荧光定量PCR检测鼻咽部脱落细胞内EBV-DNA

目的 建立荧光定量PCR（FQ－PCR）检测鼻咽部脱落细胞中EBV－DNA的方法。方法 以患者鼻咽部脱落细胞内DNA作为样本，以EB病毒基因序列中EBNA1（核抗原1）基因片段作为扩增的靶DNA，同时从人β－珠蛋白DNA片段作为内参照，合成了两对引物，并设计了两个特异的荧光探针，优化了FQ－PCR反应体系，同时对这两个片段进行扩增，每一标本得到两个Ct值；CtE和Ctβ，得到单位细胞EB病毒的相对量。结果 临床标本29例中，阳性22例，阴性7例，临床资料证实阳性者全部为鼻咽癌（NPC），阴性者全部为非鼻咽癌。结论 建立的FQ－PCR检测鼻咽部脱落细胞中EBV－DNA的方法，能反映单位细胞病毒的复制情况，可用于NPC的筛查，并可能应用于该病的风险评估和疗效观察。     

基因放大技术

基因放大技术又称之为聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR),是指用简单的试管反应的方法,在体外合成某一基因特异的DNA片段成百万个拷贝,然后再进行分析。为了大量扩增这个DNA片段,需先合成与这一段DNA两端互补的一小段寡核苷酸,长度约10—20个核苷酸,作为合成新DNA的引物。在反应液中,将基因DNA加热,变性,解链。退火时,引物与此DNA两条链按互补顺序配对。加     

PCR技术及其进展

DNA重组技术的出现，能用分子克隆研究单个基因，但必须依赖于细胞分裂时质位或其它载体携带的DNA的复制。R．K．SaiKi和K．B．MSllis分别于1985年和1987年发展了多聚酶链反应（polyIDeraseChainreaction，PCR）技术，可在体外用简单酶促反应以一个DNA模板大量扩增特异DNA片段。从复杂基因组得到纯的特异DNA片段，用传统的克隆技术需几周甚至几个月，用PCR则只需几小时。克隆开始常需百万分子DNA，PCR却少到仅需1分子，甚至不需要纯的、未受损伤的模板DNA。PCR是受DNA聚合酶催化，以某段目标DNA为模板，以寡核着酸链为…     

PCR定量技术在医学上的应用及其方法学评估

PCR技术最早是用于扩增一段特异的PCR片段,用于克隆、测序等实验,后来也将其用于样本中特异的PCR片段有无或非很粗的相对定量,而荧光定量PCR技术则是为了测定样本中特异的PCR片段相对及绝对量,是一种测定特异的PCR片段含量的方式.如测定病人样本中病原体的含量、实验样本中某一特定的mRNA的含量等.基因定量检测已经成为研究遗传性疾病、感染性疾病以及某些易感基因引起的疾病的重要手段.     

聚合酶链反应在白血病诊疗中的应用

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是一种模拟天然DNA复制过程的体外基因扩增特异性DNA片段的新技术。它能高效扩增目的DNA片段,在数小时内完成20～50个循环,使目的DNA扩增数百万倍。该技术具有快速、敏感、特异性强等优点,目前已广泛用于传染病和遗传病的诊断,并在血液病的研究中取得了重大进展。本文就PCR在白血病诊疗中的应用概述如下。     

病毒载量实时扩增检测技术的研究进展

近年来 ,运用基因扩增技术对病毒进行定性或定量检测已取得了巨大进步 ,尤其是定量检测技术的发展 ,使得临床能够更加有效地监测患者治疗效果、是否有耐药性发生等病情 ,并可依据病毒荷载量的变化合理地解释病情的变化[1 3 ] 。目前实验室常用的基因扩增技术包括PCR技术和核酸序列依赖的扩增 (nucleicacidsequence basedamplification ,NASBA)技术。PCR技术可以以DNA或RNA为模板 ,以RNA为模板时要先进行逆转录反应 ,实时检测策略可以使用SYBRGreenI、杂交探针、分子信标或TaqMan探针等 ;NASBA技术则是一种专以RNA为模板的扩…     

输血机构基因技术筛选带病毒血液

一、介绍 基因筛选传染源,尤其是病毒,随着各种核酸放大技术,诸如PCR、LCR、NASBA、TMA的应用而成为可能。这些不同的基因放大技术(GATs)体现了基于生物体内核酸复制和修补的原理而完成体外核酸放大的不同途径。CATs被成功地应用于放大核酸序列,而这种核酸序列不论对于临床相关的微生物,还是基因疾病,都是特异的。因此基因放大试验仍是传染病诊断的主要方法,因为GATs吸收了比传统的方法,如培养法或酶免检测抗原法(EIA),更为敏感的直接检测生物体的优点。另外,以核酸杂交技术为基础的诊断方法有其天然特异性,原因在于核     

人偏肺病毒亚克隆的构建与鉴定

目的 从临床标本中扩增人偏肺病毒(hMPV)基因片段进行亚克隆,为进一步全面深入地研究人偏肺病毒奠定基础.方法 根据GenBank中已知的hMPV全基因序列设计引物.收集呼吸道感染住院患儿鼻咽抽吸物697例,提取病毒核酸,运用长片段RT-PCR技术扩增目的片段,切割含目的条带的凝胶进行纯化,并将目的片段连接到PJET1.2/blunt克隆载体,转化感受态细胞TOP10,经含氨苄青霉素的抗生素平板筛选,得到阳性克隆,提取质粒,最后对重组质粒进行PCR鉴定和测序鉴定.结果 随机选取5例所获的阳性条带经PCR和测序鉴定,证实确为hMPV基因片段.结论 成功构建了hMPV基因组亚克隆,可用于后续的实验研究.     

孕妇外周血胎儿细胞PCR扩增技术在产前基因诊断的应用

DNA体外扩增技术是近年来创立和发展起来的高效DNA技术．它通过聚合酶链反应Polymerase Chain Reaction．PCR)。能够快速特异地扩增任何所希望的基因或DNA片段，因此它广泛应用于基因分离，克隆、DNA序列分析．DNA突变和重组。基因的表达和多态分析．被誉为基因工程技术上的一个新的里程碑，目前此项技术     

长链PCR技术研究进展

长链PCR(longPCR)技术是将传统DNA聚合酶与具有 3′ 5′核酸外切酶活性的DNA聚合酶混合 ,利用前者较强的延伸能力和后者的校正功能 ,通过优化反应液组成及热循环条件 ,能够扩增出长达 4 0kb的特异产物 ,在病毒基因组研究及基因检测等方面显示出很好的应用前景。本文就长链PCR技术的原理、反应条件的优化及技术应用进行了综述