补肾疏肝方对老年抑郁症小鼠海马氧化应激及TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的 观察慢性轻度不可预见性应激（CUMS）后老年抑郁症小鼠海马组织氧化应激和转化生长因子-β₁（TGF-β₁）/Smad信号通路变化,并探讨补肾疏肝方抗抑郁的可能机制。方法 5月龄的小鼠90只,随机分为正常组、模型组、补肾疏肝方高、中、低剂量组和氟西汀组共6组,每组15只。除正常组外,其余各组小鼠均采用CUMS建立老年抑郁症模型。补肾疏肝方高、中、低剂量组小鼠在造模第1天开始同时灌胃补肾疏肝方19.5,9.75,4.87 g·kg^-1,氟西汀组小鼠灌胃氟西汀0.033 g·kg^-1,正常组和模型组小鼠灌胃等体积生理盐水,共21 d。用矿场实验评价各组小鼠的行为反应,采集小鼠海马组织并进行相关指标检测,WST-1法测超氧化物歧化酶（SOD）含量,TBA法测丙二醛（MDA）的含量,微量酶标法测谷胱甘肽（GSH）含量,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测TGF-β₁,Smad2,Smad3,Smad7 mRNA表达。结果 与正常组比较,模型组小鼠OFT水平得分和垂直得分明显降低,海马组织SOD,GSH水平均下降,MDA含量明显升高（P<0.05）;TGF-β₁,Smad2,Smad3 mRNA表达均上调,Smad7 mRNA表达下调（P<0.05）。与模型组比较,补肾疏肝方高、中、低剂量组及氟西汀组小鼠海马组织SOD,GSH含量均上升,MDA含量下降（P<0.05）,补肾疏肝方高、中、低剂量组及氟西汀组小鼠海马组织TGF-β₁,Smad2,Smad3 mRNA表达均下调,Smad7 mRNA表达上调（P<0.05）。与补肾疏肝方高剂量组比较,补肾疏肝方中、低剂量组小鼠海马组织SOD,GSH含量下降,MDA含量均上升（P<0.05）;补肾疏肝方中、低剂量组小鼠海马组织TGF-β₁,Smad2,Smad3 mRNA表达均上调,Smad7 mRNA表达下调（P<0.05）。结论 补肾疏肝方可显著改善SAPM8小鼠的老年抑郁症状,其机制可能与调节海马氧化应激及TGF-β₁/Smad信号通路有关。     

三七总皂苷对A549细胞上皮-间充质转化的影响＊

目的 本研究旨在观察三七总皂苷（Panax notoginseng saponins，PNS）对A549细胞上皮-间充质转化（Epithelial-mesenchymal transition， EMT）的影响及其机制。方法 将A549细胞随机分为5组：正常对照组、TGF-β1诱导组（5 ng·mL^-1，诱导24h）、PNS干预组（低、中、高浓度组分别加入TGF-β1 5 ng·mL^-1和50、100、200 μg·mL^-1 PNS）；倒置显微镜下观察各组细胞的形态变化；Elisa法检测细胞上清液中Ⅰ型胶原蛋白（COL Ⅰ）的表达；Western blot检测各组E-cadherin、Vimentin、磷酸化p38MAPK（P-p38MAPK）蛋白的表达。结果 倒置显微镜下TGF-β1诱导的A549细胞由圆形变为长梭形、纺锤形，细胞圆形度降低（P < 0.01），PNS干预后细胞圆形度增高（P < 0.05）；Elisa法检测显示，与正常对照组相比TGF-β1诱导组细胞上清液COL Ⅰ表达增高（P < 0.05），与TGF-β1诱导组比较PNS干预后COL Ⅰ表达降低（P < 0.05）；Western blot检测与与TGF-β1诱导组比较，PNS干预后E-cadherin蛋白表达增加（P < 0.05），Vimentin蛋白表达降低（P < 0.05），磷酸化的p38丝裂原活化蛋白激酶（P-p38 MAPK）表达降低（P < 0.05）。结论 三七总皂苷可能通过调控TGF-β1/p38MAPK信号通路可以抑制TGF-β1诱导A549细胞发生EMT现象。     

逍遥散对抑郁症小鼠前额皮质BDNF和NGF蛋白表达水平的影响

目的探讨逍遥散对抑郁症小鼠前额皮质BDNF和NGF蛋白表达水平的影响。方法以慢性不可预知性温和应激(CUMS)方法应激小鼠21天,建立抑郁症小鼠模型。造模完成后,给予逍遥散和盐酸氟西汀干预,采用Elisa、免疫组化和Western blotting方法检测小鼠前额皮质BDNF和NGF蛋白表达情况及逍遥散的调节作用。结果模型组小鼠前额皮质BDNF和NGF蛋白表达较正常组显著下降(P0.01,P0.05),且经逍遥散和氟西汀治疗后小鼠前额皮质BDNF和NGF蛋白表达情况显著改善(P0.01,P0.05)。结论 BDNF和NGF的表达与抑郁症的发生密切相关,且逍遥散通过调节BDNF和NGF对抑郁症表现出一定的治疗作用。     

四逆散调控GSK-3β/A20/C/EBPβ抑制小胶质细胞激活改善抑郁模型小鼠抑郁样行为

目的 探讨四逆散通过调控糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）/肿瘤坏死因子-α诱导蛋白3（A20）/CCAAT增强子结合蛋白β（C/EBPβ）抑制小胶质细胞激活发挥抗抑郁作用。方法 将72只雄性C57/6J小鼠随机分出正常组、模型组、氟西汀组（5.0 mg·kg^-1）、四逆散低、中、高剂量组（4.9、9.8、19.6 g·kg^-1）,每组12只。适应性喂养1周后,采用慢性不可预知温和应激（CUMS）建立抑郁模型,第5周开始进行药物治疗4周。第9周进行行为学实验,包括蔗糖偏好实验、旷场实验、高架十字迷宫实验和强迫游泳实验。采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测皮质白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、一氧化氮合酶（iNOS）炎症蛋白的表达水平和GSK-3β、A20、C/EBPβ的表达水平。利用免疫荧光法检测皮质小胶质细胞的M1型极化标志物离子钙结合衔接分子1（Iba1）和巨噬细胞抗原（CD68）的荧光表达。结果 CUMS造模8周后,与正常组比较,模型组小鼠蔗糖偏好率显著降低（P<0.01）,旷场实验中央区域活动显著减少（P<0.01）,在高架十字迷宫实验开臂区域的活动明显减少（P<0.05）,强迫游泳的不动时间显著增加（P<0.01）;炎症蛋白IL-1β、IL-6、iNOS的表达水平显著升高（P<0.01）,Iba1和CD68的荧光共定位的指数升高（P<0.05）;GSK-3β蛋白表达水平升高（P<0.05）,C/EBPβ蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。药物干预4周后,与模型组比较,四逆散组小鼠糖水偏好率显著提高（P<0.01）,旷场实验和高架十字迷宫实验中在中央区域和开臂区域的活动明显增加（P<0.05）,四逆散中、高剂量组小鼠在强迫游泳实验中不动时间显著减少（P<0.01）;IL-1β、IL-6、iNOS的蛋白表达水平明显下降（P<0.05）,四逆散高剂量组Iba1和CD68的荧光共定位的指数明显下降（P<0.05）;四逆散中、高剂量组GSK-3β、C/EBPβ的蛋白表达水平显著下降（P<0.01）,A20的蛋白表达显著上调（P<0.01）。结论 四逆散抗抑郁作用与调控GSK-3β/A20/C/EBPβ蛋白的表达,抑制小胶质细胞M1型激活有关。     

逍遥散正丁醇部位基于IGF-1Rβ/PI3K/Akt信号通路的抗抑郁作用

目的 观察逍遥散正丁醇部位对慢性不可预知应激（CUMS）模型小鼠抑郁样行为的干预作用,及其作用发挥与调控类胰岛素生长因子-1受体β（IGF-1Rβ）/磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）通路的关系。方法 首先基于小鼠行为绝望模型初步获得逍遥散正丁醇部位发挥抗抑郁作用的有效剂量。再将雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、氟西汀组、逍遥散组、逍遥散正丁醇部位20,40 g·kg^-1组,采用CUMS法建立抑郁症模型小鼠研究其抗抑郁作用及机制,以糖水偏好实验检测造模效果。模型成功后,各给药组连续灌胃小鼠5周,正常组与模型组给予等体积溶媒。第5周末,开展小鼠糖水偏好实验、悬尾实验及新奇环境抑制进食实验;酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定小鼠血清、海马区类胰岛素生长因子-1（IGF-1）含量,甲苯胺蓝染色法检测海马CA3区神经元尼氏小体平均光密度,免疫荧光法标记海马齿状回（DG）5-溴脱氧尿嘧啶核苷（Brdu）和双肾上腺皮质激素（DCX）阳性表达神经元,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测海马区IGF-1Rβ,PI3K,磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K）,Akt,磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）,半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase-3）,剪切后的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶（cleaved Caspase-3）蛋白表达水平。结果 小鼠强迫游泳和悬尾实验结果表明,逍遥散正丁醇部位生药量9.1,40 g·kg^-1均能明显缩短小鼠不动时间（P<0.05,P<0.01）,表明其在9.1~40 g·kg^-1剂量之间具有有效性。CUMS模型中,与模型组比较,逍遥散正丁醇部位（生药量20,40 g·kg^-1）能明显提高小鼠糖水偏好率（P<0.05,P<0.01）,缩短悬尾不动时间（P<0.01）及新奇环境摄食潜伏期（P<0.01）;并逆转模型小鼠血清、海马区下调的IGF-1含量（P<0.01）,增加小鼠海马CA3区神经元尼氏小体数目（P<0.01）,促进海马DG区Brdu和DCX表达（P<0.05,P<0.01）,下调模型小鼠海马IGF-1Rβ（P<0.05,P<0.01）,p-PI3K/PI3K（P<0.05,P<0.01）,p-Akt/Akt（P<0.05）,cleaved Caspase-3/Caspase-3蛋白表达水平。结论 逍遥散正丁醇部位具有与逍遥散全方相当的抗抑郁作用,可改善CUSM模型小鼠的抑郁样行为,诱导模型小鼠海马CA3区神经元合成尼氏小体,增加DG区神经元增殖、分化,促进神经发生;其作用发挥可能与抑制过度激活的IGF-1Rβ/PI3K/Akt通路、减少神经元凋亡有关。     

逍遥散促进小胶质细胞极化改善血管性痴呆伴抑郁小鼠髓鞘再生及抑郁表型

目的 探讨逍遥散对血管性痴呆（VaD）小鼠抑郁行为表型的作用及可能机制。方法 3月龄雄性C57/BL6小鼠60只,分为正常组、模型组、氟西汀组及逍遥散低、中、高剂量组。除正常组外,其余5组小鼠采用双侧颈总动脉狭窄术,术后2周开始给予慢性束缚应激,每天6 h,构建VaD伴抑郁小鼠模型;逍遥散低、中、高组予逍遥散水煎剂（5,10,20 g·kg^-1）灌胃,氟西汀组给予氟西汀（10 mg·kg^-1）灌胃,正常组、模型组给予等体积生理盐水灌胃,共计4周,给药期间给予束缚应激维持;糖水偏好试验、悬尾试验检测小鼠抑郁行为表型,免疫荧光法检测小鼠腹侧海马（vHIP）髓鞘碱性蛋白（MBP）荧光表达水平;透射电镜观察小鼠vHIP髓鞘超微结构;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测MBP,少突胶质细胞糖蛋白（MOG）,髓鞘相关醣蛋白（MAG）,髓样细胞触发性受体-2（TREM2）,诱导型一氧化氮合酶（iNOS）,精氨酸酶1（Arg1）,白细胞介素-1β（IL-1β）,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,白细胞介素-4（IL-4）,白细胞介素-10（IL-10）蛋白表达水平。结果 行为学检测结果显示：与正常组比较,模型组小鼠不动时间增加、糖水偏好百分比下降（P<0.01）;与模型组比较,给予逍遥散干预后小鼠不动时间缩短（P<0.05）,糖水偏好百分比增加（P<0.01）;Western blot结果显示：与正常组比较,模型组小鼠vHIP中髓鞘相关蛋白（MBP,MOG,MAG）表达下降（P<0.01）;与模型组比较,低剂量组小鼠vHIP中MBP,MOG,MAG蛋白表达增加（P<0.05,P<0.01）,iNOS蛋白表达降低（P<0.01）,中、高剂量组MBP,MOG,MAG,TREM2,Arg1,IL-4,IL-10蛋白表达均增加（P<0.05,P<0.01）,iNOS,IL-1β,TNF-α蛋白表达水平降低（P<0.01）;免疫荧光结果显示：与正常组比较,模型组小鼠MBP平均荧光强度降低（P<0.01）,低、中、高剂量组MBP平均荧光强度不同程度增加（P<0.01）;透射电镜结果显示：模型组髓鞘结构松解,致密层分离,排列紊乱,给予逍遥散干预改善小鼠髓鞘结构完整性及板层结构松散度。结论 逍遥散改善VaD小鼠的抑郁表型,其机制可能是通过上调TREM2诱导小胶质细胞M2型极化,增加其抗炎及吞噬能力,促进受损髓鞘再生。     

二次打击致抑郁小鼠的证候属性及其机制

目的 探讨母婴分离（MS）联合慢性束缚应激（RS）致抑郁小鼠的证候属性及其机制研究。方法 仔鼠出生第0天（PD0）随机分为空白组和造模组。PD21后剔除雌鼠，随机分为模型组、温阳组、解郁组、温阳解郁组、氟西汀组，采用MS+RS建立二次打击模型，每组15只。采用糖水、悬尾及旷场实验评估小鼠焦虑抑郁样行为；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组小鼠血浆促肾上腺皮质激素（ACTH）及皮质酮（CORT）含量；高效液相-电化学法（HPLC-ECD）检测各组小鼠海马单胺类神经递质含量；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测各组小鼠海马5-羟色胺（5-HT）系统、下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴及脑源性神经营养因子（BDNF）信号通路基因表达水平；免疫组化法（IHC）检测各组小鼠海马5-HT系统及HPA轴蛋白表达水平；全自动蛋白表达分析系统（Simple Wes）检测各组小鼠海马BDNF等蛋白表达水平。结果 与空白组比较，模型组小鼠出现抑郁样行为，温阳解郁方及氟西汀可显著缓解。与空白组比较，模型组血浆CORT及ACTH含量显著升高（P<0.01）；与模型组比较，温阳解郁方及氟西汀组小鼠血浆CORT及ACTH含量明显降低（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，单胺类神经递质表达方面，模型组海马神经递质表达水平明显降低（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，温阳解郁方及氟西汀组小鼠海马神经递质表达水平明显升高（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，模型组小鼠5-HT能神经受到抑制、HPA轴异常激活，温阳解郁方及氟西汀可调控5-HT能神经及HPA轴的异常状态。与空白组比较，海马组织BDNF、TrkB mRNA及蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，温阳、解郁、温阳解郁方及氟西汀组小鼠海马BDNF、TrkB mRNA及蛋白表达水平明显升高（P<0.05，P<0.01）。结论 二次打击致抑郁小鼠的证候属性可能是阳虚肝郁型，温阳解郁方可能通过调节5-HT神经系统及HPA轴介导的BDNF信号通路，增加海马神经递质含量，进而缓解模型小鼠抑郁样行为。     

基于TGF-β/smad信号通路探讨七方胃痛颗粒对人胃腺癌AGS细胞上皮间质转化过程的影响＊

目的 探究七方胃痛颗粒对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导人胃腺癌细胞AGS上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal transition， EMT）过程的影响及其潜在分子机制。方法 为了探究七方胃痛颗粒对TGF-β1处理的AGS细胞增殖、迁移和侵袭的影响，实验分为四组：AGS细胞对照组，EMT空白模型组，中药血清组，TGF-β/smad通路抑制剂组，分别利用CCK8、细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。此外，通过免疫荧光检测EMT过程中相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin、14-3-3ζ、Smad2和p-Smad2/3）的表达水平。结果 与AGS细胞对照组相比，TGF-β1诱导EMT过程，显著促进AGS细胞增殖、迁移和侵袭，下调了E-cadherin的表达，上调了N-cadherin、14-3-3ζ、Smad2和p-Smad2/3的表达；与EMT空白模型组相比，中药血清组、TGF-β/smad通路抑制剂组显著抑制了细胞增殖、迁移和侵袭，上调了E-cadherin的表达，降低了N-cadherin、14-3-3ζ、Smad2和p-Smad2/3的表达。结论 七方胃痛颗粒通过调控TGF-β/smad信号通路从而抑制人胃腺癌AGS细胞的EMT过程。     

三物白散含药血清通过TGF-β/Smad通路抑制TGF-β1诱导的人胃癌SGC-7901细胞上皮间质转化

目的 基于转化生长因子-β/Smad（TGF-β/Smad）信号通路,体外研究三物白散含药血清对TGF-β₁诱导的人胃癌SGC-7901细胞上皮间质转化（EMT）的影响及其机制。方法 SPF级3月龄雄性SD大鼠28只,随机分为空白组及三物白散低、中、高剂量组,每组7只,三物白散低、中、高剂量组分别按0.031 25、0.062 5、0.125 g·kg^-1·d^-1的剂量灌胃,空白组以等体积超纯水灌胃。每日1次,连续7 d。末次给药后45 min经腹主动脉取含药血清;细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测三物白散高剂量组含药血清对SGC-7901细胞活性的影响;镜下观察经TGF-β₁和三物白散含药血清处理后的细胞形态变化;细胞划痕实验和Transwell实验分别检测经TGF-β₁诱导和三物白散低、中、高剂量组含药血清处理后SGC-7901细胞的迁移率和侵袭率;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞E-钙黏蛋白（E-cadherin）、Snail、TGF-β₁、Smad3、磷酸化（p）-Smad3、Smad7蛋白的表达。结果 与空白组比较,10%、15%、20%三物白散高剂量组含药血清可呈浓度-时间依赖性抑制SGC-7901细胞活性;与空白组比较,模型组细胞失去梭形形态,多数细胞变圆、变长;与模型组比较,各药物组细胞伪足减少,细胞变小且形态恢复正常;与空白组比较,模型组细胞迁移和侵袭能力增强（P<0.01）;与模型组比较,三物白散中、高剂量组处理SGC-7901细胞24 h后能显著抑制其迁移能力（P<0.01）;三物白散低、中、高剂量组处理SGC-7901细胞48 h后均能显著抑制其迁移能力（P<0.01）;与模型组比较,三物白散低、中、高组剂量组均能显著抑制其侵袭能力（P<0.01）;与空白组比较,模型组E-cadherin及Smad7蛋白的表达水平显著降低（P<0.01）,Snail、p-Smad3、TGF-β₁蛋白的表达水平显著升高（P<0.01）,Smad3总蛋白水平不变;与模型组比较,三物白散高剂量组E-cadherin蛋白显著增加（P<0.01）、三物白散中剂量组有明显上升（P<0.05）;Smad7蛋白三物白散中、高剂量组表达水平显著增加（P<0.01）;三物白散中、高剂量组Snail蛋白表达水平显著降低（P<0.01）;三物白散低、中、高组TGF-β₁、p-Smad3蛋白表达水平均显著降低（P<0.01）。三物白散含药血清可以有效地逆转TGF-β₁诱导的人胃癌SGC-7901细胞EMT,并可能通过TGF-β/Smad信号通路发挥作用。结论 三物白散能抑制TGF-β₁诱导的SGC-7901细胞EMT的发生,其机制可能与调控TGF-β/Smad信号通路有关。     

反式桂皮醛通过抑制前额皮质IL-1β改善阿尔茨海默病小鼠记忆障碍的作用研究＊

目的 探讨反式桂皮醛（Trans-cinnamaldehyde，TCA）对早老素1/2条件性双基因敲除（Presenilin1/2 conditional double knockout，PS cDKO）阿尔茨海默病（Alzheimer"s disease，AD）样小鼠的神经保护作用及其机制。方法 通过基因鉴定确定小鼠的基因型，将9月龄的PS cDKO小鼠和其同窝野生型对照小鼠随机分为4组：野生型组（wildtype，WT）、野生型 + TCA组（WT+TCA）、模型组（PS cDKO，cDKO）和模型 + TCA组（cDKO+TCA），每组15只。WT + TCA和cDKO + TCA组的小鼠给予含有TCA（240 ppm）的饲料治疗，WT和cDKO组的小鼠给予普通饲料，共治疗90天，后30天进行行为学测试，测试结束后取材进行分子生物学检测。其中，旷场实验观察TCA对PS cDKO小鼠运动能力的影响；新异物体识别实验观察TCA对PS cDKO小鼠辨识记忆的影响；Y迷宫实验观察TCA对PS cDKO小鼠空间记忆的影响；Western Blot检测TCA对PS cDKO小鼠前额皮质中突触蛋白表达的影响；qRT-PCR检测TCA对PS cDKO小鼠前额皮质中促炎症因子白介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）的mRNA水平的影响；ELISA检测TCA对PS cDKO小鼠前额皮层中IL-1β含量的影响。结果 TCA对PS cDKO小鼠的运动能力没有影响，可以改善其受损的短时辨识记忆（P < 0.05）和空间记忆（P < 0.001）。另外，TCA上调PS cDKO小鼠前额皮质中N-甲基-D-天冬氨酸受体（N-methyl-D-aspartate receptor，NMDAR）的亚基NR1（P < 0.05）和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II alpha（Ca/calmodulin-dependent protein kinases II alpha，αCaMKII）的磷酸化水平（P < 0.01）的表达，下调IL-1β的mRNA水平（P < 0.001）和减少IL-1β的产生（P < 0.05）。结论 TCA可能通过抑制前额皮质促炎症因子IL-1β和上调突触蛋白的表达发挥对PS cDKO小鼠的神经保护作用。     

大黄䗪虫丸经p38 MAPK/NF-κB/TGF-β1通路抑制小鼠硅肺纤维化的机制探讨

目的 运用中医经方大黄?虫丸干预小鼠硅肺纤维化模型，观察其对小鼠硅肺纤维化的影响并探讨其作用机制。方法 选用SPF级雄性昆明种小鼠36只，分为正常组，模型组，大黄?虫丸高、中、低剂量（1.560，0.780，0.390 g·kg^-1）组，汉防己甲素组（0.039 mg·kg^-1），每组6只。除正常组外，其余组均用静式染毒法连续40 d吸入二氧化硅（SiO₂）粉尘复制小鼠硅肺纤维化模型，并用相应药物进行干预28 d后处死小鼠，获得血清和肺组织样品，运用酶联免疫吸附测定（ELISA）方法检测血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α），白细胞介素-1β（IL-1β），IL-6和羟脯氨酸（HYP）的含量，运用肺组织样本进行病理切片观察，并采用蛋白免疫印迹法（Western blot），实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR）方法检测肺组织中p38 丝裂原活化蛋白激酶（MAPK），核转录因子-κB（NF-κB），转化生长因子-β₁（TGF-β₁），α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA），Smad2，Smad3，Smad7的蛋白和mRNA的表达水平。结果 与正常组比较，模型组中的TNF-α，IL-1β，IL-6和HYP的含量均明显升高，差异具有统计学意义（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，大黄?虫丸高剂量组能够明显降低小鼠血清中TNF-α，IL-6和HYP的含量（P<0.05，P<0.01），可见大黄?虫丸能够减轻硅肺小鼠肺部炎症。同时，与正常组比较，模型组中的p38 MAPK，NF-κB p65，TGF-β₁，α-SMA，Smad2和Smad3蛋白和mRNA表达水平均明显升高（P<0.05，P<0.01），Smad7蛋白和mRNA表达水平均显著降低（P<0.01）；与模型组比较，大黄?虫丸高剂量组中的p38 MAPK，NF-κB p65，TGF-β₁，α-SMA，Smad2和Smad3蛋白和mRNA表达水平均明显降低（P<0.05，P<0.01），Smad7蛋白和mRNA表达水平均明显升高（P<0.05，P<0.01）。结论 大黄?虫丸能改善硅肺小鼠肺泡炎症、细胞外基质沉积的情况，因而起到减轻纤维化的作用，这可能是通过调节p38 MAPK/NF-κB/TGF-β₁通路来实现的。     

三七皂苷通过抑制自噬减轻TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞损伤

目的 探讨三七皂苷（Panax notoginseng saponins,PNS）抗转化生长因子-β₁（TGF-β₁）诱导的肾小管上皮细胞损伤的作用及机制。方法 培养NRK-52E肾小管上皮细胞,分为空白组、TGF-β₁组、TGF-β₁+12.5 mg·L^-1 PNS组、TGF-β₁+25 mg·L^-1 PNS组、TGF-β₁+50 mg·L^-1 PNS组,PNS干预48 h,收集细胞及上清,采用倒置显微镜观察细胞形态;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测上皮间质转化（EMT）相关蛋白、自噬相关蛋白表达;流式液相多重蛋白定量技术检测炎症因子含量;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 与空白组比较,TGF-β₁诱导后细胞呈梭形改变且呈明显的EMT表现,即E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达明显下调（P<0.05）,α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达明显上调（P<0.05）,PNS处理后,大部分细胞形态趋向正常并逆转EMT的发生。同时,与空白组比较,TGF-β₁组肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平明显升高,IL-10水平下降,凋亡率增加（P<0.05）,PNS作用后,TNF-α水平下降,IL-10水平升高,细胞凋亡率明显下降（P<0.05）。并且TGF-β₁能明显上调肾小管上皮细胞自噬相关蛋白Beclin1和自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3Ⅱ/Ⅰ（LC3Ⅱ/Ⅰ）的表达（P<0.05,P<0.01）,而PNS抑制其表达。结论 PNS对TGF-β₁诱导的肾小管上皮细胞具有保护作用,其机制可能是通过抑制自噬来减轻炎症和凋亡,进而抵抗TGF-β₁诱导的损伤。     

酸枣仁汤联合氟西汀治疗肝郁血虚型抑郁症伴失眠的临床观察

目的 观察酸枣仁汤联合氟西汀治疗肝郁血虚型抑郁症伴失眠患者的临床疗效。方法 将120例肝郁血虚型抑郁伴失眠患者随机平均分为观察组与对照组，每组60例，对照组口服盐酸氟西汀胶囊（百忧解），观察组用酸枣仁汤联合盐酸氟西汀，两组疗程均为8周。用汉密尔顿抑郁量表（HAMD），日常生活能力量表（ADL）和匹兹堡睡眠质量指数量表（PSQI）评估临床疗效；ELISA法测定血浆中5-羟色胺（5-HT），去甲肾上腺素（NE），脑源性神经营养因子（BDNF），胶质细胞源性神经营养因子（GDNF），神经元特异性烯醇化酶（NSE）和S100β水平。结果 治疗8周后，与同组治疗前比较，观察组的HAMD和PSQI评分均显著下降（P<0.01）；ADL显著提高（P<0.01）；血浆5-HT，NE，GDNF和BDNF均显著增高（P<0.01）。治疗后，与对照组比较，观察组总有效率显著升高（P<0.01），HAMD评分和PSQI均显著降低（P<0.01），ADL评分显著升高（P<0.01）；血浆5-HT，NE，BDNF和GDNF水平均显著增高（P<0.01），而NSE和S100β水平均显著降低（P<0.01）。结论 酸枣仁汤联合氟西汀治疗肝郁血虚型抑郁症伴失眠的疗效优于单用氟西汀。其机制可能酸枣仁汤对氟西汀增加单胺类神经递质有协同作用，并与促进BDNF和GDNF的分泌，增加对神经细胞的保护有关。     

基于GSK-3β/CREB信号通路探讨加味肾气丸减轻糖尿病小鼠肾间质纤维化的作用机制

目的 观察加味肾气丸对糖尿病肾病小鼠肾功能及纤维化的影响,并基于糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）/环磷腺苷效应原件（CREB）信号通路探讨其可能的作用机制。方法 雄性db/db小鼠50只,db/m小鼠10只。50只db/db小鼠按体质量随机分为模型组、厄贝沙坦组、加味肾气丸低、中、高剂量组。db/m小鼠10只为正常组。加味肾气丸低、中、高剂量组中药颗粒剂混悬液灌胃,厄贝沙坦组给予厄贝沙坦混悬液灌胃,正常组及模型组予等体积蒸馏水灌胃,连续干预12周。分别记录治疗前后小鼠的血糖和尿白蛋白肌酐比（UACR）及小鼠肾脏中GSK-3β、CREB、转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、钙黏蛋白E（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、纤维粘连蛋白（FN）、纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）、Ⅳ型胶原蛋白（Col Ⅳ）蛋白的表达水平,并观测小鼠肾脏的病理损伤程度。结果 与正常组比较,模型组小鼠血糖、UACR水平及肾脏中GSK-3β、TGF-β₁、E-cadherin、Vimentin、FN、PAI-1、Col Ⅳ蛋白的表达水平明显升高（P<0.05）,CREB蛋白表达水平明显下降（P<0.05）,小鼠肾脏病理损伤严重;与模型组比较,肾气丸低、中、高剂量组和厄贝沙坦组小鼠血糖、UACR水平及肾脏中GSK-3β、TGF-β₁、E-cadherin、Vimentin、FN、PAI-1、Col Ⅳ蛋白的表达水平均有不同程度下降（P<0.05）,CREB蛋白表达水平升高（P<0.05）,小鼠肾脏病理损伤有不同程度的减轻。结论 肾气丸可有效降低血糖、改善肾功能和纤维化,其作用机制与其抑制GSK-3β/CREB信号通路有关。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨黑逍遥散对AD模型大鼠神经炎症的影响

目的 研究黑逍遥散是否可以通过调控激活Wnt β-连环蛋白（β-catenin）信号通路抑制阿尔茨海默病（AD）大鼠海马区炎症反应，改善AD大鼠认知和记忆功能障碍。方法 90只雄性Wistar大鼠先随机分别选择12只作为空白组和假手术组，剩余大鼠在左右两侧海马区注射β淀粉样蛋白₄₂（Aβ₄₂）制造AD模型大鼠，随机分为模型组、黑逍遥散低、中、高剂量组和多奈哌齐组，每组12只，并连续42 d给予相应剂量黑逍遥散和多奈哌齐灌胃。尼氏染色观察海马CA1区病理形态学变化；Morris水迷宫实验检测1~5 d大鼠逃避潜伏期的变化，第6天的空间探索能力。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠海马组织和血清中白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测检测海马中海马区糖原合成激酶-3β（GSK-3β）、β-catenin、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）的蛋白表达水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠GSK-3β、β-catenin、PPARγ mRNA的水平。结果 与空白组比较，模型组大鼠海马CA1区神经元数量明显减少，排布不均，细胞体损坏比较明显，尼式小体不清；模型组大鼠第3~5天的逃避潜伏期均相比治疗组显著延长（P<0.01），跨台次数显著减少（P<0.01）；模型组大鼠血清和海马组织中IL-10水平显著降低，IL-6、TNF-α水平显著升高（P<0.01）；模型组GSK-3β蛋白和mRNA显著升高，β-catenin、PPARγ蛋白表达显著降低（P<0.01），差异较为明显；与模型组比较，黑逍遥散中、高剂量组和盐酸多奈哌齐组大鼠神经元细胞数量分布较多，排列整齐，结构完整，尼式小体清晰明确；黑逍遥散中、高剂量组和多奈哌齐组的第3~5天逃避潜伏期显著缩短（P<0.01），跨越平台次数显著增多（P<0.01）；大鼠海马组织和血清中IL-10的表达水平明显升高，IL-6和TNF-α显著降低（P<0.01）；大鼠海马中GSK-3β蛋白和GSK-3β mRNA表达明显降低，β-catenin、PPARγ蛋白和β-catenin、PPARγ mRNA表达水平显著升高（P<0.01）。盐酸多奈哌齐组与黑逍遥散高剂量组之间各指标比较，差异无统计学意义。结论 黑逍遥散可以通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制AD大鼠海马区炎症反应，改善AD模型大鼠认知和记忆障碍。     

基于TGF-β1/Smads信号通路探讨当归芍药散对卵巢储备功能低下模型大鼠的影响

目的 观察当归芍药散对雷公藤多苷片联合应激所致的卵巢储备功能下降（DOR）模型大鼠卵巢储备功能的改善作用,并探讨转化生长因子-β₁ （TGF-β₁）/Smads信号通路在其中的作用机制。方法 选取性周期正常的雌性SD大鼠48只,随机分为正常组8只和模型制备组40只。模型制备组以灌胃雷公藤多苷片（50 mg·kg^-1）联合随机应激法建立模型,时间15 d,造模成功后将其随机分为模型组、当归芍药散低、中、高剂量组（3.96,7.92,15.84 g·kg^-1）及戊酸雌二醇组（0.09 mg·kg^-1）各8只,各组在继续给予应激的同时,分别用生理盐水,低、中、高剂量当归芍药散及戊酸雌二醇进行相应剂量灌胃干预,连续15 d。各组大鼠每日观察动情周期,干预结束后处死大鼠,计算大鼠卵巢脏器指数,苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠卵巢组织病理变化,免疫组化法（IHC）检测大鼠卵巢组织中TGF-β₁,转化生长因子-β₁受体（TGF-β₁R）蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠卵巢组织中Smad2,Smad3,Smad7 mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠动情周期紊乱率明显升高（P<0.05）,卵巢指数明显下降（P<0.01）,卵巢组织中TGF-β₁,TGF-β₁R蛋白及Smad2,Smad3 mRNA表达水平降低（P<0.01）,Smad7 mRNA表达水平上升（P<0.01）;与模型组比较,中药3组与戊酸雌二醇组大鼠动情周期均有不同程度改善（P<0.05）,卵巢指数均有不同程度回升,其中以中、高剂量组最为明显（P<0.05,P<0.01）,卵巢组织中TGF-β₁,TGF-β₁R蛋白及Smad2,Smad3 mRNA水平均有不同程度升高（P<0.01）,Smad7 mRNA表达水平均下降（P<0.01）,其中TGF-β₁,TGF-β₁R蛋白表达改善程度以中剂量组和戊酸雌二醇组最为明显。结论 当归芍药散能够明显改善DOR大鼠卵巢储备功能,且作用机制与调控TGF-β₁/Smads信号通路密切相关。     

鳖甲煎丸通过Wnt/β-catenin信号通路逆转大鼠肝卵圆细胞EMT的机制

目的 研究鳖甲煎丸对转化生长因子-β₁（TGF-β₁）诱导的大鼠肝卵圆细胞WB-F344上皮间质转化（EMT）的影响,探讨其逆转EMT改变的作用机制。方法 将WB-F344细胞随机分为空白组,TGF-β₁模型组（10 μg·L^-1TGF-β₁）,鳖甲煎丸低剂量组（10 μg·L^-1TGF-β₁+0.55 g·kg^-1鳖甲煎丸）,鳖甲煎丸中剂量组（10 μg·L^-1TGF-β₁+1.1 g·kg^-1鳖甲煎丸）,鳖甲煎丸高剂量组（10 μg·L^-1TGF-β₁+2.2 g·kg^-1鳖甲煎丸）,除空白组外,均采用TGF-β₁诱导WB-F344细胞构建EMT模型,分别加入鳖甲煎丸低、中、高剂量含药血清处理细胞,采用细胞划痕实验检测WB-F344细胞迁移能力的改变;使用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测E-钙黏蛋白（E-cadherin）,N-钙黏蛋白（N-cadherin）,波形蛋白（Vimentin）表达的变化;使用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测β-连环蛋白（β-catenin）mRNA表达的改变;使用细胞免疫荧光法检测β-catenin的表达。结果 与空白组比较,TGF-β₁诱导WB-F344细胞4 d,WB-F344细胞间隙从紧密逐渐变得松散,细胞形态由鹅卵石状向成纤维样细胞转变,且E-cadherin蛋白表达降低,N-cadherin蛋白表达升高（P<0.01）,说明成功构建了WB-F344细胞EMT模型。划痕实验结果显示,与空白组比较,TGF-β₁模型组WB-F344细胞的迁移能力增强（P<0.01）;与TGF-β₁模型组比较,鳖甲煎丸中、高剂量组可以明显抑制WB-F344细胞的迁移能力（P<0.05）。Western blot结果显示,与空白组比较,TGF-β₁模型组E-cadherin蛋白表达水平降低,N-cadherin,Vimentin蛋白表达水平升高（P<0.01）;与TGF-β₁模型组比较,鳖甲煎丸中、高剂量组E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin,Vimentin蛋白表达降低（P<0.05,P<0.01）。Real-time PCR结果显示,与空白组比较,TGF-β₁模型组中β-catenin mRNA表达升高（P<0.01）;与TGF-β₁模型组比较,鳖甲煎丸低、中、高剂量组中β-catenin mRNA的表达降低（P<0.01）。细胞免疫荧光结果显示,与空白组比较,TGF-β₁模型组β-catenin在细胞核内荧光表达增强;与TGF-β₁模型组比较,鳖甲煎丸低、中、高剂量组β-catenin在细胞核内荧光表达减弱,且鳖甲煎丸对细胞核内β-catenin抑制作用与其浓度呈正相关。结论 鳖甲煎丸可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路,逆转TGF-β₁诱导WB-F344细胞的EMT进程,抑制WB-F344细胞的迁移能力。     

基于NLRP3/Caspase-1/IL-1β通路探讨温阳解郁方调节小鼠海马突触可塑性的机制

目的 探讨温阳解郁方改善“母婴分离+束缚应激（MS+RS）”抑郁小鼠神经炎症，保护突触可塑性的作用机制。方法 仔鼠出生第0天（PD0）随机分为空白组和造模组。造模采用母婴分离联合束缚应激21 d建立抑郁模型，PD21离乳后剔除雌鼠，随机分为模型组、温阳组、解郁组、温阳解郁组、氟西汀组，每组15只，PD21~PD111各给药组药混饲料给药，给药剂量分别为5.85、12.03、16.71 g·kg^-1，2.6 mg·kg^-1。糖水偏好、开放旷场、O迷宫及新物体识别行为学实验评估小鼠焦虑抑郁和学习记忆能力；免疫组化法（IHC）观察海马小胶质细胞离子钙接头蛋白-1（Iba-1）；高效液相色谱法（HPLC）检测海马去甲肾上腺素（NE）、肾上腺素（E）含量；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测海马白细胞介素-18（IL-18）、白细胞介素-1β（IL-1β）含量；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测海马NOD样受体蛋白3（NLRP3）、凋亡相关斑点蛋白（ASC）、胱天蛋白酶-1（Caspase-1）、IL-1β、突触素（Syn）、突触后致密物95（PSD95）蛋白表达。结果 与空白组比较，模型组小鼠糖水偏好率、5 min中央运动时间、运动总距离、开臂停留时间和认知指数明显降低（P<0.05，P<0.01），IHC结果显示，小胶质细胞呈“阿米巴”激活态，Iba1明显增加，海马NE、E含量显著减少（P<0.01），IL-1β和IL-18含量显著增加（P<0.01），PSD95、Syn蛋白表达明显减少（P<0.05，P<0.01），NLRP3、ASC、Caspase-1和IL-1β蛋白表达明显增加（P<0.05，P<0.01）。与模型组比较，温阳解郁组和氟西汀组小鼠糖水偏好率、认知指数增加，5 min中央运动时间、开臂停留时间、认知指数明显增加（P<0.05，P<0.01），小胶质细胞形态恢复正常，Iba1明显降低，海马NE、E含量明显增加（P<0.05，P<0.01）、IL-1β和IL-18含量显著降低（P<0.01），PSD95、Syn蛋白表达显著增加（P<0.01）、NLRP3、ASC、Caspase-1和IL-1β蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01），各中药组以温阳解郁方效果最佳。结论 温阳解郁方可能通过调节NLRP3炎症通路，缓解小胶质细胞诱导的神经炎症，增加海马神经递质含量，并改善突触可塑性，减轻MS+RS小鼠抑郁样行为，其综合效果优于温阳方和解郁方。     

电针通过增强突触可塑性改善抑郁样小鼠社交与空间记忆能力作用研究※

目的 观察电针百会、印堂对抑郁样小鼠社交与空间记忆能力的影响。方法 将48只SPF级雄性C57/BL6小鼠随机分为对照组、模型组、电针组、氟西汀组各12只,采用慢性不可预见性温和性应激制备抑郁样小鼠模型,电针组给予电针百会穴、印堂穴（连续波,2 Hz,1 mA,30 min/d）,氟西汀组给予10 mg/kg氟西汀,每日干预1次,连续干预10 d。使用糖水偏好实验、强迫游泳实验、悬尾实验、三箱社交实验、Y迷宫实验评估各组小鼠抑郁行为、社交能力及空间记忆,使用离体电生理技术记录小鼠海马场电位,评估各组小鼠突触可塑性。结果 与对照组比较,模型组小鼠糖水消耗、社交时间、Y迷宫新奇臂进入次数与探索时间、fEPSP斜率均明显降低（P<0.01）,强迫游泳与悬尾实验不动时间均显著增加（P<0.01）。与模型组比较,电针组、氟西汀组小鼠糖水消耗、社交时间和Y迷宫新奇臂进入次数及探索时间、fEPSP斜率均明显增加（P<0.05或P<0.01）,强迫游泳与悬尾实验不动时间均显著减少（P<0.05或P<0.01）。与氟西汀组比较,电针组小鼠糖水消耗、悬尾实验不动时间、fEPSP斜率均明显降低（P<0.05）,强迫游泳不动时间、社交时间和Y迷宫新奇臂进入次数及探索时间均无明显改变（P>0.05）。结论 电针能够改善小鼠抑郁样行为,并且可以改善海马突触可塑性,改善小鼠社交能力与空间学习记忆。     

下瘀血汤通过Wnt/β-catenin和TGF-β1/Smad信号串联干预肾纤维化大鼠的机制

目的 观察下瘀血汤对腺嘌呤致肾纤维化大鼠的保护作用及其对Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）和转化生长因子-β₁（TGF-β₁）/Smad信号通路的影响。方法 50只SPF级SD雄性大鼠随机分为正常组,模型组,氯沙坦组（9 mg·kg^-1）,下瘀血汤低、高剂量组（2.43,4.86 g·kg^-1）,采用腺嘌呤灌胃（250 mg·kg^-1）诱导肾纤维化大鼠模型,造模连续24 d,随后给予相应药物,给药连续30 d。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定血肌酐（SCr）和尿素氮（BUN）水平;苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠肾脏组织病理改变情况;马松（Masson）染色观察大鼠肾脏胶原沉积情况;免疫组化法（IHC）和蛋白免疫印迹法（Western blot）测定大鼠肾脏Wnt5a,Wnt5b,β-catenin,TGF-β₁,Smad4,Smad7蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠SCr和BUN水平显著升高（P<0.01）,给予下瘀血汤干预后SCr和BUN水平显著降低（P<0.01）;HE和Masson染色结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肾间质损伤严重且肾间质胶原大量沉积,给予下瘀血汤干预后肾间质损伤减轻,胶原物质沉积减少;IHC和Western blot结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肾脏Wnt5a,β-catenin,TGF-β₁表达上调（P<0.01）,Wnt5b,Smad7表达下调（P<0.01）,给予下瘀血汤干预后Wnt5a,β-catenin,TGF-β₁表达下调（P<0.01）,Wnt5b,Smad7表达上调（P<0.01）,且下瘀血汤低、高剂量组间差异无统计学意义。结论 下瘀血汤对腺嘌呤致肾纤维化大鼠具有保护作用,其机制与抑制Wnt/β-catenin和TGF-β₁/Smad信号通路串联相关。