联合应用表型分析、热休克蛋白65限制性片段长度多态性分析和测序鉴定养鱼水中的非结核分枝杆菌

目的了解养鱼水中非结核分枝杆菌（NTM）的分布情况。方法采集30份市售养鱼水标本，通过分离培养和生化反应初步鉴定，然后从培养菌落中提取DNA，PCR扩增65kD分枝杆菌抗原，扩增产物：（1）分别应用两种限制性内切酶BstE Ⅱ和Hae Ⅲ酶切，然后进行琼脂糖凝胶电泳和限制性片段长度多态性分析（PRA）；（2）直接测序。结果30份市售养鱼水中29份样本分枝杆菌培养阳性，其中6份样本分别生长出两种形态性状完全不同的菌落，共分离出35株分枝杆菌，表型特征均符合NTM。理化性质、PRA和测序鉴定发现，戈登分枝杆菌8株（23％）、龟-偶然分枝杆菌复合群8株（23％）、日内瓦分枝杆菌9株（26％）、不产色分枝杆菌1株，其余9株未鉴定到种。结论NTM广泛存在于市售养鱼水中，分子生物学方法与常规细菌学鉴定可互相补充，提高鉴定的正确性。     

IS6110-限制性片段长度多态性和间隔区寡核苷酸分型技术在结核分枝杆菌菌株鉴定中的应用

目的评价IS6110-限制性片段长度多态性（IS6110-RFLP）和间隔区寡核苷酸分型技术（spoligotyping）两种方法在结核病流行病学中的应用，探讨我国各地区的结核分枝杆菌菌株特点。方法收集158株结核分枝杆菌临床分离株，分别应用IS6110-RFLP和Spoligotyping两种方法进行鉴定。结果①IS6110-RFLP的分辨力大于spoligotyping分型。②将本次实验结果与国际spoligotype数据库进行比较。结果有14个类型属于共有类型，其中类型1为流行的类型，分布广泛，即所说的北京基因型。③广东地区与其他地区成簇率和北京基因型所占比例差异有统计学意义（P〈0．05）。广东地区成簇率和北京基因型所占比例均显著低于其他地区。结论同时应用IS6110-RFLP分型和Spoligotyping两种方法进行结核病流行病学调查研究非常有效，在中国不同地区的菌株具有不同的特点。     

1997-1998泰国的全国样本结核分枝杆菌限制性内切酶片段长度多态性研究

地点：1997—1998年间，作为全球项目的一部分，在泰国进行了全国性的抗结核药物耐药监测。 目的：评价IS6110杂交带谱和成簇的水平，由于样本收集时间较短，预计不会太高。 设计：共计828株分离株可做标准的IS6110杂交指纹分析。 结果：随着地理位置、病人年龄、对利福平和链霉素耐药的变化，限制性片段长度多态性也随之变化。北京株在青年病人中常见，离曼谷越远，其流行率也越低，但只有一个杂交带的分离株则正好相反。排除舍有5个以下拷贝IS6110的菌株，26．4％的菌株成簇。成簇在女性患者中更普遍。成簇菌株常常来自不同省份，如果有耐药，它们的耐药谱也不同。 结论：在泰国某些地区用IS6110杂交带谱的成簇性来推断近期传播的可靠性值得怀疑。在结核病高流行国家进行全国性的近期传播研究的评价应该谨慎。     

应用PCR-RFLP分析结核分枝杆菌rpsL基因突变

目的 了解结核分枝杆菌链霉素(SM)耐药基因突变情况,建立快速检测耐药突变株的方法?方法 通过PCR-RFLP分析62株结核分枝杆菌临床分离株的rpsL基因突变的部位和性质?结果 以H37RV标准株为对照,13株敏感株的rpsL基因有MboⅡ酶切位点;37株耐SM分离株中,31株(838%)无MboⅡ酶切位点;12株耐其它抗结核药物株中,也有2株无MboⅡ酶切位点?结论 大多数结核分枝杆菌SM耐药分离株的核糖体S12蛋白编码基因(rpsL)第43位密码子有点突变?PCR-RFLP可能成为快速检测结核分枝杆菌耐药突变株的一种新方法?     

载脂蛋白B基因的限制性片段长度多态性与动脉粥样硬化性疾病的关系

近年来,国外学者应用DNA重组技术,特别是聚合酶链反应(polymerase chain reac-tion,PCR)技术,研究载脂蛋白B(Apo B)基因限制性片段长度多态性(RFLPs)与动脉粥样硬化(AS)、冠心病(CHD)和动脉粥样硬化性脑梗塞(ACI)之间的关系,取得一些进展。本文就Apo B功能、基因结构、基因RFLPs与动脉粥样硬化性疾病的关系进行综述。     

人载脂蛋白E基因限制性片段长度多态性

载脂蛋白的基因变异与血脂代谢、动脉粥样硬化密切相关，测定这些变异对其研究具有重要意义．载脂蛋白E是参与血脂转运和代谢的重要截脂蛋白．载脂蛋白E基因编码第112位和第158位氨基酸的密码子存在着变异，分别构成了E2、E3和E4等位基因．以基因的限制性片段长度多态性来测定载脂蛋白E的基因变异，具有准确、简便等优点，已越来越多地被用来研究载脂蛋白E不同等位基因的生物活性以及与异常脂蛋白血症和动脉粥样硬化的关系．本文就此作一综述.     

IS6110-限制性片段长度多态性DNA分型在结核分子流行病学研究中的应用

目的 建立宁夏、北京和上海等地结核分支杆菌发离株IS6110－RFLP DNA指纹图谱，观察其流行病学特征。方法 提取结核分支杆菌基因组DNA，经限制性内切酶PvuⅡ切割、琼脂糖凝胶电泳和Southern转印后，用荧光标记的IS6110DNA序列中245bp探针杂交，以核酸化学发光试剂盒探测荧光信号，比较各菌株指 IS6110拷贝数和带型，分析不同地理区域流行菌株的特点。结果 103例结核患的临床分离株，经245bp探针杂交后的指纹图谱显示大部分菌株含8－21个IS6110拷贝，在宁夏和北京地区流行的结核分支杆菌带型具有共同特点，并有成簇分布的现象，在上海分离株中发现1株零拷贝株和1株单拷贝株。结论 IS6110－RFLP DNA分型方法可用于我国流行的结核分支杆菌分子流行病学研究；宁夏分离株与北京分离株在基因上亲缘关系较相近。     

用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性法检测载脂蛋白CⅢ基因多态性

载脂蛋白ＣⅢ基因与载脂蛋白Ａ１-Ⅳ形成一个基因族，有三个插入子，四个外显子，基因３’末端ＣＧ对换可产生一个Ｓａｃ-１酶切位点。用多聚酶链反应法扩增载脂蛋白ＣⅢ基因３’末端非编码区，用限制性片段长度多态性法分析酶切位点的突变，建立了多聚酶链反应-限制性片段长度多态性法来检测载脂蛋白ＣⅢ基因突变，研究武汉地区汉族人Ｓ２基因频率。结果发现正常人为０．１６；冠心病人为０．１７６。两组无明显差别，不能做为冠心病的基因诊断标志。     

结核分枝杆菌Rv0341蛋白编码基因iniB的多态性分析

目的研究结核分枝杆菌假设蛋白Rv0341编码基因iniB的多态性,确认其保守性,分析依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)在利福平(R)培养管中Rv0341高表达的可能原因。方法用大肠埃希菌做为阴性对照,提取依R菌(14株)、耐R菌(23株)、R敏感的结核分枝杆菌(12株)、结核分枝杆菌标准株H37Rv及BCG(共51株)的细菌基因组DNA,利用PCR自基因组DNA中扩增iniB基因,通过ApaⅠ/EcoRⅤ、KpnⅠ/SmaⅠ双酶切,琼脂糖凝胶电泳检测其带型,对iniB基因进行限制性片段长度多态性分析并测序。结果实验组中iniB基因的酶切图谱完全相同,测序结果亦证实iniB基因无突变。结论 iniB基因在对R依赖、耐药和敏感等不同类型的结核分枝杆菌中是相对保守的;依R菌在Rv0341蛋白表达方面的差异可能是RNA转录差异或利福平诱导的结果。     

不同宿主肝片吸虫DNA限制性片段长度多态性分析

本文首次对分离自黄牛、水牛和牦牛的肝片吸虫的基因组DNA，以BamHⅠ、BglⅡ、EcoRⅠ、HindⅢ和PStⅠ等6种限制性内切酶消化后进行琼脂糖电泳，分析比较它们基因组DNA的限制性片段长度多态性（RestrictionFragmentLengthPolymorphism，RFLP）；同时用地高车标记的牦牛肝片吸虫基因组DNA为探针对不同宿主肝片吸虫DNA进行Southern印迹杂交，限制性内切酸酶切结果显示只有两种限制性内切酶（BamHⅠ和EcoRⅠ）在寄生于牦牛的肝片吸虫中检测到多态性，而水牛肝片吸虫与黄牛肝片吸虫基因组DNA之间没有检测到多态性，根据此结果计算了牦牛肝片吸虫与黄牛肝片吸虫和水牛肝片吸虫基因型间的遗传距离，Southern杂交结果显示牦牛肝片吸虫基因DNA的杂交谱带与黄牛肝片吸虫、水牛肝片吸虫基因组DNA的杂交港带存在一定的差异，本文的实验结果表明牦牛肝片吸虫与黄牛肝片吸虫、水牛肝片吸虫的亲缘关系相对较远，而水牛肝片吸虫与黄牛肝片吸虫的亲缘关系较近。     

hsp65基因序列PCR-RFLP法鉴定130株临床分枝杆菌研究

目的探讨hsp65基因序列PCR-RFLP法用于临床分枝杆菌鉴定的诊断价值。方法用hsp65基因序列PCR-RFLP法鉴定经过传统方法鉴定过的130株临床分枝杆菌。结果130株临床分枝杆菌中,鉴定出结核分枝杆菌105株,戈登分枝杆菌4株、瘰痢分枝杆菌3株、耻垢分枝杆菌1株。用PCR-RFLP法,偶然分枝杆菌复合群和鸟胞分枝杆菌复合群进一步鉴定,偶然分枝杆菌2株、脓肿分枝杆菌2株、龟分枝杆菌4株、鸟分枝杆菌5株、胞分枝杆菌4株。结论hsp65基因序列PCR-RFLP法比传统方法有更高的准确性、敏感性、特异性和重复性,具有很好的临床应用价值。     

Identification and Characteristics of Co-isolation of Multiple Nontuberculous Mycobacteria

Objective Although multiple nontuberculous mycobacteria (NTM) species can be isolated from the same patient, little has been reported on co-isolation. We clarified the trends and characteristics of the co-isolation of multiple NTM species. Methods To collect data on multiple NTM isolation, we first extracted all patients who visited our hospital from 2006 through 2015 with a diagnosis of NTM lung diseases other than Mycobacterium avium complex (MAC) and then reviewed their medical records to evaluate the co-isolation of multiple NTM species. Results Of 213 patients with non-MAC lung disease, the most common NTM species was M. gordonae (32%), followed by M. kansasii (20%) and M. abscessus (14%). Non-MAC NTM lung disease tended to be associated with middle age with a low body mass index and male predominance. Multiple NTM species were isolated from 55 (26%) of the 213 patients. The clinical characteristics associated with multiple NTM species isolation included female predominance, never smokers and the absence of cavity lesions in the lungs. The highest co-isolation rate was observed in patients with M. gordonae isolation (30%), followed by M. furtuitum isolation (26%) and M. abscessus isolation (20%). Only MAC was isolated when co-isolated with M. abscessus. Among M. szulgai, M. peregrinum and M. terrae isolation, no other NTM species were detected. Conclusion Co-isolation of multiple NTM species was not uncommon, with 26% of patients with non-MAC NTM lung diseases showing co-isolation with multiple NTM species. Each NTM species had distinct characteristics in terms of co-isolation.     

结核分支杆菌与非结核分支杆菌快速鉴别的实验研究

目的 探讨提供一种从菌种水平快速检测和鉴别分支杆菌的方法。方法 应用三对分别对应于分支杆菌(分子量65000)表面抗原、结核分支杆菌插入序列IS6110及人类β-珠蛋白基因的部分序列的特异性寡核苷酸引物对受试菌种及临床标本中的DNA进行多重PCR扩增，其扩增产物分别为439bp、268bp及123bp，并对439bp进行BstE Ⅱ和Hae Ⅲ两种限制性内切酶消化，同时，将135例临床标本进行培养、涂片，和多重PCR联合限制性片段长度多态性分析(mPCR-RFLP)检测。结果 mPCR-RFLP方法可将12种受试的标准菌种分别区分到种及亚种水平。本方法在临床实验中亦体现出较高的灵敏性及特异性。结论 mPCR-RFLP分析是对结核分支杆菌与非结核分支杆菌进行菌种分类鉴定的一种快速有效的方法。     

Restriction fragment length polymorphism of pepsinogen C gene in patients with gastric carcinoma and in high risk population of gastric carcinoma

AIM: To analyze the difference of distribution of the pepsinogen C (PGC) gene polymorphism among different groups and to study its application value in screening of the high risk population of gastric carcinoma and its value as an indicator for gene diagnosis. METHODS: The study consisted of two parts: study on the restriction fragment length polymorphism (RFLP) of PGC gene in normal individuals and patients with gastric cancer, and study on the PGC gene polymorphism in members from a family at a high risk for stomach carcinoma and the follow-up survey. A total of 40 cases were analyzed including 11 healthy blood donors, 10 gastric carcinoma patients, and 19 members from a high risk family of stomach carcinoma. The Southern blot method was adopted in the study. The probe and restriction endonuclease used were PGC 301 and EcoR I, respectively. Gastroscopy and gastric mucosa biopsy were performed in the follow-up study. RESULTS: There were three kinds of common PGC EcoR I allelic fragments (20 kb, 5.7 kb and 3.6 kb) and only one rare fragment (3.5 kb) in the normal subjects, and there was no difference in allelic fragments between the normal subjects and the patients. The incidence of the rare fragment and rare hybrid band type in the patients was higher than that in the normal subjects. The incidence of rare fragment and rare hybrid band type in the members from a high risk family was a little higher than that in normal subjects. After the 3-year follow-up by gastroscopy, one of the four members from the high risk family with PGC EcoR I rare fragment was found to suffer from early stomach cancer. The hybrid signal of EcoR I common allelic fragments in the gastric tumor tissue was weakened, even disappeared. CONCLUSION: PGC EcoR I rare fragment and rare hybrid band type in the early diagnosis and screening of high-risk population of stomach carcinoma are probably of important application value. There is gastric normal differentiation gene (PGC gene) deletion in the stomach tumor tissue.     

PCR-RFLP法检测亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T突变

目的 建立一种简便、实用的检测亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)等位基因C677T点突变的方法，并初步观察部分健康老人和老年血管性痴呆(VD)患者中MTHFR等位基因C677T点突变情况。方法PCR特异性扩增MTHFR基因序列，扩增产物用限制性内切酶HinfⅠ酶切，经聚丙烯酞胺凝胶电泳(PAGE)分离、溴化乙锭染色后，观察酶切位点的限制性片段长度多态性(RFLP)图谱．共检路标本167例，其中健康老人(≥65岁)138例、老年VD29例，并计算了各基因型频率和等位基因频率。结果 健康老人组和老年VD患者组均检炽到C等位基因野生型(CC)、杂合于(CT)和T等位基因纯合子(TT)基因型，各组MTHFR基因的C677T点突变中T突变位点的频率分别为43．8％、51．7％。结论 该方法简便、实用，适于一般实验室应用及流行病学调查．     

乙型肝炎病毒S基因限制性片段长度多态性分型方法的建立及应用

目的 建立乙型肝炎病毒(HBV)S基因片段聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(RFLP)的基因分型方法并用于基因型与临床疾病谱关系的研究。 方法 比较GenBank中124株各基因型HBV全序列的S基因核苷酸序列及13株单独S基因序列,设计利用限制性内切酶Mbo Ⅰ、BsTN Ⅰ、BsmA Ⅰ、HpaⅡ酶切S基因片段鉴定HBV基因型(A-F)的方法。对贵州地区176份乙型肝炎患者血清进行基因分型并分析基因型与疾病谱的关系。直接测序2份B型和3份C型毒株的PCR扩增产物,以验证本酶切分型方法的正确性。 结果 测序结果证明本方法能够准确鉴定基因型。在176份标本中,B型100份(56.8％),C型76份(43.2％),未发现其他基因型。B型中无症状携带者(ASC)比例(40.0％)高于C型(15.8％),x2=12.16,P<0.005;慢性中度比例(14.0％)低于C型(31.6％),x2=7.88,P<0,005。 结论 本S基因片段PCR-RFLP基因分型方法简便、准确。贵州地区存在HBV B和C基因型。     

AIDS合并非结核分枝杆菌肺病的诊治进展

近年来,随着AIDS的流行及实验室检测技术的进步,非结核分枝杆菌(Nontuberculous mycobacteria,NTM)肺病的发病率呈增多趋势。NTM肺病已成为AIDS患者常见的机会性感染及死亡原因之一。AIDS合并NTM肺病临床表现不典型,影像学无特异性,诊断困难,需要结合临床表现、体格检查和辅助检查结果来进行综合分析。提高对该病的认识,尽早诊治,是降低该病病死率的关键。加强对NTM鉴定和分型技术研究以及治疗方案优化是今后发展的方向和重点。