miR-125a-5p对卵巢癌细胞的增殖迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨miR-125a-5p对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用的靶基因。方法 购入正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC,卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910各1株,通过实时定量聚合酶链式反应（RT-PCR）检测人卵巢上皮细胞HOSEpiC以及卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平。利用生物信息学方法预测miR-125a-5p的靶基因,构建预测靶基因3’端非编码区（3’-UTR）的野生型（WT）和突变型（mut）荧光素酶报告基因质粒,通过双荧光素酶报告基因法验证miR-125a-5p与预测靶基因的靶向作用。利用慢病毒感染的方法建立稳定过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞,使用荧光定量PCR和Western blot检测靶基因的表达水平。利用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞增殖能力的变化,通过Transwell迁移和侵袭试验分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞迁移和侵袭能力的变化。结果 正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC中miR-125a-5p的表达水平高于卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平,其中SKOV3中miR-125a-5p的表达水平最低,差异均有统计学意义（P<0.05）,选择SKOV3进行后续实验。生物信息学分析显示,miR-125a-5p能够靶向结合Rab3D的3’-UTR;双荧光素酶报告基因分析证实miR-125a-5p能够靶向作用于Rab3D的3’-UTR。筛选稳定表达miR-125a-5p和si-Rab3D及相应对照的SKOV3细胞,分别命名为SKOV3/miR-125a-5p组,SKOV3/si-Rab3D组,SKOV3/miR-NC组和SKOV3/si-NC组。在SKOV3/miR-125a-5p组中,Rab3D的表达水平低于SKOV3组和SKOV3/miR-NC组,差异均有统计学意义（P<0.05）。细胞增殖能力检测结果显示,与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,SKOV3/miR-125a-5p组在72小时和96小时细胞增殖能力降低,差异有统计学意义（P<0.05）。Transwell迁移和侵袭试验结果显示,SKOV3/miR-125a-5p组分别与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,细胞迁移和侵袭能力均显著下降,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 miR-125a-5p能够靶向作用Rab3D,抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-200a-3p通过靶向MMP-1抑制膀胱癌T24细胞侵袭及转移

探讨miR-200a-3p靶向调控MMP-1对膀胱癌T24细胞迁移和侵袭能力的影响.运用TargetScan Human 7.2生物信息学软件预测miR-200a-3p的下游靶基因,采用双荧光素酶报告实验验证MMP-1为miR-200a-3p的下游靶基因.在T24细胞中转染miR-200a-3p mimics或miR-...     

miR-130a-3p下调STAT3对恶性黑素瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的探讨miR-130a-3p对黑素瘤细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响以及潜在的作用机制。方法运用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测黑色素瘤细胞A2058、WM239和正常人黑色素细胞HEMn中miR-130a-3p和STAT3 mRNA的表达水平;将miR-NC组(转染miR-NC)、miR-130a-3p组(转染miR-130a-3p mimics)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-130a-3p组(转染anti-miR-130a-3p)、miR-130a-3p+pcDNA3.1组(共转染miR-130a-3p和pcDNA3.1)、miR-130a-3p+pcDNA3.1-STAT3组(共转染miR-130a-3p和pcDNA3.1-STAT3)、miR-NC+WT-STAT3组(共转染miR-NC和WT-STAT3)、miR-NC+MUT-STAT3组(共转染miR-NC和MUT-STAT3)、miR-130a-3p+WT-STAT3组(共转染miR-130a-3p和WT-STAT3)、miR-130a-3p+MUT-STAT...     

miR-579-3p过表达抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的 探讨miR-579-3p在宫颈癌HeLa细胞中的表达及对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,及其潜在机制。方法 将细胞分为H8组[正常培养正常宫颈上皮永生化细胞(H8细胞)]、HeLa组[正常培养宫颈癌细胞(HeLa细胞)]、HeLa+mimic-NC(HeLa细胞转染mimic-NC)和HeLa+mimic-miR-579组(HeLa细胞转染mimic-miR-579-3p)。用细胞计数试剂盒检测各组细胞的增殖情况,用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-579-3p和上皮细胞-间充质转化(EMT)相关基因mRNA的表达水平,用迁移实验和侵袭小室法检测细胞的迁移和侵袭情况。结果 H8组中miR-579-3p mRNA相对表达水平(1.00±0.04)显著高于HeLa组(0.12±0.01),差异有统计学意义(P<0.001)。HeLa+mimic-NC组和HeLa+mimic-miR-579组的miR-579-3p mRNA相对表达水平分别为0.13±0.01和0.83±0.10,第2天的增殖能力分别为165.91±9.46和111.35±9.66,侵袭细胞数分别为(124....     

FOXD3-AS1与miR-135a-5p的相互作用及对肾细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探究FOXD3-AS1与miR-135a-5p的相互作用及对肾细胞癌(RCC)ACHN细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 选取本院2017年1月—2019年12月RCC手术切除癌组织和癌旁组织60份,RT-qPCR检测组织和细胞中FOXD3-AS1和miR-135a-5p表达水平;ACHN细胞分别或联合转染si-NC、si-FOXD3-AS1-1、si-FOXD3-AS1-2、miR-NC、miR-135a-5p mimic、pcDNA3.1-FOXD3-AS1和miR-135a-5p inhibitor;行Transwell实验检测各组细胞侵袭能力;行划痕闭合实验检测各组细胞迁移能力;行双荧光素酶实验检测靶向关系。建立裸鼠RCC移植瘤模型,分为si-FOXD3-AS1组和si-NC组,每组6只,建模后30 d处死测定移植瘤质量,采用免疫组织化学法检测Ki-67和E-cadherin阳性表达率。结果 与癌旁组织比较,癌组织中FOXD3-AS1表达显著上升,miR-135a-5p表达显著下降(P<0.01)。FOXD3-AS1干扰显著降低细胞活力、侵袭数目和划痕闭合率(P<...     

miR-514b-3p靶向MDM2对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探讨miR-514b-3p在肺癌组织中的表达水平,研究miR-514b-3p对肺癌细胞增殖、迁移侵袭的影响和分子机制.方法 qRT-PCR检测52例肺癌组织和与其对应的癌旁组织中miR-514b-3p的表达水平.构过表达miR-514b-3p的A549细胞株,MTT法检测细胞活力,Transwell法检测细胞迁移...     

LncRNA PSMA3-AS1调控miR-27b-3p对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)人蛋白酶体α亚基3型反义RNA1(PSMA3-AS1)通过调控微小RNA-27b-3p(miR-27b-3p)对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响。方法 选取20例非小细胞肺癌标本和20例健康志愿者肺部上皮样本。购买人体正常的肺部上皮细胞H1299、H358、A549及NC-LH2073.采用实时荧光RT-PCR检测LncRNA PSMA3-AS1、miR-27b-3p表达,构建抑制LncRNA PSMA3-AS1表达的A549细胞,采用MTT法、流式细胞仪、Transwell检测细胞增殖、凋亡、迁移情况,Western Blot法检测细胞周期蛋白-D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达变化。结果 与人体正常肺上皮组织相比,非小细胞肺癌组织中LncRNA PSMA3-AS1表达升高,miR-27b-3p表达下降(P<0.05)。与BEAS-2B组相比,H1299组、H358组、NC-LH2073组、A549组中LncRNA PSMA3-AS1水平上升,miR-27b-3p水平降...     

LncRNA Linc00152靶向miR-193a-3p对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探讨LncRNA Linc00152靶向调控miR-193a-3p对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法 采用qRT-PCR法检测正常胃黏膜细胞GES-1及4种胃癌细胞(MGC803、BGC803、SGC7901、AGS)中Linc00152的表达水平。MGC-803细胞分为pcDNA3.1-GFP-Linc00152组、pcDNA3.1-GFP组;AGS细胞分为si-Linc00152组、si-NC组,分别转染相应的Linc00152过表达和抑制载体。qRT-PCR法检测Linc00152、细胞周期素D1(cyclin D1,CCND1)和miR-193a-3p基因的表达水平,CCK-8检测细胞的活性,细胞克隆试验检测细胞的克隆能力,Annexin VFITC/PI染色后采用流式细胞术检测转染细胞凋亡率,Transwell法检测细胞侵袭,荧光素酶报告试验检测Linc00152和miR-193a-3p靶向关系,Western blotting检测Bcl-2、Bax、CCND1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的蛋白表达水平。并将si-Linc00152组、si-NC组细胞接种裸鼠,观察裸鼠体质量和一般状态,处死后称重记录肿瘤体积、质量,qRT-PCR法测定肿瘤组织Linc00152、CCND1和miR-193a-3p的表达水平。结果 与GES-1细胞相比,胃癌细胞MGC803、BGC803、SGC7901、AGS中Linc00152的表达升高,其中Linc00152在胃癌MGC803细胞中表达较低,而在胃癌AGS细胞中的表达较高,选用胃癌MGC803、AGS细胞进行后续试验。与pcDNA3.1-GFP组相比,pcDNA3.1-GFP-Linc00152组细胞的活性显著升高,克隆能力增强,细胞凋亡减少,侵袭能力显著上升,CCND1、Bcl-2、波形蛋白的表达显著升高,miR-193a-3p和E-钙黏蛋白的表达显著降低。双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,Linc00152可直接调控miR-193a-3p的转录活性,且Linc00152可显著上调MGC-803细胞CCND1蛋白表达。与si-NC组相比,si-Linc00152组的裸鼠体内的异种移植瘤体积和体质量显著下降,CCND1和Linc00152的表达显著下降,miR-193a-3p的表达显著上升。结论 Linc00152可靶向作用于miR-193a-3p促进胃癌细胞增殖、侵袭和迁移,其作用机制与细胞周期、上皮细胞间充质转化以及细胞凋亡有关。     

知母皂苷AⅢ通过miR-129-5p/STAT3轴调节肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨知母皂苷AⅢ(TAⅢ)对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响机制。方法:用不同浓度的TAⅢ处理A549细胞后,CCK-8法检测TAⅢ对A549细胞的细胞毒性。体外培养A549细胞,分为对照组(Control组)、TAⅢ组(20μmol·L^-1)、TAⅢ+anti-NC组、TAⅢ+anti-miR-129-5p组,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中miR-129-5p、信号转导和转录激活因子3(STAT3)mRNA表达,蛋白质印迹(Western blot)检测STAT3及其磷酸化蛋白(p-STAT3)表达,平板克隆实验检测细胞增殖活力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。双荧光素酶实验验证miR-129-5p和STAT3的靶向关系。BALB/c裸鼠移植瘤实验检测TAIII在体内的抗肿瘤活性,免疫组织化学(IHC)法检测肿瘤组织Ki-67、p-STAT3表达。结果:低浓度TAⅢ(1,5μmol·L^-1)对A549细胞存活率无显著影响(P>0.05),高浓度TAⅢ(10,20,30,6...     

LncRNA PTCSC3 inhibits the proliferation,invasion and migration of cervical cancer cells via sponging miR-574-5p

Dysregulation of long non-coding RNA papillary thyroid carcinoma susceptibility candidate 3 (lncRNA PTCSC3) has been found to correlate with various types of cancers. Quantitative RT-PCR showed a down-regulation of PTCSC3 in cervical cancer tissues compared with normal cervical tissues. The present study aimed to investigate the role of lncRNA PTCSC3 in cervical cancer and the underlying mechanisms. PTCSC3 was overexpressed in cervical cancer cell lines C-33A and Hela by transfection with pcDNA3.1-lncRNA PTCSC3 expressing plasmid. Overexpression of lncRNA PTCSC3 inhibited cell proliferation, induced cell cycle arrest, and suppressed cell invasion and migration using CCK8 assay, flow cytometry, Transwell assay and wound healing examination, respectively. Western blotting analysis showed that PTCSC3 overexpression decreased the expression of cyclinD1, matrix metalloproteinases 9 (MMP9), N-cadherin and β-catenin and increased E-cadherin expression. Further, PTCSC3 negatively regulated miR-574-5p expression and dual-luciferase assay verified the binding activity between miR-574-5p and lncRNA PTCSC3. Enforced up-regulation of miR-574-5p abolished the inhibitory effect of lncRNA PTCSC3 on cervical cancer cell proliferation, invasiveness and mobility. Taken together, lncRNA PTCSC3 inhibited cell growth and metastasis via sponging miR-574-5p in cervical cancer. Therefore, we demonstrate the tumour-suppressive function of lncRNA PTCSC3 in cervical cancer and suggest that PTCSC3 is a potential therapeutic target for cervical cancer.     

姜黄素介导微小RNA-199a-3p基因对前列腺癌细胞的影响

目的 探讨姜黄素调控微小RNA-199a-3p(miR-199a-3p)的表达对前列腺癌C4-2细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 (1)将体外培养的前列腺癌C4-2细胞分为4组:空白组(无药物干预)和低、中、高3个剂量实验组(20,40,80μmol·L-1姜黄素干预),选取对C4-2细胞的增殖抑制最明显姜黄素浓度用于...     

刺槐素通过调控LZTFL1表达抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨刺槐素对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法用浓度分别为4、8、16 μmol/L的刺槐素处理A549细胞,作为低、中、高浓度组,不作任何处理的细胞作为对照组;将pcDNA、pcDNA-LZTFL1转染至A549细胞中,记为pcDNA组、pcDNA-LZTFL1组;将si-NC、si-LZTFL1转染至A549细胞中再用16 μmol/L的刺槐素处理,记为刺槐素+si-NC组、刺槐素+si-LZTFL1组。四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞增殖抑制率;Western blotting法检测LZTFL1、CyclinD1、p21、MMP-2、MMP-9蛋白表达;Transwell检测细胞迁移和侵袭;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测LZTFL1 mRNA表达水平。结果与对照组比较,刺槐素低、中、高浓度处理的肺癌A549细胞中细胞增殖抑制率显著升高,细胞迁移、侵袭数显著降低,CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平显著降低,p21蛋白表达水平显著升高,LZTFL1 mRNA和蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。过表达LZTFL1抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。干扰LZTFL1表达逆转了刺槐素对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论刺槐素可能通过上调LZTFL1的表达抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-4795-3p通过靶向EGFR抑制胃癌细胞的增殖和侵袭

目的:探讨微小RNA（miRNA）-4795-3p通过靶基因表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）抑制胃癌细胞增殖和侵袭。方法:本研究于2020年6月至12月分别转染阴性对照模拟物（阴性对照组）和miR-4795-3p模拟物（miR-4795-3p组）至胃癌BGC...     

miR-199a-5p调控DDR1抑制人脑胶质瘤细胞增殖和迁移

目的初步探究miR-199a-5p对人脑胶质瘤细胞增殖和迁移的影响。方法选取U251细胞为实验对象,构建miR-199a-5p过表达U251细胞株。实验分组:对照组(无转染的U251细胞,Control)、阴性对照组(转染空载体质粒U251细胞,NC)以及实验组(转染miR-199a-5p成熟模拟物,mimics)。实时荧光定量PCR检测各组细胞miR-199a-5p表达;CCK-8检测转染miR-199a-5p后细胞增殖;细胞划痕实验与Transwell迁移实验检测各组U251迁移情况;Western blot检测DDR1表达;构建DDR1过表达U251细胞株,检测DDR1过表达对转染miR-199a-5p的U251细胞增殖和迁移的影响。结果mimics组细胞miR-199a-5p水平高于control组(P<0.01),细胞活力降低(P<0.01),增殖能力减弱(P<0.01)。转染miR-199a-5p组细胞DDR1表达水平降低(P<0.01)。与mimins组相比,转染pcDNA3.1-DDR1组能够上调DDR1(P<0.01),增加细胞活力,促进细胞增殖(P<0.05或P<0.01)。结论miR-199a-5p能够下调DDR1表达,抑制人脑胶质瘤细胞增殖和迁移。     

黄芩苷通过上调miR-485-5p的表达抑制前列腺癌细胞的增殖

目的：从miRNAs的角度研究黄芩苷对前列腺癌细胞增殖的影响及其作用机制。方法：将不同浓度的黄芩苷作用22RV1细胞,应用MTT检测细胞的增殖情况,筛选最佳药物浓度;应用Real-Time PCR检测不同细胞系中miR-485-5p的表达量;检测黄芩苷处理22RV1细胞后miR-485-5p及JAK3 mRNA的表达;应用Western blot检测JAK3蛋白的表达;应用双荧光素酶基因系统验证miR-485-5p与JAK3的靶向作用关系;应用MTT法检测细胞的生存率。结果：筛选出最佳药物浓度为100 μmol·L^-1;22RV1细胞中miR-485-5p的表达量明显低于正常前列腺细胞;黄芩苷刺激细胞后miR-485-5p的表达上调;黄芩苷或miR-485-5p mimics可抑制前列腺癌细胞的JAK3 mRNA和蛋白的表达,miR-485-5p inhibitor可使JAK3 mRNA及蛋白的表达水平上调;黄芩苷或miR-485-5p均可抑制前列腺癌细胞的增殖。结论：黄芩苷通过上调miR-485-5p的表达,抑制前列腺癌细胞的增殖。     

微小RNA-3682-3p通过下调GAS8基因促进肝癌细胞迁移、侵袭的研究

目的探讨肝细胞癌中miR-3682-3p的表达情况、临床意义和作用机制。方法待实验所需肝癌细胞、正常肝细胞(L02)培养与转染后,采用实时定量PCR(qPCR)检测miR-3682-3p在肝癌组织、癌旁组织、L02细胞和肝癌细胞系中的表达情况,利用TCGA数据库分析正常肝组织、肝癌组织中miR-3682-3p的表达差异,分析miR-3682-3p的表达与肝癌患者临床病理特征、预后的关系;通过Transwell实验评价细胞侵袭、迁移能力;通过TargetScan数据库预测获得下游靶基因,采用qPCR、Western blotting法分析miR-3682-3p对生长抑制特异性基因8(GAS8)的表达的调控作用,并利用双荧光素酶报告基因实验加以验证。结果与癌旁组织和正常肝细胞比较,miR-3682-3p在肝癌组织、细胞系中均高表达(P0.05),并与门静脉侵犯、Edmondson分级、TNM分期有关;基于TCGA数据库数据的生存分析显示,miR-3682-3p高表达与不良预后相关;在MHCC97-H细胞中敲减miR-3682-3p显著抑制细胞的侵袭、迁移(P0.05);通过生物信息学预测加以实验验证证实GAS8是miR-3682-3p的直接靶基因,并通过回复实验证实GAS8介导了miR-3682-3p对肝癌细胞侵袭及迁移能力的促进作用。结论 miR-3682-3p在肝癌中通过靶向抑制抑癌基因GAS8从而促进肝癌细胞侵袭、迁移。     

毛蕊花苷通过miR-708-3p抑制乳腺癌MCF-7细胞的恶性表型

目的 探究毛蕊花苷对乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭及上皮-间质转化(EMT)的影响.方法 人乳腺癌MCF-7细胞随机分为对照组(生理盐水)以及实验组(毛蕊花苷50μmol·L-1).给药24 h后,CCK-8法检测各组细胞存活率;Transwell实验检测各组细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测EMT...     

紫花牡荆素抑制小细胞肺癌NCI-H446细胞系肺癌干细胞样细胞侵袭和转移的研究

目的探讨紫花牡荆素(CAS)抑制人小细胞肺癌NCI-H446细胞系肺癌干细胞样细胞(LCSLCs)侵袭和转移作用。方法体外培养人小细胞肺癌NCI-H446细胞系细胞和LCSLCs。流式细胞术(FCM)检测CD133+表达。Trawell法检测LCSLCs侵袭和转移能力。Trawell法测定CAS对LCSLCs侵袭、转移能力的抑制作用。结果 LCSLCs呈现典型非黏附三维球状,并高表达CD133+。Trawell法结果显示LCSLCs具有很强的体外侵袭和转移能力,而CAS能显著抑制LCSLCs的体外侵袭和转移能力。结论 CAS能显著抑制LCSLCs的体外侵袭和转移能力。