28个不同采集地土茯苓(断面红色、白色)中落新妇苷分析及抗炎作用的比较

目的:采用HPLC分析测定28个不同采集地土茯苓(断面红色、白色)中落新妇苷的含量,并通过对土茯苓(断面红色、白色)渗透型炎症的研究,拟对该品种进行药效与成分的评价.方法:RP-HPLC测定落新妇苷含量,采用依利特Hypersil ODS2色谱柱(4.6 mm× 250 mm,5μm),流动相乙腈-0.1％冰醋酸溶液(21∶ 79),流速1.0 mL·min-1,检测波长291 nm,柱温25℃,理论塔板数以落新妇苷计不得低于5 000.用毛细血管通透性试验比较不同断面颜色药的抗炎作用.结果:在选定的色谱条件下,落新妇苷在0.003 379 ～4.004 μg呈良好线性关系.加样回收实验加样80％,100％,120％,平均回收率分别为100.1％,101.9％,99.3％.断面白色土茯苓中落新妇苷质量分数为0.19％ ～2.46％,断面红色土茯苓中落新妇苷质量分数为2.10％ ～ 5.92％.药效学实验结果表明,断面白色土茯苓抗炎抑制率为32％,断面红色土茯苓抗炎抑制率仅为21％.结论:红、白2种断面土茯苓中落新妇苷的含量及抗炎作用均存在较大差异,土茯苓中落新妇苷的含量高低与其抗炎作用的强弱不呈正相关.     

断面红棕色及类白色土茯苓抗炎作用的比较研究

目的:考察断面红棕色及类白色的土茯苓醇提液是否具有抗炎作用?并探讨哪种断面颜色土茯苓抗炎效果更佳。方法:小鼠以尾静脉注射伊文思蓝,二甲苯涂腹部致炎,以腹部染料的渗出量,进行急性(渗透型)炎症抗炎作用的评价;以棉球肉芽肿法,进行慢性(增殖型)炎症抗炎作用的评价;大鼠液体石蜡致炎实验对炎性物质NO释放程度进行评价。结果:二甲苯致小鼠腹部毛细血管通透性影响试验中,断面红棕色及类白色的土茯苓(7g/kg)均能减少染料的渗出量,抑制率分别为21%和32%。而对棉球肉芽肿试验中,断面红、白二色的土茯苓均能减少肉芽肿的增生,二者高剂量组(10g/kg)抑制率分别为25%和24%,低剂量组(7g/kg)抑制率分别为37%和25%。在大鼠液体石蜡致炎试验中,断面红棕色及类白色的土茯苓(7g/kg)均能减少血清中NO的产生,抑制率分别为34%和62%。结论:断面红、白二色的土茯苓醇提液均具有抗炎作用。在急性(渗透型)炎症中断面类白色土茯苓组的抗炎效果要优于断面红棕色土茯苓组;在慢性(增殖型)炎症中断面红棕色土茯苓组抗炎效果要优于断面类白色土茯苓组。     

基于HPLC指纹图谱结合灰色关联度与聚类分析对不同产地石榴皮质量评价研究

目的 对采自不同产地的11批次石榴皮样品建立HPLC指纹图谱,确定了21个色谱峰为共有峰,测定了石榴皮中主要成分的含量,利用灰色关联度结合聚类分析与判别分析,建立一种新型石榴皮质量综合评价方法。方法 采用甲醇-0.1%磷酸为流动相,梯度洗脱,建立11批次石榴皮的高效液相指纹图谱;采用HPLC测定石榴皮中没食子酸、安石榴苷和鞣花酸的含量;利用灰色关联结合聚类分析与判别分析相结合的方法对指纹图谱和化学成分进行量化数据处理。结果 建立的11批次石榴皮HPLC指纹图谱相似度良好,灰色关联分析结果表明S5(江苏)、S1(四川)、S3(河北)和S8(安徽)的药用价值更好;通过聚类分析发现11批次石榴皮的药用价值可分为5类,其中S5(江苏)为第一类,S7(陕西)和S8(安徽)为第二类,S1(四川)、S2(江苏)、S3(河北)分为第三类,两种分析结果相互印证、相互补充,同时判别分析进一步验证了聚类分析的结果,分析结果科学严谨。结论 HPLC指纹图谱结合灰色关联度与聚类分析与判别分析对11批次不同产地的石榴皮进行质量评价,所建立的方法准确可靠,可用于石榴皮药材内在质量的综合评价,为石榴皮适宜产地的优选及其质量控制方法的规范化和标准化提供基础资料。     

土茯苓黄酮类成分一测多评方法的建立及含量变化规律研究

目的建立土茯苓Smilax glabra中新落新妇苷、落新妇苷、新异落新妇苷、异落新妇苷和黄杞苷的一测多评测定方法(QAMS)并研究不同生长年限土茯苓中各成分含量的动态变化规律。方法采用高效液相色谱法,以土茯苓中的落新妇苷为内参物,计算该成分与新落新妇苷、新异落新妇苷、异落新妇苷和黄杞苷的相对校正因子,用获得的相对校正因子计算各指标成分的含量并与外标法的测定结果进行对比,考察方法的准确性和可行性。采用建立的QAMS法测定不同生长年限土茯苓中各指标成分的含量,研究其动态变化规律。结果共测定不同生长年限样品5批23份,各指标成分一测多评法与外标法计算结果偏差均小于1.0%。各指标成分含量与生长年限具有一定相关性,落新妇苷的含量与生长年限呈负相关,新落新妇苷、新异落新妇苷和异落新妇苷的含量与生长年限呈正相关,两者的变化趋势相反。结论建立的QAMS法准确、可靠,可用于土茯苓中5个成分的定量分析。生长年限对土茯苓中4种落新妇苷类成分含量均具一定影响。     

断面红棕色及类白色土茯苓药材中总鞣质的含量分析

土茯苓在药材断面有类白色及淡红棕色2种.在前期的实验发现,2种断面颜色的土茯苓在抗炎效果和化学成分方面有较大差异.该文首次以紫外-可见分光光度法对28个不同采集地断面红棕色及类白色土茯苓巾的总鞣质含量进行比较分析,旨在为该药材资源的合理开发利用及质量控制提供一定的实验及理论依据.在实验中对2010年版《中国药典》鞣质含量测定方法中加样回收进行了改进,以鞣酸代替没食子酸进行加样回收试验.     

正交试验优选土茯苓(断面红棕色及类白色)药材中总鞣质的提取工艺

目的基于药效学试验来优选并建立土茯苓(断面红棕色及类白色)药材中总鞣质的最佳提取工艺。方法采用单因素试验、L9(34)正交优化试验及紫外-可见分光光度法,研究提取溶剂浓度、提取时间及次数、料液比对土茯苓(断面红棕色及类白色)药材中总鞣质含量的影响。结果以总鞣质为指标,断面红棕色土茯苓药材最佳提取工艺为:70%丙酮,超声提取40 min,料液比为1.5 g∶25 ml,提取3次;而断面类白色土茯苓药材则为:60%丙酮,超声提取40 min,料液比为1.5 g∶25 ml,提取2次。结论通过正交试验优选的提取工艺方法可行、重复性好、总鞣质提取率高,对土茯苓(断面红棕色及类白色)药材中筛选关键有效部位的药效学试验提供了最佳给药组。     

基于多元统计方法和成分差异分析栀子及其炮制品质量

目的 建立栀子Gardenia jasminoides的UPLC指纹图谱，比较栀子及其炮制品之间的差异。方法 收集2个产地10批栀子，使用不同方法炮制，采用Waters Acquity UPLC BEH C₁₈色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm)，栀子及其炮制品用甲醇超声提取制备溶液，以乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相，梯度洗脱，进样量1μL，柱温30℃，体积流量0.2 mL/min，检测波长为239 nm与440 nm，建立其UPLC指纹图谱。运用总量统计矩相似度、灰色关联度、TOPSIS和主成分分析(principal component analysis,PCA)对栀子的UPLC特征指纹图谱进行数据分析。结果 栀子及其炮制品的UPLC特征指纹图谱的共有标志峰20个，其中4个鉴定为栀子苷、京尼平龙胆双糖苷、西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ。2产地的栀子经炮制成焦栀子后，栀子苷、西红花苷Ⅰ与西红花苷Ⅱ含量有所减少。湖南湘乡地区栀子经炮制后其京尼平龙单双糖苷含量有一定增加。结论 所建立的栀子不同炮制品特征指纹图谱共有20个标志峰，不同炮制品之间标志峰峰面积和含量...     

基于指纹图谱和OPLS-DA的越南和国产土茯苓差异性化合物探索

目的:分析越南和国产土茯苓化学成分的差异,对差异性化合物进行辨识,并对样品进行产地鉴别。方法:收集越南土茯苓7份,国产土茯苓28份。建立越南和国产土茯苓化学成分色谱指纹图谱,根据相似度评价结果比较两者的差异程度,采用HPLC-MS对指纹图谱的主要色谱峰进行归属,共鉴定21个峰。采用聚类分析对样品进行产地鉴别;结合正交信号校正偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)进行差异性化合物的筛选,选取位于S-plot图两端并且VIP1的点作为区分越南与国产土茯苓的差异性化合物。结果:越南和国产土茯苓主要化学成分的含量存在差异性,聚类分析可将35批土茯苓药材分为越南和国产2组,两者的差异性化合物分别为落新妇苷、异落新妇苷、新落新妇苷、黄杞苷,越南土茯苓中差异性化合物的含量显著大于国产土茯苓。结论:采用OPLS-DA分析样品的指纹图谱,既可从整体角度分析越南和国内土茯苓化学成分的异同,又可对两者差异性化合物进行辨识,为越南土茯苓入药的可能性及其质量评价提供实验数据。     

高效液相色谱法测定土茯苓中落新妇苷、阿魏酸、白藜芦醇含量

目的:确立土茯苓药材中阿魏酸、落新妇苷、白藜芦醇三种指标成分的含量。方法:应用高效液相色谱法(HPLC)测定,色谱条件为ODS-C18色谱柱(5μm,150x4.6mm),流动相为乙腈-0.05%磷酸水溶液(18:82),流速1.0mL/min,测定波长290nm。结果 :阿魏酸、落新妇苷、白藜芦醇分别在0.02088~0.1044ug、0.4284~2.142ug、0.0432~0.216ug范围内线性关系良好;样品中阿魏酸、落新妇苷、白藜芦醇评价含量分别为0.05964mg/g、0.01455mg/g、0.01839mg/g。结论:该方法操作简单、准确,可作为土茯苓质量控制方法。     

基于提取温度控制的土茯苓配方颗粒溶化性改善策略研究

目的 通过降低提取温度改善土茯苓Smilacis Glabrae Rhizoma提取物及其配方颗粒的溶化性。方法 分别采用回流提取、煮开后80℃水浴浸提、直接80℃水浴浸提、煮开后70℃水浴浸提、直接70℃水浴浸提5种方法制备土茯苓提取物并对各提取物的溶化性进行分析,同时考察5种提取方法对土茯苓提取物的特征图谱、多糖与淀粉含量、出膏率、落新妇苷含量及转移率的影响。结果 上述5种方法制备的提取物中不溶物含量分别为34.93%、26.67%、24.48%、29.65%、4.03%,与回流提取相比其余4种提取方法均能改善土茯苓提取物的溶化性,其中直接70℃水浴浸提对溶化性改善最明显。不同提取方法制备的土茯苓提取物的特征图谱无明显差异,表明其质量稳定。相比于回流提取,直接70℃水浴浸提的土茯苓提取物的淀粉含量降低了11.74%;落新妇苷含量(38.6 mg/g)及其转移率最高(60.95%)。结论 采用70℃水浴浸提法可显著改善土茯苓配方颗粒的溶化性。     

不同采集地土茯苓中(切面红色、白色)总糖及多糖含量分析与体外抗氧化作用

目的:分析测定26个不同采集地土茯苓中(切面红色、白色)总多糖及多糖的含量并探讨其体外抗氧化活性。方法:采用蒽酮-硫酸比色法,比较分析不同产地及不同切面颜色土茯苓中总糖及多糖含量;同时,以抗坏血酸为阳性对照,通过DPPH自由基(1,1-二苯基-2-苦肼基自由基)清除法来评价该药材中总糖与多糖的抗氧化能力。结果:切面红色土茯苓中总糖的质量分数为1.897 3%~11.680 9%,多糖为0.048 0%~1.863 4%;切面白色土茯苓中总糖的质量分数为7.957 5%~81.681 0%,多糖为0.413 2%~7.963 9%,两者含量差异较大;抗氧化结果表明,总糖及多糖均有清除自由基活性,其IC50依次为抗坏血酸(0.033 4 g·L-1)切面红色多糖(0.176 7 g·L-1)切面白色多糖(0.294 9 g·L-1)切面红色总糖(0.354 8 g·L-1)切面白色总糖(0.769 5 g·L-1)。结论:不同切面颜色及不同产地土茯苓药材中总糖及多糖的含量存在显著性差异,其多糖的含量高低与抗氧化作用的强弱不呈正相关。     

不同产地土茯苓药材UPLC及HPLC指纹图谱的构建研究

目的 建立土茯芩药材超高效液相色谱(UPLC)及高效液相色谱(HPLC)指纹图谱的分析方法,研究不同产地土茯苓药材的质量.方法 分别采用UPLC与HPLC对12批土茯苓药材进行指纹图谱分析,运用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件计算不同产地样品之间的相似度.结果 分别建立了土茯苓药材的UPLC与HPLC指纹图谱共有模式,两种方法均可标示出16个共有特征峰,12批样品的相似度均大予0.9.结论 建立的两种方法均准确可靠,重复性好,可用于土茯苓药材的质量控制.     

不同基原柴胡配方颗粒的鉴别研究

目的 基于超高效液相色谱(UPLC)特征图谱,建立快速、有效鉴别南、北柴胡配方颗粒的方法。方法 采用色谱柱ACQUITY UPLC^® BEH C₁₈(2.1 mm×100 mm,1.7 μm),流动相为乙腈-水,流速0.4 mL·min^-1梯度洗脱,检测波长为211 nm,250 nm,柱温35 ℃,对南、北柴胡配方颗粒进行特征图谱测定,分析特征峰差异。结果 特征图谱方法精密度、稳定性良好,表明建立的方法合理、可行。其中北柴胡配方颗粒特征图谱有9个共有峰,南柴胡配方颗粒特征图谱有12个共有峰,南、北柴胡配方颗粒有7个共有峰,说明两者主要化学成分大体相同,个别成分存在一定差异。以特征峰差异可以对南、北柴胡配方颗粒进行区分,并进一步确定了南、北柴胡配方颗粒鉴别的直观区分点(β值)。结论 UPLC特征图谱可对南、北柴胡配方颗粒进行质量评价,且能快速、准确、直观地反映南、北柴胡配方颗粒的基原差异,为南、北柴胡配方颗粒合理的临床应用提供重要的数据支撑。     

巴戟天及根皮与木心UPLC特征指纹图谱与化学模式识别方法研究

目的建立基于UPLC特征指纹图谱-化学模式识别方法研究巴戟天Morindae Officinalis Radix及根皮与木心的差异性。方法采用UPLC技术建立巴戟天根皮与木心环烯醚萜类和寡聚糖类特征指纹图谱,结合相似度分析、方差分析、聚类分析、主成分分析(PCA)进行化学模式识别研究。结果分别建立了巴戟天及根皮与木心环烯醚萜类和寡聚糖类UPLC特征指纹图谱,并分别确定了12个和20个共有峰,巴戟天根皮与木心UPLC特征指纹图谱差异性明显。结论巴戟天环烯醚萜类和寡聚糖类UPLC特征指纹图谱-化学模式识别方法分析能够整体、全面、真实地反映出巴戟天根皮与木心的差异性,为巴戟天去木心必要性提供了依据。     

复方苦参注射液UPLC指纹图谱检测及6种成分含量测定

目的 建立复方苦参注射液的超高效液相色谱法(UPLC)指纹图谱,并同时测定其中6种指标成分的含量。方法 采用ACQUITY UPLC CSH^TM C₁₈(2.1 mm×100 mm,1.7 μm)色谱柱,以甲醇2 g·L^-1磷酸二氢钾为流动相梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1,柱温30℃,检测波长211 nm。结果 建立复方苦参注射液UPLC指纹图谱,确立了9个共有峰,10批样品相似度均大于0.99。甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷、苦参碱、槐果碱、槐定碱、氧化槐果碱、氧化苦参碱6种成分在相应浓度范围内与峰面积的线性关系良好,平均加样回收率分别为100.42%、100.90%、101.45%、103.85%、99.95%、100.46%,相对标准偏差(RSD)值分别为1.96%、0.67%、1.60%、1.15%、1.02%、1.20%。结论 本研究建立的复方苦参注射液的UPLC指纹图谱及多成分含量测定方法,操作简单,重复性好,稳定可靠,为复方苦参注射液的质量标准研究提供更加全面的依据。     

基于UPLC指纹图谱结合多模式识别的荆芥穗炮制前后差异研究

目的 测定荆芥穗炮制前后的超高效液相色谱法（UPLC）指纹图谱,结合不同模式识别方法比较炮制前后差异,为荆芥穗和荆芥穗炭质量控制及评价提供参考。方法 采用UPLC对荆芥穗炮制前后样品进行测定,生成对照指纹图谱,通过相似度分析、对照品指认、方差分析、聚类分析（HCA）、主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘法-判别分析（OPLS-DA）对荆芥穗炮制前后进行多模式识别研究。结果 分别建立了荆芥穗和荆芥穗炭的UPLC指纹图谱,确定了13个共有峰,指认4、9、11、13号峰分别为木犀草苷、迷迭香酸、胡薄荷酮、木犀草素;相似度结果显示,炮制前后相似度均大于0.9,HCA、PCA、OPLS-DA结果可明显将荆芥穗和荆芥穗炭区分为2类,2、4、7~12号峰是引起荆芥穗和荆芥穗炭间成分差异的主要标志性成分,与方差分析结果一致。结论 建立的多指标指纹图谱鉴别方法对荆芥穗药材及其炮制品的质量控制及整体性评价具有重要意义。     

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??OBJECTIVE To investigate the chemical differences between Smilacis Glabrae Rhizoma and its adulterants, and provide a basis for the identification and quality evaluation of Tufuling samples purchased from the markets.METHODS The method of HPLC fingerprinting was used to analyze Smilacis Glabrae Rhizoma, Heterosmilacis Chinensis Rhizoma, Heterosmilacis Yunnanensis Rhizoma, and 102 Tufuling samples which were collected around China. The fingerprints were analyzed by the methods of similarity and principal component analysis (PCA).RESULTS The analytical method of HPLC fingerprinting was established. Eleven, fifteen and eight common peaks were selected in the fingerprints of Smilacis Glabrae Rhizoma, Heterosmilacis Chinensis Rhizoma, and Heterosmilacis Yunnanensis Rhizoma, respectively. Only five common peaks were found in the fingerprints of the three species, which were No. 1, 2, 3, 13, and 14 peaks. A total of twelve peaks were characterized in the three fingerprints. Nine peaks were characterized in the fingerprint of Smilacis Glabrae Rhizoma, among which, four constituents were characterized for the first time. Six and two constituents were for the first time characterized in the fingerprints of Heterosmilacis Chinensis Rhizoma and Heterosmilacis Yunnanensis Rhizoma, respectively. The result of PCA analysis showed that the chemical differences between the three species were quite obvious and they could be distinguished from each other. The established method was used for the analysis of Tufuling samples purchased from the markets. Sixty-five samples were identified as Smilacis Glabrae Rhizoma, seventeen samples were identified as Heterosmilacis Yunnanensis Rhizoma, and twenty samples were identified as Heterosmilacis Chinensis Rhizoma.CONCLUSION The established method is simple and reliable, and the development of fingerprint and its chemical pattern recognition provide the way and basis for identification of Smilacis Glabrae Rhizoma and its adulterants.     

基于UPLC特征图谱结合多模式识别和色度值的槐角炮制前后差异研究

目的 测定槐角炮制前后的超高效液相色谱（UPLC）特征图谱和色度值,结合不同模式识别方法比较槐角炮制前后的差异性,为槐角和蜜槐角的质量控制及评价提供参考。方法 采用UPLC法对槐角炮制前后样品进行测定,按《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）》对色谱图进行匹配生成槐角炮制前后的UPLC特征图谱,并对炮制前后的色度值（L、a、b）进行测定,通过相似度分析、对照品比对、方差分析、聚类分析、主成分分析（principal component analysis,PCA）和正交偏最小二乘判别分析（orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA）对槐角炮制前后进行多模式识别研究。结果 建立了槐角炮制前后的UPLC特征图谱,槐角和蜜槐角分别确定了23、24个共有峰,指认2、15、16、20、21号峰为没食子酸、芦丁、染料木苷、槲皮苷、槐角苷,炮制后新增成分24号峰为5-羟甲基糠醛;相似度分析结果显示槐角炮制前后相似度均大于0.98,聚类分析结果显示槐角炮制前后区分不明显,PCA可以将槐角和蜜槐角大致分为2类,OPLS-DA分析可将槐角和蜜槐角明显区分为2类,且结果显示1、2、10、22、23、24号峰是引起槐角和蜜槐角间成分差异的主要标志性成分,与方差分析结果一致;色度值ΔE范围为5~13,炮制前后色差可被肉眼识别。结论 建立的多指标特征图谱和色度值鉴别方法对槐角药材及其炮制品的质量控制及整体性评价具有重要意义。     

基质辅助激光解吸电离成像质谱法可视化分析制川乌炮制过程生物碱空间分布的研究

目的 采用质谱成像显微镜可视化分析制川乌炮制过程中6个生物碱的变化情况。方法 准备不同炮制时间(9个时间点)的制川乌样品,用明胶溶液包埋后冷冻,制备30 μm厚度的切片样品进行实验。根据乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱和苯甲酰乌头原碱共6种标准品的质谱信号,选取α-氰基-4-羟基肉桂酸为基质,采用升华法涂覆基质后再进行喷雾。质谱数据采集质量范围为m/z 200~800,使用DHB溶液在m/z 100~900进行质量校正,以1 000 Hz频率的正离子模式进行基质辅助激光解吸-质谱成像(MALDI-MSI)。通过超高效液相色谱(UHPLC)测定不同炮制时间样品中6个生物碱的含量,用含量测定结果验证质谱成像结果的准确性。结果 质谱成像技术可以区分制川乌不同炮制程度的样品,并且可以实现生物碱空间分布的可视化分析。结论 质谱成像技术可运用于制川乌炮制过程质量研究,为中药炮制研究提供一种新思路。     

基于ITS2一级序列和二级结构对土茯苓及混伪品的鉴别研究

目的：使中药材土茯苓与其混伪品得到有效区分,确保土茯苓药材临床用药安全。方法：采用内转录间隔区2 (ITS2)一级序列联合二级结构信息鉴别土茯苓及其混伪品,收集土茯苓正品及混伪品30条ITS2序列,使用基于隐马尔可夫模型（hidden Markov model,HMM）的方法注释,采用MEGA 7.0比对序列,基于Kimura-2-Parameter模型计算种内、种间的遗传距离,并构建邻接法（neighbor-joining,NJ）系统发育树;通过ITS2 Database预测各品种的ITS2二级结构,利用4Sale软件进行二级结构的比对,运用ProfDistS软件基于距离法构建联合一级序列及其二级结构的剖面邻接（profile neighbor joining,PNJ）系统发育树。结果：土茯苓的平均ITS2序列长度为245 bp,平均碱基G+C占比为82.8%,各物种种间遗传距离均显著大于种内遗传距离,NJ系统发育树和PNJ系统发育树的物种分支关系基本一致,土茯苓与其各种混伪品均分别各自聚为一支,可以有效鉴别土茯苓正品与混伪品。结论：ITS2可以作为鉴定土茯苓及其混伪品的DNA条形码...