亚硫酸钠暴露对人正常肝细胞自噬的影响及其作用机制

目的 探讨亚硫酸钠(Na₂SO₃)暴露对人正常肝细胞自噬的影响及其作用机制。方法 人正常肝细胞HL-7702分别暴露于含10%胎牛血清的DMEM培养基(阴性对照组)、0.2%DMSO (溶剂对照组)、Na₂SO₃暴露组(0.1、1、2.5、5 mmol/L)和20 mmol/L CCl₄(阳性对照组) 2 h、48 h。采用CCK-8法检测不同浓度Na₂SO₃暴露2 h、48 h后各组细胞存活率;免疫荧光法检测Na₂SO₃各浓度暴露组2 h、48 h自噬相关蛋白LC3B表达水平;Western blotting检测Na₂SO₃各浓度暴露组2 h、48 h自噬相关蛋白LC3B、p62和AMPK,细胞凋亡相关蛋白caspase-3表达水平;荧光素酶化学发光法测定HL-7702细胞内Na₂SO₃各浓度暴露组2 ...     

γ-氨基丁酸Rho2受体在神经母细胞瘤细胞中的稳定表达及其在谷氨酸盐致细胞死亡中的作用

目的构建人γ-氨基丁酸(GABA) Rho2受体(GABRR2)真核表达载体,并转染神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,建立稳定表达细胞株,探讨GABRR2在谷氨酸盐致细胞死亡中的作用。方法采用快速克隆方法将人脑组织GABRR2基因克隆至p IRES2-eGFP质粒,构建重组质粒p IRES2-eGFP-Rho2,利用X-fect试剂盒将其转染至SH-SY5Y细胞中,使用遗传霉素进行筛选,建立稳定表达p IRES2-eGFP-Rho2的SH-SY5Y细胞株。使用流式细胞术检测稳定转染过表达p IRES2-eGFP-Rho2的细胞,利用免疫荧光法鉴定稳定转染的SH-SY5Y细胞中p IRES2-eGFP-Rho2的表达。将野生型SH-SY5Y细胞分为A1、B1、C1组,稳定表达p IRES2-eGFP-Rho2的SH-SY5Y细胞分为A2、B2、C2组,每组设3个平行孔,其中A1、A2组细胞使用达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)孵育,B1、B2组细胞使用含有谷氨酸盐的DMEM孵育,C1、C2组细胞使用含有谷氨酸盐和GABA的DMEM孵育,将各组细胞置于细胞培养箱中培养24 h,应用乳酸脱氢酶试剂盒检测各组细胞的存活率。结果重组真核表达载体构建正确,获得了稳定表达p IRES2-eGFP-Rho2的细胞株。A1、B1、C1组细胞存活率比较差异有统计学意义(F=5. 542,P <0. 05);其中B1、C1组细胞存活率显著低于A1组(P <0. 05),C1组细胞存活率显著高于B1组(P <0. 05)。A2、B2、C2组细胞存活率比较差异有统计学意义(F=6. 588,P <0. 05);其中B2、C2组细胞存活率显著低于A2组(P <0. 05),C2组细胞存活率显著高于B2组(P <0. 01)。A2组细胞存活率与A1组比较差异无统计学意义(P> 0. 05),B2组细胞存活率显著低于B1组(P <0. 05),C2组细胞存活率显著低于C1组(P <0. 05)。结论成功构建p IRES2-eGFP-Rho2真核表达载体,建立了稳定表达p IRES2-eGFP-Rho2的SH-SY5Y细胞株,为体外研究GABRR2的功能提供了实验基础,并证明使用GABA可缓解谷氨酸盐对细胞的损伤,为缺血性脑损伤的分子生物学治疗提供了靶点。     

伽玛射线对人垂体瘤细胞细胞周期和抑癌基因p16表达的影响

目的：探讨不同剂量伽玛（γ）射线影响人垂体瘤细胞细胞周期和抑癌基因p16表达的变化。方法：采用机械分离法获得稳定生长垂体瘤原代培养细胞株,根据不同照射剂量分为4组照射组,分别接受中心剂量为2、5、8.22、13.33 Gy,设立对照组,剂量为0,照射后用流式细胞术检测细胞周期和凋亡率,Western Blot法检测p16蛋白的表达变化。结果：对照组和中心剂量2 Gy照射后细胞周期、凋亡率和c-myc蛋白表达无明显差异;中心剂量分别为5 Gy和8.22 Gy时细胞周期G0/G1和G2/M期细胞数量逐渐增多,细胞凋亡率升高,p16蛋白表达增多,与对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）;剂量为13.33 Gy时,S期细胞增多,p16蛋白表达减少。结论：一定剂量的伽玛射线能够改变细胞周期,促进垂体瘤细胞进入凋亡,抑癌基因p16在此过程中可能发挥促进垂体瘤细胞进入凋亡过程。     

丙泊酚对前列腺癌PC3细胞恶性生物学行为及Nrf2/ARE通路的影响

目的研究丙泊酚对前列腺癌细胞(PC3)增殖、侵袭和凋亡及Nrf2/ARE通路的影响。方法将PC3细胞分为空白对照组、丙泊酚低、中、高(2、4、6 mg/L)剂量组和阳性对照组(75 nmol/L阿霉素)。CCK-8法检测细胞存活率；改良Matrigel Boyden室法测定细胞侵袭力；流式细胞术检测细胞凋亡率；蛋白质印迹法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)和抗氧化反应元件(ARE)蛋白表达。结果与空白对照组比较,丙泊酚组和阳性对照组PC3细胞存活率、侵袭力、Nrf2和ARE蛋白表达水平均显著降低,细胞凋亡率显著升高,且效应呈丙泊酚剂量依赖性(P＜0.05)。与阳性对照组比较,丙泊酚低剂量组和中剂量组PC3细胞存活率、侵袭力、Nrf2和ARE蛋白表达水平均显著升高,细胞凋亡率显著降低(P＜0.05),而丙泊酚高剂量组差异无显著性(P＞0.05)。结论丙泊酚可有效逆转前列腺癌PC3细胞恶性生物学行为,其机制可能与抑制Nrf2/ARE信号通路相关蛋白表达有关。     

氯胺酮和咪哒唑仑联合使用对乳鼠神经细胞凋亡的影响

目的　探讨联合使用氯胺酮和咪达唑仑对乳鼠神经细胞凋亡的影响。方法　新生 7日龄SD大鼠 2 4只 ,随机分成 4组 (n =6 ) :对照组 (C组 ) :腹腔注射生理盐水 (10ml·kg-1) ;K组 :腹腔注射氯胺酮 (2 0mg·kg-1) ;M组 :腹腔注射咪哒唑仑 (10mg·kg-1) ;K M组 :腹腔注射氯胺酮 (2 0mg·kg-1)和咪哒唑仑 (10mg·kg-1)。用药后2 4h ,用原位缺口末端标记法 (TUNEL法 )检测神经细胞的凋亡情况 ,免疫组织化学SP法检测Caspase 3的表达水平。结果　①对照组仅有少量的凋亡神经细胞。②与对照组相比 ,K组和M组的凋亡细胞及Caspase 3阳性细胞数明显增多 ,其中K组的凋亡细胞以皮层区多见 (P <0 0 5 ) ;M组的凋亡细胞以海马区多见 (P <0 0 5 )。两组在丘脑部位均可见较多的凋亡细胞 (P <0 0 5 )。③K M组的凋亡细胞及Caspase 3阳性细胞数明显多于对照组 (P <0 0 1) ,与K组、M组比较 ,差异有极显著性意义 (P <0 0 1)。结论　氯胺酮和咪哒唑仑联合使用可引起未成熟鼠脑明显的神经细胞凋亡 ,其机制可能与Caspase 3激活有关。     

Mfn2调控氯化锰诱导的HE1-OC1细胞氧化应激、增殖和凋亡

目的探讨线粒体融合蛋白2(Mfn2)在氯化锰(MnCl2)诱导的耳蜗毛细胞(HE1-OC1)氧化应激、增殖和凋亡中的作用机制。方法采用不同浓度(0、1、3、5、10μmol/L)的MnCl2染毒培养的HEI-OC1细胞,建立锰中毒细胞模型;MnCl2染毒培养HEI-OC1细胞同时加入抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)或si-Mfn2干扰细胞中Mfn2蛋白表达,甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞增殖;Western blot检测细胞中总Caspase-3、总Caspase-9、Mfn2蛋白表达水平;流式检测细胞中活性氧(ROS)、细胞凋亡。结果与0μmol/L MnCl2组比较,3、5、10μmol/L MnCl2染毒培养显著抑制HEI-OC1细胞的增殖、促进细胞中活性氧的产生、总Caspase-3、总Caspase-9、Mfn2蛋白表达以及细胞凋亡,并呈剂量依赖性。与5μmol/L MnCl2染毒培养组比较,干扰Mfn2表达组和NAC处理组细胞的增殖能力显著增强,而细胞中活性氧的含量,总Caspase-3、总Caspase-9蛋白表达水平以及细胞凋亡比例均显著下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论干扰Mfn2蛋白表达可以减轻MnCl2对HEI-OC1细胞产生氧化应激、细胞增殖抑制以及凋亡促进作用。     

孕鼠双酚A染毒对雄性子鼠睾丸结构及MnSOD-SIRT3蛋白表达的影响

目的 探讨孕鼠双酚A(BPA)染毒对雄性子鼠睾丸结构及MnSOD-SIRT3蛋白表达的影响。方法 将ICR孕鼠随机分成4组,自受孕第一天始,用溶剂对照组、BPA低剂量(10 nmol/L)组、BPA中剂量(50 nmol/L)组、BPA高剂量(300 nmol/L)组,饮水染毒,待子鼠出生后第6周,处死雄性子鼠,取睾丸组织,HE染色、电镜观察染毒后子鼠睾丸结构改变,Hoechst染色观察细胞凋亡,Western blot法检测睾丸组织MnSOD、SIRT3蛋白的表达。结果 与溶剂对照组比较,HE染色显示,染毒组睾丸组织的形态有损伤,且中、高剂量组较为严重;电镜显示,中、高剂量组的间质细胞、精原细胞、支持细胞均有损伤;Hoechst 33258染色显示:染毒组较对照组睾丸组织内各细胞凋亡明显;Western blot检测显示:随染毒剂量增加,睾丸组织MnSOD、SIRT3蛋白表达呈下降趋势。结论 BPA可影响睾丸组织学结构,诱导生精细胞和间质细胞的凋亡,其机制可能与降低睾丸组织中MnSOD和SIRT3表达有关。     

被动吸烟大鼠生精细胞凋亡与Bcl-2、Bax表达的相关性研究

目的探讨被动吸烟对大鼠生精细胞凋亡和Bcl-2（B淋巴细胞瘤/白血病-2基因）、Bax（Bcl-2相关X蛋白）表达水平的影响,以及生精细胞凋亡与Bcl-2、Bax表达之间的相关性。方法用60日龄SD雄性大鼠40只建立被动吸烟大鼠模型,按染毒剂量不同随机均分为4组：0 g/m3组、6.49 g/m^3组、12.98 g/m^3组、25.96 g/m^3组,染毒剂量分别为0、1、2、4枝香烟,均每日2次,每次30 min,4周后处死。TUNEL检测凋亡,免疫组化（S-P法）检测Bcl-2、Bax表达。结果染毒组凋亡细胞数量增多。Bcl-2阳性表达随染毒剂量的增加呈下降趋势,Bax在染毒组中的表达明显要高于对照组,凋亡指数（AI）与Bax的表达强度呈正相关,与Bcl-2表达强度呈负相关。结论吸烟可致大鼠生精细胞凋亡,可能是通过Bcl-2表达下降、Bax表达升高,引发生精细胞凋亡增多。     

过量氟引起成骨细胞内质网应激信号通路的基因差异表达

目的：观察人成骨细胞在过量氟作用下未折叠蛋白反应（UPR）信号通路的差异基因表达,探索在氟中毒条件下成骨细胞内质网应激的作用。方法体外培养人成骨细胞染氟模型,用不同浓度的氟干预24 h后M T S法检测细胞存活率和流式细胞仪检测细胞凋亡百分率,用UPR信号通路PCR Array芯片检测通路中相关基因表达的情况,并用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测蛋白表达。结果在氟化钠浓度为0、5、10、20、40、80 mg/L 时,细胞存活率分别为（100．6785±2．8303）％、（105．3934±2．5384）％、（106．1257±2．0483）％、（77．9773±2．5443）％（与对照组比较 P＜0．05）、（30．2377±0．6327）％（与对照组比较 P＜0．05）。流式细胞仪检测,凋亡率分别为5mg/L组4．8％,10mg/L组13．8％,20mg/L组37．0％,40mg/L组58．9％,80 mg/L组63．2％（P＜0．05）。PCR芯片检测发现1个基因表达下调,14个基因表达上调。Western blot结果显示, BIP、ATF4、CHOP、IRE1均呈现出不同程度的随氟剂量增加蛋白表达逐渐上调。XBP1在NaF 5～20 mg/L表达逐渐增强,在40与80 mg/L时表达减弱。结论氟化钠可以通过PERK和IRE1途径引起成骨细胞内质网应激,并且可以引起成骨细胞凋亡。     

肝细胞生长因子对TNF-α诱导肝细胞凋亡的保护作用及其机制的研究

目的 :探讨肝细胞生长因子对肿瘤坏死因子α(TNF -α)诱导的肝细胞凋亡的保护作用以及可能的机制。方法 :选择第 3代人类肝细胞系 (L0 2细胞 ) ,分成三组 :Ⅰ组 ,正常L0 2细胞 ;Ⅱ组 ,10 0 0 0u/mlTNF -α损伤L0 2细胞 2 4h ;Ⅲ组 ,重组肝细胞生长因子 (r -hHGF ,5ng/ml)与L0 2细胞共同孵育 30min后加入 10 0 0 0u/mlTNF -α ,2 4h后处理细胞。观察“Ladder”条带、细胞DNA断裂百分率和用Westernblot印迹分析法检测HSP70和IκB -α的表达。结果 :Ⅱ组DNA电泳出现典型的“梯状”条带 ,而Ⅲ组则未见明显的“梯状”条带。DNA断裂百分率Ⅱ组比Ⅰ组高 (分别为 17.12± 4 .0 2和 5 .0 5± 1.6 7,P <0 .0 1) ,Ⅲ组比Ⅱ组低 (分别为 8.77± 2 .0 1和 17.12± 4 .0 2 ,P <0 .0 1)。重组肝细胞生长因子预处理后再用TNF -α损伤的L0 2细胞 ,1h即可检测到HSP 70的表达 ,且持续到 4 8h。肝细胞生长因子还抑制了TNF -α引起的L0 2细胞IκB -α量的减少。结论 :重组肝细胞生长因子可减轻TNF -α诱导的L0 2细胞凋亡 ,它通过诱导L0 2细胞HSP 70的表达和抑制IκB-α的降解达到减轻L0 2细胞的凋亡。     

Effects of fluoride on lipid peroxidation, DNA damage and apoptosis in human embryo hepatocytes

Objective To investigate the effects of fluoride on lipid peroxidation, DNA damage and apoptosis in hnman embryo hepatocyte L-02 cells. Methods Lipid peroxide (LPO) level, reduced glutathione (GSH) content, DNA damage, apoptosis, and cell cycle analysis were measured after in vitro cultured L-02 cells were exposed to sodium fluoride at different doses (40μg/mL, 80μg/mL,and 160μg/mL) for 24 hours. Results Fluoride caused an increase of LPO levels and a decrease of GSH content in L-02 cells. There appeared to be an obvious dose-effect relationship between the fluoride concentration and the observed changes. Fluoride also caused DNA damage and apoptosis and increased the cell number in S phase of cell cycle in the cells tested. There was a statistically significant difference in DNA damage and apoptosis when comparing the high dose of fluoride treated cells with the low dose of fluoride treated cells. Condusion Fluoride can cause lipid peroxidation, DNA damage, and apoptosis in the L-02 cell experimental model and there is a significant positive correlation between fluoride concentration and these pathological changes.     

辅酶I对缺血再灌注损伤诱导L02肝细胞凋亡的影响

目的：研究辅酶I（NADH）对体外培养正常肝细胞系L02缺血再灌注损伤模型的保护作用。方法：实验分组：（1）正常对照组（control组）；（2）缺血再灌注损伤组（I／R组），即用模拟缺氧液及复氧液处理；（3）NADH＋缺血再灌注损伤组（NADH＋I／R组），即先加NADH(终浓度为400μg/ml）后再进行缺血再灌注处理。流式细胞术观察细胞处理后1、6、12、18、24h凋亡率及12h时p16、p21、p53和 Bcl-2蛋白表达。透射电镜观察细胞超微结构。结果；NADH可明显抑制缺血再灌注损伤 诱导的肝细胞凋亡，并且能够上调Bcl－2蛋白表达，下调p53、p16、p21蛋白表达，差异显著（P＜0．01）；透射电镜下可见典型的细胞凋亡特征。结论：NADH对缺血再灌注损伤的L02肝细胞有明显的保护作用，其作用机制可能与通过调节Bcl－2家族蛋白及p16、p21、p53蛋白有关。     

姬松茸多糖诱导Bel-7402细胞凋亡的实验研究

目的研究姬松茸多糖(PAB)对人肝癌细胞Bel-7402凋亡的影响及其机制。方法用不同浓度的PAB与小鼠脾淋巴细胞共同培养制备上清;应用流式细胞术分析各组Bel-7402细胞凋亡情况、细胞内p53蛋白的表达以及肿瘤细胞内Ca2 水平的变化;应用透射电子显微镜观察细胞超微结构变化;应用荧光显微镜观察细胞内p53蛋白表达的变化。结果与阴性对照组相比较,通过流式细胞仪检测,治疗组细胞凋亡率和细胞内Ca2 水平显著升高(P<0.01);通过流式细胞仪和荧光显微镜检测细胞内p53蛋白的表达无显著差异,透射电子显微镜观察显示出细胞凋亡的典型形态学变化。结论PAB具有诱导Bel-7402细胞凋亡的作用。     

五味子乙素通过p38MAPK信号通路对结肠癌SW480细胞凋亡和侵袭的影响

目的: 观察五味子乙素(SchB) 对人结肠癌 SW480 细胞凋亡和侵袭的作用及对p38MAPK信号通路的影响,阐明其作用机制。方法: 将处于对数生长期的SW480细胞分为对照组、SchB低剂量组(20 μmol·L^-1,SchB₁组)、SchB中剂量组(40 μmol·L^-1,SchB₂组)和SchB高剂量组(80 μmol·L^-1,SchB₃组)。用不同剂量SchB处理SW480细胞后,MTT法检测各组细胞增殖抑制率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Transwell法检测SW480细胞的侵袭情况,Western blotting法检测SW480细胞中p-p38、p38、p-p53和p53蛋白表达水平。结果: 与对照组比较,SchB低、中、高剂量组SW480细胞增殖抑制率和细胞凋亡率明显升高(均P<0.01),SW480细胞的侵袭率及穿膜细胞数明显降低(P<0.01),p-p38和p-p53蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论: SchB可抑制结肠癌SW480细胞的增殖和侵袭,促进细胞的凋亡,p38MAPK信号途径可能参与了SchB对肿瘤细胞的抑制作用。     

食道鳞癌凋亡相关基因表达及原位凋亡的同步检测

用免疫组织化学染色法对食道鳞癌标本进行凋亡相关基因Ｐ５３、Ｆａｓ、Ｂｃｌ ２和Ｂａｘ表达的检测,同时采用ＴＵＮＥＬ方法原位探测细胞凋亡。检测结果显示：①５２例食道鳞癌标本中,Ｐ５３、Ｆａｓ、Ｂｃｌ ２、Ｂａｘ和细胞凋亡的阳性率分别是６１．５％、６１．５％、６９．２％、９８．１％和２８．８％。②１８例对照标本中相应指标的阳性率分别为１６．７％、１００％、３８．９％、１００％和６１．１％。③比较２组标本,肿瘤组Ｐ５３和Ｂｃｌ ２的阳性率显著高于对照组（Ｐ＜０．０１及Ｐ＜０．０５）,肿瘤组Ｆａｓ与ＴＵＮＥＬ的阳性率显著低于对照组（Ｐ＜０．０１及Ｐ＜０．０５）。④以上４种蛋白与细胞凋亡存在与否无独立相关性。上述结果表明,在食道癌变中,不仅存在细胞凋亡功能的减低,同时伴有多种凋亡相关基因的表达异常。凋亡功能的异常,可能是多基因共同调控的结果。     

五味子多糖对脑肿瘤干细胞的凋亡诱导及生长抑制作用

目的：探讨五味子多糖（SCP）对脑肿瘤干细胞（BTSCs）生长的抑制作用,阐明SCP抑制BTSCs生长的抑制机制。方法：培养原代人脑肿瘤细胞,CD133免疫磁珠法分选获得BTSCs,免疫荧光法鉴定BTSCs中神经干细胞标记抗原CD133和Nestin表达情况;将BTSCs分为对照组和不同剂量SCP组,分别用0、200、400和800 μg·L^-1SCP处理;噻唑蓝（MTT）法检测各组BTSCs的增殖率,Annexin Ⅴ-PI分析细胞凋亡率,酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组BTSCs培养上清中Bax、Bcl-2和Cascpase-3蛋白表达水平。结果：免疫荧光染色,CD133和Nestin在BTSCs中呈阳性表达。MTT检测,与对照组比较,各剂量SCP组BTSCs增殖率降低,400和800 mg·L^-1组差异有统计学意义（P<0.05）。Annexin Ⅴ-PI检测,800 mg·L^-1SCP组细胞凋亡率明显升高,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。ELISA法检测,与对照组比较,各剂量SCP组BTSCs中Bax蛋白表达水平升高（P<0.05）,800 mg·L^-1SCP组Bcl-2蛋白表达水平降低（P<0.05）,各剂量SCP组Bax/Bcl-2比值明显升高（P<0.05）。与对照组比较,800 mg·L^-1 SCP组BTSCs中Caspase-3蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。结论：SCP可抑制BTSCs生长,诱导细胞凋亡可能是其作用机制之一。     

氟伐他汀对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察氟伐他汀对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖和诱导凋亡的影响,为其抗肿瘤研究提供理论依据。方法：将HL-60细胞分为不同浓度氟伐他汀处理组（终浓度分别为0、0.5、5.0、10.0和20.0 μmol•L^-1）,对照组不加氟伐他汀,阳性药对照组加入全反式维甲酸(ATRA,终浓度为10 μmol•L^-1）,计数活细胞数目检测细胞增殖情况;用CCK-8试剂盒检测HL-60细胞生长抑制率;用流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡率。结果：与对照组比较,氟伐他汀0.5、5.0、10.0和20.0 μmol•L^-1处理1~4 d 的HL-60细胞,活细胞数有不同程度减少(P<0.01),且随着氟伐他汀剂量的增加和作用时间的延长,活细胞数明显减少。用氟伐他汀处理HL-60细胞2~72 h后,细胞生长抑制率随着氟伐他汀剂量的增加和处理时间的延长逐渐升高,其中氟伐他汀10.0和20.0 μmol•L^-1处理48和72 h后,细胞生长抑制率明显高于同浓度氟伐他汀作用2 h后（P<0.01）。流式细胞仪分析结果表明,与对照组比较,氟伐他汀处理HL-60细胞48 h后,G₀/G₁期细胞百分比明显上升（P<0.05）,S期细胞百分比明显下降及细胞凋亡率增加（P<0.01）。当用甲羟戊酸和氟伐他汀共同处理HL-60细胞后,可逆转氟伐他汀的上述作用（G₀/G₁期细胞56.11% ,S期细胞37.12%）。结论：氟伐他汀能抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡₀作用可能是通过甲羟戊酸途径介 导的。     

顺铂诱导体外儿童睾丸卵黄囊瘤细胞凋亡及p53的表达

目的:探讨p53在顺铂诱导儿童睾丸卵黄囊瘤细胞凋亡发生过程中的作用机制.方法:通过原代培养儿童睾丸卵黄囊瘤细胞获取实验对象,再用顺铂进行凋亡的诱导,TUNEL法检测凋亡细胞,免疫细胞化学方法检测p53表达的变化.结果:在顺铂作用下,细胞发生圆缩脱壁,凋亡小体形成.凋亡指数随着作用时间延长而增加(P＜0.01),p53的表达在早期(12 h)即达到高峰,此后未见持续增强情况.结论:顺铂能够诱导儿童睾丸卵黄囊瘤细胞的凋亡,而p53表达的增强可能是其重要的环节.     

Hedgehog通路对乳腺癌细胞增殖和凋亡的作用及其对Cx32和Cx43表达的影响

目的: 研究Hedgehog通路对乳腺癌细胞增殖、凋亡及间隙连接蛋白32(Cx32)和间隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响,探讨其在乳腺癌细胞增殖和转移中的作用机制。方法: 取对数生长期乳腺癌MCF-7细胞分为环巴胺组和空白对照组,环巴胺组分别以5、10、20、30和40 μmol·L^-1环巴胺处理MCF-7细胞24、48和72 h,应用MTT法测定各组MCF-7细胞增殖抑制率。以0(阴性对照组)和25 μmol·L^-1环巴胺处理MCF-7细胞48 h后,AnnexinⅤ/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率及Cx32、Cx43胞膜阳性表达率。结果: 与空白对照组比较,各剂量环巴胺组MCF-7细胞增殖抑制率明显升高(P<0.05),且随环巴胺剂量增加和作用时间延长其增殖抑制作用增强;与空白对照组比较,25 μmol·L^-1环巴胺组48 h时,MCF-7细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。与阴性对照组比较,25 μmol·L^-1环巴胺组48 h时,MCF-7细胞胞膜Cx32和Cx43阳性表达率明显升高(P<0.05)。结论: Hedgehog通路可抑制乳腺癌细胞凋亡,并调节Cx43和Cx32的胞膜表达。     

微囊藻毒素LR诱导L-02细胞发生凋亡

目的了解微囊藻毒素（MC）LR对L-02细胞的毒性机制。方法以L-02细胞为材料,用不同浓度的MCLR处理该细胞,观察了细胞增殖能力、细胞形态改变、乳酸脱氢酶（LDH）泄漏、细胞凋亡率及凋亡相关基因等一系列指标的变化。结果MTT细胞增殖实验可知,MCLR在24h内对L-02细胞有轻微的抑制作用,随后却促进细胞增殖。48h处理对LDH泄漏没有显著影响．延时处理导致LDH泄漏发生,且MCLR浓度越高,LDH泄漏越严重,此结果显示发生了细胞氧化损伤。光镜下50μg／ml的毒素浓度在60h处理后可造成明显的细胞形态改变,如细胞变圆、不贴壁、萎缩、膜发泡,这些都是典型的细胞凋亡形态变化。36h不同浓度MCLR处理的细胞凋亡率较低,约为22％-9％,延长处理时间至60h,高浓度（50μg／ml）处理的L-02细胞的凋亡率可达80％。经高浓度MCLR处理60h的L-02细胞中．p53和Bcl-2基因产物大量表达。结论微囊藻毒素LR可诱导L-02发生凋亡并上调凋亡相关基因p53和bcl-2的表达。