Ni2+与EGCG相互作用对人牙龈成纤维细胞的生物学效应

 目的 分析表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin gallate,EGCG）、Ni²⁺及其相互作用对人牙龈成纤维细胞（human gingival fibroblast cells,HGF）的生物学效应。方法 用MTT法检测HGF的存活率,运用彗星电泳检测细胞的DNA损伤情况,使用流式细胞仪法检测HGF周期变化。结果 Ni²⁺可呈时间依赖性抑制HGF的生长,造成细胞DNA损伤,并且可使细胞周期阻滞于S期,诱导细胞凋亡。高浓度的EGCG（>200 μmol/L）可明显抑制HGF生长,使细胞的DNA损伤。Ni²⁺与EGCG相互作用后增加了对HGF的抑制（P<0.01）,DNA的损伤及凋亡细胞也明显增加（P<0.05）。结论 Ni²⁺和EGCG相互作用后使Ni²⁺对HGF的抑制作用增强,加剧HGF的DNA损伤和细胞周期阻滞,并明显增加细胞凋亡。     

瘦素对缺血缺氧损伤脑星形胶质细胞凋亡的影响

目的 研究瘦素对缺血缺氧/复氧损伤星形胶质细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 制作缺血缺氧大鼠脑皮质星形胶质细胞损伤模型,MTT法检测星形胶质细胞活力;采用Annexin V-FITC试剂盒检测星形胶质细胞凋亡;RT-PCR和Western blot方法检测凋亡相关基因bcl-2、bax、caspase-3的表达.结果 与缺血缺氧损伤组比较,瘦素干预组星形胶质细胞存活率升高(P<0.01)、凋亡率下降(P<0.01);抑凋亡基因bcl-2 mRNA和蛋白表达水平上调(P<0.01),促凋亡基因bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达水平下调(P<0.01),呈剂量依赖性.结论 瘦素能够使凋亡相关基因bcl-2表达上调、bax和caspase-3表达下调,从而抑制缺血缺氧损伤星形胶质细胞发生凋亡.     

系统性红斑狼疮患者外周血IL-17表达及其与疾病活动性的关系

 目的 研究系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE）患者外周血白细胞介素-17（interleukin-17,IL-17）蛋白及基因的表达水平及其与疾病活动性的关系。方法 用酶联免疫吸附试验法（ELISA）检测26例SLE患者及21例健康对照者血浆中IL-17的蛋白水平;以β-actin为内参照,采用荧光实时定量反转录聚合酶链式反应（Real-time PCR,RT-PCR）检测两组外周血中IL-17 mRNA表达水平。结果 SLE组患者血浆IL-17含量明显高于健康对照组［(18.04±6.04)pg/mL vs (12.73±6.81)pg/mL,P<0.01］;SLE组患者外周血IL-17 mRNA表达水平高于对照组;IL-17蛋白含量与mRNA表达水平呈正相关（r=0.7,P=0.007 0）。SLE组血浆IL-17水平与SLE疾病活动性指数（SLEDAI）积分和抗dsDNA抗体水平呈正相关（r=0.459,P<0.05;r=0.487,P<0.05）;与血清C3水平呈负相关（r=-0.373,P<0.01）。结论 SLE患者体内IL-17蛋白分泌及基因表达水平存在明显异常,两者呈正相关,且与疾病活动性有明显相关性,提示IL-17可能在SLE发病中起重要作用。     

DNA甲基转移酶1与CD11a基因在系统性红斑狼疮患者中mRNA水平的表达

 目的 检测系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE）患者中DNA甲基转移酶1（DNA methyltransferase 1,DNMT1）和CD11a基因的表达水平,探讨DNMT1的表达异常在SLE发病中的作用。方法 用Real-time PCR方法测定SLE患者缓解期、活动期和正常人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）中DNMT1和CD11a基因的表达水平。结果 SLE活动期患者PBMC中DNMT1的表达水平较对照组（P=0.014）和缓解期组（P=0.030）显著下降;缓解期的DNMT1表达水平与对照组（P=0.264）相比差异无统计学意义;SLE患者DNMT1的表达水平与SLE疾病活动指数（SLE disease activity index,SLEDAI）呈现负相关（P<0.05）。SLE活动期患者PBMC中CD11a的表达水平较对照组（P=0.003）显著升高（P<0.05）;缓解期的CD11a表达水平与对照组（P=0.250）和缓解期组（P=0.069）相比差异无统计学意义（P>0.05）;SLE患者CD11a的表达水平与SLEDAI呈正相关（P<0.05）。SLE患者DNMT1与CD11a的表达水平无显著相关性（P>0.05）。结论 SLE患者PBMC中DNMT1表达水平的降低可能是造成基因组DNA低甲基化的重要原因,使得CD11a等致病基因过度表达,进而导致SLE发病。     

2型糖尿病患者血清叶黄素与体内氧化应激指标的关系

 目的 研究2型糖尿病（diabetes mellitus,DM）患者血清叶黄素含量与氧化应激反应的关系。方法 检测99例2型DM患者和83例正常对照者的空腹血糖、血清总胆固醇、血清三酰甘油;血清叶黄素、β-胡萝卜素、番茄红素和维生素E含量及血清SOD、GSH-Px、MDA、IL-6含量,采用t检验、单因素相关分析、逐步多元线性回归等方法进行统计分析。结果 2型DM患者组血清叶黄素、番茄红素、β-胡萝卜素、SOD、GSH-Px水平明显低于正常对照组（P<0.05）,血清MDA、IL-6水平高于正常对照组（P<0.01）。血清叶黄素、番茄红素和β-胡萝卜素与血清SOD和GSH-Px的相关系数为正值（P<0.05）,与MDA相关系数为负值（P<0.05）,叶黄素、β-胡萝卜素与IL-6的相关系数为负值（P<0.05）。多因素分析表明,控制BMI和年龄因素后,血清叶黄素与MDA、IL-6含量呈负相关,与血清SOD、GSH-Px呈正相关（P<0.05）。结论 随着2型DM患者血清叶黄素水平的增加,血清MDA、IL-6含量降低,血清SOD与GSH-Px的活性增高。提示叶黄素可能通过抑制机体的氧化应激反应,降低IL-6的表达,从而减轻IL-6水平过高所导致的负面效应。     

聚肌胞联合E7(44-62)增强自然杀伤细胞抗子宫颈癌免疫的实验研究

 目的 探讨聚肌胞联合E7(44-62)刺激对自然杀伤细胞（natural killer cell,NK细胞）的影响。方法 NK92细胞分别给予培养液（C组）或聚肌胞（聚肌胞组）或聚肌胞联合E7(44-62)（联合组）刺激;检测刺激前后的NK92细胞的Toll样受体3、TNF-α和INF-γ mRNA水平以及肿瘤细胞杀伤活性。结果 刺激1 h后,联合组的Toll样受体3表达明显高于C组和聚肌胞组;刺激1 h后,联合组的TNF-α mRNA水平显著高于C组和聚肌胞组（P均<0.01）;联合组的INF-γ mRNA水平显著高于C组和聚肌胞组（P均<0.05）;刺激24 h后,联合组NK92细胞的肿瘤细胞杀伤活性显著高于C组和聚肌胞组（P均<0.01）。结论 聚肌胞联合E7(44-62)通过提高NK92细胞的Toll样受体3表达,同时增加TNF-α和INF-γ基因的水平,从而增强抗肿瘤反应。     

TLR2 mAb和TLR4 mAb对急性期溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜炎症因子IFN-γ、IL-4及 IL-17表达的影响

 目的 探讨TLR2单克隆抗体（toll-like receptor 2 monoclonal antibodies,TLR2 mAb）和TLR4单克隆抗体（toll-like receptor 4 monoclonal antibodies,TLR4 mAb）对葡聚糖硫酸钠（dextran sulfate sodium,DSS）诱导的急性期溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）小鼠结肠黏膜的炎症因子IFN-γ、IL-4及IL-17表达的影响。方法 50只雄性BALB/c小鼠分为5组（每组10只）：对照组（A）、模型组（B）及TLR2 mAb干预组（C）、TLR4 mAb干预组（D）、TLR2 mAb和TLR4 mAb联合干预组（E）。A组小鼠饮用蒸馏水7 d;B-E组小鼠仅饮用5% DSS水溶液7 d以产生急性期溃疡性结肠炎模型。造模开始的同时,每隔48 h分别给予C、D、E干预组小鼠以TLR2 mAb（10 μg）、TLR4 mAb（10 μg）、TLR2 mAb（10 μg）+TLR4 mAb（10 μg）腹腔内注射,A、B组给予腹腔内注射生理盐水,以观察TLR2 mAb和TLR4 mAb的干预作用。观察指标包括疾病活动指数（disease activity index,DAI）、结肠组织病理学评分（histopathological score,HS）。造模及干预7 d后处死小鼠,Real-time PCR法检测各组结肠黏膜TLR2、TLR4、IFN-γ、IL-4及IL-17的mRNA表达。结果 (1)与A组相比,B组小鼠肠道DAI及HS明显增高（P<0.01）。与B组相比,E组小鼠肠道DAI（P<0.05）和HS（P<0.01）均明显降低。与D组相比,E组小鼠肠道HS明显降低（P<0.05）。(2)与A组相比,B组小鼠结肠黏膜TLR2、TLR4表达明显增高（P<0.01,P<0.05）。与B组相比,C、D、E组小鼠结肠黏膜TLR2、TLR4表达均有不同程度的降低。(3)与A组相比,B组小鼠结肠黏膜IFN-γ、IL-4及IL-17的mRNA表达明显增高（P<0.01,P<0.05,P<0.01）。与B组相比,C、D、E组小鼠结肠黏膜IFN-γ、IL-4及IL-17的mRNA表达均有不同程度的降低。结论 TLR2 mAb和TLR4 mAb可能通过下调小鼠结肠黏膜的炎症因子IFN-γ、IL-4、IL-17的mRNA表达而发挥其干预作用。     

重组人促红细胞生成素对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用

 目的 探索不同剂量及给药时间的重组人促红细胞生成素（recombinant human erythropoietin,rhEPO）对大鼠肾脏缺血再灌注损伤（ischemia-reperfusion injury,IRI）的保护作用。方法 48只雄性SD大鼠随机分为假手术组（S组）、缺血对照组（IR组）、EPO-1组（再灌注时给药1 000、2 000和3 000 U/kg）和EPO-2组（再灌注前给药1 000、2 000和3 000 U/kg）。阻断左侧肾蒂45 min后切除右侧肾脏,建立IRI模型。检测血液中血肌酐（Scr）、血浆尿素氮（BUN）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、IL-6和Caspase-3水平,观察肾脏的病理学改变,采用TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡。结果 EPO组血清Scr、BUN和肾组织MDA、Caspase-3、IL-6水平明显低于IR组（P<0.05）;EPO组肾组织SOD水平明显高于IR组（P<0.05）,并在组织损伤上较IR组轻;TUNEL染色观察到EPO组阳性细胞数明显少于IR组（P<0.05）。再灌注前给药优于再灌注时给药（P<0.05）。结论 rhEPO对肾脏IRI有较好的保护作用,该作用可能通过抗氧自由基、减轻炎症反应、减少肾小管上皮细胞凋亡的协同机制来实现。保护作用与药物剂量呈正相关,再灌前给药优于再灌注时给药。     

低氧培养的肝癌细胞中低氧诱导因子1的表达与血管生成和细胞凋亡相关蛋白的关系

目的:观察低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)在低氧培养的肝癌细胞中的表达变化,并初步探讨其与血管生成和细胞凋亡的关系.方法:将终浓度为125 μmol/L的氯化钴加入HepG2肝癌细胞培养液中模拟低氧环境,并设培养不同时间(0、1、2、4、6、8 h)组.(1)采用RT-PCR技术检测低氧培养不同时间的肝癌细胞中HIF-1α、VEGF、Caspase-3、bcl-2和bax mRNA的表达;(2)应用Western印迹方法及酶标免疫测量仪分别检测了各培养组细胞Caspase-3蛋白表达及Caspase-3酶活性.结果:(1)HepG2细胞在低氧培养1～2 h后,其HIF-1α、VEGF、bcl-2 mRNA的表达逐渐增加,在4 h达到高峰,随后下降,但仍高于低氧处理前水平;而bax mRNA表达无明显变化,bcl-2/bax比值与上述变化趋势一致.(2)Caspase-3 mRNA及蛋白的表达及酶活性变化趋势与HIF-1α正好相反.结论:HIF-1α可能通过调节VEGF、bcl-2、bax和Caspase-3的表达而抑制肝癌细胞凋亡,且这种抑制作用与缺氧程度有关.     

沉默神经元HIF-1α和PTEN的表达对体外培养的大鼠神经元氧糖剥夺损伤的影响

目的 利用RNA干扰技术分别沉默神经元中缺氧诱导因子1α（HIF-1α）和磷酸酶并和张力蛋白同源物（PTEN）基因,论证它们在神经元体外氧糖剥夺（OGD）损伤后的功能调控作用。方法 构建并筛选靶向HIF-1α及PTEN基因的shRNA慢病毒载体;提取并将原代神经元分为4组：（1）NC组,仅加空载病毒;（2）NC+OGD组,加空载病毒后缺氧;（3）Si-hif-1α+OGD组,加Si-hif-1α病毒后缺氧;（4）Si-pten+OGD组,加Si-pten病毒后缺氧,均在培养第3天感染病毒,第7天OGD损伤模拟细胞缺氧。缺氧后24 h行荧光实时定量PCR（qRT-PCR）法检测干扰效率,行乳酸脱氢酶（LDH）检测及AnnexinV-FITC/PI检测神经元细胞损伤、凋亡变化,Western blot检测相应蛋白表达变化。结果 慢病毒介导的shRNA能有效沉默目的基因mRNA的表达;HIF-1α沉默后,缺氧细胞的损伤及凋亡加重,PTEN蛋白的表达升高,p-PTEN、p-AKT、NR2A及VEGFa表达降低（P<0.05）;PTEN沉默后,缺氧细胞的损伤及凋亡有所减轻,p-PTEN、p-AKT表达升高（P<0.05）,HIF-1α、NR2A及VEGFa的表达无显著变化（P>0.05）。结论 慢病毒介导的shRNA能有效沉默神经元HIF-1α及PTEN的表达,逆转神经元缺氧损伤中HIF-1α升高对PTEN活性的抑制,参与神经元损伤调控。     

低氧训练对大鼠肝组织bax、bcl-2与HIF-1α的影响

目的:探讨"高住低练"肝细胞凋亡调控基因,凋亡调控基因与HIF-1α之间关系。方法:健康成年雄性SD大鼠60只,随机分为6组。低氧暴露组(HE)和高住低练组(Hilo)每天低氧暴露(氧浓度12.6%,相当于海拔4000m)8h和12h,5d/w,共4w;常氧运动组和高住低练组每天均以25m/min的速度训练1h,5d/w,共4w。采用免疫组织化学方法和计算机显微图像分析系统分析bax、bcl-2和HIF-1α阳性表达、阳性物质的定位及定量。结果:(1)Hilo组的bax蛋白表达与HE组和T组相比显著增加(P<0.05),随着低氧暴露时间的延长,呈增长趋势;TUNEL与bax呈正相关(r=0.693,P<0.01);(2)HE组bcl-2蛋白表达显著高于C组,12hHE组的bcl-2蛋白表达比8hHE组显著下降(P<0.05);12Hilo组bcl-2蛋白表达比8Hilo组显著下降,但明显高于C组(P<0.05);(3)肝组织bax/bcl-2值显示,C组与12hHE组和12Hilo组相比具有显著性意义P<0.05);T组与Hilo组相比具有非常显著性意义(P<0.01);(4)HIF-1α与bax呈高度正相关(r=0.958,P<0.01)。结论:bax、bcl-2与HIF-1α基因参与调控肝细胞的凋亡;HIF-1α可能调控bax和bcl-2,并与bax呈高度正相关,调控bax高表达而促进肝细胞凋亡。     

拉萨市藏、汉民族血脂水平的比较

 目的 调查分析拉萨市藏、汉民族间血脂水平及其异常检出率的差异,为该地区血脂异常症的预防提供客观依据。方法 选取拉萨市藏（Tibetan,T）、汉民族（Han,H）1 228例体检人群为调查对象,其中藏族559例,汉族669例,按血脂测定标准化方法测定的血清总胆固醇（total cholesterol,TC）、三酰甘油（triglycerin,TG）、高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C）及低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C） 4项指标的血脂水平;按2007年《中国成人血脂异常防治指南》将研究对象分为4个年龄组,界定4项血脂异常标准值,比较藏、汉民族各年龄组血脂异常检出率的差异。采用协方差分析和χ2检验比较两民族间血脂存在的差异。结果 汉族TG水平高于藏族（P≤0.001）,HDL-C水平低于藏族（P<0.001）;藏族TC和LDL-C水平均高于汉族 （P<0.001、P=0.013）。藏族男性青年组、中年组、老年前期组TC异常检出率均显著高于汉族（P<0.001）,藏族男性中年组和女性青年组、中年组TG异常检出率反而比汉族高（P<0.001、P<0.05、P<0.001）;汉族男性青年组、中年组、老年前期组HDL-C异常检出率明显高于藏族（P<0.001）。结论 藏族是混合型高脂血症的高危人群,尤其藏族男性;汉族男性是低HDL-C血症的高危人群。     

erbB3结合蛋白-ebp1在腺样囊性癌组织中的表达及其临床意义

 目的 研究ebp1在涎腺腺样囊性癌中的表达,并探讨其与病理生物学特征及患者术后生存时间的关系,以期为评价ebp1作为涎腺腺样囊性癌早期诊断和患者预后的可能性提供实验依据。方法 采用PV6000二步法免疫组化染色检测有完整随访资料的35例涎腺腺样囊性癌及相应癌旁正常组织中ebp1表达的差异。结果 正常涎腺组织中ebp1的阳性表达（97.1%）明显高于涎腺腺样囊性癌组织中（74.3%）的表达（P=0.016）。ebp1蛋白表达强度与肿瘤的组织学类型及分期密切相关（P<0.05）,但与患者的年龄、性别和侵袭转移类型无明显相关性（P>0.05）。其中,单纯筛状和筛状管状型ACC中ebp1的表达明显高于坏死型;T1-T2期患者中ebp1表达显著高于T3-T4期患者（P<0.05）。此外,ebp1阳性表达组患者的生存期明显高于ebp1阴性表达组,且具统计学差异（P=0.048）。结论 ebp1的下调可能促进涎腺腺样囊性癌的发生发展,可考虑作为涎腺腺样囊性癌临床评价肿瘤生物学行为及评估预后的指标。     

尼尔雌醇对去势雌性大鼠1,25双羟维生素D水平的影响

 目的 研究卵巢摘除（ovariectomy,OVX）后大鼠血清25(OH)D、1,25双羟维生素D［1,25(OH)2D］水平和骨表型的变化及雌激素干预效果。方法 采用6月龄SD雌性大鼠双侧卵巢摘除术建立去势骨质疏松模型并随机分为去势模型组（OVX组）和去势后雌激素干预组（OVX-E组）,另设假手术对照组（SHAM组）,每组10只。术后5周OVX-E组开始灌服尼尔雌醇（1 mg/kg,2次/周）,其他组灌服饮用水作为对照,均给药13周。采用酶免法（EIA）检测血清25(OH)D和1,25(OH)2D水平,用体积骨密度（volume bone mineral density,vBMD）和骨小梁面积（BV/TV）等指标进行骨表型分析。结果 OVX组血清25(OH)D水平保持稳定,与SHAM组比较差异无统计学意义。去势后1,25(OH)2D水平显著升高,OVX组为63.1 pmol/L,较SHAM组的38.5 pmol/L增加了64%（P<0.001）。OVX大鼠骨密度降低,较SHAM组分别减少9.5%（股骨,P<0.001）和9.8%（腰椎,P<0.001）。同时出现骨小梁面积减少和尿吡啶酚增加（58.7%,P<0.05）等骨质疏松表型。口服雌激素后,血清1,25(OH)2D水平较OVX组明显下降60.8% （P<0.001）,甚至低于SHAM组（P<0.01）,同时延缓骨丢失和改善骨微结构。结论 去势影响大鼠维生素D（vitamin D,VD）代谢,致血清1,25(OH)2D水平明显升高,小剂量雌激素对VD代谢改变和骨丢失具有显著纠正作用。     

黄芪皂甙与丹参酮ⅡA对大鼠骨骼肌急性钝挫伤后生长因子表达的影响

目的 观察黄芪皂甙和丹参酮ⅡA对大鼠骨骼肌钝挫伤后修复过程中生长因子表达的影响.方法 96只雄性Wistar大鼠(体重180～200 g)随机分为A组(正常对照组)、B组(生理盐水对照组)、C组(黄芪皂甙组)、D组(丹参酮ⅡA组)、E组(黄芪皂甙+丹参酮ⅡA组)、F组(黄芪丹参注射液组),每组16只.采用打击装置造成...     

双酚A及玉米赤霉烯酮对神经母细胞瘤细胞周期蛋白表达的影响

目的 探讨两种环境内分泌干扰物双酚A(bisphenol A,BPA)与玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞细胞周期素CyclinD1、CDK4、p21表达的影响.方法 SK-N-SH细胞经培养扩增后分为7组:组1,无干预(对照组);组2,加17β-雌二醇(E2);组3,加...