调控胃癌BGC823细胞PTEN和Livin基因表达的生物学效应

目的 观察在体外培养胃癌BGC823细胞中增加FTEN基因表达,同时沉默Livin基因表达,对胃癌细胞增殖、细胞凋亡以及侵袭转移能力的影响.方法 将已构建的表达FTEN基因的真核表达载体pCL-neo-PTEN、沉默Livin基因的siRNA载体pRNAT-U6.1-Livin、既表达PTEN又沉默Livin重组载体pCL-neo-PTEN-siLivin脂质体包裹后分别转染入胃癌BGC823细胞.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测PTEN和Livin mRNA和蛋白表达;测定细胞生长曲线和Caspase-3、9活性;检测细胞凋亡和体外侵袭能力.结果 转染pCL-neo-PTEN-siLivin的胃癌BGC823细胞PTENmRNA(0.897±0.112)和蛋白都呈高表达,Livin mRNA(0. 071±0.009)和蛋白都呈表达沉默.调控组细胞增殖速度减缓、穿透Matrigel的细胞数下降(23.1±3.5);凋亡率(16.72±1.84)、Caspase-3、9活性增加(1.88±0.21、1.07±0.18),与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);对BGC823细胞增殖和转移的抑制效果均优于单独增加PTEN基因表达和单独沉默Livin基因表达的效果.结论 同时增加PTEN基因表达和沉默Livin基因表达可有效抑制胃癌BGC823细胞的生长和转移.     

小干扰RNA对肾癌细胞Ki67基因表达及其增殖的抑制作用

目的探讨小干扰RNA(siRNA)对人肾癌细胞增殖基因Ki67表达及其增殖、凋亡的影响。方法将Ki67 siRNA(100 nmol/L)转染人肾癌786-0细胞。采用RT-PCR、免疫印迹、免疫组化技术检测Ki67 mRNA及蛋白表达,MTT法检测细胞增殖,免疫组化TUNEL法检测细胞凋亡。结果Ki67 siRNA处理组786-0细胞Ki67 mRNA表达(37．6±1．9)%、Ki67蛋白表达(46．4±0．9)%、免疫组化Ki67表达吸光度(A)值52．5±2．3,阴性siRNA对照组分别为(97．3±0．9)%、(95．3±0．9)%、114．5±4．9,2组比较差异均有统计学意义(P＜0．01)。Ki67 siRNA处理组细胞增殖抑制率(63．6±1．6)%、凋亡细胞阳性率(41．7±0．6)%,阴性siRNA对照组分别为(2．8±0．2)%、(10．3±1．4)%,2组比较差异有统计学意义(P＜0．01)。结论肿瘤增殖基因Ki67 siRNA能抑制人肾癌786-0细胞Ki67基因表达,进而抑制其增殖,促进其凋亡,有望成为肾癌基因治疗的有效工具。     

莪术醇对胃癌细胞凋亡的影响及机制研究

目的 观察莪术醇对胃癌细胞株BGC823细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 体外培养BGC823细胞,分别加入12.5、25、50、100 mg/L莪术醇培养液,对照组加入10 ml/L无水乙醇培养液,分别孵育24 h和48 h,采用MTT法分析增殖率;应用流式细胞仪检测各浓度莪术醇处理BGC823细胞48 h的凋亡率及细胞周期的分布;分光光度法检测Caspase-3活性;100 mg/L莪术醇孵育BGC823细胞48 h后,用RT-PCR和Western blot法检测Caspase-3、Bcl-2、Bax和Survivin mRNA和蛋白的表达水平.结果 莪术醇抑制BGC823细胞增殖,并且随浓度的增加和时间的延长而加强;不同浓度莪术醇处理BGC823细胞,均使处于G0/G1期的细胞显著增加,S期细胞明显减少(P＜0.05);细胞凋亡率随莪术醇浓度增加而升高(P＜0.05);Caspase-3活性呈浓度依赖性增加(P＜0.05);100 mg/L莪术醇孵育BGC823细胞48 h后,Caspase-3、Bax表达均显著升高(P＜0.05),Survivin、Bcl-2表达均显著下降(P＜0.05),Bcl-2/Bax比值显著降低(P＜0.05).结论 莪术醇对胃癌BGC823细胞生长具有抑制作用,阻滞细胞周期于G0/G1期,并促进其凋亡.其作用与增强Caspase-3的活性,上调Caspase-3、Bax表达,下调Survivin、Bcl-2表达及降低Bcl-2/Bax比值有关.     

纳米磁流体-单纯疱疹病毒胸苷激酶重组质粒的构建及其对胃癌细胞增殖的影响

目的研究hTERT启动子调控下单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-tk）重组质粒的构建、在人胃癌细胞BGC823中的表达及对胃癌细胞BGC823增殖的影响。方法构建重组质粒pGL3-hTERT-tk和相应的荧光报告质粒pGL3-hTERT-tk-Luc＋：经纳米磁流体PEG-PEI／Fe304转染胃癌细胞BGC823．荧光显微镜观察细胞形态变化和转染效率．免疫组织化学（免疫组化）方法检测目的基因在胃癌细胞BGC823中的表达．M1Tr法检测胃癌细胞BGC823的增殖能力．以上实验均以正常肝细胞L02为对照。结果重组质粒pGL3-hTERT-tk构建成功,其长度为1100bp。荧光素酶标记的阳性、阴性对照及治疗报告质粒pGL3-hTERT-TK-Luc＋均能有效转染高表达端粒酶活性的胃癌细胞BGC823,转染效率为（28．1±2．3）％。免疫组化结果显示,重组质粒组胃癌细胞BGC823的细胞质中可见大量HSV-tk基因编码的表达。MqT检测结果示．转染pGL3．hTERT-tk质粒4d后．BGC823细胞增殖受抑制．其A,,值为0．254±0．011,低于L02细胞的0．322±0．013;亦低于pGL3-basic-tk转染的BGC823细胞（0．357±0．014）（均P〈0．05）。结论纳米磁流体能将重组质粒pGL3-hTERT．tk转染BGC823细胞并获得表达,PEG-PEI／Fe3O4纳米磁流体-tk可显著抑制BGC823细胞增殖。有望成为胃癌基因治疗的新型生物制剂之一。     

siRNA沉默高迁移率蛋白A2基因对人膀胱移行细胞癌细胞T24增殖凋亡的影响

目的 观察siRNA靶向沉默HMGA2基因在人膀胱移行细胞癌T24细胞中表达的变化,探讨抑制HMGA2基因对T24细胞增殖、周期和凋亡的影响.方法 针对人HMGA2基因构建siRNA干扰片段,瞬时转染T24细胞后,采用Western-blot方法检测转染siRNA干扰片段48h后T24细胞蛋白表达量的变化,CCK-8法检测T24细胞增殖和流式细胞仪（FCM）检测T24细胞周期和凋亡情况.结果 转染后48h的T24细胞HMGA2蛋白表达水平较空白对照组（CON）和阴性对照组（NC）显著下降,差异有统计学意义（P＜0.05）,转染HMGA2-siRNA的实验组抑制T24细胞增殖,T24细胞S期细胞比例（35.47±0.23）％高于CON组和NC组（P＜0.05）,实验组T24细胞凋亡率为（17.25±0.24）％,明显高于CON组和NC组（P＜0.05）.结论 HMGA2基因的特异性siRNA可以抑制T24细胞增殖,细胞周期阻滞在S期,并促进其凋亡.     

RNA干扰对肾癌细胞端粒酶基因表达和活性的抑制作用及其增殖、凋亡的影响

目的探讨小干扰RNA(siRNA)对人肾癌细胞端粒酶基因表达、活性的抑制作用及对肾癌细胞增殖、凋亡的影响。方法将针对人端粒酶RNA(hTR)模板区的siRNA(100nmol/L)转染肾癌7860细胞,采用RTPCR检测7860细胞端粒酶mRNA表达,端粒重复序列扩增酶联免疫吸附法检测端粒酶活性,MTT法检测细胞增殖,免疫细胞化学TUNEL法检测细胞凋亡。结果hTRsiRNA处理组7860细胞端粒酶mRNA表达(40.7±1.5)%降低,端粒酶活性(32.7±2.3)%降低,细胞增殖抑制率(63.6±1.6)%增加,凋亡细胞阳性率(39.4±0.6)%增加。分别与阴性siRNA对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论siRNA能抑制人肾癌细胞端粒酶mRNA表达及活性,进而抑制其增殖、促进其凋亡,有望成为肾癌基因治疗的有效工具。     

RNA干扰转录因子激活蛋白4基因表达对结肠癌细胞株SW480的影响

目的观察转录因子激活蛋白4（AP-4）基因对结肠癌细胞株SW480生物学行为的影响。方法设计合成针对AP-4基因外显子7的小分子干扰RNA（siRNA）表达质粒,用脂质体转染SW480细胞,通过RT-PCR技术、Western印迹、四甲基偶氮唑盐实验（MTT法）、流式细胞仪和Transwell体外侵袭实验等检测该siRNA对SW480细胞基因表达、细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡能力和浸润转移能力等生物学行为的影响。结果AP-4siRNA转染SW480细胞96h后,其AP-4mRNA水平下降了58%,培养液上清AP-4蛋白浓度下降了75%（P〈0.01）。细胞增殖受到明显抑制,抑制率达61%～78%;流式细胞仪检测结果显示,AP-4siRNA组SW480细胞凋亡率为（21.70±2.51）%,显著高于阴性对照组的（2.31±0.14）%（P〈0.01）,G0-G1期细胞比例增加（P〈0.01）,G2-M期细胞减少（P〈0.05）;Transwell体外侵袭实验显示,AP-4siRNA能明显抑制SW480细胞的体外侵袭力（P〈0.01）。结论应用siRNA技术沉默AP-4基因能有效抑制SW-480细胞AP-4的表达,进而抑制细胞的生长、增殖及诱导细胞的凋亡,为以AP-4为靶向的结肠癌基因治疗提供了新的思路和手段。     

纳米磁流体-单纯疱疹病毒胸苷激酶重组质粒的构建及其对胃癌细胞增殖的影响

目的 研究hTERT启动子调控下单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)重组质粒的构建、在人胃癌细胞BGC823中的表达及对胃癌细胞BGC823增殖的影响.方法 构建重组质粒pGL3 -hTERT-tk和相应的荧光报告质粒pGL3-hTERT-tk-Luc+;经纳米磁流体PEG-PEI/Fe3O4转染胃癌细胞BGC823,荧光显微镜观察细胞形态变化和转染效率,免疫组织化学(免疫组化)方法检测目的基因在胃癌细胞BGC823中的表达,MTT法检测胃癌细胞BGC823的增殖能力,以上实验均以正常肝细胞LO2为对照.结果 重组质粒pGL3-hTERT-tk构建成功,其长度为1100 bp.荧光素酶标记的阳性、阴性对照及治疗报告质粒pGL3-hTERT-TK- Luc+均能有效转染高表达端粒酶活性的胃癌细胞BGC823,转染效率为(28.1±2.3)％.免疫组化结果显示,重组质粒组胃癌细胞BGC823的细胞质中可见大量HSV -tk基因编码的表达.MTT检测结果示,转染pGL3-hTERT-tk质粒4d后,BGC823细胞增殖受抑制,其A570值为0.254±0.011,低于L02细胞的0.322±0.013;亦低于pGL3-basic-tk转染的BGC823细胞(0.357±0.014)(均P＜0.05).结论 纳米磁流体能将重组质粒pGL3-hTERT-tk转染BGC823细胞并获得表达,PEG-PEI/Fe3O4纳米磁流体-tk可显著抑制BGC823细胞增殖,有望成为胃癌基因治疗的新型生物制剂之一.     

蛋白激酶B siRNA 转染对胃癌SGC-7901细胞生长增殖的影响

目的:探讨蛋白激酶B（PKB）基因沉默对人胃癌SGC-7901细胞增殖的作用。 方法:应用基因转染技术将蛋白激酶B家族的Akt2 siRNA转染至胃癌细胞中，采用Western blot、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术MTT等方法观察和检测Akt2 siRNA转染后对转染组细胞生长和增殖的影响。结果:与对照组比较，转染Akt2 siRNA组的胃癌SGC-7901细胞生长、增殖速度明显减缓（P＜0.01）， Akt2 siRNA组较对照组细胞的Akt2蛋白表达水平显著下调（P＜0.01）;转染组出现梯状凋亡条带;细胞周期显示转染组细胞聚集在G2/M期。 结论:应用RNAi使蛋白激酶B基因沉默能使人胃癌SGC－7901细胞的生长受到抑制，胃癌细胞增殖速度减缓，其作用机理可能通过诱导细胞凋亡和抑制PI3/K信号传导通路而实现。Akt2有望成为胃癌基因治疗的新靶点。     

白芍总苷对系统性红斑狼疮患者外周血B细胞内TLR9表达的影响

摘要 目的 探讨白芍总苷（TGP）对系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血B细胞内Toll样受体9（TLR9）表达的影响。方法选取SLE患者60例和正常健康人30例,分离外周血单个核细胞（PBMC）,每份标本均分为4组体外培养,即空白对照组、胞嘧啶 磷酸 鸟嘌呤 寡聚脱氧核苷酸（CpG ODN）组、CpG ODN＋TGP组和TGP组。空白对照组仅加入RPMI 1640完全培养液,其他3组分别加入CpG ODN（ODN终浓度1 μmol·L 1）、CpG ODN＋TPG（TPG最适终浓度为1×10－4 mol·L－1）、TPG。各组均培养48 h后提取细胞,应用流式细胞仪检测各组B细胞内TLR9表达。结果①正常健康人：CpG ODN组和空白对照组TLR9的表达率分别为（9.10±2.12）%,（4.96±2.11）%（P＜0.01）;②SLE患者：CpG ODN组的TLR9表达率（14.86±3.42）%,显著高于空白对照组的（9.20±3.43）%（P＜0.01）,CpG ODN＋TGP组的TLR9表达率（11.95±3.63）%,低于CpG ODN组（P＜0.05）;在SLE轻度活动患者中,CpG ODN组和空白对照组TLR9的表达率分别为（10.74±3.17）%,（5.19±2.05）%（P＜0.05）;在SLE中重度活动患者中,CpG ODN组和空白对照组TLR9的表达率分别为（16.51±1.72）%,（10.80±2.37）%（P＜0.01）,CpG ODN＋TGP组TLR9的表达率（13.59±2.58）%,低于CpG ODN组（P＜0.01）。结论TGP可以拮抗CpG ODN对B细胞内TLR9表达的上调作用。     

自体脂肪移植在颞部分层填充治疗的应用

目的 通过对颢部的解剖分析,强调在不同区域、不同层次,多点分布移植白体脂肪,以提高其术后的成活率.方法 采用3L3M(即低压抽吸、低速离心、多点、多隧道、多层次、少量注射移植的方法)的自体脂肪移植综合技术,对颞部凹陷的56例患者按不同区域进行移植.①颞区在颞浅筋膜和皮下层填充;②额区在额肌下和皮下层填充;③在眶外侧区皮下行少量的脂肪填充.结果 56例患者,术后随访3个月至3年,颞区填充效果自然,移植脂肪吸收率低,效果满意率＞85.7%.结论 通过颞部分区、分层、多点注射自体脂肪颗粒填充颞部凹陷,可以获得丰满、自然的效果.     

H3K4m3和H3K9m3修饰对胰岛组织特异性基因表达的影响

目的 通过比较不同细胞类型之间胰腺十二指肠同源盒1(Pdx-1)、配对盒基因4(Pax4)、MafA(mast cell function associated antigen)和Nkx6.1等胰岛组织特异性基因其转录起始区的H3K4m3和H3K9m3修饰的差异,探讨H3K4m3和H3K9m3修饰对胰岛组织特异性基因表达的作用.方法 采用染色质免疫共沉淀一实时定量聚合酶链反应(PCR)法检测小鼠胚胎干细胞(mES,1×10~7)、小鼠成纤维细胞株NIH3T3细胞(1×10~7)和小鼠β细胞株NIT-1细胞(1×10~7)三者中的胰岛组织特异性基因、Oct4基因和MLH1基因转录起始区H3K4m3和H3K9m3修饰的状况.同时采用实时定量逆转录(RT)-PCR检测上述3种细胞各基因mRNA表达水平.分析H3K4m3和H3K9m3修饰改变与基因表达之间的关系.结果 NIT-1细胞中Pdx-1、Pax4、MafA、Nkx6.1等胰岛组织特异性基因转录起始区的H3K4m的修饰水平分别为:(4.84±0.05)%、(9.91±1.33)%、(10.64±0.87)%、(0.23±0.03)%,与mES细胞比较明显增高(P<0.05),基因表达;NIH3T3细胞中Pdx-1、Pax4、MafA、Nkx6.1等胰岛组织特异性基因转录起始区的H3K9m3的修饰水平分别为:(0.64±0.21)%、(7.04±1.29)%、(0.39±0.10)%、(2.35±0.81)%,与mES细胞比较明显增高(P<0.05),基因不表达.结论 H3K4m3与H3K9m3修饰能相互协调,共同调控胰岛组织特异性基因的表达.     

C3d3与hCGβ基因融合质粒对不同品系小鼠DNA免疫增强抗hCGβ体液免疫效应

目的通过分子佐剂C3d3增强人绒毛膜促性腺激素(hCG)β基因疫苗在不同品系小鼠的体液免疫效应。方法分别用pCMV4-hCG-βC3d3、pCMV4-hCGβ和pCMV4-hCGβ+pCMV4-C3d3联合免疫以辅助性T细胞(Th)2型优势的BALB/c小鼠和Th1型优势的C57BL/6小鼠,免疫剂量分别为5、10、50、100和500 pmol,同一剂量免疫两次、间隔3周。初次及加强免疫后每周采血,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清抗hCGβ抗体水平。硫氰酸钠洗脱法ELISA分析抗hCGβ抗血清亲和力。结果两种品系小鼠pCMV4-hCG-βC3d3免疫产生抗hCGβ抗体的时间和效价均显著早(高)于pC-MV4-hCGβ和联合免疫组。在50 pmol免疫剂量时,C3d3在两种品系小鼠呈现出最强的佐剂活性,分别使hCGβ的免疫原性增强了400倍(BALB/c)和251倍(C57BL/6)。pCMV4-hCG-βC3d3组两个品系小鼠亲和力成熟较快。结论在Th2型及Th1型免疫优势的不同品系小鼠,分子佐剂C3d3均能增强hCGβ基因疫苗体液免疫效应。     

Albert Wojciech Adamkiewicz: the discoverer of the variable vascularity of the spinal cord

The present article contains a brief biography as well as a discussion of the more significant contributions of Albert Wojciech Adamkiewicz, Head of General and Experimental Pathology at the Jagiellonian University in Cracow in the years 1879 to 1892, and who is now primarily remembered as the discoverer of the major radicular artery eponymically named "Adamkiewicz's artery." His work as an investigator of the variability of the vasculature of the spinal cord led to his major contributions to present clinical practice in such areas as vascular surgery, neurosurgery, pediatric surgery, and the surgery of the aorta, providing a permanent Polish eponymic accent in major textbooks in these specialties. This article also deals with Adamkiewicz's contributions in other fields, mostly involving the nervous system, such as the development of a new and original method for staining neuronal tissue (double staining of the spinal cord) and his extensive studies of spinal cord degeneration. The authors also present aspects of his career that brought ill fame to Adamkiewicz. These were his claims to have discovered the so-called nervous bodies and anticancer antitoxin, which were both severely criticized by his faculty peers at the Jagiellonian University. The biography is supplemented with an attempt at evaluating Adamkiewicz's entire scientific output, wherein unquestionable achievements and pointed discoveries prevail in comparison with failures.     

Critical role of physiologist John A. Johnson in the origins of Minnesota's billion dollar pacemaker industry

Complete heart block developed in more than 10% of C. Walton Lillehei's early patients undergoing closure of ventricular septal defects, and hospital mortality was 100% in this group of patients. This problem of early fatality from heart block was completely eliminated with the use of a myocardial electrode in combination with an external plug-in electric stimulator. This method of treatment, suggested by Dr John A. Johnson, a professor of physiology at the University of Minnesota, was first used by Dr Lillehei on January 30, 1957. The next 3 years would witness the development of a portable, external, battery-powered pacemaker, and then an implantable pacemaker available for thousands of patients susceptible to lethal Stokes-Adams attacks. Fifty years have passed, and in 2005, approximately 800,000 pacemakers were implanted worldwide.     

The evolution of cardiovascular surgery in China

The history of the development of cardiovascular surgery in China was little known to the West not only because the majority of the earlier reports were published almost exclusively in the Chinese language but also because China was essentially closed to the West before the 1980s. We present here an account of how some Chinese surgeons struggled to establish a new specialty in a country that makes up more than one fifth of the world population.     

大量培养表皮细胞方法的研究

利用小鼠3T3成纤维细胞具有促进人表皮细胞生长的特点,观察了无血清培养时3T3细胞对低密度接种的传代表皮细胞生长的影响。结果表明表皮细胞具有较高的生长能力,细胞融合时间明显缩短,传代比例和培养面积明显扩大,这对临床大面积烧伤病人的救治具有重要意义。     

The first successful repair of postinfarction ventricular septal defect: influence of good fortune, team work, and an inquisitive mind

Research in our institution identified the first case in which cardiopulmonary bypass was utilized. By happenstance, it turned out to be the presumed first repair of postinfarction ventricular septal defect. The circumstances of this interesting case are presented and discussed in the context of our surgical heritage.