定量酶联免疫吸附试验在检测风疹IgG抗体中的应用

1995—2005年,上海市每年报告风疹病例100例左右,发病率控制在1/10万以下。上海市最近一次大流行在1993年,全市共报告病例58 104例,报告发病率达451.57/10万。实验室风疹检测是风疹监测工作的重要组成部分,疑似病例的最后实验室确诊对风疹疫情的预警发挥重要作用。酶联免疫吸附试验(ELISA)是检测风疹IgG抗体最常用的实验室血清学检测方法,传统的ELISA通过血清稀释将阳性血清标本的抗体含量划分为<1∶20、1∶20、1∶80、1∶20、1∶1 280 5个滴度,是一种半定量检测方法。近年来,定量酶联免疫吸附试验得到广泛的应用[1,2],能获得准确的抗…     

定量与半定量酶联免疫吸附试验在麻疹IgG抗体检测中的比较

[目的]通过对麻疹病毒IgG抗体定量酶联免疫吸附试验(ELISA)与传统半定量酶联免疫吸附试验(ELISA)进行比较,评价传统半定量ELISA法的实用价值.[方法]随机抽取2008年的180份云南省保山市两所边远小学小学生血清,用德国维润公司定量ELISA试剂盒测定麻疹IgG抗体.这180血清已经用半定量方法将抗体滴度测出,之后将两种方法测定的结果进行比较.[结果]定性结果分析发现,180份血清标本中,8份阴性,3份可疑,162份阳性,与传统半定量ELISA方法的一致率为96.05%,统计分析两实验结果差异无统计学意义(P>0.05),Kappa检验得两法存在高度一致性(Kappa值=0.677,P<0.001).同时得出传统半定量法的灵敏度为95.86%,特异度为100%,阴性似然比为0.04,正确指数为95.86%,阳性预测值为98.18%,阴性预测值为53.33%.定量测定方面,随着抗体滴度的增高,该组血清抗体国际单位(IU)也随之上升,抗体滴度分组与抗体IU明显的正相关,相关系数(rs)为0.41,P<0.001.[结论]通过本次定量与半定量EHSA法在麻疹IgG抗体检测中的比较发现,半定量法的定性、定量结果一定程度上已经能够较好反映人群麻疹抗体水平,对麻疹的监测仍具有重要的实用意义.     

定量酶联免疫吸附试验在检测麻疹IgG抗体中的应用与比较

目的对定量酶联免疫吸附试验(ELISA)在麻疹病毒IgG抗体检测中的应用进行评价,并与传统的半定量ELISA方法做比较。方法收集2003年的92份山西省和内蒙古自治区健康成人血清,用德国维润公司定量ELISA试剂盒测定麻疹IgG抗体滴度。这些血清已经用半定量方法将抗体滴度分为阴性和1∶200、1∶800、1∶3200、1∶12800四个组。将两种方法测定的结果进行比较。结果定性测定结果分析发现,92份血清标本中,5份阴性,1份可疑,86份阳性,与传统半定量ELISA方法的一致率为96·74%,统计分析两实验结果差异无显著的统计学意义。定量测定结果分析发现,随着抗体滴度的增高,该组血清抗体国际单位(IU)也随之上升,均数也随之增高,抗体滴度分组与抗体IU呈明显的正相关,相关系数(rs)为0·963,P<0·000。可重复性检验证明该试剂的可重复性较好。结论定量ELISA方法在麻疹以及其它病毒血清学研究中的应用具有优势。     

麻疹IgG抗体定量检测酶联免疫吸附试验试剂的比较和评价

目的对目前中国市场上已有的两种麻疹IgG抗体定量检测酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA）试剂（德国Virion／Serion试剂和德国IBL试剂）进行比较和评价,筛选适用于2006年全国人群麻疹血清流行病学调查的试剂。方法以蚀斑减少中和试验（Plague Reduction Neutralization Test,PRNT）的检测结果为“金标准”,分别用两种ELISA试剂检测52份麻疹IgG抗体组合血清,然后对试剂的定性和定量能力进行全面分析和评价。结果两种ELISA试剂均能正确的将13份PRNT结果为阴性的血清判定为阴性,特异度均为100％。两种试剂中,Virion／Serion试剂的敏感度为94．9％,与PRNT结果的相关性Kappa值为0．902,相关系数为0．878（P〈0．01）;IBL试剂敏感性为58．8％,与PRNT结果的相关性Kappa值为0．441,相关性系数为0．850（P〈0．01）。结论Virion／Serion试剂的特异性、敏感性较好,有单孔IgG抗体定量能力,价格适中,适于在自动化工作平台工作站中开展大规模血清样本的检测。     

酶联免疫双抗体夹心法检测牛初乳素中免疫球蛋白IgG

〔目的〕建立检测牛初乳素为原料的保健食品中免疫球蛋白IgG的常用酶联免疫双抗体夹心法。〔方法〕分离纯化小牛血清中IgG,以牛IgG免疫新西兰兔,获得抗牛IgG的血清,分离纯化,制备兔抗牛IgG。〔结果〕1000ng/孔兔抗牛IgG饮被酶联板,3倍比稀释牛IgG,夹心法检测。〔结果〕在牛IgG0.031mg/ml-2.50mg/ml范围,浓度与吸光度值线性相关,方程为:y=0.358 0.767x,相关系数为r=0.995,当添加50mmIgG时,回收率为88.4％,变异系数为6.1％。〔结论〕该方法具有特异性强、快速、灵敏和分析成本低等特点。     

酶联免疫法检测弓形体感染初探

目的酶联免疫法正确有效诊断弓形体急性感染。方法对4 500例无偿献血者血浆样本分别检测弓形体IgM抗体、IgG抗体,对IgM抗体阳性和IgM抗体阴性且IgG抗体阳性的样本检测其IgG抗体亲合力。结果 4 500例样本中,弓形体IgM抗体阳性率为0.51%,IgG抗体阳性率为1.53%。其中22例为IgM（＋）IgG（＋）,1例为IgM（＋）IgG（-）,47例为IgM（-）IgG（＋）,4 430例为IgM（-）IgG（-）。在对69例弓形体IgG（＋）的样本进行IgG亲合力检测时,IgM（＋）IgG（＋）的22例样本中2例为IgG中等亲合力抗体,3例为IgG高亲合力抗体,但这5例样本的IgM抗体均为可疑,可能由于IgM抗体常年保持低水平,并非正处于弓形体急性感染期;IgG（＋）IgM（-）的47例样本中,3例为IgG低亲合力抗体,可能由于其中的弓形体IgM抗体在急性感染期后期,IgM抗体滴度太低无法检测到,仍可判定为处于急性感染期。最终确定弓形体急性感染的样本为20例,感染率0.44%。结论可同时检测弓形体IgM抗体和弓形体IgG抗体亲合力来诊断弓形体感染,IgM抗体阳性或IgG抗体低亲合力的样本均可判定为弓形体急性感染。     

肉品检测新方法——酶联免疫分析法

酶联免疫分析法作为商业上快速测定食品中一些成分的变化,已引起人们关注,尤其是在热加工食品中的应用。我们知道,在热加工食品过程中,一些成分的含量会降低,而另一些产物的浓度会提高。当用蛋白质做指示剂时,可作为抗体,这种抗体只对一种蛋白质具有专一性,即可用指示蛋白质在加热过程中的变化。因而酶联免疫分析法可用于检测处理温度或检测蛋白质的变性程度。这种方法有简便易学,设备投资和试剂消耗少,分析速度快等优点。     

间接ELISA法检测流感病毒IgG抗体

流行性感冒 (简称流感 )是一种急性呼吸道传染病。在人群中易局部爆发或区域性流行 ,甚至引起世界性的大流行。而对流感病毒 (F1u Virus)保护性抗体 Ig G水平的监测 ,为评估人群对流感病毒是否有免疫能力提供依据。应用EL ISA法检测流感抗体 ,其敏感性高 ,特异性强 ,操作简便 ,肉眼可观察 ,便于大规模检测 ,因此我们研究了用间接EL ISA法检测流感病毒 Ig G的方法 ,并用此法对武汉市1999、2 0 0 2年采集的正常人群血清样品共 30 0份进行 Ig G抗体检测 ,现将结果报告如下。1　材料和方法1.1　备检血清　收集 1999年 10 0份、2 0 0 2年…     

酶联免疫法检测风疹病毒急性感染结果分析

目的探讨酶联免疫法在诊断风疹病毒急性感染中的应用。方法对2100例无偿献血者血浆样本分别检测风疹病毒IgM抗体、IgG抗体,对IgM抗体阳性和IgM抗体阴性且IgG抗体阳性的样本检测其IgG抗体亲合力。结果 2100例样本中,风疹病毒IgM抗体阳性率为0.76%,IgG抗体阳性率为78.67%,447例样本个体风疹病毒IgM抗体和IgG抗体均为阴性。在对IgM抗体阴性且IgG抗体阳性的样本进行IgG抗体亲合力检测时,有19例样本为低亲合力,可判定为原发性感染。在对IgM抗体阳性的样本进行IgG亲合力检测时,样本SZ0259和SZ1490IgM抗体为可疑值,IgG抗体阳性,IgG抗体高亲合力,可能由于IgM抗体常年保持低水平,并非正处于风疹病毒急性感染期。最终确定风疹病毒急性感染的样本为33例,感染率1.57%。结论可同时检测风疹病毒IgM抗体和风疹病毒IgG抗体亲合力来诊断风疹病毒感染,IgM抗体阳性或IgG抗体低亲合力的样本均可判定为风疹病毒急性感染。     

酶联免疫吸附试验检测新蝶呤的方法学评价

目的 对应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测新蝶呤(neopterin,Npt)进行方法学评价,同时探讨其在病毒性脑炎患儿脑脊液中的表达水平.方法 对ELISA法测定Npt进行灵敏度、精密度、回收率、干扰试验、正常参考值进行检测,并采用该ELISA法检测50例健康人外周血、30例病毒性脑炎患儿脑脊液和12例对照组脑脊液中Npt含量.结果 该方法的检测灵敏度为1.08 nmol/L,批内精密度为4.94%～5.55%,批间精密度为5.99%～6.57%,回收率为95.8%～107.8%,抗干扰性符合临床要求,健康人血清正常参考值为0～7.84 nmol/L,病毒性脑炎患儿脑脊液中Npt含量为(34.09±36.34)nmol/L,对照组脑脊液中Npt含量为(4.55±2.89)nmol/L,病毒性脑炎患者脑脊液中Npt含量明显高于对照组(P＜0.01).结论 ELISA法可用于临床检测血清或脑脊液Npt,适合各级医院临床开展使用.在病毒性脑炎患者的诊断和疗效观察方面有一定价值.     

风疹IgG抗体ELISA检测方法的建立和应用

目的:建立血清风疹IgG抗体(RV-IgG)酶联免疫测定(ELISA)方法,初步探讨其应用价值。方法:采用RV-GOS株感染Vero细胞制备风疹病毒(RV)抗原,并经浓缩和纯化后,建立定量间接ELISA方法。应用该方法对深圳市宝安区加～40岁270例育龄妇女血清进行RV-IgG检测,与FDA认证的意大利Dia Sorin公司生产的RV-IgGELISA方法检测试剂盒进行比较。结果:两种方法相关系数为0.92,P相似文献   

风疹病毒IgG抗体检测方法的研究及应用

目的:建立一个以最低保护力的抗体水平(15IU/ml)为临界值的风疹病毒特异性IgG抗体的检测方法。方法:用优选的抗原和具有变色功能的标本稀释液,用世界卫生组织提供的标准品标定标准曲线,以常规间接ELISA方法进行检测。结果:对检测方法的各个环节进行了比较研究,确定了检测方法的最佳工艺流程。对1005例育龄妇女血清标本进行检测,并与意大利Sorin公司的试剂检测结果进行比较,两种方法呈高度相关(Kappa值为0.85)。结论:本文建立的方法具有敏感、特异、简便、快速、可重复性好等特点,适用于育龄妇女风疹病毒抗体水平的筛查。     

7种检测风疹IgG抗体的试剂盒的比较

目的:比较7种检测风疹IgG抗体试剂盒的效果。方法:7种试剂盒中2种为本室自制,其余5种为国外市售。取262例育龄妇女血清标本按照试剂盒说明书用酶联免疫吸附法完成测定。结果:7种试剂盒Kappa值和方法的可用度分别为0.21～1和24.1%～100%,检测世界卫生组织提供的风疹抗体标准品时,曲线有很好的相关性(γ>0.85);试剂盒检测血清样本时诊断敏感性和特异性范围分别为57.3%～93.3%,53.1%～96.1%。结论:7种试剂盒检测血清标本时有较大的差异,急需进行试剂盒的标准化研究,进一步提高检测的敏感性和特异性。     

ELISPOT及ELISA鉴别HBV感染免疫状态的研究

目的比较酶联免疫斑点法(ELISPOT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴别乙型肝炎病毒(HBV)感染免疫状态。方法临床诊断的慢性HBV感染者免疫清除期、免疫耐受期患者各16例,常规分离外周血单个核细胞(PBMC),体外用HBcAg或培养液刺激,分别用ELISPOT及ELISA方法,检测两组患者PBMC分泌的r-干扰素(INFr)。结果用ELISA方法,两组患者PBMC受HBcAg刺激分泌IFNr,分别为(655.25士3.80)、(578.37±7.73)ng/L,阳性率分别为68.81%、12.50%,差异有统计学意义(P<0.01);用ELISPOT方法,两组患者PBMC受HBcAg刺激分泌IFNr,阳性率分别为87.50%、0,二者差异有统计学意义(P<0.01)。结论免疫清除期、免疫耐受期HBV感染者,PBMC对HBcAg刺激的免疫反应不同,鉴别二者,ELISPOT优于ELISA。     

重庆市育龄妇女风疹免疫水平调查

目的 了解重庆市育龄妇女抗风疹病毒IgG抗体（RV－IgG）阳性率水平,为预防和减少先天性风疹综合征（CRS）的发生提供指导。方法 在某教学医院妇产科及该大学女生中抽取15－40岁女性共263名,采用酶联免疫吸附实验法（ELISA）测定风疹IgG抗体,按年龄、地区、职业等因素分组进行抗体阳性率的分析和比较。结果 RV－IgG抗体总阳性率为71.1%,不同年龄、地区、职业组间差异无显著性。结论 重庆市育龄妇女风疹易感者比例为28.9%。建议女性于婚前检查常规接种风疹疫羁,并可在条件较好的地区对已婚未育进行风疹疫苗的普遍接种。     

基于淋病奈瑟菌外膜蛋白pIA-pIB融合基因重组产物酶联免疫吸附试验的建立和应用

2005年6月天津市武清区汊沽港镇发生以发热、腹泻、恶心、呕吐和脓血便为主要症状的病例,共确诊患者1189例,经流行病学调查确认是一起由于生活饮用水源污染而导致的福氏志贺痢疾杆菌3a型细菌性痢疾(菌痢)的暴发.     

HBV表面抗原酶联免疫检测灰区设定的应用研究

[目的]通过中和确认实验及超敏HBV表面抗原检测试剂来验证乙肝表面抗原筛查诊断试剂盒设定灰区后对提高阳性检出率的影响。[方法]对两次均在检测灰区以下样本进行超敏HBV表面抗原检测试剂,同时用高效价人免疫球蛋白与样本血清中和后,再进行检测。[结果]84份检测灰区样本中超敏HBV表面抗原检测试剂再次检测为阳性样本21例,其中15例用中和确认方法为真阳性,6例确认为真阴性,超敏HBV表面抗原检测试剂有反应性样本S/CO显著高于常规筛查试剂检测结果。[结论]HBV表面抗原检测采用灰区设定方案有效提高了HBV阳性的检出率,增加了血液安全。     

赭曲霉毒素A的酶联免疫吸附法检测

用酶联免疫吸附法检测食品等的真菌毒素的方法学研究进展很快。本文主要针对检测赭曲霉毒素Ａ的方法,包括抗原、抗体的制备方法及酶联免疫吸附法的进展做一综述性介绍。     

ELISA法检测HIV抗体的影响因素和控制措施

目的酶联免疫吸附实验(ELISA)在基层HIV抗体筛查实验室ELISA法被普遍应用,但又因其存在的诸多干扰因素,对结果的准确性起到了一定的限制,为了消除这些影响因素,检验人员在操作中必须采取相应的控制措施,以利于检验结果的准确可靠。方法依据中国疾病预防控制中心《全国艾滋病检测技术规范》(2009年修订版)的要求,主要从标本因素、试剂因素、温度因素、操作因素等方面着手,来采取相应的控制措施,试剂由北京万泰试剂有限公司(批号为120090101)和珠海丽珠试剂有限公司(批号为20090105)提供。结果珠海丽珠试剂有限公司检测的CV(预期变异)为5.43%,北京万泰试剂有限公司检测的CV(预期变异)为11.92%,《全国艾滋病检测技术规范》要求小于20.00%,合乎要求。通过对标本、试剂、温度、人员技术操作等诸多因素的控制,有效地避免了筛查结果中假阴性或假阳性等偏差的出现。结论对于我们基层的HIV抗体初筛实验室的工作人员来说,消除ELISA法检测HIV抗体操作中各个环节存在的影响因素,扬长避短,对保证检验结果的准确可靠是至关重要的。