抑制Sonic Hedgehog信号能抑制脑缺血性损伤后纤维瘢痕形成且不利于神经功能恢复

目的 探讨抑制Sonic Hedgehog（Shh）信号对脑缺血性损伤后纤维瘢痕形成及神经功能的影响。方法 构建体内成年SD大鼠大脑中动脉闭塞/再灌注（MCAO/R）模型和体外新生24 h SD大鼠脑膜原代成纤维细胞氧糖剥夺/再复氧（OGD/R）模型。成年SD大鼠随机分成假手术组、缺血/再灌注组（I/R）、缺血再灌注腺病毒空载（rAd-NC）组和缺血再灌注腺病毒敲低Shh（rAd-ShShh）组。SD大鼠脑膜原代成纤维细胞随机分成正常组、缺血对照组、肿瘤生长因子-β1预处理组（TGF-β1）、TGF-β1预处理加环王巴明组（TGF-β1+CYC）。每组细胞被预处理24 h经OGD/R 150 min后复氧72 h。采用改良神经严重程度评分（mNSS）、改良Bederson评分评估神经功能缺损。CCK-8法测定细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,免疫荧光法检测缺血中心纤维连接蛋白（Fn）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Shh的表达,TUNEL染色检测缺血中心细胞凋亡,实时荧光定量PCR（qPCR）法检测缺血中心Fn、α-SMA及Shh mRNA的表达,WB法检测OGD/R后成纤维细胞Shh、α-SMA蛋白的表达。结果 体内实验中免疫荧光法及qPCR法结果显示与假手术组相比SD大鼠MCAO/R后可诱导缺血侧大脑半球Shh、α-SMA 、Fn蛋白和mRNA的表达升高（P<0.05）。而与MCAO/R组相比,rAd-Shshh组缺血侧大脑半球Shh、α-SMA、Fn蛋白和mRNA的表达降低（P<0.05）,缺血侧组织细胞的凋亡增加（P<0.05）,改良神经严重程度评分（mNSS）、改良Bederson评分增高（P<0.05）。体外研究中CCK-8实验显示与正常组和缺血对照组相比TGF-β1组A值升高（P<0.05）,而TGF-β1+CYC组与TGF-β1组相比A值没有明显差异（P>0.05）。细胞划痕实验结果显示与正常组和缺血对照组相比在24 h内TGF-β1组成纤维细胞的迁移距离增加（P<0.05）,而TGF-β1+CYC组与TGF-β1组相比成纤维细胞的迁移距离减少（P<0.05）。免疫荧光实验、Western blot及qPCR显示与正常组和缺血对照组相比TGF-β1组细胞Shh、α-SMA和Fn的表达升高（P<0.05）,而TGF-β1+CYC组与TGF-β1组相比Shh、α-SMA和Fn的表达降低（P<0.05）。结论 抑制Shh信号能抑制脑缺血性损伤早期纤维瘢痕的形成且不利于神经功能的恢复。     

转化生长因子β1诱导皮肤成纤维细胞向肌成纤维细胞表型转分化的机制研究

目的:探讨TGF-β1诱导皮肤成纤维细胞(FB)向肌成纤维细胞转分化的可能途径和调控机制.方法:将野生型和Smad3基因敲除(KO)型小鼠皮肤FB分为9组:野生型FB组、野生型FB TGF-β1组、野生型FB SB431542组、野生型FB SB431542 TGF-β1组、Smad3 KO FB组、Smad3 KO FB TGF-β1组、野生型FB SB203580 TGF-β1组、野生型FB PD98059 TGF-β1组和野生型FB SP600125 TGF-β1组.各组细胞经同步化处理后,直接以TGF-β1刺激或经上述各激酶抑制剂预处理后再以TGF-β1刺激.收集细胞,一部分以单细胞RT-PCR检测α-SMA阳性表达百分比,另一部分细胞抽提总RNA后采用实时荧光定量RT-PCR检测α-SMA的表达水平变化.结果:Smad3 KO组与SB431542组的α-SMA表达水平和阳性百分比显著升高(Smad3 KO FB组vs野生型FB组;野生型FB SB431542 TGF-β1组vs 野生型FB SB431542组;Smad3 KO FB TGF-β1组vs Smad3 KO FB组,P＜0.01),而SB203580组和SP600125组中α-SMA表达水平和阳性百分比升高的作用则被显著抑制(野生型FB SB203580 TGF-β1组、野生型FB SP600125 TGF-β1组vs 野生型FB TGF-β1组,P＜0.05).结论:在TGF-β1诱导成纤维细胞向肌成纤维细胞的转分化过程中,Smad3途径介导抑制作用,而p38/MAPK、JNK/MAPK途径则介导正向调节作用.     

Snail介导的肺上皮间质转化在肌成纤维细胞活化中的作用

目的 探讨核转录因子Snail介导的肺上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）在肌成纤维细胞活化中的作用。方法 培养小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞（MLE-12）并利用转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）刺激获得EMT模型,应用RT-qPCR检测上皮标志物E钙粘蛋白（E-cadherin,CDH1）、间质标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、核转录因子Snail mRNA表达变化。建立MLE-12与小鼠胚肺成纤维细胞（NIH-3T3）共培养体系,应用RT-qPCR检测NIH-3T3的α-SMA、Ⅰ型胶原（collagen Ⅰ α1,COL1A1）、Ⅲ型胶原（collagen Ⅲ α1,COL3A1）mRNA表达。利用Snail-shRNA转染MLE-12,应用RT-qPCR、Western blotting检测Snail mRNA和蛋白质表达。建立慢病毒转染的MLE-12与NIH-3T3共培养体系,应用RT-qPCR检测NIH-3T3的α-SMA、COL1A1、COL3A1 mRNA表达。采用单因素方差分析及最小显著差法判断结果差异是否具有统计学意义。结果 加入TGF-β1刺激48 h后,RT-qPCR结果显示,与对照组相比,TGF-β1组的CDH1 mRNA的表达下调、α-SMA和Snail mRNA的表达上调（P<0.05）;共培养体系中,RT-qPCR结果显示,与TGF-β1和MLE-12组相比,加入TGF-β1刺激的MLE-12引起下室NIH-3T3的α-SMA、COL1A1、COL3A1 mRNA表达上调,且上调程度高于TGF-β1和MLE-12的单独作用（P<0.05）;慢病毒转染后,与阴性对照病毒组相比,Snail慢病毒干扰组Snail的mRNA和蛋白质表达均明显下调（P<0.05）;分别用阴性对照病毒和Snail慢病毒转染MLE-12后与NIH-3T3建立共培养体系,RT-qPCR结果显示,与TGF-β1+阴性对照病毒组相比,TGF-β1+Snail慢病毒转染组下室NIH-3T3的α-SMA、COL1A1、COL3A1 mRNA表达上调程度降低（P<0.05）。结论 Snail介导的小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞发生EMT可引起肌成纤维细胞活化,敲减Ⅱ型肺泡上皮细胞的Snail基因可抑制成纤维细胞活化为肌成纤维细胞。提示Snail介导的肺上皮间质转化在肌成纤维细胞活化中发挥重要作用。     

bFGF反义寡核苷酸对大鼠肺成纤维细胞增殖信号通路的影响

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)反义寡核苷酸(AODN)对大鼠肺成纤维细胞增殖、转化信号通路的影响。方法:分离成年大鼠肺成纤维细胞,分为4组:对照组(未转染肺成纤维细胞);TGF-β1组(未转染肺成纤维细胞+5ng/ml TGF-β1刺激);TGF-β1+AODN组(转染AODN肺成纤维细胞+5ng/ml TGF-β1刺激);TGF-β1+RODN(正义寡核苷酸)组(转染RODN肺成纤维细胞+5ng/ml TGF-β1刺激)。每组设3复孔,并作细胞爬片,镜下计数肺成纤维细胞数量,绘制生长曲线。MTT比色法测定肺成纤维细胞增殖率。免疫细胞化学方法检测肌成纤维细胞特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)。通过ELISA法检测培养液中bFGF、CTGF及Ⅰ型胶原蛋白含量。用RT-PCR法分析肺成纤维细胞Smad3 mRNA、Smad7 mRNA、Ⅰ型胶原mRNA表达水平。结果:1细胞计数显示:TGF-β1+RODN组各时段成纤维细胞的数目均较对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组明显增多(P<0.05);TGF-β1+AODN组中成纤维细胞增殖数比TGF-β1组明显减低(P<0.05)。2MTT结果显示:TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞光密度值明显高于对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组(P<0.05);TGF-β1+AODN组中肺成纤维细胞光密度值明显比TGF-β1组减低(P<0.05)。3免疫细胞化学染色结果显示:TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞与对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组比较,α-SMA染色的平均光密度值(IOD)明显增加(P<0.05);TGF-β1+AODN组中肺成纤维细胞α-SMA染色的平均光密度值(IOD)比TGF-β1组明显减低(P<0.05)。4 ELISA法检测结果显示:在TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞培养液中bFGF、CTGF及Ⅰ型胶原蛋白含量明显高于对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组(P<0.05);TGF-β1+AODN组肺成纤维细胞培养液中bFGF、CTGF及Ⅰ型胶原蛋白含量比TGF-β1组明显减低(P<0.05)。5RT-PCR法检测结果显示:在TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞Smad3mRNA及Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达明显高于对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组(P<0.05);TGF-β1+AODN组肺成纤维细胞Smad3mRNA及Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达明显比TGF-β1组明显减低(P<0.05);TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞Smad7mRNA表达明显低于对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组(P<0.05);TGF-β1+AODN组肺成纤维细胞Smad7 mRNA表达比TGF-β1组明显增加(P<0.05)。结论:bFGF反义寡核苷酸可抑制肺成纤维细胞的增殖、转化及胶原合成,bFGF反义寡核苷酸可能通过下调TGF-β1-Smad信号通路来发挥作用。     

成纤维细胞激活蛋白在小鼠肺纤维化模型中的表达

目的探讨成纤维细胞激活蛋白（FAP）在实验性小鼠肺纤维化组织中的表达,及其与α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子β1（TGF-β1）之间的相互关系。方法气管内滴入博莱霉素（7mg/kg）制备肺纤维化模型,采用免疫组化技术检测小鼠肺纤维化组织中FAP、α-SMA和TGF-β1的表达。结果正常肺组织无FAP表达;纤维化组FAP表达于细支气管和大血管周围的成纤维细胞,成纤维细胞灶中FAP、α-SMA和TGF-β1表达部位相似,但FAP比α-SMA的表达更广泛,比TGF-β1的表达更强。FAP、α-SMA和TGF-β1与小鼠肺纤维化程度均呈正相关（r值分别为0.795、0.766和0.628,P〈0.01）,且FAP与TGF-β1的表达呈正相关（r=0.706,P〈0.01）。结论 FAP特异性表达在小鼠肺纤维化组织的成纤维细胞灶中,与肺纤维化程度有关。FAP与TGF-β1可能在肺纤维化形成中起协同作用。     

Ac\|SDKP调节Rac1信号抑制皮肤肌成纤维细胞的转化和迁移

目的 研究N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)通过阻断小G蛋白Ras相关的C3肉毒素底物(Rac1)信号,抑制转化生长因子β1(TGF-β1)介导的皮肤肌成纤维细胞转化的机制。 方法 原代培养大鼠乳鼠皮肤成纤维细胞,分为空白对照组、TGF-β1诱导组及Ac-SDKP预处理组。划痕实验检测细胞迁移能力,免疫细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Rac1蛋白的表达,Western-blot法检测α-SMA、血清应答因子(SRF)、心肌蛋白相关转录因子(MRTF-A)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)及Rac1蛋白的表达。 结果 细胞划痕实验显示,TGF-β1诱导组与空白对照组比较,细胞迁移至中央划痕区的距离明显增大,Ac-SDKP预处理组与TGF-β1诱导组比较,细胞迁移至中央划痕区的距离减小。免疫细胞化学法检测结果显示,TGF-β1诱导组α-SMA和Rac1的阳性表达较空白对照组增强,而Ac-SDKP预处理组可明显抑制α-SMA和Rac1的阳性表达。TGF-β1诱导组的α-SMA,SRF,MRTF-A,ColⅠ及Rac1蛋白表达均较空白对照组明显上调,Ac-SDKP预处理组的蛋白表达较TGF-β1诱导组下降(P<0.05)。 结论 Ac-SDKP能够阻断Rac1信号,抑制TGF-β1介导的皮肤成纤维细胞迁移能力的提高和肌成纤维细胞转化。     

Meprinα对TGF-β1诱导的成纤维细胞胶原合成的调节作用

目的观察Meprinα对转化生长因子(TGF)-β1介导的成纤维细胞胶原合成和肌成纤维细胞分化的调节作用。方法原代培养肺成纤维细胞,采用TGF-β1诱导,并予以重组Meprinα及放线酰胺素(Actinonin)预处理。免疫细胞化学染色检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,免疫印迹法检测Meprinα、I型胶原、α-SMA的表达。结果 TGF-β1能够促进肺成纤维增殖和迁移能力,显著上调I型胶原、α-SMA的表达,同时降低Meprinα的表达(P<0.05)。免疫印迹结果显示,予以Meprinα预处理能够显著抑制TGF-β1介导的I型胶原、α-SMA表达的上调(P<0.05);予以Actinonin预处理,则能够显著促进TGF-β1介导的I型胶原、α-SMA表达的上调(P<0.05)。结论 Meprinα具有抑制TGF-β1介导的肺成纤维细胞胶原合成和肌成纤维细胞分化的作用。     

氟对成纤维细胞和成骨细胞TGF-β和Smad2/3表达的影响

目的: 观察不同浓度氟化物在不同时间段对成纤维细胞和成骨细胞中转化生长因子β（TGF-β）和Smad2/3表达的影响。方法：将成纤维细胞和成骨细胞各分7个染氟组（0、0.0001、0.001、0.1、1、10和20 mg•L^-1），在5个染氟时间段（2 、4、24、48 和72 h） 采集细胞培养上清，应用酶联免疫吸附（ELISA）法检测TGF-β和Smad2/3含量，应用RT-P CR方法检测染氟48 h细胞 TGF-β mRNA 的表达。结果：与染氟0 mg•L^-1组 比较，氟作用2 h的0.001、0.1、1、10 和20 mg•L^-1组和氟作用4 h的0.0001、0.001、0.1、10 和20 mg•L^-1组成 纤维细胞TGF-β蛋白表达明显降低（P<0.01或P<0.05)；染氟48 h 时1和20 mg•L^-1组成纤维细胞TGF-β mRNA表达有所增强，染氟2～24 h时Smad2/3表达多呈上升趋势，但差异无 显著性（P>0.05）；成骨细胞染氟48 h时0.0001、0.001和1 mg•L^-1组TGF- β蛋白表达增强 （P<0.01或P<0.05），TGF-β mRNA的表达呈增强趋势；染氟成骨细胞Smad2/3表达多呈上升趋势，其中染氟48 h 的20 mg•L^-1组表达明显升高（P<0.01）。结论：染氟对 成纤维细胞和成骨细胞TGF-β表达具有不同的作用特点，TGF-β在成纤维细胞成骨表型转换过程中可 能起重要作用。     

Notch1在TGF-β1诱导心肌成纤维细胞向肌成纤维细胞转化中的作用

目的：研究转化生长因子β1（TGF-β1）诱导心肌成纤维细胞（CFs）向肌成纤维细胞（MFB）转分化过程中Notch1的变化情况,探讨在此转分化过程中Notch1的可能作用.方法：体外分离培养CFs,以10μg/LTGF-β1诱导CFs向MFB转分化.实验分为对照组,TGF-β1作用24,48,72h组,采用消化法测定羟脯氨酸（HYP）含量;免疫荧光、免疫印迹法测定α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达;实时定量PCR、免疫印迹法测定Notch1 mRNA及蛋白表达.利用γ分泌酶抑制剂DAPT（75μmol/L）阻断Notch1受体活化.实验分对照组,DAPT作用24,48,72h组,检测SMA及胶原的表达变化.结果：TGF-β1作用后,与对照组相比较α-SMA,HYP表达量随TGF-β1诱导时间的增加呈上升趋势,而Notch1则呈下降趋势,均以72h最显著（P〈0.01）;加入DAPT后,与对照组相比较α-SMA,HYP表达量随DAPT作用时间增加呈上升趋势,以72h最显著（P〈0.01）.结论：TGF-β1可以诱导CFs向MFB转分化,Notch1在此过程中的表达呈下降趋势,而DAPT阻断Notch1活化后可以促进CFs向MFB转分化.     

白血病抑制因子对肾间质成纤维细胞活化的影响

目的 研究白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)对肾间质成纤维细胞活化的干预作用.方法 体外培养正常大鼠肾脏成纤维细胞,分对照组、转化生长因子β1 (transforming growth factor-β1,TGF-β1)处理组及TGF-β1和LIF共处理组,电镜下观察细胞形态变化,通过RT-PCR及Western blot检测肌成纤维细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)表达的改变,双抗体夹心ABC-ELISA检测细胞上清Ⅰ型胶原.结果 TGF-β1引起成纤维细胞激活,产生形态学改变,α-SMA表达增高(P<0.01),Ⅰ型胶原产生增加(P<0.01).与TGF-β1处理组相比,LIF干预组形态学改变不明显,LIF能干预TGF-β1引起大鼠肾间质成纤维细胞α-SMA表达和Ⅰ型胶原产生.结论 LIF可以抑制TGF-β1引起的肾间质成纤维细胞激活.     

β-catenin蛋白敲除对肺成纤维细胞活性影响的实验研究

目的 探讨β-catenin蛋白敲除对TGF-β1诱导的肺成纤维细胞（CCC-REPF-1）活性的影响及其机制.方法 体外培养大鼠肺成纤维细胞（CCC-REPF-1）,应用CCK-8法、Western blot、RT-PCR技术检测细胞增殖、活性及功能表达,进行统计学检验.结果 TGF-β1刺激组、pcDNA3转染组CCK-8吸光度OD值、α-SMA和Fn蛋白表达量、α-SMA、col Ⅰ、colⅢmRNA表达量明显高于正常细胞组,而E-cadherin蛋白表达量明显低于正常细胞组;F-TrCP-Ecad转染组上述值明显低于TGF-β1刺激组（P＜0.01）,E-cadherin蛋白表达量高于TGF-β1刺激组（P＜0.01）;TGF-β1刺激组、pcDNA3转染组比较无明显差异.结论 TGF-β1是促进肺成纤维细胞增殖、活化的重要细胞因子,β-catenin途径是TGF-β1发挥作用的重要信号通路,β-catenin蛋白敲除通过阻断该信号途径,阻止肺纤维化进程.     

羊栖菜多糖对TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞的影响

目的 研究羊栖菜多糖对TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞的影响,探讨其抗肺纤维化作用及机制。方法 将实验分成对照组、TGF-β1组、TGF-β1+不同剂量羊栖菜多糖组（25、50、100μg/ml）,采用MTT法检测细胞增殖,RT-PCR法检测Smad 3、Smad 7、α-SMA、Ⅰ型胶原mRNA的表达,ELISA法检测Ⅰ型胶原蛋白的表达, Western blot法检测α-SMA的表达。结果 TGF-β1能诱导肺成纤维细胞增殖及表达Smad3 mRNA、Smad7 mRNA、Ⅰ型胶原、α-SMA（P < 0.05）。羊栖菜多糖可以不同程度抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞的增殖以及Smad3mRNA、Ⅰ型胶原和α-SMA的表达,且呈剂量依赖性（P < 0.05）,能促进TGF-β1诱导的肺成纤维细胞表达Smad7 mRNA, 呈剂量依赖性（P < 0.05）。结论 在离体细胞,羊栖菜多糖能抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞增殖、分化与表达,其机制可能与其下调Smad3,促进Smad 7表达从而抑制TGF-β/Smads信号通路有关。     

Smad3信号通路及其靶基因CTGF在豚鼠巩膜成纤维细胞的表达

目的：探讨结缔组织生长因子（CTGF）参与形觉剥夺性近视的可能机制.方法：采用对照实验性研究.用MTT比色法检测不同浓度的外源性转化生长因子（TGF-β1）干预前后豚鼠巩膜成纤维细胞（GSF）增生的质量浓度效应和时间效应,RT-PCR检测GSF中CTGF以及smad3mRNA的表达,Western Blot检测CTGF以及smad3蛋白的表达.结果：在0.1～50μg/L浓度范围内,TGF-β1可促进巩膜成纤维细胞增生（P〈0.05）;干预前后均可见到CTGF及smad3的表达;干预后CTGF及smad3 mRNA和蛋白表达量明显高于干预前.结论：TGF-β1可以上调CTGF及smad3的表达.     

黄芪甲苷对人成纤维细胞光老化的抑制作用

目的：观察黄芪甲苷对长波紫外线（ultraviolet A,UVA）辐射导致的人成纤维细胞衰老的抑制作用,以及对基质金属蛋白酶-1（matrix metalloproteinase-1,MMP-1）和金属蛋白酶组织抑制因子-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1）等老化相关基因表达的影响。方法：分离培养人原代成纤维细胞,将亚融合状态的培养细胞分为空白对照组、黄芪甲苷组、UVA组和UVA＋黄芪甲苷组,以10J/cm2UVA进行照射,并加入20μg/mL黄芪甲苷干预处理。采用组织化学染色法检测衰老相关β半乳糖苷酶表达,以酶联免疫吸附法检测上清液中转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）的含量,实时聚合酶链反应法检测MMP-1和TIMP-1的mRNA表达水平变化。结果：空白对照组及黄芪甲苷组β半乳糖苷酶阳性细胞均较低,UVA组β半乳糖苷酶阳性细胞数则显著升高,加入黄芪甲苷处理可使β半乳糖苷酶阳性细胞比率明显降低（P〈0.05）。黄芪甲苷处理可以促进成纤维细胞分泌TGF-β1;UVA照射成纤维细胞后TGF-β1分泌量明显降低,UVA照射前加入黄芪甲苷可增加TGF-β1分泌量（P〈0.05）。此外,UVA能够诱导MMP-1和TIMP-1的mRNA表达水平升高,而黄芪甲苷可在一定程度上抑制MMP-1mRNA表达,并诱导TIMP-1mRNA表达（P〈0.05）。结论：黄芪甲苷可有效延缓人成纤维细胞光老化进程,其机制可能与促进TGF分泌和抑制胶原降解相关。     

珍珠水解液对皮肤增生性瘢痕及正常皮肤来源成纤维细胞bFGF、TGF-β1表达的影响

目的：观察珍珠水解液对正常皮肤及瘢痕皮肤来源成纤维细胞碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth fac-tor,bFGF）、转化生长因子β1（transforming growth factor beta 1,TGF-β1）的影响,并探讨其对病理性瘢痕的作用.方法：原代培养、分离纯化获得人类皮肤瘢痕和正常皮肤成纤维细胞系.采用荧光实时定量RT-PCR及免疫细胞化学法分别检测成纤维细胞在珍珠水解液作用下bFGF、TGF-β1 mRNA及蛋白表达变化的情况.结果：珍珠水解液可下调增生性瘢痕及正常皮肤来源的成纤维细胞TGF-β1 mRNA和蛋白表达,同时上调bFGF的mRNA和蛋白的表达,且呈现浓度依赖性.结论：珍珠水解液能调节成纤维细胞bFGF、TGF-β1的分泌,其对皮肤瘢痕作用的功效及机制值得进一步研究.     

恒稳磁场对离体增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1表达的影响

目的 观察不同强度的恒稳磁场对增生性瘢痕离体的成纤维细胞在TGF-β1表达强度的影响;探讨恒稳磁场的抗增生性瘢痕作用机理. 方法 取体外分离培养的皮肤增生性瘢痕成纤维细胞,离体培养后,分为4个实验组即0 T磁场组、0.1 T磁场组、0.2 T磁场组、0.3 T磁场组,各组先在无处理因素下培养12 h,再分别加上强度为0 T 、0.1T、0.2T、0.3T的恒稳磁场,0 T磁场组不加磁场,在4个时间点上采用Western blot检测各组TGF-β1表达对数总灰度值. 结果 处理组表达强度较对照组明显减弱(P<0.05);在处理组之间,随着磁场强度的增强,TGF-β1(转化生长因子β1)表达强度逐渐减弱. 结论 恒稳磁场可抑制增生期瘢痕成纤维细胞TGF-β1的表达强度.     

丹参酮ⅡA磺酸钠对大鼠肺成纤维细胞转化生长因子β_1信号通路的作用

目的:研究丹参酮ⅡA磺酸钠注射液(STS)对大鼠肺成纤维细胞转化生长因子β1(TGF-β1)Smad信号通路的影响,探讨STS抑制肺成纤维细胞(LFB)增殖、转化的可能机制。方法:体外分离培养大鼠肺成纤维细胞,实验分为3组:①空白对照组;②TGF-β1刺激组;③联合处理组:STS+TGF-β1刺激组,培养48h,待细胞生长同步化后,用MTT法检测丹参酮ⅡA对肺成纤维细胞增殖的影响,用RT-PCR法分析丹参酮ⅡA磺酸钠和TGF-β1作用后肺成纤维细胞Smad3、Smad7 mRNA表达水平的变化,以及对Ⅰ型胶原mRNA的影响。结果:丹参酮ⅡA磺酸钠在80-640mg/L浓度范围对5μg/L TGF-β1刺激的肺成纤维细胞增殖均具有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性(P<0.05);丹参酮ⅡA磺酸钠在浓度160mg/L时能明显下调TGF-β1刺激的肺成纤维细胞内Smad3 mRNA、Smad3/Smad7 mRNA及Ⅰ型胶原mRNA的表达(P<0.05),并能上调Smad7 mRNA表达(P<0.05)。结论:丹参酮ⅡA磺酸钠能抑制LFB的增殖、转化及胶原的合成,机制可能是丹参酮ⅡA磺酸钠下调了大鼠TGF-β1 Smad信号通道的Smad3/Smad7水平,从而抑制LFB的增殖、转化。     

整合素和TGF-β受体在增生性瘢痕成纤维细胞中的表达研究

目的 了解增生性瘢痕成纤维细胞表面整合素α1-3、αv、β1和转化生长因子β(TGF-β)受体1分布的情况及相互关系。方法 采用免疫组化染色的方法,观察10例人体增生性瘢痕和10例正常人皮肤组织成纤维细胞表面各整合素亚单位和TGF-β受体I表达的差异,以了解两者间的相关程度。结果 增生性瘢痕成纤维细胞表面整合素α1-3、αv、β1和TGF-β受体I的表达均明显高于正常对照组(P<0.01),其中以整合素α1、α3和β1的表达更为显著。增生性瘢痕成纤维细胞表面各整合素亚单位(除了α2以外)与TGF-β受体I在表达强度上呈正相关(P<0.05)。结论 增生性瘢痕成纤维细胞表面各整合素亚单位的高度表达是瘢痕产生与发展的重要因素之一;TGF-β受体I的高度表达提示增生性瘢痕成纤维细胞对于TGF-β的高反应性;整合素与TGF-β受体I在瘢痕形成过程中相互影响。     

不同浓度肿瘤细胞上清液对成纤维细胞生长及表型转化的影响

目的 利用含不同浓度肿瘤细胞上清液的条件培养液培养成纤维细胞,观察其对成纤维细胞的生长及表型变化的影响.方法 用MTT法和流式细胞凋亡术测定成纤维细胞的生长变化与凋亡率.用RT-PCR检测成纤维细胞转化为肌成纤维细胞后α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)与转化生长因子β1(TGF-β1)的表达.用Western blot检...     

霉酚酸酯抑制转化生长因子-β在肺成纤维细胞中的表达及应用价值

目的 探讨霉酚酸酯(mycophenolate mofetil,MMF)抑制转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)在肺成纤维细胞WI26中的表达和应用价值.方法 肺成纤维细胞WI26常规细胞培养后分4组:对照组、MMF组、TGF-β组、MMF+TGF-β组.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) 检测TGF-β介导相关基因COL1A1的表达,Western blot和氯霉素乙酰基转移酶实验(chloramphenicol acetyl transferase,CAT)方法检测COL1蛋白的表达;胶原基质收缩实验和细胞伤痕实验观察胶原纤维的收缩和细胞移行能力的差异.结果 MMF作用细胞24、48 h后,COL1A1 mRNA表达分别为对照组的(77.0±2.9)% 和(38.0±3.7)%,MMF降低了COL1A1 mRNA水平(P<0.05);TGF-β作用细胞24、48 h后,COL1A1 mRNA表达分别为对照组的(134.0±3.1)%和(189.0±2.4)%,TGF-β提高了COL1A1 mRNA水平(P<0.05);MMF+TGF-β作用细胞24,48 h 后,COL1A1 mRNA表达分别为对照组的(95.0±2.7)%和(71.0±3.3)%(P<0.05),48 h后MMF阻止了TGF-β诱导的COL1A1 mRNA表达.48 h后MMF组COL1蛋白表达为对照组的(44.0±1.9)%(P<0.05);TGF-β组COL1蛋白表达为对照组的(145.0±1.5)%(P<0.05);MMF+TGF-β组COL1蛋白表达为对照组的(79.0±2.5)%,MMF阻止TGF-β诱导的COL1蛋白表达.胶原基质收缩实验(第0、1、5天观察)和细胞伤痕实验(第0、8、24小时观察)结果显示:MMF重建成纤维细胞的接触抑制生长.结论 MMF能阻止TGF-β介导的细胞纤维化.