单细胞凝胶电泳图像分析系统的研制及应用

目的 编制单细胞凝胶电泳（SCGE）图像分析系统（IMI1．0）。方法 利用Dephi5作为工具,设计的分析指标有长度、强度、 矩类以及头尾DNA含量比等4类指标。结果 应用该系统检测了谷胱甘肽（GSH）在H2O2致DNA损伤中的作用,尾长、尾重心、Olive尾矩、尾惯量、尾分布矩、尾DNA含量（％）以及尾／头比等指标与H2O2浓度存在明显的剂量－效应关系。Olive尾矩与H2O2浓度的剂量－效应关系线性良好,是SCGE检测DNA损伤的最适指标。10μmol/L GSH能抑制H2O2对DNA的断裂损伤。结论 IMI1．0操作快捷谁,设计的指标能满足SCGE图像分析的要求。     

单细胞凝胶电泳技术及其应用进展

单细胞凝胶电泳又称彗星试验 ,是一种在单细胞水平上检测DNA单、双链断裂和碱性不稳定位点的方法 ,具有敏感、稳定、快速的优点。近些年来 ,该方法广泛应用于DNA修复、遗传毒理、环境监测和细胞凋亡的研究。本文就彗星试验结合荧光原位杂交、检测DNA碱基氧化损伤、以及在染色、玻片储存和彗星图像分析方面的进展进行了综述     

单细胞凝胶电泳技术的研究进展与应用

单细胞凝胶电泳技术是一种在单细胞水平上检测有核细胞ＤＮＡ损伤与修复的方法。本文总结了该实验技术的基本原理、发展、方法和它在遗传毒理学、放射生物学、环境生物监测、人类流行病学和衰老学等领域中的应用现状。     

DNA损伤检测—单细胞凝胶电泳技术的研究

单细胞凝胶电泳(SCGE)又称为彗星实验,是一种可以在单个细胞水平上检测DNA断裂的技术。近年来该技术被广泛应用于特定的DNA损伤、DNA特异性染色、DNA修复、遗传毒理、环境生物监测等方面的研究。在前人的基础上对该实验方法做了进一步的研究和改进,使改进后的方法更加快速简捷、经济可行。     

单细胞凝胶电泳技术的进展及应用

单细胞凝胶电泳技术（ｓｉｎｇｌｅｃｅｌｌｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓａｓｓａｙ，ＳＣＧＥ）又称彗星试验（Ｃｏｍｅｔａｓｓａｙ），是一种快速、灵敏、简便、价廉、重复性好的检测单细胞ＤＮＡ损伤的方法。首先由Ｏｓｔｌｉｎｇ等（１９８４）建立，随后Ｓｉｎｇｈ等（１９８８）改善了试验条件，使之得以更广泛地应用。ＳＣＧＥ在遗传毒理学、肿瘤学、放射生物学、人群监测、环境监测、临床诊断与治疗等方面有着广泛的应用前景。我们就ＳＣＧＥ的发展、原理、分析方法及在遗传毒理学、ＤＮＡ损伤与修复、人群监测、环境监测…     

单细胞凝胶电泳技术的应用与进展

1　检测原理ＤＮＡ为紧密的四级超螺旋结构 ,一般情况下 ,部分ＤＮＡ的单链断裂对ＤＮＡ的结构影响不大 ,不容易释放。在单细胞凝胶电泳 (ＳＣＧＥ)实验中 ,由于细胞裂解液的作用 ,膜结构受到破坏 ,胞内成份扩散到裂解液中 ,ＤＮＡ由于相对分子质量大留在原位。在碱性条件下 ,ＤＮＡ解螺旋 ,ＤＮＡ的断链和亲碱性片段释放 ,在电场中移动 ,形成彗星样图像。通过测定ＤＮＡ迁移部分的光密度或迁移距离可以测定ＤＮＡ的损伤程度[1] 。2　实验方法目前多采用Ｓｉｎｇｈ等的“三明制”法制板[1] ,第一层为正常熔点琼脂糖(ＮＭＡ) ,第二层为含有细…     

单细胞凝胶电泳试验在人群生物监测研究中的应用

单细胞凝胶电泳试验 (SCGE)或称彗星试验 ,是一种在单细胞水平上评价遗传损伤 ,进行人群生物监测的新方法。由于技术简单 ,费用低 ,能够进行快速、准确的大样本的人群监测 ,筛检对DNA损伤因素敏感的高危人群。本文就彗星试验的原理及发展 ,在环境暴露、临床、生活方式等研究方面的应用及其敏感性、影响因素作一综述     

单细胞凝胶电泳法检测焦炉作业工人淋巴细胞DNA损伤

目的 :利用单细胞凝胶电泳技术 ,检测焦炉作业工人外周血淋巴细胞 DNA的损伤 ,以了解作业工人所受的遗传损害。方法 :分别抽取炼焦和非炼焦工人进行流行病学调查 ,同时采用单细胞凝胶电泳技术 ,对每一位对象观察 DNA断裂分级 (将 DNA断裂损伤按其损伤程度分级 )。结果 :焦炉作业工人的 DNA断裂程度随生产环境的不同而不同 ,其炉顶、炉侧组均明显高于对照组 ,差异有显著性 (P<0 .0 1) ;专业工龄 10～年的工人 DNA损伤程度远高于专业工龄 0～年及 5～年者 (P<0 .0 1) ;吸烟与 DNA损伤呈正相关 ,而饮酒与 DNA损伤程度未见相关性。结论 :单细胞凝胶电泳法能够快速、敏感地检测炼焦工人淋巴细胞的 DNA损伤 ,提示对于检测环境致癌物和致突变物可能是一有用的工具     

单细胞凝胶电泳检测二硫化碳致人淋巴细胞DNA损伤

目的应用单细胞凝胶电泳(SCGE)方法体外检测二硫化碳(CS2)染毒对人外周血淋巴细胞DNA损伤、损伤程度以及有无剂量-效应关系.方法将未处理的人外周血淋巴细胞作为阴性组,用H2O2染毒的人外周血淋巴细胞作为阳性对照组(50μmol/LH2O2染毒),用不同浓度CS2处理的人外周血淋巴细胞设为4个剂量组(500 μmol/L组、1 000 μmol/L组、2 500 μmol/L组、5 000 μmol/L组),进行SCGE实验.结果随CS2染毒浓度增加,淋巴细胞DNA损伤加重,表现在彗头直径变小,分别为(5.04±0.47)、(4.95±0.65)、(4.87±0.74)、(4.92±0.51)μm,与阴性对照组比较,差异均有显著性(P<0.01);彗尾长度增加,分别为(5.78±7.04)、(12.04±8.95)、(16.12±8.86)、(17.28±8.63)μm,与阴性对照组比较,差异均有显著性(P<0.01).DNA拖尾率在500 μmol/L组(48.73%)明显增加,阴性对照组为11.56%;1000μmol/L组后未见随剂量增加损伤率增加的趋势,依次为73.60%、84.40%、86.86%,经Y2检验,6个组之间差异有显著性(P<0 01).结论 CS2体外染毒对人外周血淋巴细胞DNA有一定损伤,但CS2染毒到达一定浓度后,未见随剂量增加而DNA损伤程度加重的趋势.     

单细胞凝胶电泳法检测苯作业工人淋巴细胞DNA损伤

目的 用碱性单细胞凝胶电泳技术检测苯作业工人外周血淋巴细胞DNA损伤,研究苯的遗传毒性。方法 采用碱性单细胞凝胶电泳技术。将接苯工人按累积浓度、历史平均浓度和测定当时8h时间加权平均浓度（8hTWA）分组。观察指标包括DNA断裂分级（将DNA断裂损伤细胞按其损伤程度分级）及DNA彗星尾长（彗头末端到彗尾的长度）。结果 接苯工人DNA断裂程度及DNA彗星尾长[Ig(尾长＋1）]两个参数,接苯组按累积浓度、历史平均浓度和8hTWA浓度计算,均明显高于对照组,差异有显著性（P＜0．01）,并有明显的剂量－反应关系。结论 彗星试验能够快速,敏感地检测苯引起的人类淋巴细胞DNA损伤,提示对于检测环境致癌物和致突变物可能是一有用工具。     

神经管畸形DNA损伤单细胞凝胶电泳检测

目的 利用单细胞凝胶电泳技术检测大鼠神经管畸形发生过程中DNA损伤及影响因素.方法 Wistar孕鼠20只.按体重随机分为神经管畸形模型组和生理盐水对照组.模型组于孕13d一次性腹腔注射环磷酰胺12.5mg.(kg·bw),正常对照组于孕13d给予0.3ml的生理盐水.孕14d时各组随机处死2只孕鼠.每只孕鼠各取3只胎鼠的脑组织,利用单细胞凝胶电泳技术检测神经管畸形发生过程中胚胎神经细胞DNA损伤情况并分析影响因素.孕20d时处死各组动物,检测动物的生长发育情况以及各组的畸形发生率.结果 正常对照组的胎鼠神经细胞呈现典型的圆形,而模型组出现特征性彗星形态,即很小的彗星头,大而圆的彗星尾,且彗星尾长[(16.35±5.59)μm]明显高于对照组[(7.28±1.76)μm].于孕20d时处死各组动物,发现模型组动物胎鼠的生长发育指标包括身长、体重和尾长均明显小于对照组(P＜0.05),畸形发生率(67%)明显高于对照组(P＜0.05).细胞悬液和胶的浓度、裂解及荧光染色的时间是影响实验的因素.结论 单细胞凝胶电泳技术可以检测神经管畸形发生时胚胎神经细胞中DNA损伤情况,注意实验的影响因素可增加该法的特异性和灵敏度.     

单细胞凝胶电泳技术的现场应用及健康人群的表现特征

目的　介绍一种改良的单细胞凝胶电泳技术同时检测血白细胞DNA链断裂和DNA-蛋白交联并将其应用于部分健康人群。方法　60名健康人群,每人血样分A、B两份,B份在细胞裂解后加蛋白酶K,其余同常规方法;B份尾矩为总的DNA链断裂量,B份与A份尾矩的差值为DNA-蛋白交联量。结果　DNA链断裂在性别、年龄和饮酒与否方面的分布无显著性差异,而吸烟可使其显著增加;上述各因素对DNA-蛋白交联均无显著影响,后者在该研究人群中的分布呈正态(2.46×10     

基于单细胞凝胶电泳技术快速检测食品添加剂对V79细胞DNA损伤作用的研究

目的快速检测啤酒花浸膏、溴酸钾和焦磷酸钠等3种食品添加剂对V79细胞DNA的损伤作用。方法采用V79细胞培养和单细胞凝胶电泳技术,借鉴单细胞凝胶电泳技术（SCGE）图像分析系统IM11．0对彗星图像进行分析,观察指标有尾长、尾重心、olive尾矩、尾惯量、尾分布矩、尾长／头长比、尾DNA含量（％）等7个计量指标。结果实验结果表明,溴酸钾和焦磷酸钠的剂量分别在75～300ug／ml和25．100umol／ml范围内,均对V79细胞DNA有明显的损伤作用,存在剂量-反应关系;啤酒花浸膏的剂量在25～100ug／ml范围内,不引起V79细胞DNA的损伤作用。结论本研究方法与传统的彗星实验相比,具有分析指标多,操作方便等优点,可应用于快速检测食品添加剂诱变性的筛选试验。     

单细胞凝胶电泳法分析指标及检测DNA交联的标准断裂剂的研究

目的 寻求单细胞凝胶电泳计算机成像与分析系统中的有效分析指标，为Ｈ２Ｏ２在１℃条件下作为检测ＤＮＡ交联的标准ＤＮＡ断裂剂提供依据。方法 常规培养Ｖｅｒｏ细胞 悬浮在ＰＢＳ中，Ｈ２Ｏ２染毒，分别在３７℃和１℃条件下孵育１ｈ，常规单细胞凝胶电泳，专用软件分析其图像。结果 Ｈ２Ｏ２的染毒浓度在２５００μｍｏｌ／Ｌ以下时，尾长、尾面积、尾矩和尾积分等指标均有剂量－效主尖关系（Ｔ＝３７℃时，ｒ分别为０．６８     

溴虫腈对小鼠脾细胞和肝细胞DNA损伤作用

目的　探讨溴虫腈对小鼠脾细胞和肝细胞DNA的损伤作用。方法　将溴虫腈按 4 9,9 8及 19 6mg/kg 3个不同剂量 ,一次性灌胃染毒小鼠 ,2 4h后用单细胞凝胶电泳技术检测小鼠脾、肝细胞的拖尾率和DNA迁移距离。结果　脾细胞 3个剂量组拖尾细胞率和DNA迁移距离分别是对照组的 4 8～ 17 6倍 (P <0 0 0 1)和 1 6～ 2 9倍(P <0 0 5～ 0 0 1) ;肝细胞 3个剂量组的拖尾细胞率和DNA迁移距离分别是对照组的 7 5～ 10 4倍 (P <0 0 0 1)和2 0～ 2 8倍 (P <0 0 1～ 0 0 0 1) ;且表现出明显的剂量效应关系 (3者的r值依次分别为 0 995,0 9987和 0 9999,P <0 0 5) ;在相同剂量下 ,肝细胞拖尾细胞率比脾细胞均明显增高 (P <0 0 1) ;在 4 9mg/kg剂量水平 ,肝细胞的DNA迁移距离比脾细胞的DNA迁移距离也明显增高 (P <0 0 5) ;而在 9 8和 19 6mg/kg剂量水平 ,2种细胞的DNA迁移距离无显著性差异 (P >0 0 5)。结论　溴虫腈能引起小鼠脾脏和肝脏细胞DNA的损伤 ,且对肝细胞DNA损伤更严重