白芍总苷通过抑制内质网应激减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的实验研究

目的 探讨白芍总苷(TGP)对大鼠脑缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用及其机制.方法 将240只SD大鼠按照随机数字表法分为假手术组、模型组、TGP低(50mg/kg)、中(100mg/kg)、高(200mg/kg)剂量组和尼莫地平(NMP,15mg/kg)组,每组40只.采用线栓法阻断大脑中动脉2h复制大鼠脑I/R模...     

白芍总苷对糖尿病大鼠肝脏内质网应激的调节作用

目的 探讨白芍总苷( TGP)对糖尿病大鼠肝脏损害的保护作用是否与抑制内质网应激( ERS)有关. 方法 建立链脲佐菌素( STZ)诱导的糖尿病模型,随机分为对照组、模型组、TGP ( 50、100、200 mg/kg )给药组. 应用油红 O与Masson染色对肝组织行病理检查;采用免疫组化法检测肝组织ED-1表达;采用Western blot法检测GRP78、p-Perk及p-Eif2α的表达. 结果 TGP给药可降低糖尿病大鼠肝重增加及肝组织总胆固醇( TC)、三酰甘油( TG)及游离脂肪酸( FFA)水平. 模型组肝细胞油红O染色评分明显高于对照组( P <0. 01 );TGP 各给药组评分明显低于模型组( P <0. 01). Masson染色模型组肝纤维化评分明显高于对照组(P<0. 01);TGP 50、100、200 mg/kg给药组评分明显低于模型组( P<0. 01 ). 免疫组化显示模型组肝组织巨噬细胞浸润明显增加,各给药组均能抑制糖尿病肝组织巨噬细胞浸润的增加. Western blot显示糖尿病模型组肝组织GRP78、p-Perk及p-Eif2α表达明显高于对照组, TGP 给药组肝组织GRP78、p-Perk及p-Eif2α表达明显低于模型组. 结论 TGP对糖尿病肝损害有明显保护作用,其机制可能与其抗炎、抑制ERS有关.     

红景天苷抑制内质网应激和细胞凋亡减轻心脏缺血再灌注损伤

目的 观察红景天苷(Sal)在大鼠离体心脏缺血再灌注(IR)中的作用并探讨其对内质网应激(ERS)和细胞凋亡的调控机制。方法 制备大鼠离体心脏缺血再灌注模型,缺血45 min,再灌注2 h,随机分为4组(n=10):对照(Control)组、Sal处理(Sal)组、缺血再灌注(IR)组及Sal处理缺血再灌注(IR+Sal)组。氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测心肌梗死面积,ELISA法检测灌注液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,测量左室内收缩峰压(LVSP)和舒张末压(LVEDP),Western blot检测B淋巴细胞瘤2基因(Bcl-2)及蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)和转录活化因子6(ATF6)的表达,TUNEL染色观察细胞凋亡。结果 Sal组和Control组各指标之间比较差异均无统计学意义;与Control组比较,IR组心肌梗死面积和灌注液中LDH活性增加,LVSP降低,LVEDP增加,Bax表达增加,Bcl-2表达减少,TUNEL阳性细胞数增加,ERS相关蛋白PERK、CHOP和ATF6的表达增加;与IR...     

氢气对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤内质网应激及神经细胞凋亡的影响

目的 探讨吸入高浓度氢气(H2)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤(IRI)内质网应激(ERS)相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、半胱氨酸蛋白酶12 (Caspase-12)及脑皮质神经细胞凋亡和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响.方法 选取72只健康成年SPF级雄性SD大鼠,将其分为对照组(Ⅰ组:不作任何处理)、假手术组(Ⅱ组)、脑IRI组(Ⅲ组)、氢气治疗组(Ⅳ组),每组18只.采用线栓法建立大鼠局灶性脑IRI模型.于再灌注24 h后行神经功能缺损评分(NDS),采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察大鼠脑缺血梗死程度并计算脑梗死面积,原位末端标记法(TUNEL)技术检测各组大鼠脑皮质神经细胞凋亡并计算凋亡指数(AI),Western blot法和免疫组织化学法检测大鼠脑皮质GRP78、Caspase-12、Bcl-2及Bax蛋白表达.结果 与Ⅰ、Ⅱ组比较,Ⅲ、Ⅳ组大鼠脑IRI后NDS、脑梗死面积、AI均明显增加,GRP78、Caspase-12、Bax蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达明显下降(P＜0.05);与Ⅲ组比较,Ⅳ组大鼠NDS、脑梗死面积、AI及Caspase-12、Bax蛋白表达明显减少,GRP78、Bcl-2表达明显增加(P＜0.05).结论 再灌注同时吸入高浓度H2可通过增加脑IRI后内质网GRP78蛋白表达,并抑制Caspase-12的激活进而抑制ERS并促进内质网功能修复,对大鼠脑IRI起到一定的保护作用.     

内质网应激与脑缺血再灌注损伤

缺血性脑血管病是危害人类生命和健康的常见病和多发病,但其机制目前仍未完全阐明。内质网的应激（ERS）是细胞的一种自我保护机制,早期以恢复内质网（ER）稳态,维持生存,但是过强或持续时间过长的ERS可以引起细胞凋亡。ERS反应性凋亡途径是不同于经典凋亡途径（死亡受体途径和线粒体途径）的一种新的细胞凋亡途径。     

肉苁蓉总苷对脑缺血再灌注大鼠氧化应激损伤及细胞凋亡的影响

目的:探讨肉苁蓉总苷(GCs)对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠氧化应激损伤及神经细胞凋亡的影响及可能机制。方法:模型大鼠采用线栓法构建大脑中动脉闭塞(MCAO)模型。造模成功后,药物组(GCs)大鼠给与GCs 50 mg/(kg·d)灌胃,连续14 d;假手术组(Sham)及模型组(Model)大鼠给与同等体积生理盐水灌胃。给药结束后采用Longa评分法评价其神经功能缺损情况;随后处死大鼠,进行TTC染色计算脑梗死面积百分比;ELISA法检测血清丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性;蛋白免疫印记(Western blot)检测脑组织中核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)以及B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达情况。结果:与Sham组相比,Model组神经功能缺损评分升高,脑梗死面积百分比升高,MDA含量升高,SOD和GSH-Px活性降低,Nrf 2、HO-1及Bcl-2蛋白表达水平下降,Bax及Caspase-3蛋白表...     

脑缺血/再灌注损伤后内质网应激对神经元转归的影响

内质网本身在细胞生理及组成结构方面起至关重要的作用,当内质网出现功能障碍时,未折叠蛋白反应(UPR)试图增加未折叠蛋白的折叠能力而减轻内质网应激(ERS)的压力。当无法缓解时,细胞便通过内质网凋亡途径走向凋亡。而脑缺血/再灌注损伤(CIRI)会导致内环境紊乱,引起ERS反应,进而通过ERS途径引起神经元凋亡。现对内质网的结构、功能、ERS机制、ERS后产生的UPR机制以及凋亡机制予以阐述,并提出了对CIRI后ERS状态下神经元转归的应对措施。     

加贝酯对脑缺血再灌注大鼠神经细胞凋亡的影响及机制研究

目的 研究加贝酯(gabexate mesilate,GM)对脑缺血再灌注(ischemia reperfusion, I/R)大鼠神经细胞凋亡的影响并初探其机制。方法 取120只雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、I/R组、尼莫地平(NMP)2mg/(kg·d)组和GM 5、10、20mg/(kg·d)组,每组20只;采用线栓阻断大脑中动脉2h的方法制备脑I/R大鼠模型,造模完成后尾静脉注射给药,1次/天连续7天。通过HE、TUNEL染色法行脑组织病理学检查和细胞凋亡观察;生化分析法测定抗氧化酶(SOD、GSH-Px)活性和MDA含量;Western blot法检测cleaved caspase-3、NF-κB、内质网应激凋亡通路相关蛋白(p-JNK、CHOP)表达。结果 与I/R组比较,经GM 10、20mg/(kg·d)或NMP 2mg/(kg·d)治疗7天明显改善脑组织形态结构病变和细胞损伤,改善细胞凋亡状况、降低凋亡指数(AI),提高SOD、GSH-Px活性并降低MDA含量,下调cleaved caspase-3、NF-κB、p-JNK、CHOP蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05)。与NMP 2mg/(kg·d)组比较,GM 20mg/(kg·d)组脑组织病变和细胞凋亡状况改善效果较优、AI降低,SOD活性升高且MDA含量降低,NF-κB、p-JNK、CHOP表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 GM具有抑制脑I/R大鼠神经细胞凋亡的作用,其机制可能与抑制氧化应激、下调cleaved caspase-3和NF-κB蛋白表达、阻断内质网应激凋亡通路有关。     

热量限制抑制内质网应激对脑缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨能否通过热量限制(CR)抑制脑缺血再灌注后内质网应激通路葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)表达对脑缺血再灌注损伤(CIRI)起保护作用.方法 选取6～8周雄性健康C57BL/6J小鼠30只,将其随机分为假手术组(Sham组)、造模组(CIRI组)及CR组,每组10只,持续干预至第...     

松龄血脉康胶囊对大鼠脑缺血再灌注损伤内质网应激凋亡相关蛋白的影响

目的 探讨松龄血脉康胶囊对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其对内质网应激细胞凋亡的影响.方法 从50只雄性SD大鼠中随机选取11只为假手术组,其余大鼠采用大脑中动脉栓塞法制备脑缺血再灌注损伤模型,造模成功的33只大鼠随机分为模型组、松龄血脉康组及依达拉奉组,每组11只,分别予蒸馏水[10 mL/(kg?d)]、松龄血脉...     

大株红景天对PM_(2.5)暴露后缺血/再灌注大鼠心肌内质网应激诱导细胞凋亡的保护作用

目的从心肌内质网应激及其诱导的细胞凋亡水平探讨PM_(2.5)暴露对缺血/再灌注大鼠心肌损伤的影响,以及大株红景天的保护作用及其机制。方法应用大气细颗粒物制备PM_(2.5)生理盐水混悬液备用,取SPF级雄性SD大鼠48只随机分为4组:(1)假手术组(Sham组,n=12);(2)缺血/再灌注组(I/R组,n=12);(3)PM_(2.5)联合缺血/再灌注组(PM_(2.5)+I/R组,n=12);(4)大株红景天组(PM_(2.5)+I/R+DZ组,n=12)。Sham、I/R组术前给予PM_(2.5)相同体积生理盐水气管内滴注,每48h1次共3次,Sham、I/R、PM_(2.5)+I/R组术后予用药等体积的生理盐水腹腔注射,每日1次共3d。末次给药后检测各组大鼠超声心动图,实验结束麻醉下取大鼠心脏,Western blot及qPCR法分别检测心肌内质网应激相关蛋白GRP-78、XBP1、CHOP的表达水平,TUNEL法检测心肌细胞凋亡率。结果与I/R组相比,PM_(2.5)+I/R组左室射血分数(LVEF)及左室短轴缩短率(LVFS)显著降低,心肌细胞凋亡率增加,GRP-78、CHOP表达在转录和蛋白表达水平明显升高,XBP1s/XBP1u明显增大(P0.01);与PM_(2.5)+I/R相比,PM_(2.5)+I/R+DZ组LVEF及LVFS明显增加,心肌细胞凋亡率降低,GRP-78、CHOP表达在转录和蛋白表达水平降低(P0.01),XBP1s/XBP1u明显减小(P0.05)。结论 PM_(2.5)暴露可加重心肌缺血/再灌注损伤;大株红景天可改善PM_(2.5)暴露后大鼠心功能及心肌缺血/再灌注导致的心肌损伤,其机制可能与抑制内质网应激及细胞凋亡相关。     

癫痫脑损伤与内质网应激的研究进展

近年来的研究表明,单次癫痫发作即可产生脑损伤。其主要的病理改变是神经元程序性死亡和神经胶质增生;其原因是细胞内外环境的改变,诱导内质网应激启动自适应性保护通路即未折叠蛋白反应。当长时间且强烈的内质网稳态失衡时,可启动内质网应激反应性凋亡通路,这一系列细胞内信号转导和相关基因的激活被视为一条新的细胞信号路径,为癫痫脑损伤防治的研究提供了新方向。     

赤芍总苷对D-氨基半乳糖胺所致小鼠肝损伤的保护作用

目的观察赤芍总苷对D-氨基半乳糖胺（D-GaIN）所致小鼠肝损伤的防治作用。方法NIH小鼠60只,随机分5组,分别为正常对照组,模型组,赤芍总苷高剂量组、低剂量组和联苯双脂组小鼠分别灌胃给药,1次／d,连续7d,末次给药1h后,除正常对照组外,其余各组小鼠均腹腔注射D-GaIN 800mg／kg,16h后采血,检测血清ALT、AST活性及超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量,并观察肝组织病理学变化。结果赤芍总苷高剂量组能显著降低D-GaIN所致小鼠肝损伤血清ALT、AST活性,提高肝组织匀浆SOD活性,降低MDA,明显改善肝组织损伤的程度,与模型组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论赤芍总苷对D-GaIN诱导的小鼠肝损伤有保护作用,其作用机制可能与抗脂质过氧化有关。     

肌红蛋白诱导的内质网应激及细胞凋亡在挤压综合征中的机制初探

目的 建立挤压综合征急性肾损伤(AKI)小鼠模型,探究肌红蛋白诱导的肾小管上皮细胞内质网应激及细胞凋亡在挤压综合征中的致病机制。方法 体内实验:将C56BL/6小鼠随机分为对照组、模型组8 h及模型组24 h,每组6只,模型组于小鼠大腿外侧肌注50%甘油生理盐水溶液（8 μL/g）建立挤压综合征模型,对照组注入等量生理盐水。分别于注射后8、24 h麻醉处死动物,检测血清肌酐（sCr）,获取完整肾脏标本进行电镜及TUNEL染色观察凋亡,采用免疫组化、实时荧光定量PCR等检测凋亡及内质网应激相关蛋白表达。体外实验:将人近端肾小管上皮细胞随机分为对照组、干预组6 h及干预组12 h,对照组加入标准细胞培养液,干预组加入等量含马肌红蛋白的细胞培养液,分别于6、12 h后收取细胞进行流式分析检测细胞凋亡。结果 注射甘油8 h后sCr明显升高,挤压综合征模型建立成功。电镜示与对照组相比,模型组肾小管上皮细胞内质网、线粒体等细胞器肿胀较明显。TUNEL染色提示模型组肾组织凋亡细胞百分比高于对照（P<0.05)。免疫组化染色和实时荧光定量PCR示模型组肾组织凋亡标志蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase）3及内质网应激标志蛋白CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）、caspase12表达高于对照组（P<0.05）。细胞流式分析提示马肌红蛋白干预组细胞凋亡比例较对照组升高（P<0.05）。结论 内质网应激及凋亡参与了挤压综合征导致AKI的发病机制,肌红蛋白可能是诱导细胞凋亡的重要因素。     

胰岛素生长因子与内质网应激关系的研究进展

内质网应激(ERS)是脑缺血/再灌注、病毒性肝炎、乳腺癌等众多疾病发生的重要病理过程,同时是一个多因素、多步骤协同的复杂病理生理过程。近来的研究报道,胰岛素生长因子(IGFs)能通过ERS的多条路径的联系恢复内质网稳态,促进细胞存活,但在内质网持续应激时则启动内质网相关凋亡途径,诱导细胞凋亡。该文以IGFs为切入点,探讨IGFs和ERS的相互关系,并对之进行综述。     

Role of Endoplasmic Reticulum Stress in Silica-induced Apoptosis in RAW264.7 Cells

Objective We investigated the role of endoplasmic reticulum stress(ERS) in silica-induced apoptosis in alveolar macrophages in vitro. Methods RAW264.7 cells were incubated with 200 μg/mL silica for different time periods. Cell viability was assayed by the MTT assay. Cell apoptosis was evaluated by DAPI staining, flow cytometry analysis, and Western blot analysis of caspase-3. Morphological changes in the endoplasmic reticulum were observed by transmission electron microscopy. The expression of ERS markers binding protein(BiP) and CCAAT-enhancer-binding protein homologous protein(CHOP) was examined by Western blotting and real-time PCR. As an inhibitor of ERS, 4-phenylbutyric acid(4-PBA) was used in the experiments. Results Silica exposure induced nuclear condensation and caspase-3 expression in RAW264.7 cells. The number of apoptotic cells increased after silica exposure in a time-dependent manner. Silica treatment induced expansion of the endoplasmic reticulum. In addition, the expression of BiP and CHOP increased in silica-stimulated cells. Furthermore, 4-PBA treatment inhibited silica-induced endoplasmic reticulum expansion and the expression of Bi P and CHOP. Moreover, 4-PBA treatment attenuated nuclear condensation, reduced apoptotic cells, and downregulated caspase-3 expression in silica-stimulated cells. Conclusion Silica-induced ERS is involved in the apoptosis of alveolar macrophages.     

内质网应激诱导慢性间歇低氧幼鼠认知相关的脑损害

目的 探讨内质网应激对慢性间歇低氧幼鼠脑损害的机制。方法 取SPF级健康雄性SD幼鼠32只,随机分为4组：间歇低氧（IH）2、4周组（2IH,4IH组）,对照2、4周组（2C,4C组）,每组8只。采用八臂迷宫测试各组幼鼠工作记忆错误（WME）、参考记忆错误（RME）、总错误数（TE）,观察海马神经元凋亡变化,测定免疫球蛋白结合蛋白（BiP）、转录激活因子4（ATF4）、C/EBP同源蛋白（CHOP）和磷酸化RNA激活蛋白激酶的内质网类似激酶（p-PERK）的表达水平。结果 慢性间歇低氧导致幼鼠学习记忆能力下降,与2周组比较,4周组明显（WME：3.38±0.52 vs 2.12±0.84;RME：4.25±0.71 vs 3.00±0.93;TE：7.62±0.74 vs 5.12±0.64,P均<0.01）;IH组海马神经元发生凋亡,4周组最明显（20.78%±2.63% vs 14.94%±1.59%,P<0.01）。IH组幼鼠海马BiP、ATF4和CHOP mRNA表达均增加,4IH组ATF4、CHOP mRNA表达显著升高（ATF4：3.50±0.24 vs 1.92±0.13,P<0.01;CHOP：3.09±0.22 vs 1.95±0.18,P<0.01）。2IH、4IH组p-PERK、CHOP蛋白表达上调,4IH组表达明显升高（p-PERK 3.72±0.21 vs 1.85±0.07,P<0.01;CHOP：4.29±0.27 vs 2.69±0.11,P<0.01）。结论 慢性间歇低氧可上调记忆相关脑区BiP、CHOP、ATF4 mRNA和p-PERK、CHOP蛋白的表达,表明内质网应激诱导慢性间歇低氧幼鼠认知相关的脑损害;PERK/ATF4/CHOP信号通路可能是内质网应激的分子机制。     

百草枯致大鼠肺纤维化肺组织内质网相关凋亡基因Caspase-12的表达

目的 观察内质网相关凋亡基因半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12（ Caspase-12） 在百草枯诱导肺纤维化模型大鼠肺组织中的表达。方法 30 只Spragne-Dawley（ SD） 大鼠随机分为对照组、14 d模型组和28 d 模型组。采用百草枯灌胃法复制肺纤维化模型。逆转录-聚合酶链反应（ RT-PCR）检测肺内Caspase-12 mRNA 表达, 免疫组化检测其蛋白表达。HE 和Masson 染色判断肺组织肺泡炎及肺纤维化程度。结果 HE 和Masson 染色结果证实成功复制肺纤维化模型。模型组大鼠肺泡炎和肺纤维化程度较对照组严重（ P 〈0. 01） 。与对照组比较, Caspase-12 表达在14 d 模型组中明显升高（ P 〈0. 01） , 在28 d 模型组中更高（ P 〈 0. 01） 。结论 百草枯中毒大鼠肺内质网相关凋亡基因Caspase-12 表达增高, 提示内质网应激在百草枯中毒引起的肺纤维化中发挥重要作用。