PD-L1阻断对脓毒症小鼠T淋巴细胞凋亡及单核细胞功能的影响北大核心CSCD

目的:探讨程序性死亡受体-1配体(PD-L1)阻断对脓毒症小鼠T淋巴细胞凋亡及单核细胞功能的影响。方法:30只8~10周龄清洁级C57BL/6雄性小鼠随机分为3组:sham组、模型组、PD-L1拮抗组,每组10只,模型组、PD-L1拮抗组小鼠采用盲肠结扎穿孔手术(CLP)构建脓毒症小鼠模型,sham组小鼠暴露盲肠后即进行伤口缝合,不结扎。PD-L1拮抗组小鼠术后腹腔注射抗PD-L1抗体(50μg/只),每6 h注射1次,连续4次,sham组和模型组小鼠腹腔注射等剂量生理盐水。流式标记法检测各组小鼠CD3+T细胞表面PD-1和单核细胞CD11b+表面PD-L1表达,HE染色观察组织病理学改变,电镜下观察脾脏和胸腺超微病理结构改变,TUNEL染色检测脾脏和胸腺组织细胞凋亡、流式细胞术检测胸腺组织T淋巴细胞凋亡,ELISA检测Caspase-3和TNF-α、IL-6及IL-10表达。结果:与sham组相比,模型组小鼠CD3^(+)、CD11b^(+)表面PD-1和PD-L1表达、脾脏和胸腺组织细胞凋亡率、T淋巴细胞凋亡率、Caspase-3、TNF-α、IL-6、IL-10蛋白表达显著升高(P<0.05);与模型组相比,PD-L1拮抗组小鼠CD3^(+)、CD11b^(+)表面PD-1和PD-L1表达、脾脏和胸腺组织细胞凋亡率、T淋巴细胞凋亡率、Caspase-3、TNF-α、IL-6蛋白表达明显降低,IL-10表达明显升高(P<0.05)。结论:PD-L1阻断可有效降低脓毒症小鼠T细胞凋亡率,改善其单核细胞功能。     

miR-877-3p抑制小鼠骨髓间充质干细胞分泌MCP-1及T淋巴细胞趋化及凋亡引起小鼠骨质疏松

目的 研究miR-877-3p对骨髓间充质干细胞(BMSC)迁移趋化及凋亡T淋巴细胞的影响。方法 构建双侧卵巢摘除术(OVX)所致骨质疏松症及假手术(sham)模型。术后8周，显微CT(Micro-CT)检测两组小鼠骨参数指标；ELISA检测BMSC单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的水平，OVX组及假手术组BMSC分别与T淋巴细胞共培养，采用PKH26染色Transwell^TM实验观察两组T淋巴细胞迁移能力，流式细胞术检测两组T淋巴细胞凋亡水平，反转录PCR检测BMSC的miR-877-3p表达。通过细胞转染，过表达或下调BMSC miR-877-3p水平，ELISA检测各组BMSC分泌的MCP-1水平，采用上述方法检测T淋巴细胞迁移能力T淋巴细胞凋亡水平。结果 OVX组小鼠骨小梁数量，骨密度均低于假手术组小鼠。OVX组BMSC分泌MCP-1水平，趋化及凋亡T淋巴细胞能力均低于假手术组BMSC。OVX组BMSC表达miR-877-3p水平高于假手术组。过表达BMSC miR-877-3p后，BMSC分泌MCP-1,趋化及凋亡T淋巴细胞水平降低，下调miR-877-...     

可乐定通过激活胆碱能抗炎通路抑制肺损伤小鼠炎性反应

目的:探讨可乐定对肺损伤小鼠炎性反应的影响及其作用机制。方法:以脂多糖(lipopolysac charide,LPS)诱导的肺损伤小鼠为模型,静脉注射可乐定,取左肺上叶组织,检测肺湿干重比(W/D)和总肺含水量(TLW),ELISA试剂盒检测炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α的含量,RT-PCR和Western blot检测α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达的变化;鼻内吸入法将α7nAChR基因RNA干扰慢病毒载体导入肺损伤模型小鼠肺内,或者静脉注射HMGB1外源性蛋白,检测炎性因子和HMGB1的变化。结果:可乐定可减轻LPS诱导的小鼠肺损伤,并通过降低细胞因子IL-6、IL-10和TNF-α水平从而抑制LPS诱导的炎性反应;可乐定促进α7nAChR表达从而激活胆碱能抗炎通路,并抑制HMGB1的表达。结论:可乐定对肺损伤小鼠具有抗炎作用,这可能与激活胆碱能抗炎通路,抑制HMGB1的表达有关。     

益气化瘀化痰方对UUO诱导的肾间质纤维化大鼠KLF15、HMGB1、NF-κB及其下游炎症因子表达的影响

目的:观察益气化瘀化痰方(YHHD)对单侧输尿管结扎(UUO)模型大鼠肾间质纤维化的作用及其可能机制。方法:48只雌性SD大鼠,随机分为假手术组、UUO模型组、替米沙坦组及YHHD低、中、高剂量组,每组8只。除假手术组外,其余各组采用UUO法建立肾间质纤维化模型。各药物干预组以相应浓度的药物灌胃,模型组及假手术组以等体积生理盐水灌胃,每日1次,连续用药12周后采集标本并处死大鼠,检测大鼠血清胱抑素C(Cys-C)和尿酸(UA)的水平,PAS染色观察肾组织形态学改变,Masson染色计算肾间质胶原纤维沉积率,realtime PCR检测肾组织Krüppel样因子15(KLF15)、高迁移率族盒蛋白1(HMGB1)、核因子κB(NF-κB)及其抑制蛋白IκB、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、纤维连接蛋白(FN)、I型胶原(Col I)和Ⅳ型胶原(ColⅣ)的m RNA表达水平,Western blot检测KLF15、HMGB1和NF-κB的蛋白表达,免疫组化检测MCP-1的蛋白表达。结果:与假手术组相比,模型组的胶原纤维沉积率及Cys-C水平显著升高(P0.05),KLF15的m RNA及蛋白表达显著下调(P0.05),HMGB1、NF-κB、IκB、MCP-1、IL-1β、TNF-α、FN、Col I和ColⅣ的m RNA及HMGB1、NF-κB和MCP-1的蛋白表达显著上调(P0.05);与模型组相比,YHHD中、高剂量组及替米沙坦组的胶原纤维沉积率显著降低(P0.05),且HMGB1和NF-κB的蛋白表达以及IL-1β和TNF-α的m RNA表达显著下调(P0.05);YHHD高剂量组及替米沙坦组KLF15的蛋白表达显著上调(P0.05),MCP-1的蛋白表达及FN的m RNA表达显著下调(P0.05);YHHD高剂量组KLF15的m RNA表达显著上调(P0.05),MCP-1、Col I和ColⅣ的m RNA表达明显下调(P0.05);YHHD各剂量组及替米沙坦组NF-κB和IκB的m RNA表达及Cys-C水平明显降低(P0.05)。各组间UA水平的差异无统计学显著性。结论:益气化瘀化痰方对肾间质纤维化的抑制作用呈剂量依赖性,高剂量组作用最明显;其机制可能与上调KLF15表达、抑制肾组织HMGB1和NF-κB及其下游炎症相关因子的表达有关。     

基于CD80/CTLA-4途径探究IL-7对脓毒症T淋巴细胞功能的机制研究

目的 基于CD80/CTLA-4途径探究IL-7对脓毒症T淋巴细胞功能的影响。方法 选取我院2021年1月1日～2023年6月6日收治的104例脓毒症患者,分离患者外周血中T淋巴细胞并纯化,刺激培养T淋巴细胞并分为3组,即对照组、IL-7组和CYAL-4组。流式细胞仪分别检测T淋巴细胞凋亡率和增殖代数;ELISA检测淋巴细胞IL-7、IFN-γ、TNF-α水平;流式细胞仪检测淋巴细胞表面CD80表达;免疫荧光法检测T淋巴细胞表面CTAL-4表达。结果 与对照组相比,IL-7组和CTAL-4组T淋巴细胞凋亡率明显降低（分别为45.17±4.02、48.06±4.08）,T淋巴细胞增殖代数（分别为6.01±1.04、5.92±1.02）、T淋巴细胞中IL-7（分别为115.46±9.07、112.39±9.01）、IFN-γ（分别为21.46±2.15、20.07±2.12）、TNF-α（分别为347.15±2.26、340.87±12.08）水平明显增加（P<0.05）;但IL-7组T淋巴细胞凋亡率、增殖代数、IL-7、IFN-γ、TNF-α水平和CTAL-4组相比差异无统计学意义...     

重组HMGB1-A盒蛋白对小鼠单核细胞的抗炎作用

目的:观察高迁移率蛋白B1-A盒蛋白(HMGB1-Abox)对小鼠单核细胞系在脂多糖(LPS)刺激下表达HMGB1的影响和动态变化以及对炎性因子分泌的抑制作用。方法:利用克隆载体构建PET28a-HMGB1-Abox原核质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(ITPG)诱导后经Ni2+-NTA树脂亲和纯化得到目的蛋白;以不同浓度的重组HMGB1-Abox蛋白作用于LPS刺激的小鼠单核细胞系RAW264.7,CCK8试剂盒检测其对小鼠单核细胞活力的影响。以PBS和重组HMGB1-Abox蛋白为对照组和实验组,于2、6、12、24、48小时检测其细胞上清中的TNF-α、IL-1β的含量,Western blot、免疫荧光法观察细胞中HMGB1的表达、RT-PCR检测细胞中HMGB1-mRNA变化趋势。结果:成功构建PET28a-HMGB1-Abox原核质粒并纯化出大约为14 kD的目的蛋白。小鼠单核细胞活力与重组HMGB1-Abox蛋白浓度及作用时间呈正相关;实验组细胞上清TNF-α、IL-1β的含量较对照组显著下降;Western blot及免疫荧光检测提示实验组细胞中HMGB1表达不断减少;细胞中HMGB1-mR-NA含量及峰值均较对照组显著减少且延后。结论:重组HMGB1-Abox蛋白可以显著减少小鼠单核细胞在受到LPS刺激时HMGB1的表达和分泌,从而有效的阻断HMGB1对其他早期炎性因子的促进作用,减少炎性因子的分泌,有较强的抗炎作用。     

骨髓间充质干细胞Fas／FasL介导的免疫调节在结肠炎治疗中的作用北大核心CSCD

目的探索卵巢摘除术(OVX)所致骨质疏松症小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)与假手术组(sham)BMSC治疗结肠炎效果差异,明确Fas/FasL表达水平改变情况及其下游T淋巴细胞趋化及凋亡程度的差异。方法建立实验性结肠炎模型,OVX小鼠骨质疏松及假手术模型,对比注射OVX组与sham组小鼠BMSC治疗结肠炎的效果,检测2组BMSC对T淋巴细胞趋化及凋亡的差异,采用RT-PCR和Western blot法对BMSC的凋亡相关基因Fas/FasL的表达进行对比。结果注射雌激素缺乏所致骨质疏松小鼠的BMSC与注射假手术组的BMSC相比,表达Fas/FasL降低,从而使T淋巴细胞趋化及凋亡能力减弱,导致用OVX-BMSC治疗结肠炎效果较差。结论 OVX-BMSC通过降低自身Fas/FasL表达减弱肠炎小鼠T淋巴细胞的趋化和凋亡。     

小鼠HMGB1 B box基因的原核表达及其活性鉴定

目的：克隆小鼠HMGB1 B box基因,表达具有明显致炎活性的鼠HMGB1 B box蛋白,为深入研究其生物学功能以及新型抗炎制剂的研发奠定基础,也为进一步探讨其与H5N1禽流感病毒性肺炎的相关性奠定了基础。方法：从小鼠的肺脏组织中提取总RNA,经RT-PCR扩增小鼠HMGB1中的B box的cDNA,构建于载体pMD-18T并进行序列测定,随后构建于原核表达载体pET-28a（＋）中。IPTG诱导4小时后可见Mr约13000的蛋白。经Ni2＋亲和层析柱纯化获得高纯度的HMGB1 B box蛋白,然后用此蛋白刺激小鼠外周血单核细胞（PBMCs）,作用6小时后用ELISA检测PBMCs释放TNF-α、IL-6的含量。结果：经RT-PCR扩增得到了240bp的DNA片段,经序列分析与Genebank中报道的已知序列完全一致;成功构建了含有HMGB1 B box编码序列的原核表达载体;纯化表达的HMGB1 B box蛋白能显著地刺激小鼠PBMCs释放致炎因子TNF-α、IL-6,具有较好的生物活性。结论：原核表达的小鼠HMGB1 B box蛋白具有较好的生物活性,为进一步研究HMGB1 B box的作用机制以及新型抗炎制剂的研究奠定了基础。     

雌激素缺乏致骨质疏松症小鼠骨髓间充质干细胞通过分泌MCP-1影响T淋巴细胞趋化及凋亡

目的探讨卵巢摘除术(OVX)所致雌激素缺乏骨质疏松小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)与假手术(sham)组BMSC单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的改变,并研究其对诱导T淋巴细胞趋化及凋亡的组间差异,揭示BMSC在骨质疏松症发生中的可能作用。方法建立OVX模型及sham模型,micro-CT检测证明动物模型建立成功。ELISA检测OVX组及sham组BMSC MCP-1的表达,并对OVX组来源BMSC给予梯度浓度雌激素,观察不同浓度雌激素作用下BMSC表达MCP-1的变化。两组来源BMSC分别与T淋巴细胞共培养后,检测不同组间BMSC诱导T淋巴细胞趋化能力及凋亡的改变,同时观察外源性雌激素对这一改变的扭转作用。结果在雌激素缺乏所致骨质疏松症中,BMSC MCP-1表达能力下降,同时其诱导T淋巴细胞趋化及凋亡能力随之下降。当外源性给予一定浓度雌激素后,该下降趋势得到一定程度的扭转。结论 BMSC可能通过自身MCP-1的表达从而调控T淋巴细胞的趋化及凋亡,其免疫调节特性使其在骨质疏松症发生发展中起重要作用。     

PTX3单克隆抗体对心肌缺血再灌注小鼠炎症反应的作用

为探究抗正五聚蛋白3(pentraxin 3,PTX3)单抗对心肌缺血再灌注(myocardial ischemia/reperfusion, MI/R)小鼠炎症反应的影响，将30只小鼠随机分为3组(每组10只):假手术组、MI/R模型组和MI/R+PTX3单抗处理组。H-E染色检测小鼠心肌组织病理学改变；原位末端转移酶标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling, TUNEL)技术检测小鼠心肌细胞凋亡情况；免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)检测小鼠心肌组织中IL-17A和PTX3表达；ELISA检测小鼠外周血和心肌组织中过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)活性、心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)、TNF-α、IL-6和IL-1β浓度；Western blotting检测小鼠心肌组织中IL-17A、IL-1β和PTX3的表达；qRT-PCR分析小鼠心肌组织中IL-17A、巨噬细胞炎性蛋白2(ma...     

Calcium/calmodulin-dependent protein kinase (CaMK) Ialpha mediates the macrophage inflammatory response to sepsis

Dysregulated Ca(2+) handling is prevalent during sepsis and postulated to perpetuate the aberrant inflammation underlying subsequent organ dysfunction and death. The signal transduction cascades mediating these processes are unknown. Here, we identify that CaMKIα mediates the M? response to LPS in vitro and the inflammation and organ dysfunction of sepsis in vivo. We show that LPS induced active pThr(177)-CaMKIα in RAW 264.7 cells and murine peritoneal M?, which if inhibited biochemically with STO609 (CaMKK inhibitor) or by RNAi, reduces LPS-induced production of IL-10. Transfection of constitutively active CaMKIα (CaMKI293), but not a kinase-deficient mutant (CaMKI293(K49A)), induces IL-10 release. This production of IL-10 is mediated by CaMKIα-dependent regulation of p38 MAPK activation. CaMKIα activity also mediates the cellular release of HMGB1 by colocalizing with and regulating the packaging of HMGB1 into secretory lysosomes. During endotoxemia, mice receiving in vivo CaMKIα(RNAi) display reduced systemic concentrations of IL-10 and HMGB1 in comparison with mice receiving NT(RNAi). These data support the biological relevance of CaMKIα-dependent IL-10 production and HMGB1 secretion. In a CLP model of sepsis, CaMKIα(RNAi) mice display reduced systemic concentrations of IL-10, IL-6, TNF-α, and HMGB1 in comparison with NT(RNAi) mice, which correlate with reductions in the development of renal dysfunction. These data support that CaMKIα signaling is integral to the M? responding to LPS and may also be operant in vivo in regulating the inflammation and organ dysfunction consequent to sepsis.     

HMGB1对淋巴细胞增殖、凋亡及Th1/Th2、Tc1/Tc2漂移的影响

目的:探索HMGB1是否参与淋巴细胞免疫功能的调节.方法:系列浓度HMGB1单独或与ConA联合刺激培养小鼠脾淋巴细胞.MTT法检测细胞增殖,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡、细胞表面CD3、CD8及细胞内IL-4、IFN-γ表达.结果:(1)HMGB1时间-剂量依赖性调节淋巴细胞增殖,而不影响其凋亡.(2)不同HMGB1浓度和刺激时间不影响淋巴细胞Th1、Th2及Th1/Th2变化,但10 μg/L和100 μg/L HMGB1刺激12～24 h,Th1亚群占优势;培养12～24 h,淋巴细胞Tc1亚群明显减少,Tc2无变化.Tc1/Tc2变化显示,1 μg/L和10 μg/L HMGB1刺激,Tc1亚群占优势.(3)培养12～24 h,上清中IL-2增加,sIL-2R减少,IL-2/sIL-2R比例升高20～50倍,尤以10 μg/L HMGB1刺激明显.结论:低剂量HMGB1可增强淋巴细胞免疫功能.     

视黄酸通过TLR4/NF-κB通路对脂多糖诱导血管炎症与氧化应激的影响

目的 研究视黄酸(RA)对脂多糖(LPS)诱导的血管炎症与氧化应激的保护作用并探讨其作用机制。 方法 SD大鼠给予RA和TLR4抑制剂连续口腔灌胃2周后,除对照组外,LPS组、RA 3 mg/kg组、RA 15 mg/kg组和TLR4抑制剂组（TAK-242, 3 mg/kg）,通过腹腔注射LPS (10 mg/kg)以建立血管炎症模型。血管张力测定系统检测血管舒张功能,硝酸还原酶法检测大鼠血清中一氧化氮（NO）的含量,ELISA法检测血清中IL-18、IL-1β、TNF-α、IL-6和GSH-px的水平,WST-1法和TBA法分别检测血清中超氧化物歧化酶（SOD）活力、丙二醛（MDA）,DHE荧光探针检测血管活性氧(ROS)的水平,免疫组化法检测血管 NF-κB p65的表达,免疫印迹法检测血管TLR4、eNOS和p-eNOS的表达。 结果 与LPS组相比,RA能够改善血管舒张功能,增加p-eNOS和NO的水平,减少血清炎症因子IL-18、IL-1β、TNF-α、IL-6的含量,降低血清中MDA和ROS的生成,升高血清中SOD的生成和GSH-px的释放量,并且下调血管TLR4和NF-κB p65的表达水平。另外,RA对LPS诱导的血管炎症与氧化应激的影响与TLR4抑制剂作用相似。 结论 RA对LPS诱导的血管炎症与氧化应激具有抑制作用,其可能通过TLR4/NF-κB p65信号通路发挥作用。     

虫草素联合谷氨酰胺对LPS诱导的脓毒症大鼠炎症失衡及肝肺病理变化的影响

目的　研究虫草素（cordycepin,Cop）联合谷氨酰胺（glutamine,Gln）对脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导的脓毒症大鼠炎症失衡和肝肺病理变化的影响及其可能机制。 方法　将大鼠按体重随机分为5组：对照组、模型组（LPS组）、LPS+Cop组、LPS+Gln组和LPS+Cop+Gln组,腹腔注射LPS（5 mg/kg）诱导建立脓毒症大鼠模型。ELISA检测外周血中炎症因子IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-10的含量;HE染色观察肝肺组织的病理损伤情况;TUNEL染色观察肝肺组织的细胞凋亡情况;Western blot检测肝肺组织中Caspase-3表达水平及NF-κB p65的磷酸化情况 。 结果　LPS+Cop组、LPS+Gln组和LPS+Cop+Gln组均能逆转LPS诱导的促炎因子（IL-6、TNF-α、IL-1β）的高表达和抗炎因子（IL-10）的低表达（P<0.05）,减轻病理损伤,抑制细胞凋亡（P<0.05）,降低凋亡蛋白Caspase-3高表达（P<0.05）,下调NF-κB p65的磷酸化水平（P<0.05）。 结论　在LPS诱导的脓毒症大鼠模型中,虫草素联合谷氨酰胺能有效改善其炎症失衡和肝肺病理变化。     

虫草素联合谷氨酰胺对LPS诱导的脓毒症大鼠炎症失衡及肝肺病理变化的影响

目的　研究虫草素（cordycepin,Cop）联合谷氨酰胺（glutamine,Gln）对脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导的脓毒症大鼠炎症失衡和肝肺病理变化的影响及其可能机制。 方法　将大鼠按体重随机分为5组：对照组、模型组（LPS组）、LPS+Cop组、LPS+Gln组和LPS+Cop+Gln组,腹腔注射LPS（5 mg/kg）诱导建立脓毒症大鼠模型。ELISA检测外周血中炎症因子IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-10的含量;HE染色观察肝肺组织的病理损伤情况;TUNEL染色观察肝肺组织的细胞凋亡情况;Western blot检测肝肺组织中Caspase-3表达水平及NF-κB p65的磷酸化情况 。 结果　LPS+Cop组、LPS+Gln组和LPS+Cop+Gln组均能逆转LPS诱导的促炎因子（IL-6、TNF-α、IL-1β）的高表达和抗炎因子（IL-10）的低表达（P<0.05）,减轻病理损伤,抑制细胞凋亡（P<0.05）,降低凋亡蛋白Caspase-3高表达（P<0.05）,下调NF-κB p65的磷酸化水平（P<0.05）。 结论　在LPS诱导的脓毒症大鼠模型中,虫草素联合谷氨酰胺能有效改善其炎症失衡和肝肺病理变化。     

α7烟碱型乙酰胆碱受体激动剂抑制骨水泥微粒刺激小鼠外周血单核细胞分泌炎性因子

目的探讨α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7n AChR)激动剂PNU282987对骨水泥微粒刺激小鼠外周血单核细胞分泌炎性反应因子的影响及其分子机制。方法分离培养小鼠外周血单核细胞,使用聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)微粒刺激后,ELISA检测培养上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量;RT-PCR检测细胞TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表达;Western blot检测p-p65、p65、p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3及β-actin的表达;ELISA检测NF-κB DNA结合活力。结果单核细胞经PMMA微粒刺激后,上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量明显增高(P0.05);细胞TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达明显增高(P0.05);p65、JAK2和STAT3磷酸化明显增强(P0.05);NF-κB DNA结合活力明显增高(P0.05)。不同浓度PNU282987作用后,上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量呈浓度依耐性下降(P0.05);细胞TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达呈浓度依耐性下降(P0.05);总p65、JAK2和STAT3的表达不变;p-p65、p-JAK2和p-STAT3的表达呈浓度依耐性下降(P0.05);NF-κB DNA结合活力也呈浓度依耐性下降(P0.05)。结论α7n AChR激动剂PNU282987能显著抑制PMMA骨水泥微粒所诱导的小鼠血单核细胞炎性反应因子的分泌。     

MiR-494通过核转录因子-κB通路对脓毒症大鼠肾损伤的作用机制

目的：探讨miR-494 通过核转录因子-κB(NF-κB) 通路对脓毒症大鼠肾损伤的作用机制。方法：大鼠 分为假手术组、脓毒症大鼠模型组（ 模型组）、转染miR-494 inhibitor 脓毒症大鼠模型组（miR-494 inhibitor 组）。Masson 三色法检测大鼠肾组织病变程度,ELISA 法检测炎症因子水平,免疫印迹检测NF-κB 的蛋白表达, TUNEL 检测肾小管细胞凋亡,全自动生化分析仪检测大鼠血清及尿液中血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）及24 h 尿蛋白定量（UTP）等生物化学指标。结果：与假手术组相比,模型组及miR-494 inhibitor 组大鼠肾组织中miR- 494 表达量均升高,但miR-494 inhibitor 组大鼠miR-494 表达低于模型组;模型组和miR-494 inhibitor 组大鼠血清 中Scr、BUN 和UTP的表达水平均显著升高。与模型组相比,miR-494 inhibitor 组大鼠血清Scr、BUN、UTP水 平显著降低。假手术组肾组织结构完整,miR-494 inhibitor 组肾小球间质增多,肾间质增宽,炎症细胞浸润严重。 与miR-494 inhibitor 组相比,模型组肾小球硬度增加,肾小管周围组织炎症细胞浸润更加严重。假手术组大鼠白 介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和IL-1β 的表达水平最低,模型组大鼠IL-6、TNF-α 和IL-1β 的表达最高; 与模型组比较,miR-494 inhibitor 组大鼠IL-6、TNF-α 和IL-1β 的水平明显降低,肾小管上皮细胞的凋亡率比模型 组低,但高于假手术组。miR-494 inhibitor 组中大鼠NF-κB p65 蛋白表达比模型组低,但高于假手术组。结论： miR-494 低表达可抑制脓毒症大鼠NF-κB p65 的表达,降低炎症因子水平,从而改善肾损伤程度。     

TLR4／NF-κB信号通路在SiO2所致矽肺模型肺泡巨噬细胞脂质代谢调控中的作用#br#

目的 探讨Toll样受体4（Toll like receptor 4,TLR4）/核转录因子κB（nuclear factor-κB,NF-κB）通路在二氧化硅（SiO2）所致大鼠矽肺模型肺泡巨噬细胞的脂质代谢中的作用。 方法 按随机数字表法将36只SD大鼠分为正常组、模型组、抑制剂组。模型组、抑制剂组采用一次性气管内缓慢滴注1 mL SiO2悬浮液进行造模。造模成功后抑制剂组大鼠每天定时耳缘静脉注射TAK-242（TLR4/NF-κB信号特异性抑制剂）,剂量为0.5 mg/kg,正常组和模型组注射等剂量生理盐水。4周后处死大鼠收集支气管灌洗液（bronchial lavage fluid,BALF）,ELISA测定各组大鼠BALF中白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量;提取BALF中的肺泡巨噬细胞进行培养,油红O染色观察各组大鼠肺泡巨噬细胞的脂滴形成;Western blot检测各组肺泡巨噬细胞中TLR4、MyD88、NF-κB的表达水平。 结果 与正常组相比,模型组、抑制剂组大鼠BALF中IL-6和TNF-α的含量,巨噬细胞中油红O阳性比例,巨噬细胞中TLR4、MyD88、NF-κB的表达升高,差异具有统计学意义（均P<0.05）;与模型组相比,抑制剂组大鼠上述指标降低,差异具有统计学意义（均P<0.05）。 结论 在SiO2所致大鼠矽肺模型中,TLR4/NF-κB信号参与肺泡巨噬细胞的脂质代谢的调控,抑制该信号的表达,能明显抑制矽肺的病理损伤。     

HMGB1在TNF-α诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364增殖中的作用及机制

目的：探讨HMGB1在TNF-α诱导的大鼠滑膜RSC-364细胞增殖中的作用及机制。方法: 将常规培养的RSC-364细胞分为正常对照组和10 μg·L-1TNF-α刺激组，分别于6 h、12 h、24 h收集细胞。RT-PCR检测HMGB1、STAT1和STAT3 mRNA的表达；免疫细胞化学和流式细胞术检测HMGB1、PCNA、 STAT1和STAT3蛋白表达。结果：① TNF-α能显著上调HMGB1 mRNA和蛋白的表达，同时PCNA蛋白表达也增强（P<0.05或P<0.01）。② TNF-α 作用12 h 后，STAT1 mRNA和蛋白的表达明显增强，24 h表达最高（P<0.01）。③ TNFα 作用6 h-24 h对STAT3 mRNA和蛋白的表达无明显影响（P>0.05）。④ HMGB1蛋白表达与PCNA 、STAT1蛋白表达呈正相关；STAT1与PCNA蛋白表达亦呈正相关。结论：TNF-α可能通过诱导RSC-364细胞高度表达HMGB1，促进滑膜细胞增殖；STAT1可能参与了其信号转导及调控过程。     

白细胞介素-11在小鼠脑缺血再灌注损伤中的保护作用及其机制

目的 探讨白细胞介素-11(interleukin-11,IL-11)在小鼠脑缺血再灌注损伤中的保护作用及机制研究.方法 选择SPF级C57BL/6雄性小鼠60只,随机分成为对照组、模型组和IL-11组,每组各20只,通过线栓法构建脑缺血再灌注损伤.应用TTC染色检测脑组织梗死面积,采用Longa评分法评估各组小鼠的神...