GALNT2通过EGFR信号通路对糖尿病视网膜病变引起的细胞和组织损伤的作用机制

目的 考察GALNT2通过EGFR信号通路对糖尿病视网膜病变引起的损伤。方法 检测糖尿病大鼠视网膜血管病理、GALNT2 mRNA、GALNT2、EGFR磷酸化、EGFR。将hRMECs分为NC组、高糖组、siRNA+高糖组、GALNT2敲低+高糖组、pcDNA+高糖组、GALNT2过表达+高糖组。检测GALNT2、EGFR mRNA,GALNT2、EGFR磷酸化、EGFR、细胞增殖、细胞迁移、细胞小管形成、细胞膜通透性、葡萄糖消耗及乳酸。结果 与对照组比,糖尿病组大鼠视网膜凋亡增高,GALNT2 mRNA和GALNT2蛋白降低,EGFR磷酸化增高,差异有统计学意义（P<0.05）。各组细胞GALNT2 m RNA、GALNT2蛋白、EGFR磷酸化、细胞增殖、细胞迁移、细胞小管形成及细胞膜通透性差异存在统计学意义,呈GALNT2敲低+高糖组、高糖组、siRNA+高糖组、pcDNA+高糖组、NC组、GALNT2过表达+高糖组变化趋势。结论 GALNT2通过抑制EGFR磷酸化改善糖尿病视网膜病变。     

黄芩苷通过抑制JAK2/STAT3信号通路减轻脂多糖诱导的心肌细胞凋亡

目的 探讨黄芩苷对脂多糖（LPS）诱导的大鼠心肌细胞凋亡及Janus激酶2（JAK2）/信号转导和转录启动因子3（STAT3）信号通路的调控作用。方法 体外培养大鼠心肌H9C2细胞,分为对照组（不做干预）、LPS组（1 μg/mL LPS）和LPS+5、10、20、40 μmol/L黄芩苷组（1 μg/mL LPS+5、10、20、40 μmol/L黄芩苷）;酶联免疫吸附试验（ELISA）和活细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法测定炎症因子［白细胞介素（IL）-6、IL-1β和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）］表达水平和细胞活力,筛选出最适浓度黄芩苷后,再次分组：对照组、LPS组、LPS+10 μmol/L黄芩苷组、LPS+AG490组、LPS+10 μmol/L黄芩苷+AG490组和LPS+10 μmol/L黄芩苷+colivelin组。用5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷、Hoechst33258染色法、实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹法分别检测细胞增殖、凋亡、mRNA［细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）］表达及相关蛋白表达水平。结果 与对照组相比,LPS组细胞炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α表达水平显著升高,24和48 h细胞活力显著降低（P＜0.05）;与LPS组相比,LPS+10、20和40μmol/L黄芩苷组炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α显著降低（P＜0.05）,干预24 h LPS+10 μmol/L黄芩苷组细胞活力显著升高（P＜0.05）,选择干预24 h的LPS+10 μmol/L黄芩苷组进一步实验。与对照组相比,LPS组细胞增殖率、Cyclin D1 mRNA及蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率、Caspase-3 mRNA及蛋白表达、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达显著升高（P＜0.05）;与LPS组相比,LPS+10 μmol/L黄芩苷组和LPS+AG490组显著逆转了上述指标的变化（P＜0.05）;与LPS+10 μmol/L黄芩苷组相比,加入JAK2/STAT3通路抑制剂后,上述指标变化更为显著（P＜0.05）,LPS+10 μmol/L黄芩苷+colivelin组则与LPS+10 μmol/L黄芩苷+AG490组结果相反（P＜0.05）。结论 黄芩苷可抑制LPS诱导的大鼠心肌H9C2细胞的凋亡及炎症,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3通路的信号转导相关     

含活血通络方血清对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞增殖作用的研究

目的 探究含活血通络方血清调控IncRNA MEG3对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞（human retinal microvascular endothelialcells,hRMECs）增殖及凋亡的影响作用。方法 选取20只SD大鼠,采用随机数字表法对10只大鼠灌胃活血通络方,10只灌胃等量生理盐水。灌胃结束1h后制备相应血清。分别采用5mmol/L葡萄糖或30mmol/L的D-甘露醇、葡萄糖溶液对hRMECs细胞进行诱导24h。按照诱导情况将细胞分为正常对照组（5mmol/L葡萄糖,n=6）、等渗组（30mmol/LD-甘露醇,n=6）、高糖组（30mmol/L葡萄糖,n=6）、高糖+2.5%含药血清组（n=6）、高糖+7.5%含药血清组（n=6）、高糖+10%含药血清组（n=6）,相应血清干预24h。采用CCK-8法、酶联免疫吸附法检测细胞增殖情况及丙二醛（malondialdehyde,MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathioneperoxidase,GSH-Px）含量;采用实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time fluorescence...     

黄芩苷对氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠血脑屏障的影响

目的 研究黄芩苷对氯化锂-匹罗卡品诱导的大鼠癫痫模型血脑屏障通透性的影响。 方法 将45只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、癫痫模型组和黄芩苷干预组。采用氯化锂-匹罗卡品制备颞叶癫痫模型。运用伊文思蓝染色法评估血脑屏障的通透性,采用免疫组化及Western Blot确定紧密连接蛋白occludin的表达情况,ELISA检测评估炎症因子IL-1β和TNF-α的表达情况,电子显微镜观察血脑屏障超微结构变化。 结果 与模型组相比,黄芩苷延长了癫痫发作潜伏期,降低了发作级别（P＜0.05）。黄芩苷降低了脑组织中伊文思蓝的渗出,增加了occludin的表达,降低了IL-1β和TNF-α的表达水平（P＜0.05）。黄芩苷组血脑屏障超微结构的破坏得到明显改善。 结论 黄芩苷在氯化锂-匹罗卡品致痫模型中具有显著的血脑屏障保护作用,其机制可能与上调occludin的表达,减少炎症因子IL-1β和TNF-α的表达有关。     

黄芩苷对溃疡性结肠炎模型大鼠NF-κB表达的影响

目的?观察黄芩苷对溃疡性结肠炎模型大鼠核因子-κB（Nuclear factor-κB,NF-κB）表达及下游炎症细胞因子的影响。方法?采用TNBS法制备大鼠溃疡性结肠炎模型,随机分为正常组、模型组、黄芩苷（Baicalin）高中低剂量组、阳性对照组（柳氮磺胺吡啶,SASP组）。给药10d后,留取结肠组织标本,观察结肠大体形态变化,采用ELISA法观察UC模型大鼠结肠组织中肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素-8（IL-8）和白介素-1（IL-1）的含量,采用Western blot法检测NF-κB的表达水平。结果?与模型组相比,黄芩苷100mg/kg组能显著改善结肠大体形态,黄芩苷（25、50、100mg/kg）干预后能剂量依赖性的抑制各炎症因子的分泌,黄芩苷高剂量组能降低IL-1、IL-8和TNF-α表达水平,但与SASP组比较无明显差异。黄芩苷高剂量组能降低NF-κB的水平,促进IκBα水平（P<0.05）。结论?黄芩苷能够抑制NF-κB的活化,从而发挥其在溃疡性结肠炎中的抗炎效应。      

基于“通肾络、益脾肾”治法研究足细胞凋亡及自噬

[目的] 基于中医"通肾络、益脾肾"治法，探讨通络益肾方对体外高糖培养的小鼠肾小球足细胞自噬和凋亡蛋白SIRT1、BNIP3、P62、Bax表达的调控影响。[方法] 成熟无特定病原体（SPF）级SD雄性大鼠40只，随机分为正常组、中药高、中、低剂量组各10只。按照人与大鼠体表面积折算方法计算出大鼠所需中药灌胃浓度：高剂量浓度4.76 g/mL、中剂量浓度2.38 g/mL、低剂量浓度1.19 g/mL，灌胃10 d取含药血清备用。足细胞分6组，正常组5.6 mmol/L葡萄糖+10%正常大鼠血清、高糖组30mmol/L葡萄糖+10%正常大鼠血清、通络益肾方含药血清高、中、低干预组30 mmol/L葡萄糖+10%高、中、低剂量大鼠血清、高渗组甘露醇24.5 mmol/L+10%正常大鼠血清。细胞培养48 h后收集，Hoechst33342荧光染色，观察各组足细胞凋亡状况及形态变化；流式细胞仪检测足细胞凋亡率；Western Blot检测细胞内自噬标志蛋白SIRT1、P62及促凋亡蛋白BNIP3、Bax表达水平。[结果] 流式细胞仪检测结果显示通络益肾方中、低剂量组可降低高糖诱导的足细胞凋亡率（P<0.01或P<0.05），高剂量组不能改善凋亡情况（P>0.05）；Hoechst33342荧光染色观察结果也证实通络益肾方中、低剂量组可降低高糖诱导的足细胞凋亡率；蛋白印迹结果显示，与高糖组相比，通络益肾方中、低剂量组自噬标志蛋白SIRT1表达升高，自噬标志蛋白P62及促凋亡蛋白BNIP3、Bax蛋白表达下降（P<0.05或P<0.01），高剂量组SIRT1、BNIP3、P62、Bax蛋白表达未见明显改变（P>0.05）。[结论] 中剂量、低剂量通络益肾方能够启动细胞自噬减少高糖刺激下体外培养足细胞凋亡，降低细胞凋亡率及凋亡蛋白的表达。     

小干扰RNA对高糖诱导大鼠肾小管上皮细胞Snail 1表达的抑制作用

目的：观察小干扰RNA对高糖诱导大鼠肾小管上皮细胞Snail1表达的抑制作用及意义。方法：将原代培养肾小管上皮细胞分为5组,（1）对照组（含糖5.5 mmol/L）;（2）高糖组（含糖25 mmol/L）;（3）Snail1 siRNA处理组,转染Snail1 siRNA,6 h后更换为高糖（含糖25 mmol/L）培养;（4）Control siRNA处理组,转染Control siRNA作为阴性对照,6 h后换为高糖（含糖25 mmol/L）培养;（5）高渗组（含甘露醇19.5 mmol/L）。72 h后收集细胞,用Western blot检测Snail 1、Vimentin蛋白表达,用半定量RT-PCR检测Snail 1、Vimentin、成纤维细胞特异性蛋白-1（FSP-1）和纤维连接蛋白（FN）的mRNA表达。结果：肾小管上皮细胞转染Snail1 siRNA后,与高糖组比较Snail1mRNA和蛋白表达分别下降62%和68%（P〈0.01）;与高糖组比较,Snail1 siRNA处理组Vimentin、FSP-1、FN蛋白和（或）mRNA表达显著下调（P〈0.01）。结论：（1）小干扰RNA能显著抑制高糖诱导大鼠肾小管上皮细胞Snail1表达;（2）Snail1参与了高糖作用下肾小管上皮细胞病理改变,并在细胞外基质的沉积中起重要作用。     

异芒果苷对高脂饮食诱导大鼠肝脏损伤的改善作用

目的?探讨异芒果苷对高脂饮食诱导大鼠非酒精性脂肪肝的影响。方法?将动物随机分为4组:空白组、高脂组、异芒果苷(20、40?mg/kg)组。除空白组外,其它组动物以高脂肪饮食喂养6周,空白组给予正常饲料,从第5周起,异芒果苷组给予相应的药物治疗2周。ELISA法检测丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、细胞因子白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),采用HE染色观察肝脏病理改变,Western blot法检测肝脏Sirt1/NF-κB信号通路蛋白的表达。体外实验采用棕榈酸诱导肝脏L02细胞损伤模型,检测细胞活性以及细胞上清IL-1β、IL-6、TNF-α水平,检测细胞Sirt1/NF-κB信号通路蛋白表达。结果?体内实验结果显示,异芒果苷显著降低ALT、AST活性及TG、TC、IL-1β、IL-6、TNF-α水平（P<0.01）,改善肝组织病理学改变,增加肝脏Sirt1蛋白表达（P<0.01）,降低NF-κB信号通路蛋白表达（P<0.01）。体外实验结果表明,异芒果苷能显著增加L02细胞活性（P<0.01）,降低细胞上清炎症因子水平（P<0.01）,增加细胞Sirt蛋白表达（P<0.01）,降低NF-κB信号通路蛋白表达（P<0.01）。结论?异芒果苷能显著改善高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝,其机制可能与调节Sirt1/NF-κB信号通路有关。      

过表达SIRT1对高糖诱导RVECs细胞的影响及对VEGF和PEDF表达的影响

目的:探讨过表达沉默信息调节因子-1(SIRT1)对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞(RVECs)增殖、凋亡的影响.方法:构建SIRT1过表达慢病毒载体,感染体外培养的RVECs细胞.实验分3组:(1)正常对照组(NG组):不处理;(2)高糖组(HG组):33 mmol/L葡萄糖处理;(3)SIRT1过表达慢病毒组(SIRT1组):33 mmol/L葡萄糖处理,同时转染SIRT1过表达慢病毒.采用实时荧光定量PCR和蛋白印迹法检测细胞SIRT1、血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)的表达.采用噻唑蓝比色法和原位末端标记法(TUNEL)检测细胞增殖、凋亡情况.结果:与NG组较,HG组细胞SIRT1表达降低,VEGF和PEDF表达增加,细胞增殖率增加、凋亡率降低,差异均有统计学意义(P<0.05).与HG组比较,SIRT1组细胞SIRT1表达增加,VEGF和PEDF表达降低,细胞增殖率降低、凋亡率增加,差异均有统计学意义(P<0.05).Pearson分析显示,SIRT1表达与VEGF和PEDF呈负相关(r=-0.814,P=0.005;r=-0.593,P=0.029).结论:过表达SIRT1能够抑制高糖诱导的RVECs细胞增殖、促进凋亡,并下调细胞VEGF和PEDF表达.     

阿托伐他汀对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤的作用及其机制

目的 探讨阿托伐他汀（atorvastatin,Atv）对高糖环境下人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤的作用及其可能的机制.方法 人脐静脉内皮细胞株低糖（5.6 mmol/L）培养贴壁后随机分为正常组（NG）、渗透压对照组（OS）、高糖组（HG）、高糖＋不同浓度药物组（HG＋0.1、1.0、10.0 μmol/L Atv）,药物培养24 h后应用CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）的水平,Western blot法检测细胞中SIRT1蛋白表达水平.结果 与正常组相比,高糖组细胞增殖减少,药物干预可改善高糖对人脐静脉内皮细胞增殖的抑制作用,呈浓度依赖性.高糖环境下,细胞内ROS生成显著增加,SIRT1蛋白表达明显降低.阿托伐他汀可以上调高糖环境下SIRT1的表达水平,降低高糖诱导的ROS的表达增加水平,具有浓度依赖性.结论 阿托伐他汀可以对抗高糖诱导的人脐静脉内皮细胞的氧化损伤,其可能的机制与升高内皮细胞SIRT1的表达有关.     

血管内皮生长因子诱发早期糖尿病的血-视网膜屏障破坏

目的血管内皮生长因子(VEGF)可以导致强烈的血管渗漏。越来越多的文献报道在糖尿病视网膜病变时VEGF升高。早期糖尿病性视网膜病变的一个特点是血管渗漏增加。本文的目的是探讨应用可溶性Flt阻断VEGF的作用能否抑制视网膜血管渗漏。方法重约200g的S-D大鼠通过注射链左霉素制备糖尿病模型。1周后通过静脉注射5%的PBS加甘油,或白介素-6受体单克隆抗体,或可溶性Flt,24h后应用伊凡思蓝法测定血管渗漏。用枸橼酸钠缓冲液处理的大鼠作为对照组。结果糖尿病大鼠的血管渗漏较对照组显著升高(P<0.05)。PBS加甘油和白介素-6受体单克隆抗体处理后的糖尿病大鼠的视网膜血管渗漏无变化(P>0.05),但用可溶性Flt处理糖尿病大鼠的血管渗漏显著降低(P<0.0001)。结论VEGF在糖尿病性视网膜病变的发生过程中起着十分重要的作用。通过抑制VEGF可以降低早期糖尿病性视网膜病变的血管渗漏。     

Lazaroid对早期糖尿病大鼠视网膜的保护作用

目的探讨Lazaroid对早期糖尿病大鼠视网膜的保护作用。方法20只SD大鼠采用链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病动物模型,10只于成模2周后经尾静脉注射Lazaroid进行干预(糖尿病Lazaroid干预组),其余10只不予干预(糖尿病不干预组)。另设立不建模且不干预的空白对照组(n=10)。分别于实验前后进行视网膜电流图检查,对视网膜组织切片进行透射电子显微镜观察。结果糖尿病Lazaroid干预组和空白对照组在实验前后的暗适应最大电反应b波、振荡电位(OPs)振幅值差异无统计意义(P>0.05)。糖尿病不干预组实验前后的暗适应最大电反应b波、OPs振幅值明显下降(P<0.05);与空白对照组比较,成模4周后的糖尿病不干预组大鼠的神经节细胞内出现线粒体的改变;而同期糖尿病Lazaroid干预组大鼠视网膜未出现明显神经节细胞的改变。结论糖尿病动物模型在建立的早期已经出现视觉电生理的变化,并且有神经细胞超微结构的改变;全身使用Lazaroid对早期糖尿病大鼠模型视网膜神经元具有保护作用。     

Up-regulation of HIF-1α and VEGF Expression by Elevated Glucose Concentration and Hypoxia in Cultured Human Retinal Pigment Epithelial Cells

Summary： In order to explore the effect of high glucose concentration and high glucose concentration with hypoxia on the production of hypoxia-inducible factor-1α （HIF-1α） and vascular endothelial growth factor （VEGF）, human RPE cells were cultured in 5,56 mmol/L glucose （control group）, 5.56 mmol/L glucose with 150 !a mol/L COCl2 （hypoxic group）, 25 mmol/L glucose （high glucose group） and 25 mmol/L glucose with 150 μmol/L COCl2 （combination group）. RT-PCR was used to detect the expression of HIF-1α and VEGF mRNAs. Western blot analysis was used to measure the levels of HIF-1α and VEGF proteins. Although the small amount of HIF-1α protein was able to be detected in high glucose group but not in control group, there was no significant difference between the expression of HIF-1α mRNA of RPE cells in high glucose group and that of RPE cells in control group. As compared with RPE cells in control group, the mRNA expression and the protein synthesis of VEGF in high glucose group were up-regulated. As compared with RPE cells in hypoxic group, the expression of HIF-1α mRNA of RPE cells in combination group was not different, but the protein synthesis of HIF-1α, the mRNA expression and the protein synthesis of VEGF were more obviously up-regulated. In conclusion, high concentration glucose mainly influence the protein synthesis of HIF-1α of RPE cell, and HIF-1α protein is able to be accumulated in high concentration glucose. Under hypoxia, the HIF-1α protein induced by high concentration glucose is more stable, and the expression of VEGF is obviously increased. It is suggested that high concentration glucose may play a role in retinal neovascularization, especially at ischemia stage of diabetic retinopathy.     

转染靶向RhoA基因小干扰RNA对高糖刺激下人肾小球系膜细胞RhoA/ROCK信号通路表达的影响

目的 观察小G蛋白(RhoA)小干扰RNA(Stealth RNAm siRNA)对高糖刺激下的人肾小球系膜细胞(HMC)炎症反应及纤维化的影响,探讨RhoA/ROCK信号通路在糖尿病肾病发生发展中的作用.方法 传代培养的HMC同步化后分组,LipofectaminerTM2000脂质体转染抑制RhoA表达的Stealth RNA或无关的siRNA,用荧光倒置显微镜观察各组转染效率,利用实时定量RT-PCR、ELISA技术检测RhoA、ROCK-I、纤维连接蛋白(FN)、结缔组织生长因子(CTGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达情况.结果 (1)RhoA-siRNA转染可抑制高糖刺激的HMC中P&oA、ROCK-I、CTGF mRNA的表达水平,各mRNA的表达较高糖组少26%-60%(均P<0.05).(2)RhoA-siRNA转染HMC后继续培养48 h,FN、CTGF和TNF-α仪的蛋白表达水平较高糖组明显少[FN:(1.99±0.04)mg/L比(4.31±0.13)ms/L,CTGF:(4.98-1-0.17)mg/L比(6.06±0.09)ms/L;TNF-α:(61.17±2.59)ns/L比(91.76±2.27)ng/L;均P<0.05],几乎使FN和CTGF下降到正常糖培养HMC的水平.结论 通过RNA干扰技术抑制RhoA的表达,可减少高糖刺激下HMC中FN、CTGF、TNF-α的积聚,降低细胞外基质的蓄积,减少肾小球的纤维化和炎症反应,为糖尿病肾病的防治提供新的干预靶点.

Abstract：

Objective To observe the effect of small interference RNA(Steahh RNAiTM siRNA)of RhoA on the inflammatory response and fibrosis in human mesangial cell(HMC)and explore the role of RhoA/ROCK signaling pathway in the process of diabetic nepropathy.Methods Synchronized HMC were divided into several groups.LipofectamineTM2000 was employed to transfect RhoA-siRNA and RhoA-negative siRNA into the above cells.RhoA-siRNA could inhibit the expression of RhoA.The expressions of RhoA,ROCK-I,fibronectin(FN),connective tissue growth factor(CTGF)and tumor necrosis factor-alpha(TNF-α)were detected by real-time reverse transeription-polymerase chain reaction(RT.PCR)and ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay).Resuits (1)The expressions of RhoA,ROCK-I and CTGF mRNA were inhibited by RhoA siRNA transfection in high glucose-induced HMC.The expression of each mRNA was reduced 26%-60%as compared with the high glucose-induced group(P<0.05).(2)After RhoA siRNA transfection and culturing with high glucose for 48 h.FN, the secretions of CTGF and TNF-αsignificantly declined[FN:(1.99±0.04)mg/L vs(4.31±0.13)mg/L,CTGF:(4.98±0.17)ms/L vs(6.06±0.09)mg/L;TNF-α[:(61.17±2.59)ng/L vs(91.76±2.27)ng/L,all P<0.05].The levels of FN and CTGF almost decreased to those of normal glucose-induced HMC.Conclusions The levels of FN,CTGF and TNF-αin higsh glucose-induced HMC may be lowered by inhibiting RhoA through RNA interference and reducing the accumulation of extracellular matrix, glomerular fibrosis and inflammation.Thus it provides a new intervention target for the prevention of diabetic nephropathy.     

黄芪多糖对2型糖尿病早期大鼠视网膜Muller细胞Kir2.1表达的影响

目的:探讨黄芪多糖对链脲佐菌素(STZ)诱导的2型糖尿病大鼠早期视网膜Muller细胞Kir2.1表达的影响。方法:雄性SPF级SD大鼠随机分为:正常对照组(C组,n=10),黄芪多糖对照组(CA组,n=10),饲以正常饲料;通过高脂饮食加小剂量STZ诱导复制2型糖尿病大鼠模型,将血糖>13.9 mmol/L者随机分为糖尿病组(DM组,n=8)及黄芪多糖治疗组(DA组,n=8)。治疗前后观察血糖、口服葡萄糖耐量变化。从4组大鼠视网膜提取总mRNA,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Kir2.1 mRNA的表达。结果:DM组血糖显著高于C组,同时伴有明显的糖耐量下降(P<0.01),经黄芪多糖治疗8周后,DA组血糖降低,与DM组比较糖耐量改善(P<0.01)。RT-PCR扩增的Kir2.1 cDNA产物在DM组表达比在C组下降,而在CA组表达较DM上升(P<0.05),但在C组与CA组中未出现这种显著性的改变(P>0.05)。结论:黄芪多糖能够降低血糖,糖尿病大鼠早期视网膜Muller细胞Kir2.1蛋白表达下降,而黄芪多糖对于逆转这一早期的改变可能起到一定作用,从而起到减少糖尿病视网膜病变发病率的作用。     

痰瘀同治法对糖尿病大鼠心肌微血管病变AGEs/RAGE轴及氧化应激的影响

目的 观察痰瘀同治对高糖诱导心肌微血管内皮细胞损伤的保护作用并从AGEs/RAGE轴探讨其作用机制。方法 利用酶消化法从大鼠心脏中分离出原代心肌微血管内皮细胞（CMECs）,经免疫荧光法鉴定后,培养传代备用。在不同时间段采用不同浓度的葡萄糖对大鼠CMECs进行诱导干预,MTT检测方法发现葡萄糖浓度在33 mmol/L且干预48 h为最佳造模条件;予不同浓度的含药血清,同上法检测得10%含药血清干预48 h为最佳干预方法。将造模成功的CMECs分成5组：模型组（MC）、化痰组（RP）、化瘀组（DBS）、痰瘀同治组（RPDBS）、ALT-711组,予以10%含药血清和ALT-711细胞干预制剂进行干预;另设一组空白对照组（NC）。采用ELISA法检测各组内皮细胞AGEs含量;免疫荧光法、Western blot法和RT-qPCR法检测各组内皮细胞RAGE蛋白及基因表达水平;细胞色素c还原法检测各组内皮细胞还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶活性水平;二氢乙锭荧光探针法检测各组内皮细胞活性氧自由基（ROS）活性水平。结果 MC组较NC组,细胞内晚期糖基化终末产物（AGEs）含量、RAGE蛋白及基因表达水平、NADPH氧化酶活性水平和ROS活性水平均升高（P<0.01）。与MC组比较,各治疗组的上述指标均降低（P<0.01）。在降低AGEs含量、RAGE蛋白及基因表达水平和NADPH氧化酶活性水平上,RPDBS组较RP组与DBS组显著下降（P<0.01,P<0.05）;在降低ROS水平上,RPDBS组与DBS组差异无统计学意义（P>0.05）,较RP组显著下降（P<0.01）。结论 痰瘀同治法可能通过抑制AGEs/RAGE轴及氧化应激对高糖损伤的CMECs起到保护作用,从而防治糖尿病心肌微血管病变,且痰瘀同治法优于单独化痰法和单独化瘀法。     

血清总抗氧化能力和丙二醛水平在2型糖尿病颈动脉病变和视网膜病变中的变化

目的：探讨糖尿病颈动脉病变和视网膜病变时的氧化应激表现。方珐：选择92例2型糖尿病患者，检测血清总抗氧化能力（TAOC）、丙二醛（MDA）浓度及空腹血糖、糖化血清蛋白、糖化血红蛋白、肌酐、尿酸、纤维蛋白原、血脂水平，并进行对照分析。采用彩色多普勒超声判定糖尿病颈动脉病变，采用眼底荧光造影判定糖尿病视网膜病变，按结果将其分为3组：糖尿病无颈动脉病变和无视网膜病变组（DM1组）30例，糖尿病伴颈动脉病变组（DM2组）30例，糖尿病伴颈动脉病变和视网膜病变组（DM3组）32例。结果：（1）TAOC与MDA呈负相关（r=0．312，P〈0.01）。（2）DM2组、DM3组TAOC水平均明显低于DM1组（P〈0．05）。（3）DM2组、DM3组MDA水平明显高于DM1组（P〈0.05），DM3组MDA水平明显高于DM2组（P〈0.05）。结论：氧化应激可能参与2型糖尿病大血管和微血管并发症的发病过程。     

橙皮苷防治糖尿病视网膜病变药效及网络药理学机制研究

目的观察橙皮苷对高糖诱导的视网膜血管内皮细胞的影响,并运用网络药理学及分子对接探讨其分子机制。方法在高糖环境下培养视网膜血管内皮细胞,检测橙皮苷对高糖条件下细胞迁移和试管形成的影响。利用Pubchem、Swisstarget和PharmGKB等数据库检索橙皮苷抗糖尿病视网膜病变潜在作用靶点,通过DAVID数据库进行富集分析,采用Accelrys Discovery Studio Client 2.5将橙皮苷和靶蛋白进行分子对接。结果橙皮苷可减少视网膜内皮细胞的迁移数量,同时降低细胞成管能力。网络药理学结果显示,橙皮苷抗糖尿病视网膜病变靶点共17个,KEGG通路富集得到8条信号通路。结论橙皮苷可以抑制高糖诱导下内皮细胞迁移和管道形成,提示橙皮苷可能具有防治糖尿病视网膜病的药效,其机制可能与影响表皮生长因子受体、血管内皮生长因子-A、雌激素受体1和雌激素受体2等有关。     

AngiotensinⅡ通过氧化应激引起巨噬细胞AMPK/SIRT1能量信号紊乱

目的 探讨Angiotensin II诱导巨噬细胞氧化应激反应与 AMPK/SIRT1通路活化关系的机制。方法 RAW264.7细胞正常培养后给予不同浓度的Angiotensin II（0、0.5、1、3、10、20 μmol/L）处理24 h后,Western blot 检测AMPK,p-AMPK和SIRT1的表达水平变化,和用 DCFH 探针检测 ROS 水平的变化,试剂盒检测细胞上清液中 SOD 活性和 MDA 表达量;同时采用基因编辑技术将 Angiotensin II的受体 AT1R成功沉默后给予Angiotensin II刺激,检测对AMPK,p-AMPK 和SIRT1蛋白水平的影响以及使用ROS 的抑制剂来观察细胞AMPK和SIRT1的变化情况。结果 20 μmol/L的Angiotensin II的刺激能显著抑制蛋白AMPK的磷酸化（P<0.05）,抑制SIRT1 的表达;同时增加了细胞ROS的释放（P<0.05）。在检测SOD活性和MDA表达量时, 0.5~10 μmol/L的 Angiotensin II对细胞无明显改变（P>0.05）,20 μmol/L 的 Angiotensin II 明显抑制SOD 活性（P<0.05）,能显著增加 MDA 的产生。沉默了AT1R后,Angiotensin II不能抑制AMPK蛋白磷酸化以及对SIRT1的表达无明显下调作用;使用ROS 抑制剂后,Angiotensin II处理无法降低细胞磷酸化AMPK 和SIRT1的表达。结论 Angiotensin II通过诱导巨噬细胞发生氧化应激反应从而引起AMPK/SIRT1信号通路的紊乱。