Preparation of monoclonal antibody to P53 and its clinical application

Objective:The aim of this study was to prepare monoclonal antibody against P53, a kind of tumor suppressor protein,and use the antibody initial y in clinical immunoassay. Methods:Monoclonal antibody wa...     

P53突变产物在睑板腺癌中的增强表达及其意义

 我们采用免疫组化S-P法, 对17例石蜡包埋睑板腺癌及癌旁组织标本的P⁵³突变蛋白表达进行了检测。 结果:17例癌组织有12例表达阳性, 阳性率71%。其中分化型7例, 6例呈阳性(86%)表达。在一组原发灶及淋巴结转移癌配对标本中, 同一病人之两个部位P⁵³突变蛋白表达差异无明显意义。 癌旁(睑缘)组织17例中5例上皮有异常增生, 且同时伴有P⁵³突变蛋白呈强阳性表达。 以上结果提示:抑癌基因P53的突变在睑板腺癌的发生中是一个比较常见的基因改变, 且在分化型癌的发生中表现明显; P⁵³基因异常发生在肿瘤转移之前且在淋巴道转移中可能起重要作用; P⁵³突变蛋白在癌旁上皮异型增生组织中的过度表达具有十分重要的意义。     

P53、P63、P73蛋白在骨肉瘤中的表达及相关性研究

目的 研究P53、P63、P73蛋白在骨肉瘤中的表达,探讨它们之间的相关性及其在骨肉瘤发生发展中的可能作用。方法 应用免疫组织化学方法和图像分析技术检测52例骨肉瘤标本P53、P63和P73蛋白的表达。结果 骨肉瘤P53、P63、P73蛋白表达水平高于正常骨组织,差别均有显著意义(P<0.01),三者表达与患者性别、年龄及病理类型无关;P53、P63、P73蛋白在骨肉瘤病理Ⅰ级的表达明显低于Ⅱ、Ⅲ级(P<0.05);P73蛋白过表达与肿瘤直径大小及侵犯转移有关(P<0.05),P63与P53蛋白,P73蛋白与P53蛋白表达之间存在着正相关(r=0.328,0.346,P<0.05)。结论 P53、P63、P73蛋白以高表达方式参与骨肉瘤发生发展,并与骨肉瘤进程密切相关。p53基因突变可能与p63、p73基因表达异常有关。     

抗上皮细胞黏附分子单克隆抗体的制备及应用

 目的　制备抗人类上皮细胞黏附分子（EpCAM）的单克隆抗体（mAb）并对其进行鉴定及初步功能研究。方法　将原核表达的EpCAM免疫BALB／c小鼠,按常规方法将小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤Sp2／0细胞进行融合,用酶联免疫吸附试验进行阳性克隆的筛选。免疫印迹法对制备的mAb进行鉴定,用免疫组织化学法对临床的3份大肠癌组织样本进行初步检测。结果　酶联免疫吸附试验筛选获得了3株分泌抗EpCAM的mAb杂交瘤细胞株1B10、3G2和4E11。免疫印迹检测结果表明,3株杂交瘤细胞株分泌的抗体均能与EpCAM呈阳性反应,与GST蛋白不发生反应。免疫酶组织化学染色结果显示3株mAb能使3份大肠肿瘤组织样本呈现阳性反应,效果优于对照mAb。结论　成功地制备了3株识别大肠癌细胞表面抗原的mAb,这些mAb在大肠癌的诊断中可能具有一定潜在的应用价值。     

ScFv及重组TNF-α双功能抗体融合蛋白的表达及其软件预测

目的:利用生物信息学网络资源分析融合蛋白的二级结构及其理化性质,以及探讨分泌型抗肝癌单链双功能抗体基因的表达。方法:在构建融合蛋白之前,运用DNA分析软件(DNAssist)和蛋白质分析软件(ANTHEPROTV5)分析融合蛋白的氨基酸序列、二级结构及其理化性质。采用PCR方法将人工合成的抗体分泌信号肽序列加在抗肝癌ScFv基因5′端,其3′与人的肿瘤坏死因子TNFα基因连接构成分泌型单链双功能抗体ScFvTNFα基因,将该基因克隆至逆转录病毒表达载体PLxSN,用NIH3T3测定病毒滴度,将重组病毒感染人肝癌细胞命名为HCC/ScFvTNFα,以PCR,RTPCR以及Westernblotting对ScFvTNFα基因修饰的HCC9204细胞进行鉴定。结果:运用DNAssist核酸序列分析软件分析ScFvTNFαDNA序列翻译并获得了氨基酸序列,运用ANTHEPROTV5蛋白质分析软件分析融合蛋白的二级结构及其理化性质。经酶切及PCR分析鉴定,成功地构建了融合基因表达载体pL(ScFvTNFα)SN,并获得高滴度产毒细胞株,以及Westernblotting分析证明ScFvTNFα基因融合蛋白的表达。结论:利用生物信息学网络资源进行分析预测融合蛋白的性质,为进一步探讨单链双功能抗体基因融合蛋白提供依据。     

Alterations of theTP53 gene and TP53 protein expression in epithelial ovarian cancer before and after chemotherapy

Background A role for theTP53 (alias p53) tumor-suppressor gene in chemoresistance has recently been discussed, but little is known about the clinical relevance of theTP53 gene to chemoresistance. To elucidate the relevance ofTP53 status to chemoresistance, we investigated theTP53 gene and TP53 protein expression in tumors from the same patients, before and after chemotherapy. Methods Twenty-one patients with ovarian cancer, who had residual disease after primary surgery, were studied. These patients received chemotherapy consisting of cisplatin, doxorubicin, and cyclophosphamide, and then underwent a second surgery. Polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism analysis and cycle sequencing were performed to determineTP53 mutation. TP53 protein was detected by Western blot analysis. Results Of the 21 patients studied, 9 responded to chemotherapy. Mutation of theTP53 gene was seen in 7 patients (2 responders and 5 nonresponders) before chemotherapy. After chemotherapy, another mutation of the gene was observed in 5 patients, all of whom were nonresponders. TP53 protein was detected in 10 patients (3 responders and 7 nonresponders) before chemotherapy. After chemotherapy, the expression of TP53 protein increased in these 3 nonresponders, and became positive in 2 other nonresponders. Conclusions This study showed for the first time in clinical investigation that alterations toTP53 could develop in association with chemotherapy, and thatTP53 status may relate to the mechanisms of chemoresistance in patients with epithelial ovarian cancer.     

Generation of monoclonal antibody against human androgen receptor with synthetic peptide

Prostate cancer is one of the common malignant tumor in man. The incidence of the disease has been growing in the past few years.[1] The metastasis of patients is the chief cause of death.[2] The level of AR expression in prostate cancer is an important index to estimate its prognosis and provide scientific basis for make clinical cure scheme. Sometimes, the relation between AR and other tumor cause people's attention.[3-4] At present, the method of convention test AR is DCC and IHC meth…     

ScFv及重组TNF-α双功能抗体融合蛋白的表达及其软件预测

目的：利用生物信息学网络资源分析融合蛋白的二级结构及其理化性质，以及探讨分泌型抗肝癌单链双功能抗体基因的表达。方法：在构建融合蛋白之前，运用DNA分析软件（DNAssist）和蛋白质分析软件（ANTHEPROT V5）分析融合蛋白的氨基酸序列、二级结构及其理化性质。采用PCR方法将人工合成的抗体分泌信号肽序列加在抗肝癌ScFv基因5’端，其3’与人的肿瘤坏死因子TNF-α基因连接构成分泌型单链双功能抗体ScFv-TNF—α基因，将该基因克隆至逆转录病毒表达载体PLxSN，用NIH3T3测定病毒滴度，将重组病毒感染人肝癌细胞命名为HCC／ScFv-TNF-α，以PCR，RT—PCR以及Western blotting对ScFv—TNF-α基因修饰的HCC9204细胞进行鉴定。结果：运用DNAssist核酸序列分析软件分析ScFv-TNF-αDNA序列翻译并获得了氨基酸序列，运用ANTHEPROT V5蛋白质分析软件分析融合蛋白的二级结构及其理化性质。经酶切及PCR分析鉴定，成功地构建了融合基因表达载体pL（ScFv—TNF-α ）SN，并获得高滴度产毒细胞株，以及Western blotting分析证明ScFv—TNF-α基因融合蛋白的表达。结论：利用生物信息学网络资源进行分析预测融合蛋白的性质，为进一步探讨单链双功能抗体基因融合蛋白提供依据。     

不同级别胶质瘤中p53蛋白与O~6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶表达的相关性

目的探讨不同级别胶质瘤中p53蛋白与O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)表达的相关性。方法选取2013年1月至2013年12月间行神经外科手术切除的98例脑胶质瘤组织作为研究对象,采用免疫组织化学的方法分析不同级别胶质瘤组织中p53蛋白与MGMT表达的关系。结果 MGMT在不同级别胶质瘤组织间表达无显著差异,在表达强度上差异有统计学意义(P<0.05)。p53在不同级别胶质瘤组织中的表达差异有统计学意义,在表达强度上并无明显特征。MGMT与p53在表达强度上呈负相关。结论 p53与MGMT的表达在不同级别的胶质瘤中均有一定的关系,且p53表达增强和MGMT表达减弱均对胶质瘤的发生、发展及其恶性程度产生一定的影响。     

卵巢癌P-糖蛋白、GST-π、P53、P185表达对近期化疗效果的影响

 目的:评价卵巢癌P-糖蛋白、P53、P185表达对近期化疗效果的影响及相互关系。方法:免疫组织化学ABC法检测49例卵巢癌P-糖蛋白、GST－π、P53、P185表达。结果:1.卵巢癌P-糖蛋白、GST－π、P53、P185表达阳性者的近期化疗有效率分别为14.3％。27.3％、41、67％、24、63％,而表达阴性者的近期化疗有效率分别为53.6％(P0.05)、75.0％(P<0.005)。2.P-糖蛋白、P185的表达存在相关性(P＜0.05)。结论:卵巢癌P-糖蛋白、GST－π、P185的表达明显影响其近期化疗效果。P-糖蛋白、P185表达的相关性值得进一步研究。     

胃癌组织中p53蛋白的表达与生物学行为的关系

目的：探讨突变型ｐ５３基因产物在胃癌中异常表达的意义。方法：应用免疫组织化学方法研究ｐ５３基因在９８例胃癌中３的表达。结果：９８例胃癌标本中,ｐ５３表达阳性率为５９．２％,与组织学类型无关;不同浸润深度胃癌与ｐ５３异常表达有关（Ｐ〈０．０５）,肿瘤直径大于５ｃｍｐ５３阳性率明显高于直径小于５ｃｍ（Ｐ〈０．０１）,在淋巴结转移组和无转移组间ｐ５３阳性程度有显差异（Ｐ〈０．０１）。结论：ｐ５３异     

P53基因在不同类型胃癌细胞内表达的研究

目的：探讨不同类型胃癌P53基因表达情况，协助进一步判断肿瘤的恶性程度。方法：用免疫组化ABC法，对不同类型胃癌进行对比检查。结果：胃肝样腺癌P53基因表达明显高于其它类型胃癌。结论：检查胃癌，尤其是胃肝样腺癌P53基因表达，给临床的治疗及判断病人预后提供了重要指标。     

Reduced p21(WAF1/CIP1) protein expression is predominantly related to altered p53 in hepatocellular carcinomas

To investigate the relationship between the expression of p21(WAF1/CIP1) protein and p53 status and the possible role of the two proteins in hepatocellular carcinomas (HCCs), we examined the expression of p21(WAF1/CIP1) and p53 immunohistochemically in 81 tumours from 65 patients with hepatocellular carcinoma. p21(WAF1/CIP1) protein was absent from 59 of 81 tumours (72.8%), and altered p53 expression was found in 43 (53.1%). p21(WAF1/CIP1) expression was significantly associated with p53 status (P = 0.0008); 38 of 59 tumours lacking p21(WAF1/CIP1) protein were accompanied by altered p53 expression. Further analyses showed that p21(WAF1/CIP1) expression was inversely correlated with p53 expression in hepatitis C virus (HCV)-related HCCs, but not in HBV-related hepatocellular carcinomas and hepatocellular carcinomas without viral infection. All 11 tumours with intrahepatic metastasis showed altered p21(WAF1/CIP1) or p53 expression. In contrast, no intrahepatic metastasis was found in any of the 17 tumours without abnormal expression of either of the two proteins. These results suggest that: (1) different modes of p21(WAF1/CIP1) regulation are involved in HCCs differing in their hepatitis viral infection status, and p21(WAF1/CIP1) expression appears to be predominantly related to altered p53 in HCV-related HCCs; (2) disruption of the p53-p21(WAF1/CIP1) cell-cycle-regulating pathway may contribute to malignant progression of HCC.     

p53蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

目的：研究ｐ５３蛋白表达与膀胱移行细胞癌生物学行为及预后的关系。方法：应用免疫组织化学ＬＳＡＢ法检测５０例膀胱移行细胞癌组织中ｐ５３蛋白的表达。结果：６例正常膀胱粘膜组织中未发现ｐ５３蛋白的表达，５０例膀胱移行细胞癌中ｐ５３蛋白阳性表达率为６４％。ｐ５３蛋白阳性表达与肿瘤的病理分级、临床分期、复发率及患者术后生存率关系密切。结论：检测ｐ５３蛋白表达对判断膀胱移行细胞癌的恶性程度及预测预后有重要参考     

p53蛋白在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的 :探讨非小细胞肺癌中p5 3蛋白的表达及意义。方法 :应用SP免疫组化法检测 5 2例肺癌组织中p5 3蛋白的表达。结果 :非小细胞肺癌中p5 3蛋白阳性表达率为 78 8% ,其中鳞癌与腺癌分别为 75 0 %和 82 1% ,p5 3蛋白阳性病人的预后较阴性者差。结论 :p5 3蛋白在非小细胞肺癌中有较高的表达 ,有可能作为评估预后、指导治疗的指标。     

Suppression of human hepatoma growth in vivo by a monoclonal antibody against a Mr 45,000 protein

The monoclonal antibody T2-2 was originally raised against the colorectal carcinoma cell line LS174T and was found to bind to several other human carcinomas, including hepatoma and ovarian cancer. The goal of this study was to investigate the antitumor activity of mAb T2-2 in human tumor models and further characterize the antigen. mAb T2-2 inhibited the growth of human hepatocellular cell line SMMC 7721 in vivo and in vitro. Western blot analysis revealed that this mAb recognizes an unique Mr 45,000 band from tissue extracts of human hepatocellular carcinoma (HCC), which localizes to the cell periphery. In vitro cell assays indicate that T2-2 decreases cell adhesion to laminin, implying the functional role of T2-2 antigen in cell-matrix interaction and cell migration.     

突变型P53蛋白、PCNA的表达与肺癌病理组织学的关系

目的:为探讨突变型P53蛋白、PCNA(增殖细胞核抗原)的表达与肺癌病理组织学的关系.方法:应用免疫组化ABC法检测112例原发性肺癌的P53蛋白、PCNA的表达.结果:①突变型P53表达的阳性率为45%;②突变型P53与PC-NA的表达关系密切,PCNA强阳性的P53强阳性率为86%,显著高于其他组(P<0.01);③P53强阳性率、PCNA强阳性率均以腺癌组为最低(P<0.05);④P53、PCNA的表达与肺癌分期间的关系不密切(P>0.05).结论:提示突变型P53蛋白、PCNA的表达可作为肺癌患者预后判断的客观指标.     

PTEN和P53蛋白在子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的：探讨PTEN和P53蛋白在子宫内膜癌中的表达及临床意义。方法：采用免疫组织化学S-P法检测42例子宫内膜癌、28例子宫内膜增殖症和20例正常增生期子宫内膜组织中PTEN和P53蛋白的表达。结果：与增生期子宫内膜100％表达率相比,PTEN蛋白子宫内膜非典型增生及子宫内膜癌中的阳性表达率逐渐降低,分别为66．7％和53．1％。随着子宫内膜癌临床分期的升高、病理分级的降低及肌层浸润的加深,PTEN蛋白的表达呈逐渐降低的趋势。子宫内膜癌组织中PTEN蛋白的失表达主要局限于子宫内膜样腺癌,占46．9％,10例子宫内膜浆液性腺癌中则未见PTEN的失表达,PTEN失表达在这两组肿瘤间的差异有统计学意义（P=0．001）。P53蛋白过表达在子宫内膜样腺癌中占25％,在子宫内膜浆液性腺癌中为80％,两组间差异有统计学意义（P=0．001）。结论：PTEN的缺失和P53过表达与子宫内膜癌的发生、发展有关,同时预示着子宫内膜癌的不良预后。     

P53和Ki67在非霍奇金淋巴瘤中的表达及临床意义

目的:探讨P53蛋白和增殖相关抗原Ki67在非霍奇金淋巴瘤(NHL)中的表达及临床意义。方法:用免疫组织化学染色法(SP法)对129例NHL活检石蜡组织进行P53、Ki67检测,同时以CHOP方案化疗,评价疗效。观察P53和Ki67与NHL恶性程度、化疗疗效及PFS的关系。结果:129例NHL中,P53蛋白过度表达55例,占42.6%,Ki67表达101例,占78.3%;侵袭性NHL组的P53和Ki67表达均高于惰性淋巴瘤组(P<0.01)。全组LDH正常77例,异常52例,LDH异常组Ki67表达高于正常组(P<0.01);P53蛋白表达两组无显著性差异(P>0.05)。129例NHL接受CHOP方案化疗后,首次化疗有效组中的P53过度表达低于无效组(P<0.01);Ki67表达无显著性差异(P>0.05)。P53低表达组的中位PFS较高表达组长4.5个月;Ki67低表达组的中位PFS较高表达组长11个月。P53、Ki67表达与性别、发病部位、临床分期及免疫分型无相关性。结论:P53和Ki67与NHL的恶性程度、预后密切相关,可作为预测NHL患者的预后因素并指导治疗。     

P53基因在乳腺癌细胞中异常表达的观察

 P₅₃基因是一种重要的抑癌基因,它的突变和异常表达,与癌细胞的发生、发展密切相关。本文应用免疫组化ABC法检测了58例乳腺癌石蜡标本中P₅₃表达状况。结果表明：P₅₃基因异常表达为39.7%（23/58）。并与肿瘤的分化程度、区域淋巴结转移和性激素受体有明显相关性,与乳腺癌患者术后五年生存率有一定关系。