黄芪甲苷对Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞和人软骨细胞共培养体系MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP的调控作用

目的观察黄芪甲苷对Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞和人软骨细胞共培养体系基质金属蛋白酶-7(MMP-7)、Ⅱ型胶原羧基端肽(CTX-Ⅱ)、软骨寡聚基质蛋白(COMP)的调控作用,初步阐释黄芪甲苷治疗骨关节炎的分子作用机制。方法通过β-catenin慢病毒载体转染正常人滑膜细胞,激活其Wnt/β-catenin信号通路。Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞与正常人软骨细胞置于Transwell小室中共培养。倒置显微镜观察Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞对人软骨细胞形态学变化的影响。黄芪甲苷混悬液干预共培养体系,采用Western bolt方法检测黄芪甲苷对滑膜细胞β-catenin蛋白表达的影响;采用ELISA方法检测黄芪甲苷对滑膜细胞、软骨细胞培养上清液MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP表达的影响。结果β-catenin慢病毒载体转染正常人滑膜细胞后成功激活Wnt信号通路并与软骨细胞共培养。随培养时间的延长,软骨细胞生长逐渐受到抑制,软骨细胞胞体边缘与板壁接触处发白,折光度增加,细胞贴壁强度降低。黄芪甲苷干预后,Western blot检测发现滑膜细胞中β-catenin蛋白的表达明显下调(P0.01);ELISA法检测发现滑膜与软骨细胞上清液中MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP表达与正常对照相比明显升高(P0.01)。结论滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路的激活可以使软骨细胞生长受到抑制。黄芪甲苷可以降低滑膜细胞β-catenin表达,且与干预时间长短相关。黄芪甲苷可以抑制滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路,下调MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP的表达。黄芪甲苷可能通过抑制OA滑膜Wnt/β-catenin信号通路,改善滑膜炎症、调控滑膜-软骨共同体系微环境、达到抑制软骨降解,促进软骨细胞功能恢复而治疗骨关节炎。     

新疆紫草中乙酰阿卡宁对人黑色素瘤A375细胞增殖、迁移及侵袭的影响

观察新疆紫草中乙酰阿卡宁对人黑色素瘤A375细胞增殖、迁移和侵袭的影响，同时探讨其可能的作用机制。设空白组以及乙酰阿卡宁低、中、高剂量组(0.5、1.0、2.0μmol·L^-1)分别作用于A375细胞。采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况，细胞划痕及Transwell迁移实验检测细胞迁移能力；Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测迁移侵袭相关N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)以及Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路相关Wnt1、轴蛋白2(Axin2)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、磷酸化糖原合酶激酶3β(p-GSK-3β)、β-catenin、细胞周期蛋白D₁(cyclin D₁)、p21蛋白表达水平；实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、N-cadherin、vimentin、β-catenin、...     

黄芪甲苷对类风湿关节炎肺间质病变大鼠的治疗作用和机制

目的 研究黄芪甲苷对类风湿关节炎肺间质病变(RA-ILD)大鼠的治疗作用并探讨可能机制。方法 Wistar大鼠48只随机分为对照组、模型组、黄芪甲苷高中低剂量组、雷公藤甲苷组;造模后给予相应药物。检测各组大鼠关节炎指数、肿胀程度,观察滑膜及肺组织病理特征,采用实时定量PCR、蛋白杂交印迹分析、免疫共沉淀等技术观察Notch和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达及结合情况。结果 黄芪甲苷(AS-IV)可以改善RA-ILD大鼠滑膜及肺组织的病理变化,可促进E-Cadherin、抑制Snail、ZEB-1 mRNA表达,其作用与剂量呈依赖性;AS-IV还可以显著抑制Notch通路关键蛋白NICD的表达及phos-β-catenin的表达水平;且AS-IV明显抑制了肺组织中β-catenin及NICD分别与Snail及ZEB-1的启动子区结合能力,而提高了β-catenin及NICD与E-Cadherin的启动子区的结合。结论 黄芪甲苷可能通过抑制Notch和Wnt/β-catenin信号通路减轻RA-ILD大鼠肺间质病变。     

黄连素对体外培养肝癌细胞生物学行为的影响

目的研究黄连素对体外培养肝癌HepG2细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响并探讨分子机制。方法不同浓度黄连素体外作用肝癌HepG2细胞后,MTT法检测增殖,流式细胞法检测凋亡,划痕法及Transwell法检测细胞迁移及侵袭,免疫印迹法检测MMP-9及VEGF蛋白表达。结果 12.5～200μmol/L黄连素均可对肝癌HepG2细胞产生明显的抑制增殖和诱导凋亡作用(P0.05,P0.01),浓度越高作用时间越长效果越好;50～200μmol/L黄连素还可抑制HepG2细胞迁移及侵袭并下调MMP-9和VEGF蛋白表达。结论黄连素可通过下调MMP-9以及VEGF蛋白表达对体外培养的肝癌HepG2细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等生物学行为产生影响。     

化痰通瘀解毒方水提取物通过Wnt/β-catenin信号通路抑制人胃癌细胞株MKN-45上皮-间质转化及侵袭迁移

目的:观察化痰通瘀解毒方对人胃癌细胞MKN-45侵袭迁移能力和上皮-间质转化(Epithelial-mesenchymal transformation,EMT)的影响,并探讨其与Wnt/β-catenin信号通路的相关性。方法:以转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1) 10 ng/m L诱导MKN-45细胞构建EMT模型;采用Transwell小室实验和划痕愈合实验检测细胞的侵袭、迁移能力;采用Western Blot法检测EMT标志蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平。结果:TGF-β1能够明显增强MKN-45细胞侵袭、迁移能力,诱导MKN-45细胞发生EMT:E-cadherin蛋白表达下调,N-cadherin、Vimentin和Snail蛋白表达上调;同时,TGF-β1能诱导MKN-45细胞Wnt1和β-catenin蛋白表达上调。化痰通瘀解毒方(10、20、40μg/m L)均可显著抑制TGF-β1诱导的MKN-45细胞侵袭迁移及EMT:E-cadherin蛋白表达上调,N-cadherin、Vimentin和Snail蛋白表达下调;同时,化痰通瘀解毒方(10、20、40μg/m L)还可下调Wnt1和β-catenin蛋白表达,且上述结果中化痰通瘀解毒方在10、20、40μg/m L剂量组间存在剂量依赖性; Wnt/β-catenin信号通路特异性抑制剂XAV939与化痰通瘀解毒方40μg/m L均可明显抑制TGF-β1诱导的MKN-45细胞EMT和侵袭迁移,且XAV939可协同化痰通瘀解毒方40μg/m L抑制TGF-β1诱导的EMT和侵袭迁移。结论:化痰通瘀解毒方能通过Wnt/β-catenin信号通路抑制TGF-β1诱导的EMT,进而降低MKN-45细胞侵袭迁移能力。     

樟芝三萜酸A通过Wnt/β-catenin信号抑制人肝癌细胞HepG_2上皮-间质转化的研究

目的:研究樟芝三萜酸A通过Wnt/β-catenin信号抑制人肝癌细胞HepG_2上皮-间质转化的机制。方法:将常规培养的HepG_2细胞分为空白对照组、Sailnomycin(163 nmol/L,IC_(50))阳性组及樟芝三萜酸A低(10 mg/L)、中(50 mg/L)、高(100 mg/L)浓度组。CCK-8法检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,光镜下观察细胞形态改变,细胞划痕检测各组细胞迁移能力,Transwell法检测各组细胞侵袭能力和趋化运动能力,Western blot法检测各组细胞中β-catenin、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平,Elisa法检测Wnt蛋白的含量。结果:樟芝三萜酸A对于HepG_2有显著的增殖抑制作用,但无明显细胞毒性。樟芝三萜酸A可抑制细胞的迁移和侵袭,降低Wnt/β-catenin信号的表达水平,上调上皮-间质化相关N-cadherin、Vimentin蛋白表达,下调E-cadherin蛋白表达。结论:樟芝三萜酸A能通过抑制Wnt/β-catenin信号来逆转HepG_2细胞的上皮-间质转化,这是樟芝三萜酸A抑制肿瘤转移侵袭的机制之一。     

臭牡丹总黄酮对A549细胞增殖迁移侵袭力及Wnt通路相关蛋白的影响

目的:观察臭牡丹总黄酮对β-catenin过表达A549细胞增殖、迁移、侵袭力以及Wnt通路相关蛋白的影响。方法:选取构建β-catenin真核过表达载体并转染A549细胞,将其分为6组,分别为未转染细胞、未转染细胞+臭牡丹总黄酮、空载组、空载+臭牡丹总黄酮、β-catenin过表达组、β-catenin过表达+臭牡丹总黄酮。MTT法检测各组细胞的相对存活率,划痕实验检测各组细胞迁移能力,Transwell小室侵袭实验检测各组细胞的侵袭力。Western Blot检测各组Wnt通路相关蛋白β-catenin、GSK-3β、P-GSK-3β、c-myc、CyclinD1的表达。结果:转染β-catenin过表达的A549细胞增殖能力、迁移能力、侵袭力均明显增强(P0.05),并显著上调wnt通路相关因子β-catenin、C-Myc,CyclinD的蛋白表达,下调P-GSK-3β的蛋白表达(P0.05)。采用臭牡丹总黄酮干预后,能明显降低各组细胞的存活率,降低细胞向划痕区域迁移的能力,减少侵袭小室穿过基膜的细胞数(P0.05)。并下调β-catenin、C-Myc、CyclinD1表达(P0.05),上调P-GSK-3β表达(P0.05)。臭牡丹总黄酮的干预作用对转染β-catenin过表达细胞尤为明显。结论:转染β-catenin过表达的A549细胞其增殖、迁移、侵袭力均明显增强,能激活Wnt/β-catenin通路。臭牡丹总黄酮可抑制A549细胞的增殖、迁移、侵袭力,其机制可能是通过抑制细胞中β-catenin的高表达从而调控下游的一系列因子而起到抑制Wnt/β-catenin通路的作用。     

紫草素对宫颈癌细胞株Caski侵袭迁移及Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨紫草素对宫颈癌细胞株Caski细胞侵袭迁移及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:采用MTT法检测细胞增殖抑制情况;采用Transwell小室侵袭迁移实验检测Caski细胞侵袭迁移情况;采用qPCR方法检测Caski细胞GSK-3β、Wnt2B表达情况;采用Western bloting方法检测Caski细胞β-Catenin、p-β-Catenin蛋白含量。结果:紫草素可抑制Caski细胞的增殖,具有时间-浓度依赖性,并可抑制细胞的侵袭迁移,增加Caski细胞GSK-3β mRNA和p-β-Catenin蛋白的表达量,减少Caski细胞Wnt mRNA和β-Catenin蛋白的表达量。结论:紫草素可能通过抑制Caski细胞Wnt/β-Catenin信号通路抑制Caski细胞的侵袭迁移。     

石见穿多糖通过Wnt/β-catenin信号通路调控骨肉瘤细胞的迁移和侵袭

目的探讨石见穿多糖通过Wnt/β-catenin信号通路调控骨肉瘤细胞的迁移和侵袭。方法不同浓度石见穿多糖(0、0.25、0.5、1 mg/mL)处理人OS MG63细胞24 h,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,RT-PCR检测人OS细胞β-catenin mRNA表达,Western blot检测人OS MG63细胞Vimentin、E-cadherin蛋白表达。结果石见穿多糖抑制细胞迁移、侵袭(P0.01),降低β-catenin mRNA及Vimentin蛋白表达(P0.05,P0.01),促进E-cadherin蛋白表达(P0.01),且上述作用呈现剂量依赖性。结论石见穿多糖能抑制人OS MG63细胞的迁移和侵袭能力,这种作用可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路,从而阻断EMT过程而引起的。     

毒痰瘀脾虚方含药血清对HepG2肝癌细胞影响的实验研究

目的:研究毒痰瘀脾虚方含药血清对Hep G2肝癌细胞Wnt/β-catenin信号通路中相关基因及细胞侵袭、迁移、凋亡的影响。方法:采用RT-qPCR实验观察毒痰瘀脾虚方含药血清对Hep G2肝癌细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin mRNA、MMP2 mRNA、Cyclin D1 mRNA表达的影响;Transwell细胞侵袭和迁移实验,观察其对Hep G2肝癌细胞侵袭和迁移的影响;AnnexinV-FITC双染流式细胞法检测其对Hep G2肝癌细胞凋亡的影响。结果:RT-qPCR结果显示,与阴性组比较,毒痰瘀脾虚方含药血清能下调HepG2肝癌细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin mRNA、MMP2 mRNA、Cyclin D1 mRNA的表达,差异有统计学意义(P0.01或P0.05);Transwell细胞侵袭实验和迁移实验结果显示,毒痰瘀脾虚方含药血清能抑制Hep G2细胞的侵袭(P0.01),对细胞的迁移无明显影响(P0.05);细胞凋亡实验结果显示,毒痰瘀脾虚方含药血清能促进Hep G2细胞的凋亡,与阴性组比较,差异有统计学意义(P0.01)。结论:毒痰瘀脾虚方含药血清能抑制Hep G2细胞侵袭,促进细胞凋亡,并能抑制Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin mRNA、MMP2 mRNA、Cyclin D1 mRNA表达。     

大黄酚调控Wnt/β-catenin 通路对胶质瘤U87细胞增殖、凋亡、侵袭能力及EMT 的影响

目的：探讨大黄酚调控Wnt/β-catenin 信号通路抑制胶质瘤细胞的作用机制。方法：体外培养人脑 胶质瘤细胞U87,用不同浓度（0、50、100、200 μmol/L） 的大黄酚处理后,采用CCK-8 法检测U87 细胞增 殖能力;划痕法检测细胞迁移能力;Transwell 法检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质 印迹法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2 以及Wnt 通路上皮细胞-间充质转化（EMT） 相关蛋白β-catenin、 E-cadherin、vimentin、MMP-9 蛋白表达。结果：大黄酚能抑制U87 细胞增殖、迁移及侵袭,诱导凋亡（P＜ 0.05）,下调Bcl-2、β-catenin、vimentin 与MMP-9 的表达水平,上调Bax 与E-cadherin 的表达水平（P＜ 0.05）,并呈浓度依赖关系。结论：大黄酚能抑制胶质瘤细胞U87 增殖、迁移及侵袭能力,其机制可能与抑制 Wnt/β-catenin 信号通路有关。     

木犀草素对人结直肠癌干细胞样细胞转移能力的影响及机制

目的 观察木犀草素对人结直肠癌干细胞样细胞(CSCLC)转移能力的影响,并探讨其机制。方法 将结直肠癌LoVo细胞置于含有多种细胞因子的无血清DMEM/F12培养基中培养出肿瘤细胞微球,采用流式细胞术检测LoVo细胞及其来源的CSCLC表面标志物CD44~+和CD133~+表达率。木犀草素作用CSCLC后,采用CCK-8细胞增殖实验、Transwell侵袭实验等检测CSCLC增殖能力和侵袭能力;Western blot检测E-cadherin、Twist、TCF-4、β-catenin和MMP-2蛋白表达量。结果 LoVo细胞在干细胞培养环境中可培养出肿瘤细胞微球,连续传代能形成新的微球;来源于LoVo细胞的CSCLC表面CD44~+或CD133~+表达率明显高于LoVo细胞(P0.05)。木犀草素能有效抑制CSCLC的增殖,呈现剂量依赖性;Transwell迁移实验证实木犀草素抑制CSCLC的侵袭能力随着浓度的增加而增强;Western blot证实木犀草素上调E-cadherin蛋白表达量,下调Twist、β-catenin、TCF-4和MMP-2蛋白表达量。结论 木犀草素显著抑制结直肠癌LoVo细胞来源的CSCLC侵袭和转移能力,其作用机制可能是通过抑制Wnt/β-catenin/TCF-4信号通路来实现的。     

黄芪甲苷对宫颈癌Hela细胞增殖、迁移侵袭作用机制研究

目的:探讨黄芪甲苷能否抑制Hela细胞的增殖和侵袭迁移能力,并初步探讨相关机制。方法:选取人宫颈癌Hela细胞,0、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2 mg/ml黄芪甲苷作用于细胞,通过CCK-8和平板克隆形成实验探讨该药物对Hela细胞增殖能力的影响;通过Transwell细胞迁移和侵袭实验研究黄芪甲苷对Hela细胞侵袭迁移能力的影响;通过Western Blot检测肿瘤侵袭、迁移相关蛋白MMP2、MMP9的表达情况。结果:0.2mg/ml以上黄芪甲苷对Hela细胞增殖能力具有显著抑制作用,存在浓度-时间依赖性;0.2mg/ml黄芪甲苷处理Hela细胞24、48 h后,穿过小室的细胞数均明显减少;0.2mg/ml黄芪甲苷对肿瘤侵袭和迁移相关蛋白MMP2、MMP9的表达水平均显著下降。结论:黄芪甲苷可抑制Hela细胞的增殖和细胞迁移侵袭的能力,其抑制作用可能和Hela细胞MMP 2、MMP 9的表达下调有关。     

臭牡丹总黄酮通过调控Wnt/β-catenin通路影响A549细胞上皮间质转化研究

目的探讨臭牡丹总黄酮对人肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的作用及其机制。方法将pcDNA3.1+空载体与S45位点突变的β-链蛋白(S45A-β-catenin)真核过表达载体转染A549细胞,给予臭牡丹总黄酮干预。MTT法检测细胞的相对存活率,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室侵袭实验检测细胞的侵袭能力,Western blotting法检测各组细胞β-catenin、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、转录因子Snail 2(Slug)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、p-GSK-3β的表达水平。结果转染S45A-β-catenin质粒后,A549细胞增殖、迁移、侵袭能力均明显增强,β-catenin、vimentin蛋白表达水平显著上调,E-cadherin、GSK-3β、P-GSK-3β蛋白的表达水平显著下调。臭牡丹总黄酮可抑制A549细胞的增殖、迁移与侵袭能力,对转染S45A-β-catenin质粒组的细胞作用尤为明显。对转染空载质粒的A549细胞,可上调E-cadherin、GSK-3β、P-GSK-3β表达,下调β-catenin、vimentin表达;对转染S45A-β-catenin质粒的A549细胞,可下调β-catenin、vimentin表达。结论抑制细胞中β-catenin的高表达并调控下游的一系列因子,从而影响Wnt/β-catenin通路诱导的上皮间质转化(EMT)现象可能是臭牡丹总黄酮抑制肺癌侵袭、转移的重要作用机制之一。     

黄芩苷对人肺腺癌LTEP-A2细胞的抑制作用及机制研究

目的:研究观察黄芩苷对人肺腺癌LTEP-A2细胞株体外的抑制作用及相关机制。方法:采用不同浓度的黄芩苷干预人肺腺癌LTEP-A2细胞株,用CCK-8方法检测不同时间点不同浓度的黄芩苷对肺癌细胞增殖的抑制程度,接着用细胞划痕试验和Transwell小室侵袭试验观察黄芩苷对肺癌细胞体外迁移、侵袭能力的影响;用Western blot进一步检测黄芩苷干预后肺癌细胞MMP-2、MMP-9、TGF-β的表达的变化。结果:黄芩苷能明显抑制肺癌细胞增殖;能不同程度降低肺癌细胞的迁移、侵袭、体外划痕愈合能力,呈浓度依赖性;黄芩苷能不同程度下调MMP-2、MMP-9表达,其中以高浓度效果明显,中浓度居中,低浓度作用稍弱,与空白对照组比较,组间差异有统计学意义,P0.05;对肺癌细胞TGF-β的表达没有显著影响,与对照组比较,P0.05。结论:黄芩苷能不同程度地降低肺癌增殖迁移侵袭的能力,其机制可能是通过下调MMP-2、MMP-9的表达从而对肺癌细胞的增殖、迁移、侵袭发挥抑制作用。     

冬凌草甲素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖侵袭的抑制作用及细胞Wnt2/β-catenin表达的影响

目的:探讨冬凌草甲素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖侵袭的抑制作用及细胞Wnt2/β-catenin表达的影响。方法:培养人肝癌SMMC-7721细胞,实验分为阴性对照组,冬凌草甲素低剂量组(10μmol/L),冬凌草甲素中剂量组(20μmol/L),冬凌草甲素高剂量组(40μmol/L)。MTT检测肝癌细胞存活率;流式细胞仪检测肝癌细胞凋亡;RT-PCR检测肝癌细胞Wnt2、β-catenin mRNA的表达;Western Blot检测肝癌细胞内Wnt2、β-catenin蛋白的表达。结果:冬凌草甲素进行剂量干预后,肝癌细胞存活率显著降低(P0.05)。冬凌草甲素以20μmol/L的浓度进行干预后,人肝癌SMMC-7721细胞凋亡高于阴性对照组(P0.05),冬凌草甲素浓度40μmol/L时,人肝癌SMMC-7721细胞凋亡显著高于阴性对照组(P0.01)。冬凌草甲素干预肝癌细胞后,显著降低肝癌细胞内Wnt2、β-catenin mRNA的表达(P0.05)。同时,冬凌草甲素干预后,肝癌细胞内Wnt2、β-catenin蛋白的表达也得到显著降低(P0.05)。结论:冬凌草甲素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖侵袭具有明显的抑制作用,其机制可能与抑制Wnt2/β-catenin经典通路上的Wnt2、β-catenin的表达有关。     

左旋紫草素靶向Wnt/β-catenin通路抑制宫颈癌HeLa细胞增殖侵袭迁移的机制研究

目的?观察左旋紫草素对宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭、迁移及Wnt/β-catenin通路蛋白的影响。方法?设置左旋紫草素浓度梯度为0、0.5、1、2、4、8 μmol/L，干预HeLa细胞，MTS法检测细胞增殖活力，并筛选最佳干预浓度进行后续实验。后续实验中分为对照组、左旋紫草素 0.5、1、2 μmol/L组。划痕实验检测HeLa细胞24、48 h后细胞的迁移能力；Transwell实验检测左旋紫草素作用HeLa细胞24 h后细胞侵袭能力；Western Blot检测左旋紫草素作用HeLa细胞24 h后Wnt/β-catenin通路相关蛋白Wnt5a、β-catenin、p-LRP、LRP的表达。结果?左旋紫草素1、2、4、8 μmol/L在24 h可明显抑制HeLa细胞增殖（P<0.05，P<0.01），其抑制作用呈现浓度依赖性；与对照组比较，左旋紫草素0.5、1、2 μmol/L组细胞穿过率明显降低，细胞穿过基质胶的能力随着药物浓度的加大而降低（P<0.01），同时Wnt5a、β-catenin、p-LRP蛋白表达下降（P<0.05，P<0.01）。结论?左旋紫草素可通过下调Wnt/β-catenin信号通路，抑制HeLa细胞增殖、侵袭、迁移功能。     

冬凌草甲素对人黑色素瘤A375细胞侵袭和转移的影响及机制研究

目的研究冬凌草甲素对人黑色素瘤A375细胞侵袭和转移的抑制作用及其作用机制。方法采用细胞培养技术体外培养A375细胞,用不同浓度冬凌草甲素处理细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖率;划痕实验分析细胞的迁移能力;Transwell小室实验研究细胞的侵袭能力;黏附实验评价细胞的黏附能力;Western blotting法检测转录因子Snail、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9蛋白的表达。结果冬凌草甲素对A375细胞48 h半数抑制浓度(IC50)为47.94μmol/L;与对照组比较,5、10、20μmol/L冬凌草甲素可明显降低A375细胞的体外迁移、侵袭及黏附能力(P0.05),且具有量效关系。冬凌草甲素作用于细胞后,E-cadherin蛋白表达水平明显上调(P0.05),Snail、N-cadherin、vimentin、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显下调(P0.05)。结论冬凌草甲素具有体外抑制A375细胞侵袭和转移的作用,其机制可能与调控上皮-间质转化(EMT)及MMPs有关。     

重楼总皂苷对LiCl诱导人胃癌MKN-45细胞迁移及侵袭的影响

目的探讨重楼总皂苷(Rhizoma Paridis total saponin,RPTS)在体外对人胃癌MKN-45细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,探讨其作用的可能机制。方法体外培养MKN-45细胞,取对数生长期细胞,加入不同质量浓度RPTS(2.5、5.0、10.0、20.0、40.0μg/m L)处理24h,采用MTT法检测细胞增殖情况;细胞划痕实验、Transwell小室实验检测RPTS对MKN-45细胞迁移和侵袭的影响;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测RPTS对LiCl诱导的MKN-45细胞上清液中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的上调表达的影响;免疫印迹技术(Western blotting)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分别检测RPTS(10、20、40μg/m L)对Li Cl诱导的MKN-45细胞中肿瘤侵袭转移相关分子血管内皮生长因子(VEGF)、环加氧酶-2(COX-2)以及Li Cl作用靶点糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)蛋白和基因表达水平的影响。结果与对照组比较,RPTS 5.0、10.0、20.0、40.0μg/m L可明显下调MKN-45细胞的增殖活性(P0.05、0.001);RPTS 2.5、5.0、10.0μg/m L可抑制MKN-45细胞的迁移和侵袭能力(P0.01、0.001)。与模型组比较,RPTS能够显著下调Li Cl诱导的MKN-45细胞上清液中MMP-9的表达水平(P0.05、0.01);下调细胞中VEGF、COX-2 mRNA和蛋白表达水平;上调Li Cl作用位点GSK-3βm RNA和蛋白表达水平(P0.05、0.001)。结论 RPTS具有体外抑制MKN-45细胞迁移和侵袭的能力,其作用机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路有关。     

羽扇豆醇抑制乳腺癌 MCF-7增殖迁移和侵袭及机制研究

目的 探讨羽扇豆醇抑制乳腺癌MCF-7增殖迁移和侵袭及可能机制。方法 以人乳腺癌MCF-7细胞为对象,根据加入羽扇豆醇的浓度不同分为不同组(羽扇豆醇最终质量浓度分别为0、7.5、15、30、60、90 mg/L),以MTT法检测培养24 h后细胞增殖情况,划痕实验检测细胞迁移情况,Transwell法检测细胞侵袭能力,RT-PCR法检测Wnt/β-catenin信号通路下游基因表达,蛋白免疫印迹法检测细胞周期蛋白D1(cyclin-D1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、C-myc、β-联蛋白(β-catenin)蛋白表达。结果 不同浓度羽扇豆醇下MCF-7细胞存活率、迁移率及侵袭细胞数量均明显不同,比较差异有统计学意义(P<0.05),与对照组(羽扇豆醇0.00 mg/L,即不加入羽扇豆醇)比较,加入7.5、15、30、60、90 mg/L羽扇豆醇组细胞的存活率、迁移率、侵袭细胞数量均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);不同浓度羽扇豆醇下MCF-7细胞中Wnt、cyclin-D1、MMP-2、C-myc、β-catenin基因蛋白表达量明显不同,比较差异有统计学...