水蛭素通过PI3K/Akt信号通路抑制卵巢癌细胞增殖的机制研究

目的：探讨水蛭素抑制卵巢癌的潜在分子机制。方法：培养卵巢癌SKOV3细胞株,将其分为空白组、水蛭素组、顺铂组、水蛭素+顺铂组,通过CCK-8法确定水蛭素的最佳抑制浓度,免疫组化评估各组PI3K/Akt通路相关因子的表达情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,通过Western blot法检测水蛭素对癌细胞IL-1及PI3K-Akt信号通路中相关蛋白表达量的影响。结果：水蛭素能明显降低卵巢癌SKOV3细胞组织中IL-1水平,水蛭素组、顺铂组及水蛭素+顺铂组诱导人卵巢癌SKOV3细胞的凋亡(P<0.05),下调了PI3K/Akt信号通路中p-PI3K、p-Akt蛋白的表达水平(P<0.01),且水蛭素+顺铂组的p-PI3K、p-Akt蛋白表达下调最为明显。结论：水蛭素对卵巢癌有抑制作用,其机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。本研究为进一步深入阐释水蛭素抗卵巢癌机制提供了研究基础。     

姜黄素调控PI3K/Akt信号通路抑制H9c2心肌细胞的炎症损伤

目的探讨姜黄素对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞炎症损伤的保护效应,并对其作用机制进行初步研究。方法将H9c2心肌细胞分为对照组、LPS组和姜黄素干预组。除对照组外,其余各组构建LPS诱导的心肌细胞炎症损伤模型。姜黄素干预组分别以10μmol/L、20μmol/L和40μmol/L姜黄素处理细胞。培养24 h后,CCK8法检测各组细胞的存活率,ELISA法检测各组细胞分泌炎症因子IL-6和TNF-α的水平,Western blot法检测各组细胞PI3K、Akt和p-Akt蛋白表达水平。采用PI3K抑制剂LY294002(5μmol/L)预先处理细胞4 h后,加入LPS诱导细胞损伤,再以20μmol/L姜黄素干预细胞,检测各组(对照组、LPS组、LPS+抑制剂组、LPS+姜黄素组和抑制剂+LPS+姜黄素组)细胞的相对存活率、炎症因子水平及PI3K/Akt通路蛋白的表达。结果与对照组相比,LPS组细胞的相对存活率显著降低(P0.05),细胞上清中炎症因子IL-6和TNF-α水平显著升高(P0.05),且PI3K和p-AKT蛋白表达量显著降低(P0.05)。与LPS组细胞相比,不同浓度姜黄素干预后,H9c2细胞相对存活率显著升高(P0.05),细胞分泌的IL-6和TNF-α水平显著降低(P0.05),且PI3K和p-AKT蛋白表达量显著升高(P0.05)。与LPS+姜黄素组相比,抑制剂LY294002干预细胞后,姜黄素对LPS诱导的H9c2细胞炎症损伤的保护作用减弱,细胞存活率明显下降(P0.05),IL-6和TNF-α水平显著升高(P0.05),且PI3K和p-AKT蛋白表达量显著降低(P0.05)。结论姜黄素对LPS诱导的H9c2心肌细胞炎症损伤具有保护效应,其作用机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。     

姜黄素通过PI3K/Akt信号通路抑制胃癌细胞增殖和诱导细胞凋亡

目的研究姜黄素(Cur)对人胃腺癌细胞(SGC-7901)PI3K/Akt信号通路的影响。方法采用CCK-8检测不同浓度Cur对SGC-7901细胞的24、48、72h的抑制作用;TUNEL检测各浓度Cur作用24h后SGC-7901细胞凋亡的发生率;Western blot、RT-PCR法检测各浓度Cur作用SGC-7901细胞后PI3K、p-Akt、Akt蛋白和PI3K、Akt mRNA的表达。结果 CKK-8实验证明了姜黄素对SGC-7901细胞增殖具有抑制作用,且随作用浓度的增强而增强;TUNEL法检测姜黄素作用SGC-7901细胞后凋亡率的变化,发现细胞凋亡率随浓度的增强而显著增加;Western blot、RT-PCR法检测Cur作用SGC-7901细胞后,PI3K、p-Akt、Akt蛋白和mRNA的表达水平降低。结论 Cur具有抑制人胃癌细胞增殖和促凋亡的作用,其机制与抑制PI3k/Akt信号通路有关。     

PI3K/Akt信号通路调节创伤愈合的机制

<正>磷酯酰肌醇3激酶(PI3K)是特异性的催化磷酯酰肌醇(PI)3位羟基磷酸化,产生具有第二信使作用的激酶。丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)处于PI3K/Akt通路的中心环节,在细胞的凋亡、存活、增殖等活动中发挥重要的生物学作用。     

健脾祛痰方影响TGF-β/PI3K/Akt通路减轻高脂血症大鼠内皮损伤

目的 探讨健脾祛痰方基于TGF-β/PI3K/Akt信号通路对高脂血症大鼠的内皮保护作用。方法 使用60只SPF级雄性大鼠随机分为正常组、模型组、西药(阿托伐他汀)组和健脾化痰低、中、高剂量组。正常组给予基础饲料喂养,其余各组给予高脂饲料喂养,并活动受限,建立高脂血症大鼠模型。健脾祛痰各组给予不同剂量中药,西药组给予阿托伐他汀。12周后,苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining, HE染色)观察肝组织病理变化;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测一氧化氮(Nitric oxide, NO)与内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)水平;Western blot检测转化生长因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-β)和单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、磷脂酰肌醇-3激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶(phos...     

基于PI3K/Akt信号通路探讨茯苓杏仁甘草汤抗动脉粥样硬化巨噬细胞凋亡的作用机制

目的 探讨茯苓杏仁甘草汤对内毒素(lipopolysaccharide, LPS)联合氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein, ox-LDL)诱导巨噬细胞凋亡的干预作用。方法 构建巨噬细胞凋亡模型,检测巨噬细胞凋亡率、细胞Bax与Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平、PI3K、Akt蛋白磷酸化水平,检测茯苓杏仁甘草汤对上述指标的影响,及PI3K抑制剂LY294002干预后上述指标的变化。结果 茯苓杏仁甘草汤降低Bax与Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平比值,升高PI3K、Akt蛋白磷酸化水平,其作用受到LY294002抑制。结论 茯苓杏仁甘草汤抑制巨噬细胞凋亡,其机制与激活PI3K/Akt信号通路有关,为临床治疗巨噬细胞凋亡相关心血管疾病提供了实验依据。     

PI3K/Akt信号通路与胰岛素抵抗的研究进展

胰岛素信号转导在胰岛素生理作用的发挥中起着至关重要的作用,其减弱或受阻,使得胰岛素生理作用减弱,导致IR形成。本文概述了PI3K/Akt通路成员及功能,与IR关系及临床药物应用等研究进展。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨小金丹对巨噬细胞极化的调控作用及机制

目的 探讨小金丹提取物（XJD）对巨噬细胞极化的调控作用及作用机制。方法 以脂多糖（LPS）、白细胞介素-4（IL-4）刺激RAW264.7细胞诱导M1型和M2型极化。采用细胞增殖活性检测（CCK-8）法检测10~80 mg·L^-1对RAW264.7细胞增殖活性的影响;采用Griess法检测一氧化氮（NO）的释放;采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测细胞因子白细胞介素-6（IL-6）释放;采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测M1型和M2型巨噬细胞标志物的mRNA表达;采用流式细胞分析法检测CD206表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路关键蛋白的活化。结果 10~80 mg·L^-1 XJD对0.5 mg·L^-1 LPS和20 μg·L^-1 IL-4诱导的RAW264.7细胞增殖未见明显影响。与空白组比较,LPS诱导组M1型巨噬细胞标志物表达升高,主要包括显著增加NO、IL-6释放（P<0.01）,明显上调M1型基因白细胞介素-1β（IL-1β）、一氧化氮合酶（iNOS）、前列腺素氧化环化酶-2（COX-2）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA表达（P<0.01）。同LPS诱导组比较,20~80 mg·L^-1 XJD能浓度依赖性显著抑制NO、IL-6的释放（P<0.01）;10~80 mg·L^-1 XJD能浓度依赖性下调M1型基因IL-1β、iNOS、COX-2和TNF-α mRNA表达（P<0.01）。与空白组比较,IL-4诱导组M2型巨噬细胞标志物表达升高,主要包括CD206⁺巨噬细胞比例显著升高（P<0.01）,显著上调M2型基因精氨酸-1（Arg-1）、白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-13（IL-13）和转化生长因子-β₁（TGF-β₁）mRNA表达（P<0.01）。同IL-4诱导组比较,10~80 mg·L^-1 XJD能浓度依赖性显著降低CD206⁺ M2型巨噬细胞比例（P<0.01）;显著下调Arg-1、IL-10、IL-13和TGF-β₁ mRNA表达（P<0.01）。Western blot结果显示,与空白组比较,LPS和IL-4诱导组磷脂酰肌醇3-激酶p110（PI3K-p110）和磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）表达均显著上调（P<0.01）;同LPS或IL-4诱导组比较,XJD能明显降低PI3K p110蛋白表达和p-Akt水平（P<0.05,P<0.01）。结论 小金丹提取物能抑制LPS和IL-4诱导RAW264.7细胞的M1型极化和M2型极化,机制与降低PI3K/Akt通路的活化水平有关。     

解毒化浊方对HER-2阳性乳腺癌细胞PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达的影响

目的观察解毒化浊方血清对HER-2阳性乳腺癌细胞PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达的影响,探讨解毒化浊方治疗HER-2阳性乳腺癌的作用机制。方法将雌性Wistar大鼠分为对照组、中药组、西药组、联合组4组,分别给药制备含药血清,再以给药血清干预SK-BR-3细胞,采用Western blot检测HER-2、p-HER-2蛋白表达以及PI3K/Akt通路相关蛋白p-Akt、Bad、p-Bad表达。结果 Western blot检测显示,中药组、西药组、联合组HER-2、p-HER-2灰度比较对照组均降低;西药组、联合组HER-2、p-HER-2、p-Akt灰度比较对照组明显降低,西药组、联合组较对照组HER-2、p-HER-2、p-Akt表达含量差异有统计学意义(P0.05)。中药组、西药组、联合组Bad、p-Bad灰度比较对照组降低,总Bad表达含量各组间差异无统计学意义(P0.05)。西药组、联合组p-Bad表达含量差异有统计学意义(P0.05)。结论解毒化浊方具有下调PI3K/Akt信号通路中相关蛋白表达,协同抑制剂发挥减毒增效的抗肿瘤作用。     

抑制PI3K/Akt信号转导通路逆转喉癌耐药的作用及其机制

目的探讨磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/Akt信号转导通路抑制剂LY294002对脂多糖(LPS)刺激喉癌细胞引发耐药反应的影响。方法实验分为空白组、LPS组和LPS+LY294002抑制剂组,收集对数生长期人喉癌Hep-2细胞,接种于6孔培养板中,待密度为5×105个/孔时,LPS+LY294002抑制剂组加入10 mmol/L LY294002抑制剂刺激1 h,随后LPS组和LPS+LY294002抑制剂组均加入1 mg/m L LPS刺激5 h。通过实时定量PCR检测各组中肿瘤细胞多药耐药性基因mRNA的表达情况,倒置荧光显微镜观察顺铂处理后各组细胞的形态,MTT法检测各组细胞生长抑制率,流式细胞仪技术检测各组细胞凋亡率。结果 LPS组BCRP及MRP3/5 mRNA表达量均明显高于空白组和LY294002抑制剂组(P均<0.05)。顺铂刺激24 h后,空白组中细胞数量明显减少,有较多漂浮的小圆形细胞和坏死的细胞碎片;LPS组细胞形态无明显改变,漂浮的小圆细胞和碎片较少;LPS+LY294002抑制剂组中漂浮的小圆细胞和碎片多于LPS组。LPS组细胞生长抑制率和细胞凋亡率均明显低于空白组(P均<0.05),LPS+LY294002组细胞生长抑制率和细胞凋亡率均明显高于LPS组(P均<0.05)。结论 PI3K/Akt信号转导通路抑制剂LY294002可逆转Hep-2细胞对顺铂的耐药性,可能与降低肿瘤细胞多药耐药基因mRNA的表达有关。     

PI3K/Akt信号通路在慢性阻塞性肺疾病中的研究进展

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)是一种常见的以持续气流受限为特征的慢性肺部疾病,其气流受限多呈进行性发展,与气道和肺组织经香烟烟雾等有害气体或有害颗粒刺激诱发的氧化应激和慢性炎症增强有关。目前,COPD的相关发病机制尚未完全明确。近年来,研究发现磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase, PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路参与调控COPD炎症和氧化应激反应以及类固醇的抵抗性,在COPD的发病机制和治疗中发挥关键作用。就PI3K/Akt的结构与转导过程和调控途径;与COPD炎症反应和氧化应激的关系;基于调控PI3K/Akt信号通路的COPD药物治疗进行综述,以期为临床干预COPD提供新的治疗靶点。     

消癌平注射液通过PI3K/Akt信号通路调节卵巢癌细胞增殖研究

目的研究消癌平注射液对卵巢癌细胞株Caov-3增殖作用的影响,以探讨其抗癌机制。方法 MMT法检测消癌平注射液对Caov-3细胞增殖活性的影响;相差显微镜观察细胞形态变化;流式细胞术分析消癌平注射液对Caov-3细胞周期的影响;免疫印迹方法检测消癌平注射液对Caov-3细胞质中Akt、pAkt、p27蛋白表达的影响。结果消癌平注射液能以时间和剂量依赖方式抑制Caov-3细胞增殖,并诱导Caov-3细胞发生G0/G1期阻滞;随着消癌平注射液作用时间的延长,Caov-3细胞质中pAkt蛋白表达减少,p27蛋白表达增加。结论消癌平注射液通过抑制PI3K/Akt通路,使细胞周期发生阻滞,从而抑制细胞增殖。     

基于PI3K/Akt/Nrf2信号通路探讨小蓟饮子治疗小鼠放射性膀胱炎作用机制

目的 基于PI3K/Akt/Nrf2信号通路探讨小蓟饮子治疗小鼠放射性膀胱炎（RC）的作用机制。方法 将30只健康雌性SPF级ICR小鼠采用随机数字表法分为11只空白组和19只造模组。空白组不予造模,造模组腹腔麻醉后暴露膀胱部位于X射线辐照仪下以6-MV X射线、2 Gy/min照射10 min建立RC小鼠模型,空白组和造模组各随机取3只处死后,在光镜下观察膀胱组织形态学改变以确定造模成功。造模成功后将造模组按随机数字表法分为模型组和中药组各8只,中药组按10 mL/（kg·d）灌胃1.68 g/mL小蓟饮子浓缩液,空白组和模型组灌胃等体积生理盐水,连续灌胃7 d。灌胃结束后使用酶联免疫吸附测定（ELISA）法测定小鼠眼球血氧化应激指标[超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、总抗氧化能力（T-AOC）;实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测膀胱组织中磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B(Akt)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶-1(HO-1)mRNA相对表达水平。结果 与空白组比较,模型组小鼠眼球血中SOD、T-AOC...     

基于PI3K/Akt通路探讨健脾化瘀方对大肠癌SW480增殖的影响

目的:探讨健脾化瘀方基于PI3K/Akt通路抑制大肠癌SW480增殖的相关机制。方法:取对数生长期的SW480细胞,噻唑蓝(MTT)检测不同质量浓度健脾化瘀方(0.25,0.5,1,2,4,8 g·L~(-1))对SW480细胞增殖的影响;不同质量浓度健脾化瘀方(1,2,4 g·L~(-1))培养24 h,另设空白组,流式细胞仪检测对SW480细胞凋亡、细胞周期的影响,实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)法检测健脾化瘀方对SW480细胞中磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K),蛋白激酶B(Akt),p27,细胞周期素D1(Cyclin D_1),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因表达的影响,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测健脾化瘀方对SW480细胞中PI3KⅢ,Akt,p27,Cyclin D_1,Bcl-2及Bax蛋白表达的影响。结果:健脾化瘀方对人大肠癌细胞SW480增殖有抑制作用,且呈现量效和时效关系。与空白组比较,健脾化瘀方作用于SW480细胞后明显促进细胞凋亡,细胞周期阻滞于G0/G1期,健脾化瘀方明显降低PI3K,Akt,Cyclin D_1,Bcl-2基因及蛋白的表达,明显升高p27,Bax基因及蛋白的表达(P0.05,P0.01)。结论:健脾化瘀方对人大肠癌细胞SW480增殖具有抑制作用,其机制可能是通过下调PI3K和Akt的表达,从而影响下游的Cyclin D_1,p27,Bcl-2,,Bax的表达,引起SW480细胞发生G0/G1期阻滞和凋亡。     

基于PI3K/Akt通路研究理中汤治疗胃溃疡大鼠的作用机制

目的:基于PI3K/Akt通路研究理中汤治疗胃溃疡(gastric ulcer,GU)大鼠的作用机制.方法:将50只SD雄性大鼠随机分为正常对照组、模型组、理中汤低剂量组(6 g·kg-1)、理中汤高剂量组(12 g·kg-1)与雷尼替丁组(0.3 g·kg-1),每组10只,除正常对照组外,其余各组采用乙酸注射法制备...     

乳宁Ⅱ号方对HER-2过表达型乳腺癌PI3K/Akt信号通路的作用机制研究

目的:采用乳宁Ⅱ号方血清干预人乳腺癌细胞株MDA-MB-453细胞,观察中药调控乳腺癌细胞HER-2过表达后对PI3K/Akt通路的影响,探讨乳宁Ⅱ号方治疗HER-2过表达型乳腺癌的作用靶点。方法:选用雌性Wistar大鼠分组给药制备含药血清,给药血清干预MDA-MB-453细胞。采用Western blot技术检测中药血清干预乳腺癌细胞后HER-2、p-HER-2表达以及PI3K/Akt通路相关蛋白p-Akt、Bad表达。结果:Western blot结果显示,联合组HER-2、p-HER-2灰度比较对照组明显降低,但HER-2、p-HER-2表达含量差异无统计学意义(P>0.05);中药组、西药组、联合组p-Akt主条带灰度比较对照组显著降低,表达含量差异有统计学意义(P<0.05)。联合组Bad灰度比较对照组显著降低,Bad表达含量差异有统计学意义(P<0.05)。结论:实验各用药组p-Akt蛋白表达含量均较对照组显著降低,表明用药组能够通过抑制Akt蛋白的磷酸化水平发挥抗乳腺癌的作用。联合组Bad表达含量明显较对照组明显升高,表明用药后可通过诱导调亡蛋白的变化引起细胞凋亡。     

黄芩苷通过抑制ROS介导的PI3K/Akt/FoxO3a信号通路诱导HepG2细胞铁死亡

运用网络药理学和体外实验探究黄芩苷是否诱导HepG2细胞发生铁死亡并探讨潜在机制。体外培养HepG2细胞,CCK-8法检测细胞活力。TCGA数据库获取肝癌转录组测序数据,FerrDb V2数据库获取铁死亡基因数据。使用DEG2程辑包筛选差异表达基因,并与铁死亡基因取交集,得到介导铁死亡调节肝癌进程的靶向基因。通过基因本体数据库(Gene Ontology, GO)与京都基因与基因组百科全书数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG)以P<0.05、|log₂(fold change)|>0.5为标准,分析模块相关的分子功能及结构。DCFH-DA探针检测细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平变化。试剂盒检测细胞还原型谷胱甘肽(glutathione, GSH)、Fe²⁺水平。实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative PCR, RT-PCR)检测谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase ...     

白藜芦醇通过PI3K/Akt信号通路协同5-氟尿嘧啶对结肠癌细胞的抑制作用

[目的] 观察白藜芦醇（RES）对5-氟尿嘧啶（5-FU）化疗结肠癌敏感性及磷脂酰肌醇激酶（PI3K）/蛋白激酶（Akt）信号通路的影响。[方法] 体外培养SW620细胞,CCK8法检测细胞活力,倒置显微镜分析细胞克隆数,流式细胞术分析细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测凋亡蛋白Cle-caspase 9、Cle-caspase 7和Cle-PARP及PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达水平。[结果] 与对照组比较,RES组、5-FU组和RES+5-FU组SW620细胞活力、克隆数及p-p85、p-110β、p-PDK1和p-Akt表达水平明显降低,而细胞凋亡率及Cle-caspase 9、Cle-caspase 7和Cle-PARP表达水平明显增高（P<0.05）;与RES组和5-FU组比较,RES+5-FU组SW620细胞活力、克隆数及p-p85、p-110β和p-PDK1和p-Akt表达水平明显降低,而细胞凋亡率及Cle-caspase 9、Cle-caspase 7和Cle-PARP表达水平明显增高（P<0.05）。PI3K抑制剂LY294002增强RES和5-FU联合处理对SW620细胞生长的抑制作用,而PI3K基因过表达则降低RES和5-FU联合处理对SW620细胞生长的抑制作用。[结论] RES与5-FU协同抑制PI3K/Akt信号通路诱导结肠癌的化疗效果。     

黄连-厚朴配伍抑制PI3K/Akt信号通路改善TNBS诱导的大鼠溃疡性结肠炎研究

目的 研究黄连-厚朴配伍对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠及磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路的调控作用.方法 利用高通量基因表达数据库获取UC基因表达谱数据,并综合生...     

SIRT1与PI3K/Akt通路在肿瘤发生发展中的串联作用

SIRT1在抑制细胞凋亡、延缓衰老、延长寿命中发挥着重要作用,而PI3K/Akt信号转导通路作为细胞内重要信号转导通路之一,其活性的异常变化将直接影响着肿瘤的发生和进展。因此,了解SIRT1、PI3K/Akt通路与肿瘤之间的关系将有助于揭示肿瘤发生、发展的潜在机制,为肿瘤的预防和治疗提供新的思路。本文对SIRT1与PI3K/Akt通路与肿瘤发生、发展的关系作一概述。