UPLC法同时测定玉屏风颗粒中9种成分

目的建立UPLC法同时测定玉屏风颗粒(黄芪、白术、防风)中升麻素苷、毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、亥茅酚苷、芒柄花素、白术内酯Ⅲ的含有量。方法该药物75%甲醇提取液的分析采用ACQUITY UPLC~? BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.8μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;体积流量0.20 mL/min;柱温30℃;检测波长220 nm。结果 9种成分在各自范围内线性关系良好(r0.999 0),平均加样回收率96.40%～106.82%,RSD 2.14%～3.85%。结论该方法简便、快速、准确,可用于玉屏风颗粒的质量控制。     

肠道菌群法研究黄芪对防风中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷代谢的影响

目的采用肠道菌群法研究黄芪对防风中主要活性成分升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷代谢的影响,从而探讨防风-黄芪药对的配伍机制。方法采用肠道菌群法,比较不同时间点防风组和防风-黄芪组以及防风单体组和防风单体-黄芪组中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、升麻素的质量浓度。结果防风-黄芪组中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷的质量浓度均高于防风组,升麻素的质量浓度均低于防风组。单体-黄芪组中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷的质量浓度均高于单体组,升麻素的质量浓度均低于单体组。结论黄芪能抑制防风中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的水解反应,减缓其代谢。     

液质联用法监测玉屏风颗粒原药材的投料分析研究

目的:建立应用液质联用(HPLC-MS/MS)法全面监测和控制玉屏风颗粒中原药材(黄芪、防风、白术)的投料情况,并建立可同时检测玉屏风颗粒中黄芪甲苷、升麻苷、白术内酯Ⅲ含量的方法。方法:采用Inertsil ODS-3 (2. 1 mm×150 mm,5μm)色谱柱,柱温40℃,流动相以甲醇-10 mmol/L醋酸铵溶液,梯度洗脱;以HPLC分离有效成分、采用电喷雾(ESI)离子源正负离子模式检测,选择多反应离子监测方式(MRM)进行定性监测原药材的投料情况及定量测定有效成分的含量。结果:通过分析供试品与对照药材、混合对照品的一级质谱图、二级质谱图有相同的特征峰,可判断该中成药是按处方工艺投料的;通过测得的HPLC-MS/MS色谱峰面积,计算出3批次供试品的黄芪甲苷含量均符合标准规定。方法学验证结果表明,黄芪甲苷、白术内酯Ⅲ、升麻苷分别在0. 105～0. 628μg/m L (r=0. 999 5),0. 531～3. 191μg/m L (r=0. 998 8),0. 104～0. 626μg/m L (r=0. 999 9)浓度内线性关系良好;精密度试验的RSD分别为0. 56%、0. 80%、1. 10%;平均回收率分别为90. 77%,93. 25%,94. 26%。结论:该法快速简便、准确可靠、灵敏度高,适用于全面监测和控制玉屏风颗粒中原药材(黄芪、防风、白术)的投料情况及质量。     

玉屏风颗粒UPLC指纹图谱建立和同时测定8种成分含量

目的:建立玉屏风颗粒的UPLC指纹图谱,并同时测定升麻素苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、升麻素、毛蕊异黄酮、芒柄花苷、芒柄花素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、白术内酯Ⅲ8种成分的含量。方法:采用ACQUITY UPLC~@HSS T3色谱柱(150 mm×2.1 mm,1.8μm);流动相为乙腈-水,梯度洗脱;流速:0.26 mL/min;柱温为30℃;进样量为1μL;检测波长为220 nm。结果:建立了玉屏风颗粒指纹图谱,标示15个共有峰,指认了升麻素苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、升麻素、毛蕊异黄酮、芒柄花苷、芒柄花素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、白术内酯Ⅲ8种成分。上述8种成分在相应的浓度范围内线性关系良好,r均0.999,平均加样回收率分别为100.50%、101.20%、98.20%、96.53%、95.92%、99.11%、96.17%、97.01%。结论:玉屏风颗粒UPLC指纹图谱的建立和8个指标成分含量测定的方法简便、快速、准确,可为有效评价玉屏风颗粒质量提供实验依据。     

防风中色原酮类化学成分的分离及鉴定

目的采用高速逆流色谱技术(HSCCC)及超高压液相色谱-高分辨线性离子阱-轨道阱杂交串联质谱(UHPLC-LTQ-Orbitrap-MSn)快速分离鉴定防风中四种色原酮类化合物,建立快速分离制备色原酮类化合物的方法。方法采用甲醇加热回流提取得防风提取物,再用正丁醇萃取富集色原酮类成分;采用高速逆流色谱分离纯化,以乙酸乙酯:正丁醇:水(1:1:3,V/V/V)组成二元溶剂体系,上相为固定相,下相为流动相,仪器转速为800 r/min,流动相流速为1.5 ml/min,检测波长254 nm。结果从100 mg防风正丁醇提取物中一次性分离制备得到3.58 mg升麻素苷,3.72 mg 5-O-甲基维斯阿米醇苷,0.96 mg亥茅酚苷,7.8 mg升麻素,经高效液相色谱法(HPLC)分析,其纯度分别为95.28%,97.89%,59.88%和92.33%,超高压液相色谱-高分辨线性离子阱-轨道阱杂交串联质谱技术鉴定化合物1为升麻素苷,化合物2为5-O-甲基维斯阿米醇苷,化合物3为亥茅酚苷,化合物4为升麻素。结论该联用方法操作简便、灵敏度高、重现性好,为色原酮类化合物的开发提供了理论基础和技术平台。     

防风色原酮微波辅助提取及含量动态变化研究

目的:优选防风色原酮微波辅助提取工艺并确定防风的最佳采收期。方法:以升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的含量为指标,采用正交试验法优选防风色原酮微波提取的最佳工艺,并测定不同采收时期防风色原酮的含量。结果:防风微波提取的最佳工艺为料液比为1∶30,乙醇体积分数70%,提取温度90℃,提取时间3 min;不同时期防风色原酮含量具有明显的差异,5月10日防风中色原酮含量最高,5月20日抽薹后防风色原酮含量迅速下降,进入10月份以后,防风色原酮含量逐渐上升。结论:采用微波提取技术提取防风色原酮,提取时间短,提取效率高,防风最佳采收期为春季5月上旬或秋季10月中旬。     

高温处理防风鲜根对其色原酮含量的影响

目的以防风鲜根为研究材料,研究放置在常温(20～25℃)、30℃、40℃、50℃环境中,防风主要色原酮成分含量的变化。方法以HPLC法测定经过不同温度处理后防风中升麻素、升麻苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷三种色原酮含量的变化。结果 30℃高温胁迫环境6天防风色原酮含量提高最为明显,升麻苷含量由3.11mg/g提高到4.89mg/g,提高了57.23%;升麻素含量由0.04mg/g提高到0.07mg/g,提高了75.00%;5-O-甲基维斯阿米醇苷含量由1.93mg/g提高到3.57mg/g,提高了84.97%。结论高温处理防风鲜根可显著提高药材中色原酮含量。     

静脉给药防风色原酮单体药理活性对比研究

目的研究防风中升麻素、升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷三种主要色原酮单体化合物的药理活性差异,为建立一种更为科学的防风药材质量评价方法提供理论依据。方法以对2,4-二硝基苯酚致热大鼠体温的抑制率考察药物解热作用,以对热板致痛小鼠痛阈值的变化考察药物的镇痛作用,以对二甲苯致小鼠耳廓炎症肿胀抑制程度考察药物的抗炎作用,以此三项指标研究升麻素、升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷单体静脉给药后的药理活性差异。结果灌胃给药色原酮单体化合物后,升麻素组各浓度均表现出较强的解热、镇痛、抗炎作用,且作用迅速。升麻苷表现出一定药理活性,但作用迟缓,1h后药理作用逐渐增强,作用效果不及升麻素。5-O-甲基维斯阿米醇苷无明显药理作用。结论升麻素、升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷药理活性存在较大差异,药典以升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷作为防风质量评价指标具有一定局限性。     

防风色原酮类对照提取物制备工艺研究

目的：建立防风色原酮类对照提取物制备工艺。方法：采用正交设计实验以及单因素考察法对防风色原酮类成分的提取、富集以及纯化等工艺进行研究,建立防风色原酮类对照提取物的最佳制备工艺,并进行工艺验证。结果：防风色原酮类成分的最佳提取工艺为：10倍量70%乙醇提取3次,每次2 h,合并3次提取液,回收溶剂;防风70%乙醇提取物加水分散,使上样液浓度为3.84 mg/mL（以总色原酮量计）,通过AB-8型大孔吸附树脂法柱,吸附流速1.0 mL/min,树脂柱径高比为1∶8,上样量为7.68 mg/mL（以总色原酮量计）,以10%乙醇洗脱2 BV进行除杂,流速为1.0 mL/min,再用5 BV 70%乙醇洗脱,流速为2.0 mL/min,收集70%乙醇洗脱液,即为防风色原酮部位;防风色原酮部位加甲醇溶解,与200～300目硅胶按1∶1.3的比例拌样,将硅胶按径高比为1∶15干法装柱,再以环己烷-醋酸乙酯-甲醇（1∶9∶1.5）1.6 BV洗脱,合并含有目标成分的硅胶部分,加甲醇洗脱,回收溶剂、减压干燥得防风色原酮类对照提取物。结论：该研究建立的制备工艺准确性高、重复性好,可用于防风色原酮类对照提取...     

生长方式及年限对防风品质影响研究

为研究不同生长方式及年限对防风品质的影响,通过色差仪量化防风样品粉末表观颜色,计算总色值(E^*ab),采用HPLC同时测定样品中升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷和3′-O-当归酰亥茅酚含量,利用多元统计方法对样品粉末色度值与5种成分含量进行聚类分析、主成分分析、偏最小二乘法判别分析及Pearson相关性分析。结果表明防风样品粉末总色值(E^*ab)野生防风<多年生防风<一年生防风;野生防风的升麻素、亥茅酚苷和3′-O-当归酰亥茅酚含量显著高于多年生防风及一年生防风;多元统计分析结果显示,多年生防风质量差异大,其品质虽不及野生防风,但接近野生防风,优于一年生防风;3′-O-当归酰亥茅酚含量、E^*ab、b^*、L^*和升麻素含量的变量投影重要性(VIP)均>1,升麻素含量的VIP亦接近于1;升麻素苷、升麻素、亥茅酚苷和3′-O-当归酰亥茅酚含量与E^*ab呈显著负相关,而5-O-甲基维斯阿米醇苷含量与E^*ab...     

不同基原柴胡配方颗粒的鉴别研究

目的 基于超高效液相色谱(UPLC)特征图谱,建立快速、有效鉴别南、北柴胡配方颗粒的方法。方法 采用色谱柱ACQUITY UPLC^® BEH C₁₈(2.1 mm×100 mm,1.7 μm),流动相为乙腈-水,流速0.4 mL·min^-1梯度洗脱,检测波长为211 nm,250 nm,柱温35 ℃,对南、北柴胡配方颗粒进行特征图谱测定,分析特征峰差异。结果 特征图谱方法精密度、稳定性良好,表明建立的方法合理、可行。其中北柴胡配方颗粒特征图谱有9个共有峰,南柴胡配方颗粒特征图谱有12个共有峰,南、北柴胡配方颗粒有7个共有峰,说明两者主要化学成分大体相同,个别成分存在一定差异。以特征峰差异可以对南、北柴胡配方颗粒进行区分,并进一步确定了南、北柴胡配方颗粒鉴别的直观区分点(β值)。结论 UPLC特征图谱可对南、北柴胡配方颗粒进行质量评价,且能快速、准确、直观地反映南、北柴胡配方颗粒的基原差异,为南、北柴胡配方颗粒合理的临床应用提供重要的数据支撑。     

HPLC指纹图谱分析不同产地天麻中酚类成分差异

目的 构建57批天麻样品的HPLC指纹图谱,结合含量测定、聚类分析和主成分分析综合评价不同产地天麻中代表性酚类成分含量。方法 采用VisionHT-C₁₈-HL色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.8 mL·min^-1,检测数长220 nm,柱温30 ℃。利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)”和SPSS 23.0软件进行指纹图谱研究和化学计量学分析。结果 建立的指纹图谱共标定了10个共有峰,通过与对照品比对指认了天麻素、天麻苷元、巴利森苷E、巴利森苷B、巴利森苷C和巴利森苷A 6个色谱峰,57批样品相似度大于0.81。基于含量测定结果的聚类分析与主成分分析结果一致,可将药材分为两大类,其中吉林露水河产天麻的酚类成分含量最高。结论 所建立的综合分析方法稳定可靠,可为后续天麻的质量差异评价提供参考。     

当归建中汤物质基准特征图谱和多指标成分测定研究

目的 建立15批当归建中汤特征图谱及多指标成分含量测定方法,为当归建中汤经典名方的质量控制评价提供参考。方法 色谱柱为Waters Symmetry C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);以乙腈(B)-0.1%磷酸溶液(A)为流动相,梯度洗脱;流速:1 mL·min^-1;检测波长为230 nm;柱温35 ℃;进样量为5 μL,建立15批当归建中汤物质基准特征图谱,并使用HPLC测定5种指标成分含量。结果 对15批当归建中汤物质基准进行研究,其特征图谱相似度处于0.886~0.996之间,标定了15个共有峰,指认出芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、甘草苷、肉桂酸、甘草酸6个色谱峰。经方法学考察,5种成分在一定浓度范围内呈良好的线性关系;精密度、稳定性、重复性均符合要求;阿魏酸、肉桂酸、甘草苷、甘草酸、芍药苷的平均加样回收率分别为99.74%、100.28%、100.56%、98.44%、102.25%。以含量测定均值上下浮动30%规定出各指标成分的含量范围,均未出现离散数据(平均值的70%～130%以外)。结论 建立的经典名方当归建中汤特征图谱及5个成分的含量测定方法简便、稳定、准确可靠,可用于当归建中汤物质基准的质量控制。     

硫酸吗啡原料药中有关物质检查方法研究

目的 通过对硫酸吗啡原料药的有关物质进行分析,考察现行标准的完善性,探讨存在的问题,为提高产品质量标准提供参考。方法 采用HPLC,选用Symmetry C₁₈(4.6 mm×150 mm,5 μm)色谱柱,以1.01 g·L^-1庚烷磺酸钠溶液(用50%磷酸调节pH值至2.6)和甲醇为流动相进行梯度洗脱;检测波长为230 nm,流速为1.5 mL·min^-1,柱温35 ℃。结果 国内硫酸吗啡原料药中检出的主要杂质有可待因(杂质A)、伪吗啡(杂质B)、10-羟基吗啡(杂质D)、吗啡酮(杂质E)和吗啡氮氧化物(杂质F),溶液稳定性显示其中伪吗啡含量增加明显,表明样品需临用新配。结论 建立方法的专属性、线性等均良好,能用于硫酸吗啡原料药中有关物质的检测。现行标准中缺少有关物质检查项,建议增加。     

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??OBJECTIVE To develop a method for simultaneous determination of six iridoid glycosides from Cymbaria dahurica.METHODS Cymbaria dahurica collected from different regions were determined by HPLC. The separation was performed on Inertsil ODS-SP column (4.6 mm??250 mm,5 ??m) at 30 ?? by gradient elution with CH₃OH-H₂O as the mobile phase, with the detection wavelength set at 210 nm.RESULTS Under the chromatographic conditions adopted in this study, all the calibration curves exhibited good linearity (r>0.999 4) in a relatively wide concentration range. The recovery of the method was within the range of 95.0%-98.0%, and the RSD was less than 3%. The contents of all the compounds (S1-S6) in samples from different habitats varied significantly.CONCLUSION The quantitative method for evaluating the quality of Cymbaria dahurica is established and can be used for the quality control of Cymbaria dahurica.     

金银花炮制前后咖啡酰奎宁酸类成分变化

目的 建立炒金银花和金银花炭中咖啡酰奎宁酸类成分的含量测定方法,研究金银花炮制前后咖啡酰奎宁酸类成分的含量变化。方法 确定提取方法、检测波长、流动相组成等色谱条件,并且考察了所建立分析方法专属性、线性、耐用性、重复性、回收率和精密度。结果 采用提取溶剂为体积分数50%甲醇,料液比为1∶200,超声提取30 min。含量测定采用高效液相色谱法,色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶(柱长为250 mm,内径为4.6 mm,粒径为5 μm)为填充剂;以乙腈为流动相A,以0.4％磷酸溶液为流动相B,梯度洗脱;柱温为30 ℃;流速为1.0 mL·min^-1;检测波长为327 nm。新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、3,4-O-二咖啡酰奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸的专属性、线性、耐用性、重复性、回收率和精密度均符合要求。结论 该方法操作简单,可用于炒金银花、金银花炭中6种酚酸类成分含量的同时测定。6种咖啡酰奎宁酸在金银花炮制前后含量、比例变化显著,为其炮制工艺、质量控制和活性研究等提供了依据。     

青蒿富倍半萜提取物的稳定性及光物质转化的初步研究

目的 考察青蒿富倍半萜提取物在高温、高湿和强光照射条件下的稳定性,并初步探究在光照条件下倍半萜组分间的转化规律。方法 根据《原料药物与制剂稳定性试验指导原则》,对提取物进行高湿(相对湿度90%)、高温(60 ℃)、强光照射(4 500 lx)试验,考察其重量及含量变化,并对提取物、原药材及青蒿乙素(arteannuin B)、青蒿素(artemisinin)、青蒿酸(artemisinic acid)及二氢青蒿酸(dihydroartemisinic acid)的对照品进行30 d光照试验(4 500 lx),检测各倍半萜组分的含量变化,并应用液质联用(LC-MS)方法对光照后各对照样品进行定性分析。结果 提取物在高湿条件下于10 d内各检测成分无明显变化,高温及强光照条件下青蒿酸及二氢青蒿酸含量降低,强光照条件下青蒿素及青蒿丙素含量有所升高。经30 d照射后提取物及原药材中青蒿酸及二氢青蒿酸均显著降低,青蒿素明显升高,光照5 d后即可在二氢青蒿酸的对照品中检测到青蒿素,并随时间的增加,其含量持续上升。提取物、原药材及二氢青蒿酸对照品组的青蒿素平均转化率分别为75.33%、59.10%和1.29%。LC-MS定性结果显示二氢青蒿酸和青蒿酸经过30 d强光照射,分别产生了青蒿素与青蒿乙素。结论 作者首次发现了青蒿富倍半萜提取物的光反应转化现象,这提示该提取物在高温及光照条件下将导致物质组成的变化,应避光保存于阴凉处。此外,在以提取青蒿素单一化合物为目标时,原药材在采收后适当增加光照有助于提高其得率。     

大孔树脂吸附分离纯化玉屏风复方中色原酮苷的研究

目的大孔树脂吸附分离纯化玉屏风复方提取物中色原酮苷成分。方法采用静态吸附实验考察D101,AB-8,S-8,X-5等7种大孔吸附树脂对升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷两种色原酮苷的吸附效果,筛选出吸附性能较好的树脂;对所筛选出的树脂,进一步采用固定床吸附法分离玉屏风提取物中色原酮苷,探讨主要参数对色原酮苷固定床穿透曲线及洗脱曲线的影响。结果AB-8树脂的吸附性能优于其它考察的树脂,经AB-8树脂固定床分离纯化后,玉屏风复方提取物中色原酮苷含量从0.55%提高到10.01%,回收率为87.2%。结论AB-8大孔吸附可用于玉屏风提取物中色原酮苷活性成分的分离纯化。     

复方苦参注射液UPLC指纹图谱检测及6种成分含量测定

目的 建立复方苦参注射液的超高效液相色谱法(UPLC)指纹图谱,并同时测定其中6种指标成分的含量。方法 采用ACQUITY UPLC CSH^TM C₁₈(2.1 mm×100 mm,1.7 μm)色谱柱,以甲醇2 g·L^-1磷酸二氢钾为流动相梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1,柱温30℃,检测波长211 nm。结果 建立复方苦参注射液UPLC指纹图谱,确立了9个共有峰,10批样品相似度均大于0.99。甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷、苦参碱、槐果碱、槐定碱、氧化槐果碱、氧化苦参碱6种成分在相应浓度范围内与峰面积的线性关系良好,平均加样回收率分别为100.42%、100.90%、101.45%、103.85%、99.95%、100.46%,相对标准偏差(RSD)值分别为1.96%、0.67%、1.60%、1.15%、1.02%、1.20%。结论 本研究建立的复方苦参注射液的UPLC指纹图谱及多成分含量测定方法,操作简单,重复性好,稳定可靠,为复方苦参注射液的质量标准研究提供更加全面的依据。     

钩藤多指标含量测定及化学计量学分析

目的 建立同时测定钩藤中绿原酸、异钩藤碱、钩藤碱、去氢毛钩藤碱、毛钩藤碱、喜果苷含量的方法,基于化学计量学分析,评价钩藤的质量。方法 采用高效液相色谱(HPLC),KinetexC₁₈色谱柱(4.6 mm×100 mm,2.6 μm),以乙腈(A)-0.1%磷酸水(含0.5 g·L^-11-丁基-3-甲基咪唑氯盐)(B)为流动相,梯度洗脱,流速:0.8 mL·min^-1;检测波长327 nm(绿原酸)、246 nm(异钩藤碱、钩藤碱、去氢毛钩藤碱、毛钩藤碱和喜果苷);柱温:35 ℃;进样量:10 μL。结果 绿原酸、异钩藤碱、钩藤碱、去氢毛钩藤碱、毛钩藤碱和喜果苷分离良好,平均回收率分别为99.74%、103.25%、98.35%、99.45%、104.16%、97.98%。11批钩藤上述成分的含量测定结果分别为0.128 7～0.432 0、0.007 1～0.022 1、0.008 1～0.023 7、0.009 8～0.047 1、0.005 7～0.022 8、0.008 9～0.034 9 mg·g^-1。化学计量学分析表明不同产地的钩藤质量存在一定差异。结论 建立的钩藤多指标含量测定方法简单、准确,可为钩藤药材质量综合评价提供新的参考方法。