲液(pH 4.5)-甲醇(65∶35),流速为1.0 mL·min-1,检测波长为270 nm.结果 维生素B1、维生素B2、维生素B6浓度分别在0.6 μg·mL-1～0.75 mg·mL-1、0.3 μg·mL-1～0.62 mg·mL-1、80～415 μg·mL1范围内与峰面积线性关系良好.结论 该方法简便、快速、准确可靠,可用于复合维生素B片中维生素B1、维生素B2、维生素B6的含量测定.     

免疫接种策略与乙型肝炎控制

乙型肝炎病毒感染是中国最严重的公共卫生问题之一,乙型肝炎疫苗接种是控制乙型肝炎病毒感染的最有效方法.此文就乙型肝炎疫苗免疫接种策略对乙型肝炎控制的影响进行综述.     

免疫接种策略与乙型肝炎控制

乙型肝炎病毒感染是中国最严重的公共卫生问题之一,乙型肝炎疫苗接种是控制乙型肝炎病毒感染的最有效方法.此文就乙型肝炎疫苗免疫接种策略对乙型肝炎控制的影响进行综述.     

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