3种抗氧化剂对亚砷酸钠染毒人膀胱上皮细胞血管内皮生长因子表达的拮抗作用研究

目的探讨抗氧化剂褪黑素(melatonin,MEL)、N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl cysteine,NAC)、维生素C(Vitamin,VC)对砷诱导人正常膀胱上皮(SV-HUC-1)细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的拮抗作用。方法将处于对数生长期的SV-HUC-1细胞暴露于含终浓度分别为0(对照)、0.5、1、2、4、8、10μmol/L亚砷酸钠的F12K完全培养基染毒24 h,或者含终浓度分别为4、10μmol/L亚砷酸钠的F12K完全培养基染毒0(对照)、4、12、24、48、72 h;联合暴露组在加入含终浓度分为4μmol/L亚砷酸钠的F12K完全培养基前30 min分别加入1%二甲基亚砜(DMSO)和抗氧化剂MEL、VC、NAC(终浓度分别为0.5、1、1 mmol/L),染毒24 h。分别采用Western blot法和RT-PCR法检测SV-HUC-1细胞VEGF蛋白和mRNA的表达水平。结果 10μmol/L亚砷酸钠染毒组SV-HUC-1细胞VEGF mRNA的表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);且随着亚砷酸钠染毒剂量的升高,SV-HUC-1细胞VEGF mRNA的表达水平呈上升趋势。与对照组比较,4μmol/L亚砷酸钠染毒12、24、48 h及10μmol/L亚砷酸钠染毒24和48 h后SV-HUC-1细胞VEGF mRNA的表达水平均升高,差异有统计学意义(P0.05);且随着亚砷酸钠染毒时间的延长,各剂量组SV-HUC-1细胞VEGF mRNA的表达水平均呈先上升后下降的趋势。与对照组比较,4μmol/L亚砷酸钠+DMSO染毒组SV-HUC-1细胞中VEGF蛋白的表达水平均增加,差异有统计学意义(P0.05)。与4μmol/L亚砷酸钠+DMSO染毒组比较,亚砷酸钠+NAC染毒组SV-HUC-1细胞中VEGF蛋白的表达水平较高,差异有统计学意义(P0.05);而亚砷酸钠与MEL和VC联合染毒组SV-HUC-1细胞中VEGF蛋白的表达水平无明显改变。结论砷能诱导人正常膀胱上皮细胞VEGF表达增加,NAC能增加VEGF表达。     

长时间低浓度暴露亚砷酸钠促进人正常膀胱上皮细胞增殖

以不同浓度亚砷酸钠(Na As O2)(0、0.1、0.5、1.0μmol/L)对人正常膀胱上皮细胞(SV-HUC-1)进行长期染毒,采用四甲基偶氮唑(MTT)比色法检测细胞活力。未经砷染毒的SV-HUC-1进行长期传代培养,细胞增殖活力没有发生任何改变;0.1、0.5μmol/L Na As O2处理20代后,细胞增殖活性显著增高,并呈剂量-反应增高趋势(r=0.632、P0.01,r=0.939、P0.01),而1.0μmol/L Na As O2处理的细胞其增殖活力未随染毒时间而发生变化(P0.05)。提示长时间低浓度暴露Na As O2可以促进SV-HUC-1增殖。     

三维和二维培养对砷诱导膀胱上皮细胞间充质转化的影响

目的 比较三维（3D）和二维（2D）培养下慢性砷暴露的膀胱上皮细胞间充质转化（epithelial mesenchymal transition，EMT）的相关因子表达。方法 2D培养人膀胱上皮细胞（SV-HUC-1）暴露于0、0.5 μmol/L亚砷酸钠（NaAsO2）40周，分别于2D和3D（采用Matrigel构建）培养5 d，采用反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）和免疫印迹法（Western blot）检测EMT的E-cadherin、Vimentin mRNA和蛋白的水平。结果 膀胱上皮细胞株SV-HUC-1在3D培养中呈球形生长，3 d后逐渐聚团。从mRNA水平看，在2D与3D培养中As暴露组较对照组的E-cadherin水平显著下降（P<0.01），Vimentin水平显著升高（P<0.05）；在两种培养方式下As暴露组间差异也有统计学意义（P<0.01）。2D培养中，与对照组比较，As暴露组的E-cadherin蛋白表达显著下降（P<0.001），Vimentin蛋白表达显著升高（P<0.01）；3D培养条件下，染毒前后两种蛋白水平差异无统计学意义。结论 膀胱上皮细胞株SV-HUC-1在3D培养环境下细胞呈球形；长期低剂量As暴露的膀胱上皮细胞株E-cadherin和Vimentin的表达变化在2D培养条件下更显著。     

NF-κB在砷诱导人正常膀胱上皮细胞COX-2表达中的作用

目的观察NF-κB核转录因子在砷诱导人正常膀胱上皮细胞(SV-HUC-1)环氧化酶-2(COX-2)表达中的作用。方法在细胞培养液中加入不同浓度的NaAsO2,24 h后提取细胞总RNA和核蛋白,用RT-PCR和Westernblot方法分别分析COX-2 mRNA表达和NF-κB蛋白水平;选择COX-2高表达的NaAsO2处理组,再用NF-κB抑制剂(PDTC)处理,观察COX-2 mRNA表达水平的变化。结果 4、8μmol/L NaAsO2处理细胞后,COX-2 mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.05);4μmol/L NaAsO2处理组细胞NF-κB蛋白水平也显著提高,高于对照组,而10μmol/LNaAsO2处理组细胞NF-κB蛋白水平低于对照组(P<0.05);同时用4μmol/L NaAsO2和PDTC共同处理细胞后,COX-2 mRNA表达水平降低,显著低于单纯用4μoml/L NaAsO2处理细胞的COX-2 mRNA表达水平(P<0.05)。结论低剂量的砷能够诱导人正常膀胱上皮细胞COX-2 mRNA和NF-κB蛋白表达水平的增高,砷诱导的核转录因子NF-κB活化在砷诱导的COX-2...     

砷对人正常膀胱上皮细胞NFAT2 mRNA表达的影响

用浓度为0、1、2、4、8、10μmol/L的亚砷酸钠处理人正常膀胱上皮细胞24 h和浓度为0、0.5μmol/L的亚砷酸钠处理人正常膀胱上皮细胞至40代,应用RT-PCR方法检测活化T细胞核因子(NFAT2 mRNA)的表达水平。结果显示,1μmol/L剂量组染砷24 h后NFAT2 mRNA表达水平显著高于其他浓度组(P0.05);0.5μmol/L浓度砷长期处理细胞40代后引起NFAT2 mRNA表达水平显著增高(P0.05)。提示,长期、低剂量砷处理的人正常膀胱上皮细胞NFAT2 mRNA水平增高。     

长期砷暴露诱导人膀胱上皮细胞恶性转化的研究

目的构建低浓度长期亚砷酸钠(NaAsO_2)诱导人膀胱上皮细胞(SV-HUC-1)恶性转化模型,研究低浓度长期砷暴露对SV-HUC-1恶性转化过程的影响。方法 0和0. 5μmol/L NaAsO_2分别长期处理SV-HUC-1至40周(约80代,10个月),观察暴露组及对照组细胞在培养至10、20、30和40周时形态,四氮唑盐比色(MTT)验证细胞增殖速率;划痕实验、Transwell细胞迁移实验验证细胞迁移能力;软琼脂集落形成实验观察细胞肿瘤形成能力。结果随NaAsO_2处理时间的延长,细胞由连接紧密的扁平多变形状向松散的长梭型转变; 0. 5μmol/L NaAsO_2处理至20周后,细胞活力显著增强,与处理10周时比较差异有统计学意义(P0. 01);划痕愈合实验显示,砷暴露20周后,划痕愈合面积显著大于10周(P0. 01); Transwell细胞迁移侵袭能力30周时显著高于10周(P0. 01);软琼脂集落形成实验显示,砷暴露30周后软琼脂上出现大量明显的锚定生长集落,20、30、40周组集落形成数量分别为10周组的1. 85、9. 79和15. 36倍(P0. 01),未经砷暴露组各代数有极少集落,且体积小,故忽略不计。结论 0. 5μmol/LNaAsO_2长期处理的SV-HUC-1可逐渐恶转,在砷处理20～30周时已初具恶性表型,40周后细胞恶性转化。     

砷对人正常膀胱上皮细胞信号传导与转录激活因子3mRNA表达的影响

目的研究亚砷酸钠对人正常膀胱上皮(SV-HUC-1)细胞中信号传导与转录激活因子3(STAT3)m RNA表达的影响。方法将处于对数生长期的SV-HUC-1细胞分别进行急性染毒[暴露于含终浓度为0(对照)、1、2、4、8、10μmol/L亚砷酸钠的培养基染毒24 h]和慢性染毒[以含终浓度为0(对照)、0.5μmol/L亚砷酸钠的培养基染毒40代]。采用逆转录PCR(RT-PCR)方法检测细胞STAT3 m RNA表达情况。结果与对照组比较,4、8、10μmol/L亚砷酸钠暴露组SV-HUC-1细胞内STAT3 m RNA的表达水平均升高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着亚砷酸钠染毒剂量的升高,SV-HUC-1细胞内STAT3 m RNA的表达水平呈先升高后下降的趋势。0.5μmol/L亚砷酸钠慢性暴露组SV-HUC-1细胞内STAT3m RNA的表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论砷可能通过调控STAT3的表达而在砷诱导的SVHUC-1细胞恶性转化中发挥一定作用。     

抗氧化剂对砷诱导人膀胱上皮细胞氧化应激相关通路的影响

目的研究抗氧化剂对亚砷酸钠诱导的人膀胱上皮细胞系(SV-HUC-1)氧化应激相关通路的影响。方法取处于对数生长期的SV-HUC-1细胞,分别暴露于含终浓度为0(对照,F12K培养基)、4μmol/L亚砷酸钠及4μmol/L亚砷酸钠与丁硫氨酸亚砜亚胺(BSO,0.5 mmol/L)、褪黑素(0.5 mmol/L)或N-乙酰半胱氨酸(NAC,0.5 mmol/L)的培养基中,于培养16 h后,收集细胞进行转录因子NF-E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,NRF2)通路相关蛋白及其下游基因[血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO1)、醌氧化还原酶(NAD(P)H-quinone oxidoreductase 1,NQO1)]蛋白表达水平的检测;于培养1 h后,收集细胞进行丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-Activated Protein Kinase,MAPK)通路关键蛋白[p-细胞外信号调节激酶(p-ERK)、p-p38、p-c-Jun-N末端激酶(p-JNK)]表达水平的检测。结果与对照组比较,亚砷酸钠暴露SV-HUC-1细胞内NRF2、NQO1、HO1蛋白及p-ERK、p-p38、p-JNK蛋白的表达水平均较高;巯基耗竭剂BSO与亚砷酸钠联合暴露可加剧砷诱导的SV-HUC-1细胞内NRF2、NQO1、HO1和p-p38、p-JNK蛋白表达水平的升高,而抑制p-ERK的升高,差异均有统计学意义(P0.05)。褪黑素与亚砷酸钠组及亚砷酸钠+NAC组SV-HUC-1细胞内NRF2蛋白的表达水平明显低于对照组和亚砷酸钠组;NQO1蛋白的表达水平仅明显高于对照组;HO1蛋白的表达水平明显高于对照组,而明显低于亚砷酸钠组,差异均有统计学意义(P0.05)。褪黑素+亚砷酸钠组SV-HUC-1细胞内p-ERK、p-p38蛋白的表达水平明显低于对照组和亚砷酸钠组;p-JNK蛋白的表达水平明显高于对照组和亚砷酸钠组,差异均有统计学意义(P0.05)。亚砷酸钠+NAC组SV-HUC-1细胞内p-p38蛋白的表达水平明显低于对照组和亚砷酸钠组;p-JNK蛋白的表达水平仅明显高于对照组;p-ERK蛋白的表达水平明显高于对照组,而明显低于砷暴露组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论抗氧化剂能够抑制亚砷酸钠急性暴露导致的SV-HUC-1细胞氧化应激相关通路的活化。     

缺氧诱导因子-1对缺氧诱导肺泡上皮细胞凋亡的调控作用

【目的】探讨细胞凋亡在缺氧肺损伤的作用及缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)对细胞凋亡的调控作用。【方法】体外培养大鼠肺泡上皮细胞加入氯化钴(cobalt chloride,COCl2)制作细胞缺氧模型,将小分子干扰缺氧诱导因子-1(HIF-1αsmall interference RNA,HIF-1αsi RNA)有效的转染至细胞内,检测常氧、缺氧4、24 h、小分子干扰后缺氧4、24 h后HIF-1αmRNA的表达水平变化,同时应用荧光显微镜以及流式细胞术检测非转染以及转染组不同缺氧时间细胞凋亡率的变化。【结果】常氧下HIF-1αmRNA表达水平较低,随缺氧时间增加HIF-1αmRNA的表达水平明显升高(P<0.05);HIF-1αsiRNA可有效沉默HIF-1α,下调率为56%、57%(P<0.01)。细胞凋亡率随着缺氧时间延长而增加(P<0.05),48 h细胞开始出现坏死现象;通过HIF-1αsi RNA预处理细胞后,可降低缺氧诱导的细胞凋亡的发生率(P<0.05)。【结论】缺氧引起肺泡上皮细胞的凋亡,随缺氧时间增加凋亡增加,HIF-1α在缺氧诱导细胞凋亡中起着重要的作用,HIF-1αsiRNA可以减少肺泡上皮细胞凋亡的发生。     

不同剂量左甲状腺素对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织HIF-1α表达的调节

目的 探讨不同剂量左甲状腺素(L-T4)对缺氧缺血性脑损伤(hypoxia-ischemia brain damage, HIBD)新生大鼠脑组织缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1α, HIF-1α)的调节作用。方法 7日龄SD大鼠随机分为假手术组、缺氧缺血组(HI)、溶剂组及L-T4低、高剂量组。低、高剂量L-T4干预组及溶剂对照组分别于HIBD后当日起腹腔注射2 μg/100 g L-T4、3.5 μg/100 g L-T4及等体积溶剂, 每日1次, 共5 d。应用免疫组化法检测鼠脑HIF-1α蛋白, RT-PCR法检测HIF-1αmRNA。结果 缺氧缺血组缺血侧大脑皮质HIF-1α蛋白(72.795±6.121)及HIF-1αmRNA(0.448±0.035)表达较假手术组(依次为38.581±2.846, 0.174±0.015)增高, 差异有统计学意义(P＜0.05);L-T4低、高剂量干预组缺血侧大脑皮质HIF-1α蛋白(依次为117.350±9.374, 142.842±8.948)及HIF-1αmRNA(依次为0.618±0.042, 0.711±0.049)表达较缺氧缺血组增高, 差异有统计学意义(P＜0.05), 且L-T4对HIF-1α的影响具有剂量依赖性, 即随剂量增加, HIF-1α蛋白及HIF-1αmRNA表达增加, 两组间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 在新生大鼠HIBD时, L-T4可上调HIF-1α蛋白及其mRNA表达, 从而对HIBD起保护作用, 且具有剂量依赖性。     

复发性流产妇女围植入期子宫内膜HIF-1α、VEGF及微血管的表达和意义

目的探讨复发性流产妇女围植入期子宫内膜缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)及微血管的表达及意义。方法选择2016年4月-2018年1月邵阳市中心医院妇产科收治的58例不明原因复发性流产妇女作为病例组,生育正常妇女40例为正常组,使用Pipelle取样器获得受试者围植入期子宫内膜活组织样本,RT-PCR检测子宫内膜HIF-1α和VEGF mRNA表达水平,免疫组织化学染色法检测子宫内膜HIF-1α和VEGF蛋白表达水平,并计算微血管密度(MVD),分析病例组子宫内膜HIF-1α和VEGF表达水平及意义。结果病例组子宫内膜HIF-1α、VEGF mRNA均显著高于正常组,MVD显著高于正常组,子宫内膜HIF-1α和VEGF蛋白阳性表达率显著高于正常组,差异均有统计学意义(P0. 05)。HIF-1α蛋白主要在子宫内膜胞质中表达,VEGF蛋白主要在子宫内膜腺上皮中表达。病例组再次流产患者子宫内膜HIF-1α和VEGF表达水平显著高于未流产患者,差异有统计学意义(P0. 05)。病例组子宫内膜HIF-1α、VEGF表达水平与MVD分别呈显著正相关关系(r=0. 687、0. 724,P0. 05)。结论复发性流产妇女围植入期子宫内膜HIF-1α和VEGF表达及MVD异常升高,可能是复发性流产发生的病理机制之一。     

HIF-1α在新西兰兔脑组织局灶性缺血再灌注中的表达及意义

目的 探讨新西兰兔脑组织局灶性缺血后再灌注实验动物模型的制作,研究局灶性脑缺血再灌注后新西兰兔脑组织缺氧诱导因子-1α的表达及意义. 方法 制备兔局灶性脑缺血3 h再灌注6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、4 d及对照组动物模型,通过免疫组化检测缺氧诱导因子-1(HIF-1)α蛋白的表达,RT-PCR检测HIF-1α基因表达的变化.结果 免疫组化结果显示新西兰兔在缺血后再灌注6 h开始,缺血侧脑组织梗死灶周边HIF-1α蛋白开始呈阳性表达,随再灌注时间的延长阳性表达进一步增强,一直持续到第3 d,第4 d开始下降;RT-PCR检测HIF-1α在6 h后已有表达,随再灌注时间的延长,HIF-1α的表达呈上升的趋势,在第3 d达高峰,第4 d显著下降. 结论 脑缺血再灌注损伤可以诱导HIF-1α表达增强,提示HIF-1α对缺血性脑损伤有神经保护作用.     

亚砷酸钠暴露对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞雌激素受体α表达的差异研究

目的研究亚砷酸钠(Na As O2)暴露对雌雄ICR胎鼠鼠肺Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)雌激素受体α(ERα)表达的影响。方法孕期20 d的ICR胎鼠,分辨雌雄,以Ⅰ型胶原酶分离AECⅡ,以免疫黏附法和差速贴壁法纯化细胞,以免疫荧光法鉴定纯度;以0.5、1.25、5μmol/L Na As O2分别处理AECⅡ12 h和24 h;以不含Na As O2的培养基处理AECⅡ12 h和24 h作空白对照组,每组分设6个重复剂量。以实时荧光定量PCR检测各组ACEⅡ内ERαm RNA表达情况,以western blot检测各组ERα蛋白的表达情况。结果免疫荧光显示纯化后AECⅡ纯度为85%±5%;经Na As O2处理12 h,雌性AECⅡ中各剂量组ERαm RNA和中、高剂量组的蛋白表达高于同剂量组雄性(P0.05);雌性各剂量组ERαm RNA和蛋白表达均高于同性别对照组;雄性中剂量组蛋白表达高于雄性对照组。经Na As O2处理24 h,雌性低剂量组ERαm RNA表达和中、高剂量组蛋白表达高于同剂量组雄性(P0.05);雌雄各剂量组ERαm RNA和中高剂量组蛋白表达均高于各自对照组,雌雄对照组之间ERαm RNA和蛋白表达差异无统计学意义(P0.05)。结论亚砷酸钠暴露可致雌性胎鼠AECⅡ内ERα表达高于雄性。     

二甲基砷酸对大鼠膀胱上皮细胞IKKα和p65表达水平的影响

目的探讨二甲基砷酸(dimethylarsinic acid,DMAⅤ)对大鼠膀胱上皮细胞IKKα和p65表达的影响。方法雌性Wistar大鼠60只,随机均分为对照组和100 ppm、200 ppm DMAⅤ染毒组3组,经饮用水染毒10周后处死。通过Real Time PCR法测定大鼠尿中膀胱上皮细胞中IKKα和p65的mRNA表达情况。采用免疫组化法观察大鼠尿中膀胱上皮细胞中IKKα、p65蛋白表达情况。结果 100 ppm DMAⅤ染毒组大鼠膀胱上皮细胞IKKαmRNA的表达水平显著升高(P0.05),p65 mRNA表达差异无统计学意义,而IKKα蛋白表达以及核内p65阳性率均显著高于对照组(P0.01);200 ppm DMAV染毒组膀胱上皮IKKα、p65的mRNA表达与对照组差异无统计学意义,唯见核p65阳性率有所上升(P0.05)。结论低剂量DMAⅤ可以激活大鼠膀胱上皮细胞内NF-κB信号通路。     

亚砷酸钠对SV-HUC-1细胞NRF2通路影响

目的探讨亚砷酸钠(NaAsO_2)对人膀胱上皮细胞系SV-HUC-1细胞内核因子相关因子2(NRF2)活性的影响。方法时间效应实验以4μmol/L NaAsO_2分别处理SV-HUC-1细胞0(对照)、4、8、16、24 h;剂量效应实验设对照组和NaAsO_2处理组(1、2、4、8、10μmol/L);Western blot免疫印迹试验检测NRF2通路相关蛋白(NRF2、NQO1和HO1)表达水平。结果 4μmol/L NaAsO_2处理SV-HUC-1细胞4、8、16、24 h后,与对照组(0.68±0.03)比较,细胞内NRF2蛋白表达水平明显升高,16 h处理组NRF2蛋白表达最高(1.17±0.10),差异有统计学意义(P0.05);随着染砷剂量增加,NRF2、NQO1和HO1蛋白表达水平增强,与对照组NRF2(0.86±0.05)、NQO1(0.68±0.02)、HO1(0.09±0.01)比较,4和8μmol/L NaAsO_2处理组细胞内NRF2、NQO1、HO1蛋白表达水平分别为(1.12±0.01)和(1.16±0.11)、(0.93±0.01)和(1.15±0.19)、(1.28±0.01)和(1.30±0.02),均明显升高,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论 NaAsO_2急性暴露能够活化NRF2通路,引起膀胱上皮细胞适应性抗氧化反应增强。     

阿司匹林对缺氧诱导人HTR-8/SVneo滋养细胞凋亡及sFlt-1、HIF-1α表达的影响

目的：探讨阿司匹林对缺氧诱导人HTR-8/SVneo滋养细胞凋亡及可溶性类fms酪氨酸激酶-1(sFLT-1)、低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响。方法：人HTR-8/SVneo滋养细胞分为正常对照组、缺氧模型组(2%O₂、5%CO₂、93%N₂)、阿司匹林低(0.05mmol/L)、中(0.1mmol/L)、高剂量组(0.2mmol/L);培养结束后，MTT法测定细胞活力，流式细胞仪测定细胞凋亡水平及细胞周期，血清培养基基质胶培养测定细胞血管形成能力，RT-PCR法及蛋白印记法测定细胞sFlt-1、HIF-1α水平。结果：缺氧模型组OD值、存活率、血管形成能力、HIF-1α mRNA和蛋白表达均低于正常对照组及阿司匹林各剂量组，但随着阿司匹林剂量增上述各指标逐渐降低；缺氧模型组凋亡率、G1期、sFlt-1 mRNA和蛋白表达均高于正常对照组和阿司匹林各剂量组，但随着阿司匹林剂量增加凋亡率、G1期、sFlt-1 mRNA和蛋白表达逐渐升高(均P<0.05)。结论：低剂量阿司匹林可促进缺氧环境下HTR-8/S...     

RNAi沉默HIF-1α对人宫颈癌细胞株辐射敏感性的影响

[目的]探讨在乏氧条件下,应用RNA干扰技术沉默HIF-1α基因表达对人宫颈癌细胞株U14辐射敏感性的影响。[方法]构建针对HIF-1α基因的siRNA,将其结合到pSilencer2.1-U6-neo质粒表达载体上,脂质体转染法转入宫颈癌细胞U14,低氧培养后RT-PCR检测HIF-1αmRNA的表达;成克隆实验检测HIF-1α沉默后对细胞辐射敏感性的影响。[结果]成功构建HIF-1α的siRNA真核表达载体,转染宫颈癌细胞后低氧条件下RT-PCR显示HIF-1αmRNA表达明显下调,同时细胞形成的克隆数明显减少。[结论]HIF-1α的siRNA真核表达载体能够抑制低氧条件下HIF-1α基因的表达并提高宫颈癌细胞对γ射线的辐射敏感性。     

细胞自噬在砷暴露所致肺损伤中的作用

目的探讨细胞自噬在砷暴露所致大鼠肺损伤中的作用。方法 24只无特定病原体(SPF)级健康雄性SD大鼠随机分为4组,即对照组,砷暴露低(10μg/L)、中(100μg/L)、高(1 000μg/L)剂量组,砷暴露组通过自由饮用含Na As O2的水进行染毒,对照组自由饮用不含Na As O2的水,染毒28 d后统一处死。ELISA法测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-ɑ、IL-6、IL-8、IL-10的含量。Western blot法检测肺组织中自噬相关蛋白NBR1、p62、LC3Ⅱ表达量。结果砷暴露组大鼠BALF中促炎因子TNF-a、IL6、IL8表达量显著高于对照组(P0.05),且100μg/L组的IL-6最高;砷暴露1 000μg/L组的抑炎因子IL-10含量显著低于对照组(P0.05);与对照组相比砷暴露组大鼠肺组织中p62、NBR1的表达量增加(P0.05),且存在剂量—反应关系;与对照组相比砷暴露组大鼠肺组织中LC3Ⅱ蛋白表达量显著下降(P0.05),且存在剂量—反应关系。结论砷暴露所致大鼠肺损伤中,细胞自噬被抑制时会加重大鼠肺部的炎症损伤,当Na As O2暴露浓度达到100μg/L时,会对大鼠肺组织造成明显的损伤。     

妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中HSP70、HIF-1α的表达及相关性研究

目的通过测定妊娠期高血压疾病患者和正常妊娠妇女胎盘组织中热休克蛋白70(Heat Shock Protein 70,HSP70)及胎盘组织中缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-Inducible Factor-1α,HIF-1α)的表达,探讨其在妊娠期高血压疾病发病中的作用,并为临床治疗提供实验性理论依据。方法收集90例妊娠期高血压疾病患者为妊娠期高血压疾病组(妊娠期高血压组30例,轻度、重度子痫前期组各30例),同期健康孕妇30例为对照组。用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法检测胎盘组织中HSP70、HIF-1α蛋白表达水平并进行定位、半定量及相关性分析;用逆转录聚合酶链法检测胎盘组织中HSP70、HIF-1αmRNA表达水平并进行相关性分析。结果 (1)胎盘组织中HSP70蛋白、mRNA表达水平:妊娠期高血压组、轻度、重度子痫前期组高于对照组(P0.05);重度子痫前期组高于妊娠期高血压组、轻度子痫前期组(P0.05);轻度子痫前期组较妊娠期高血压组升高,但差异无统计学意义(P0.05)。(2)胎盘组织中HIF-1α蛋白、mRNA表达水平:轻度、重度子痫前期组均高于对照组、妊娠期高血压组(P0.05);重度子痫前期组高于轻度子痫前期组(P0.05);妊娠期高血压组较对照组升高,但差异无统计学意义(P0.05)。(3)胎盘组织中HSP70和HIF-1α蛋白、mRNA表达的相关性:妊娠期高血压疾病组胎盘组织中HSP70蛋白表达水平与HIF-1α蛋白呈正相关(r=0.648,P0.05),HSP70 mRNA表达水平与HIF-1αmRNA呈正相关(r=0.619,P0.05)。结论 (1)HSP70、HIF-1α在妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中表达均升高,且随疾病严重程度加重表达明显升高。(2)HSP70与HIF-1α在妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中表达呈正相关,提示HIF-1α表达升高可能上调HSP70表达,两者紧密联系共同在妊娠期高血压疾病发病的病理生理过程中发挥作用。     

曲美他嗪对糖尿病大鼠心肌缺氧诱导因子-1α表达影响的研究

目的观察曲美他嗪对糖尿病大鼠心肌中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达的影响。方法单次腹腔一次性注射链脲佐菌素（50 mg/kg）诱导建立糖尿病大鼠模型,尾静脉采血测定糖化血红蛋白（HbA1C）及血清总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）,随机分为观察组30例（曲美他嗪2 mg/kg,每日1次灌胃）,对照组28例给予等量生理盐水灌胃,实时荧光定量PCR方法检测HIF-1αmRNA的表达水平。结果观察组大鼠曲美他嗪治疗后心肌HIF-1αmRNA的表达量显著低于对照组（P〈0.05）,大鼠心肌中HIF-1α表达量与HbA1C、TC及LDL-C呈正相关（P〈0.05）。结论曲美他嗪可显著降低糖尿病大鼠心肌HIF-1α的表达;糖尿病大鼠心肌中HIF-1α的表达量与血糖、血脂相关。